用于腫瘤成像的試劑盒的制作方法
【專利說明】用于腫瘤成像的試劑盒
[0001] 引言
[0002] 本申請要求2013年2月15日提交的編號61/765312的美國臨時申請的優(yōu)先權(quán)， 其內(nèi)容作為整體通過引用并入本文中。
[0003] 本發(fā)明是在國立衛(wèi)生研究院（NationalInstitutesofHealth)授予的合同號CA 109231之下由政府支持做出的。政府享有本發(fā)明中一定的權(quán)利。
【背景技術(shù)】
[0004] 2011年在美國進(jìn)行的約160萬例乳腺活檢中，診斷出約288130例乳腺癌（BC) (230480 例擴(kuò)散性和 57650 例原位）（DeSantis等人·（2011)CACancerJ.Clin. 61 : 409-418;Elter等人·（2011)Med.Phys. 2007, 34 (11) :4164-4172)，但超過 130 萬例活 檢是良性診斷結(jié)果。雖然診斷這些癌癥是關(guān)鍵的，但在此過程中呈現(xiàn)的大量良性活檢產(chǎn) 生了顯著的患者發(fā)病率和潛在的不必要的醫(yī)療費(fèi)用。檢測乳腺癌的成像方法不斷發(fā)展， 包括數(shù)字乳房X線照相術(shù)、核磁共振成像（MRI)、計算機(jī)X線斷層成像（CT)、超聲（US)、 F-18-FDG和Tc-99msestamibi，然而，所有這些方法都具有有限的特異性并且接著會產(chǎn) 生許多假陽性和假陰性診斷（Uematsu等人·（2002)BreastCancer9 :62-68 ;Berg等 人·（2004)Radiology233 :830-849;Ruibal等人·（2008)Med.Clin. 130(9) :332-333 ; Yang&Tse(2004)AJRAm.J.Roentgenol. 182 :101-110;Elmore等人·（2005)JAMA293: 124δ-1256;Ghai等人·（2〇〇5)AJRAm.J.Roentgenol.I85 :48l-487;Chagpar等人·（2〇〇6) Ann.Surg. 243 :257-264;Xu等人·（2011)Nucl.Med.Comm. 32 :980-988;Xue等人·（2012) Eur.J.Surg.Oncol. 38(5) :375-381)。考慮到費(fèi)用，不必要的良性活檢意味著嚴(yán)重的醫(yī)療負(fù) 擔(dān)。這對將會減少不必要的良性活檢數(shù)量同時還能發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤的創(chuàng)新方法有迫切需求。
[0005] 近期的藥物發(fā)現(xiàn)方法集中于在分子水平上了解疾病的成因和控制疾病的生物醫(yī) 學(xué)途徑。先前的研究已經(jīng)證實(shí)VPAC1受體（結(jié)合血管活性腸肽和垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽） 在乳腺癌細(xì)胞上以高密度過表達(dá)（Reubi等人·（2000)CancerRes. 60(11) :3105-3112)。 VPAC1受體編碼G蛋白，所述G蛋白參與乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化以及存活。在 基質(zhì)、正常細(xì)胞和良性腫塊上，只有少數(shù)VPAC1受體進(jìn)行表達(dá)（Reubi等人.（2000)同 上；Zia等人·（1996)CancerRes. 56(15) :3486-89;Leyton等人.（1999)1^6&81:0&11(3· Res.Treat. 56(2) :177-186 ；Moody&GozesI(2007)Curr.Pharm.Des. 13(11) :1099-1104 ； Valdehita等人·（2010)Peptides31 (11) :2035-2045;Valdehita等人·（2012)M〇1.Cell Endocrinol. 348(1) :241-246)。
[0006] 已經(jīng)開發(fā)了對VPAC1受體具有高親和性的放射性標(biāo)記的生物分子，并且在臨 床前環(huán)境下進(jìn)行分析（Chakder&Rattan(1993)J.Pharm.Expt.Therapeut. 266 :392-399 ; Thakur等人·（2000)J.Nucl.Med. 41 :107-110;Pallela等人·（1999)J.Nucl.Med. 40(2): 352-360;Kolan等人·（1997)J.Label.Comp.Radiopharmaceut. 40 :455-457;Thakur等 人·（2004)J.Nucl.Med. 45 :1381-1389;Zhang等人·（2007)Reg.P印tides144 :91-100 ; Thakur(2009)Semin.Nucl.Med. 39 :236-246;Thakur等人·（2010)J.Nucl.Med. 51 : 106-111;Zhang等人·（2008)J.Nucl.Med. 49 :112-121;US6855308)?；谒鼈儗PAC1 受體的高親和性，生成了通過利用Tc99m(tl/2-6小時，y-140keV)放射性標(biāo)記進(jìn)行修飾 的肽構(gòu)建物（peptideconstruct)，并且對受體親和性（Kd)、受體特異性、體內(nèi)穩(wěn)定性和 組織分布進(jìn)行了評價（Thakur等人·（2000)同上；Pallela等人·（1999)同上；Kolan等 人.（1997)同上；Thakur等人.（2004)同上；Zhang等人.（2007)同上；Thakur(2009)同上； Thakur等人.（2010)同上；Zhang等人.（2008)同上）。另外，用發(fā)射 0+(19%，656keV)的 Cu-64(tl/2-12. 8小時）對肽進(jìn)行標(biāo)記，以用于用N2S2作為螯合劑的正電子發(fā)射斷層成像 術(shù)（positronemissiontomography) (PET)。對Kd值、患有T47D人乳腺癌的無胸腺裸鼠的 組織分布研究、受體阻斷研究、受體親和性和體內(nèi)穩(wěn)定性進(jìn)行了檢測（Thakur等人.（2004) 同上；Zhang等人.（2007)同上；Thakur(2009)同上；Thakur等人.（2010)同上；Zhang等 人.（2008)同上）。在所產(chǎn)生的化合物中，CU-64-TP3805不僅成像了無胸腺裸鼠中所有的異 種移植人乳腺癌（注射后24小時，腫瘤吸收6. 35± 1. 28%ID/g)，該化合物還定位轉(zhuǎn)基因 MMTVneu小鼠（η= 9)中所有（η= 8)自發(fā)生長的乳腺癌（可見的5例，不可見的1例，轉(zhuǎn) 移性的2例）病灶（Thakur等人.（2010)同上）。此外，對于具有可以忽略不計的VPAC1受 體表達(dá)的兩個病灶，CU-64-TP3805PET圖像是正常的。通過組織學(xué)（histology)和由RT-PCR 確定的表達(dá)的VPAC1受體確認(rèn)了所述8例惡性病灶（Thakur等人.（2010)同上）。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明提供用于腫瘤成像的試劑盒。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的試劑盒由凍干 組合物組成，所述凍干組合物包含葡庚糖酸鹽、甘氨酸緩沖液和具有以下結(jié)構(gòu)的化合物 s-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys -Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu-yAba-Lys(R)(SEQIDNO:1)，其中R是與賴氨酸殘基的 γ-氨基偶聯(lián)的螯合劑，所述螯合劑為：
[0008]
[0009] 在一些實(shí)施方案中，將試劑盒貯存于4°C。在其他實(shí)施方案中，將試劑盒貯存 于-20°C。在還另外的實(shí)施方案中，試劑盒包含20-250μg所述化合物、50至500μg葡庚 糖酸鹽和任選地64Cu、6SGa、S9Zr或9EtaTc。還提供了一種制備所述試劑盒的方法。
[0010] 在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的試劑盒由具有以下結(jié)構(gòu)的化合物組成：His-Ser-A sp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Ty ;r-Leu-Ala-Ala-Val-Leu-γAba-Lys(R)(SEQIDNO:l)，其中R是與賴氨酸殘基的γ-氨基 偶聯(lián)的螯合劑，并且其中所述化合物被固定在基質(zhì)（substrate)上。
【具體實(shí)施方式】
[0011] 現(xiàn)在已經(jīng)表明CU-64-TP3805能夠成像人乳腺癌患者的原發(fā)性腫瘤。在20例分析 的腫瘤中，所有病灶均為惡性的。另外，在全身正電子發(fā)射斷層成像術(shù)（PET)/計算機(jī)斷層 掃描（CT)成像中，4例涉及前哨淋巴結(jié)（1名患者中有2個，另外2名患者每人1個），且輪 廓清晰。在此研究中，觀察到值得注意的另外兩種現(xiàn)象。首先，CU-64-TP3805攝取是快速 的，即注射后15分鐘。因此，還可以使用半衰期為68分鐘、由發(fā)生器產(chǎn)生的Ga-68。Ga-68 的正電子發(fā)射為88%，超過Cu-64的四倍。這就允許給予小于150MBq(~4mCi)的Ga-68 而不會降低圖像質(zhì)量，因而顯著減少了受試者的福射積存量（radiationburden)。在任何 一種情況下，在注射15分鐘后就可以得到圖像而不需要要求患者禁食或監(jiān)測血糖水平。
[0012] 第二，觀察到注射后15分鐘的正電子發(fā)射乳房X線造影術(shù)（PositronEmission Mammography，PEM)攝取值直到成像后5小時并沒有變化。這表明，C