一種質(zhì)粒在大腸桿菌上進(jìn)行轉(zhuǎn)化的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種質(zhì)粒在大腸桿菌上進(jìn)行轉(zhuǎn)化的方法。步驟如下：(1)挑取平板上活化的大腸桿菌DH5a接種于3mlLB培養(yǎng)液中，37°C振蕩培養(yǎng)過(guò)夜；(2)按1：150-200挑取過(guò)夜培養(yǎng)菌液接種于200mlLB培養(yǎng)液中，37°C振蕩培養(yǎng)2~2.5h(OD600約為0.4)；(3)培養(yǎng)物放入冰浴中冷卻lOmin。本發(fā)明的有益效果是，實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單，費(fèi)用較低，抗體的制備為將來(lái)檢測(cè)臨床器官和人工肝中的PERV的表達(dá)及傳播具有重要意義。
【專利說(shuō)明】一種質(zhì)粒在大腸桿菌上進(jìn)行轉(zhuǎn)化的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種實(shí)驗(yàn)方法，具體來(lái)說(shuō)，一種質(zhì)粒在大腸桿菌上進(jìn)行轉(zhuǎn)化的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]質(zhì)粒是真核細(xì)胞細(xì)胞核外或原核生物擬核區(qū)外能夠進(jìn)行自主復(fù)制的遺傳單位，包括真核生物的細(xì)胞器(主要指線粒體和葉綠體)中和細(xì)菌細(xì)胞擬核區(qū)以外的環(huán)狀脫氧核糖核酸(DNA)分子?，F(xiàn)在習(xí)慣上用來(lái)專指細(xì)菌(大腸桿菌)、酵母菌和放線菌等生物中細(xì)胞核或擬核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中質(zhì)粒常被用做基因的載體(Vector)。許多細(xì)菌除了擬核中的DNA外，還有大量很小的環(huán)狀DNA分子，這就是質(zhì)粒(plasmid)(補(bǔ)充:部分質(zhì)粒為RNA)。質(zhì)粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四環(huán)素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些質(zhì)粒稱為附加體(episome)，這類質(zhì)粒能夠整合進(jìn)真菌的染色體，也能從整合位置上切離下來(lái)成為游離于染色體外的DNA分子。質(zhì)粒在宿主細(xì)胞體內(nèi)外都可復(fù)制，通過(guò)個(gè)些特性，人們可以把一些目的DNA片斷構(gòu)建在質(zhì)粒中，通過(guò)轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中，不斷的復(fù)制，來(lái)得到目的產(chǎn)物。這就是轉(zhuǎn)化的目的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為克服上述技術(shù)問(wèn)題，我們提出了以下技術(shù)方案:
一種質(zhì)粒在大腸桿菌上進(jìn)行轉(zhuǎn)化的方法，步驟如下:
(1)挑取平板上活化的大腸桿菌DH5a接種于3mlLB培養(yǎng)液中，37°C振蕩培養(yǎng)過(guò)夜；
(2)按1:150-200挑取過(guò)夜培 養(yǎng)菌液接種于200ml LB培養(yǎng)液中，37° C振蕩培養(yǎng)2~2.5h (0D600 約為 0.4)；
(3)培養(yǎng)物放入冰浴中冷卻IOmin；
(4)把每支離心管中菌體重新懸浮于IOml預(yù)冷(4°C)的lOOmmol/LCaCh溶液中，’冰浴中20min, 4° C SOOOrpm離心12min,收集菌體；
(5)把每支離心管中菌體懸浮于IOml預(yù)冷(4°C)的IOOmmoI/LCaCh溶液中；
(6)分裝在四支離心管中,4°C 3000rpm離心12min,收集菌體；
(7)再將每支離心管中菌體懸浮于2ml預(yù)冷的lOOmmol/LCaCb溶液分裝在1.5ml的離心管中；
(8 )取感受態(tài)細(xì)胞I ;;冰h解凍30iTiin、加入al pGEX-4T_l質(zhì)粒載體；
(9)放入冰浴中30min，轉(zhuǎn)入42°C水浴90sec，再冰浴2min培養(yǎng)液，37° C振蕩培養(yǎng)
Ih;
(10)取己轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞均勾鋪于含Amp的LB平板上，待平板中的液體吸收后，倒置平板，37° C恒溫培養(yǎng)過(guò)夜。
[0004]本發(fā)明的有益效果是，實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單，費(fèi)用較低，抗體的制備為將來(lái)檢測(cè)臨床器官和人工肝中的PERV的表達(dá)及傳播具有重要意義?！揪唧w實(shí)施方式】
[0005]一種質(zhì)粒在大腸桿菌上進(jìn)行轉(zhuǎn)化的方法，步驟如下:
(1)挑取平板上活化的大腸桿菌DH5a接種于3mlLB培養(yǎng)液中，37°C振蕩培養(yǎng)過(guò)夜；
(2)按1:180挑取過(guò)夜培養(yǎng)菌液接種于200ml LB培養(yǎng)液中，37° C振蕩培養(yǎng)2h (0D600約為0.4)；
(3)培養(yǎng)物放入冰浴中冷卻IOmin；
(4)把每支離心管中菌體重新懸浮于IOml預(yù)冷(4°C)的lOOmmol/LCaCh溶液中，’冰浴中20min, 4° C SOOOrpm離心12min,收集菌體；
(5)把每支離心管中菌體懸浮于IOml預(yù)冷(4°C)的IOOmmoI/LCaCh溶液中；
(6)分裝在四支離心管中,4°C 3000rpm離心12min,收集菌體；
(7)再將每支離心管中菌體懸浮于2ml預(yù)冷的lOOmmol/LCaCb溶液分裝在1.5ml的離心管中；
(8 )取感受態(tài)細(xì)胞I ;;冰h解凍30iTiin、加入al pGEX-4T_l質(zhì)粒載體；
(9)放入冰浴中30min，轉(zhuǎn)入42°C水浴90sec，再冰浴2min培養(yǎng)液，37° C振蕩培養(yǎng)
Ih;
(10)取己轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞均勾鋪于含Amp的LB平板上，待平板中的液體吸收后，倒置平板，37° C恒溫培養(yǎng)過(guò)夜。
[0006]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實(shí)施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種質(zhì)粒在大腸桿菌上進(jìn)行轉(zhuǎn)化的方法，其特征在于，步驟如下:(1)挑取平板上活化的大腸桿菌DH5a接種于3mlLB培養(yǎng)液中，37°C振蕩培養(yǎng)過(guò)夜； (2)按1:150-200挑取過(guò)夜培養(yǎng)菌液接種于200ml LB培養(yǎng)液中，37° C振蕩培養(yǎng)2~2.5h (0D600 約為 0.4)； (3)培養(yǎng)物放入冰浴中冷卻IOmin； (4)把每支離心管中菌體重新懸浮于IOml預(yù)冷(4°C)的lOOmmol/LCaCh溶液中，’冰浴中20min, 4° C SOOOrpm離心12min,收集菌體； (5)把每支離心管中菌體懸浮于IOml預(yù)冷(4°C)的IOOmmoI/LCaCh溶液中； (6)分裝在四支離心管中,4°C 3000rpm離心12min,收集菌體； (7)再將每支離心管中菌體懸浮于2ml預(yù)冷的lOOmmol/LCaCb溶液分裝在1.5ml的離心管中； (8 )取感受態(tài)細(xì) 胞I ;;冰h解凍30iTiin、加入al pGEX-4T_l質(zhì)粒載體；(9)放入冰浴中30min，轉(zhuǎn)入42°C水浴90sec，再冰浴2min培養(yǎng)液，37° C振蕩培養(yǎng)Ih; (10)取己轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞均勾鋪于含Amp的LB平板上，待平板中的液體吸收后，倒置平板，37° C恒溫培養(yǎng)過(guò)夜。
【文檔編號(hào)】C12N1/21GK103614403SQ201310521935
【公開(kāi)日】2014年3月5日 申請(qǐng)日期:2013年10月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月30日
【發(fā)明者】徐麗 申請(qǐng)人:徐麗