一種環(huán)肽化合物clavatustide B及其制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種環(huán)肽化合物clavatustide?B及其制備方法和應用。clavatustide?B的結構式如式（Ⅰ）所示，其備方法包括：將經(jīng)活化的棒曲霉（Aspergillus?clavatus）CCTCC?No.M?2013421接種到發(fā)酵培養(yǎng)液中，進行發(fā)酵培養(yǎng)；發(fā)酵完成后，分離得到菌絲體和發(fā)酵液；對菌絲體提取物或發(fā)酵液提取物進行層析分離、純化處理，制得所述環(huán)肽化合物；所述應用是所述環(huán)肽化合物在制備抗腫瘤藥物或腫瘤預防保健食品中的應用。本發(fā)明的環(huán)肽化合物具有較好的體外抗腫瘤活性，其對HepG2細胞的IC50值為15μg/mL，具有良好的開發(fā)前景；并且制備方法操作簡便，適合規(guī)?；a(chǎn)。
【專利說明】—種環(huán)肽化合物clavatustide B及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于海洋真菌活性物質(zhì)領域,具體涉及一種環(huán)肽化合物clavatustide B及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002]海洋微生物由于生活在壓力環(huán)境下，其二次代謝產(chǎn)物往往具有陸地真菌二次代謝產(chǎn)物不具備的生物活性，近年來成為藥物開發(fā)的熱點。海洋微生物不僅生存競爭壓力很大，其所處的海洋環(huán)境的PH范圍、溫度、壓力、溶解氧、光線、營養(yǎng)和鹽度等都與陸地環(huán)境不同，這是海洋微生物二次代謝產(chǎn)物多樣性的基礎(Debbab，A.;Aly, A.H.;Lin, ff.H.;Proksch, P.Microb.Biotech.2010，3，544 - 563 ;Saleema，M.; Alij M.S.;Hussain, S.; Jabbar, A.; Ashraf, M.; Lee, Y.S.Nat.Prod.Rep.2007，24，1142 - 1152 ；Wu, B.; Wuj X.; Sun, M.; Li, M.Mar.Drugs2013, 11，2713-2721.)?
[0003]海洋真菌作為海洋微生物的重要組成部分，在藥物合成、石油降解、環(huán)境修復等方面具有重要作用。海洋真菌既具有真核生物典型的蛋白修飾性能，又具有微生物操作上簡便、快速的優(yōu)點，作為新的真核生物表達系統(tǒng)具有巨大的潛能和廣闊的應用前景。近年來隨著對海洋微生物研究的深入，從海洋真菌中發(fā)現(xiàn)了越來越多的抗腫瘤活性物質(zhì)，海洋真菌成為了繼海洋放線菌之后的又一研究熱點。
[0004]沼田敦等(徐赤，顧謙群，崔承彬.2001年.海洋微生物抗腫瘤代謝產(chǎn)物的研究進展[J].中國海洋藥物.6:44-49.)對從將苔屬海藻Enteromorpha intestinalis體表分離到的一株青霉菌進行了一系列研究。將該菌株置于含2%葡萄糖、1%蛋白胨及0.5%酵母膏的海水培養(yǎng)基中，27°C培養(yǎng)3周，首先分離得到2個細胞毒代謝產(chǎn)物Communesins A和B，二者結構上僅?；鶄孺湸?差異，但活性上卻相差了近10倍。
[0005]沼田敦等(徐赤，顧謙群，崔承彬.2001年.海洋微生物抗腫瘤代謝產(chǎn)物的研究進展[J]?中國海洋藥物.6:44-49.)還從分離于海魚Pseudolabrus japonicus胃腸道的曲霉Aspergillus fummigatus菌絲體中分離到一系列細胞毒化合物Fumiquinazolines A~G,對P385細胞有中等細胞毒性。Fenieal等人從加勒比海綠藻Penicillus capitatus體表分離的Aspergillus versicolor得到四個倍半職硝基苯酯化合物,其中9a, 14- 二羥基_6對硝基苯甲酸肉桂酯對NCI的60個人類腫瘤細胞群的IC5tl的平均值為1.lmg/L，但對5種腎癌細胞(786-0，ACHN, CAK-1, TK-10，V0-31)有選擇性毒性，平均 IC5tl 為 0.5lmg/L?
[0006]海洋熱液口是地球上最活躍的環(huán)境(Thornburg, C.C.;Zabriskie, T.M.;McPhail, K.L.J.Nat.Prod.2010, 73, 489 - 499.),熱液口螃蟹(Xenograpsustestudinatus)就生活在極端、毒性、布滿硫化物的熱液口附近。這種熱液口螃蟹在臺灣龜山島被發(fā)現(xiàn)(eng, M.-S.;Ng, N.K.;Ng, P.K.L.Nature2004, 432，969.)，迄今為止，沒有人研究這種熱液口螃蟹的附生真菌的代謝產(chǎn)物。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0007]本發(fā)明提供了一種環(huán)肽化合物clavatustide B,該化合物從熱液口螃蟹Xenograpsus testudinatus 附生棒曲霉Aspergillus clavatus C2WU發(fā)酵培養(yǎng)物中提取獲得，具有較強的抗腫瘤活性。
[0008]一種環(huán)肽化合物clavatustide B,結構式如式(I )所示:
[0009]
【權利要求】
1.一種環(huán)肽化合物clavatustide B,其特征在于,結構式如式(I )所示:
2.如權利要求1所述環(huán)肽化合物clavatustideB的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將經(jīng)活化的棒曲霉(Aspergillusclavatus) CCTCC N0.M 2013421接種到發(fā)酵培養(yǎng)液中，于20-30°C發(fā)酵培養(yǎng)10-60天； (2)發(fā)酵完成后，分離得到菌絲體和發(fā)酵液； 將菌絲體置于有機溶劑中浸提，得到浸提液，再用蒸餾水對浸提液混懸，得到水混懸液，然后用乙酸乙酯或氯仿對水混懸液進行萃取，得到萃取液A，萃取液A經(jīng)濃縮后得到菌絲體提取物； 或者，用乙酸乙酯或氯仿對發(fā)酵液進行萃取，得到萃取液B，萃取液B經(jīng)濃縮后得到發(fā)酵液提取物； (3)對菌絲體提取物或發(fā)酵液提取物進行層析分離、純化處理，制得權利要求1所述的環(huán)妝化合物clavatustide B。
3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為20-30°C，時間為 10-60 天。
4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為22-26°C，時間為 15-25 天。
5.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述有機溶劑為甲醇、乙醇、乙酸乙酯和丙酮中的一種或兩種。
6.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述層析分離為正相硅膠柱層析分離，洗脫劑為石油醚/乙酸乙酯混合液。
7.如權利要求1所述環(huán)肽化合物clavatustideB在制備抗腫瘤藥物或腫瘤預防保健食品中的應用。
8.如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述抗腫瘤藥物為抗肝癌藥物，所述腫瘤預防保健食品為肝癌預防保健食品。
【文檔編號】C12R1/66GK103641791SQ201310574939
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年11月15日 優(yōu)先權日:2013年11月15日
【發(fā)明者】吳斌, 葉瑛 申請人:浙江大學