甘草查爾酮a的抗菌用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了甘草查爾酮A的抗菌用途。通過實(shí)驗(yàn)，證明了甘草查爾酮A的抗菌作用，可以用于制備抗菌藥物、食品添加劑或化妝品等。
【專利說明】甘草查爾酮A的抗菌用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及甘草查爾酮A的一種抗菌用途，具體地涉及甘草查爾酮A在制備抗菌 藥物或食品中的用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 查爾酮類化合物屬于中草藥的一種化學(xué)成分，主要存在于甘草，紅花，廣豆根等藥 用植物中，也是現(xiàn)代工業(yè)中比較常用的一類黃色素。查爾酮類化合物由于其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)而具 有較大的柔性，因此表現(xiàn)出了廣泛的藥理學(xué)作用，主要包括抗腫瘤、清除氧自由基以及抗氧 化以及抗菌作用等，其抗菌作用尤其針對(duì)革蘭氏陽性菌，而且某些化合物的作用效果與慶 大霉素作用相當(dāng)。
[0003] 從甘草根中提取出來的查爾酮又可以細(xì)分為以下幾種新的組分：刺查爾酮，查爾 酮A，查爾酮B，查爾酮C以及查爾酮D，具體結(jié)構(gòu)見附圖1。這些查爾酮與之前的傳統(tǒng)意義 上的查爾酮又有所不同，因?yàn)槠湓?' -位置上的氧的缺失，被命名為刺甘草查爾酮。1975 年，甘草查爾酮A (Licochalcone A，分子式C21H2204,分子量338. 39698)首次被報(bào)道，具有 廣泛的生物學(xué)活性。有研究表明，查爾酮A對(duì)食物中的污染的微生物有比較強(qiáng)烈的抑制作 用，而且查爾酮A可以抵抗高溫。但查爾酮A對(duì)熱處理過的由L-丙氨酸誘導(dǎo)產(chǎn)芽孢菌產(chǎn)生 的芽孢沒有抑制作用。與陽離子抗生物肽在3% (wt/vol)氯化鈉或者20ug/ml蛋白酶存在 的情況下失去抗菌的活性相比較，查爾酮A仍然具有抗菌活性。甘草查爾酮A的抗鏈球菌 尤其是抗變形鏈球菌及豬鏈球菌作用未見報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明公開了甘草查爾酮A的抗菌用途，尤其是在抗鏈球菌和葡萄球菌的用途。 甘草查爾酮A可以用于制備抗菌藥物，也可以制備抗菌食品或食品添加劑，制備抗菌化妝 品。
[0005] 本發(fā)明公開的甘草查爾酮A的抗菌用途中的細(xì)菌為鏈球菌。其中鏈球菌可為導(dǎo)致 人類和動(dòng)物疾病的鏈球菌，如A族鏈球菌、變形鏈球菌、肺炎鏈球菌或豬鏈球菌。本發(fā)明在 公開的甘草查爾酮A的抗菌用途中的細(xì)菌可以為葡萄球菌，特別是金黃色葡萄球菌。
[0006] 本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)證明甘草查爾酮A對(duì)上述細(xì)菌有廣泛、強(qiáng)烈的抑制作用。首先進(jìn) 行了培養(yǎng)基、甘草查爾酮A溶液、MIC板和接種物的制備，然后對(duì)甘草查爾酮A的抗菌作用 進(jìn)行觀察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示甘草查爾酮A對(duì)所實(shí)驗(yàn)的鏈球菌、葡萄球菌有較好的抑菌作用。
[0007] 將甘草查爾酮A作為活性成分原料，添加適當(dāng)?shù)妮o料，通過適當(dāng)制劑工藝，可以制 成相應(yīng)的藥物劑型，制備抗菌藥物，也可以通過適當(dāng)?shù)氖称饭に?，制備食品添加劑，或通過 化妝品制備工藝，制備有抗菌作用的化妝品，不限于以上所述，可以利用其抗菌作用，將甘 草查爾酮A用于其他任何方面。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0008] 圖1為查爾酮的化學(xué)分子式示意圖，其中1.查爾酮A 2查爾酮B 3查爾酮C 4查 爾酮D 5刺查爾酮6查爾酮。
[0009] 圖2為甘草查爾麗A對(duì)變形鏈球菌（Streptococcus mutans ATCC55677)的生長(zhǎng) 抑制作用圖。過夜培養(yǎng)的變形鏈球菌菌株S.mutans ATCC55677以1%的比例接種到新培 養(yǎng)基中，分別在接種后〇h，4h和6h后加入不同濃度的查爾酮A溶液（0. 5MIC，MIC)，每隔Ih 觀察記錄細(xì)菌的0D600。
[0010] 圖3為甘草查爾酮A對(duì)A族鏈球菌GAS G519的生長(zhǎng)抑制作用圖。過夜培養(yǎng)的A 族鏈球菌菌株GAS G519以1 %的比例接種到新培養(yǎng)基中，并加入不同濃度的甘草查爾酮A， 繼續(xù)培養(yǎng)llh，每隔Ih測(cè)量一次0D600。
[0011] 圖4為甘草查爾酮A對(duì)豬鏈球菌血清2型的生長(zhǎng)抑制作用圖。過夜培養(yǎng)的豬鏈球 菌血清2型菌株05ZYH33,以1 %的比例接種到新培養(yǎng)基中，每隔Ih測(cè)量一次0D600,繼續(xù)培 養(yǎng)4. 5h后，加入不同濃度的甘草查爾酮A(0,0. 5MIC，MIC)，然后繼續(xù)培養(yǎng)5h。

【具體實(shí)施方式】
[0012] 實(shí)施例甘草查爾酮A的抗菌作用
[0013] 一、實(shí)驗(yàn)材料
[0014] 1.菌株：變形鏈球菌（Streptococcus mutans)，購自 ATCC，編號(hào)為 ATCC55677 ;豬 鏈球菌血清 2 型 05ZYH33 (Streptococcus suis serotype2) (PLoS 0NE2 (3) :e315)，購自 中國(guó)⑶C傳染病預(yù)防控制所；A族鏈球菌中國(guó)分離株（GAS G519) (Journal of Clinical Microbiology，2009,47 (3) :715-720)，購自中國(guó) CDC 傳染病預(yù)防控制所。
[0015] 2.實(shí)驗(yàn)器材
[0016] 甘草查爾酮A :購自Sigma公司；THB培養(yǎng)基：購自BD公司；酵母提取物，蛋白胨： 購自0X0ID公司。C02孵箱：日本三洋公司，生物安全柜：美國(guó)Thermo公司。
[0017] 二·實(shí)驗(yàn)方法
[0018] 1.液體培養(yǎng)基的制備
[0019] THB培養(yǎng)基（30gTHB每升）或者LB (IOg氯化鈉、5g酵母提取物、IOg蛋白胨每升）， 113°C 15min高壓滅菌后4°C冰箱保存待用。
[0020] 2.甘草查爾酮A溶液的制備
[0021] 將甘草查爾酮A用無水乙醇配成12mg/ml的母液，無菌條件下依照試驗(yàn)需要用液 體培養(yǎng)基進(jìn)行倍比稀釋。
[0022] 3.半數(shù)抑菌濃度（MIC50)板的制備
[0023] 在生物安全柜內(nèi)無菌操作，將倍比稀釋后不同濃度的甘草查爾酮A溶液分別加到 無菌的96孔培養(yǎng)板中，第1至第9孔加藥液，每孔100 μ 1，第10孔加100 μ 1的液體培養(yǎng)基 作為對(duì)照。
[0024] 3.接種物的制備
[0025] 將過夜復(fù)蘇培養(yǎng)的鏈球菌菌液按1 %接種量接種到5mlTHB液體培養(yǎng)基中， 37°C 5% CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。細(xì)菌長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期，其菌量大概為IO9CFUAiI數(shù)量級(jí) 時(shí)備用。
[0026] 4.甘草查爾酮A抗菌作用觀察
[0027] 將培養(yǎng)接種物菌液用培養(yǎng)基十倍稀釋，100 μ 1/孔加到對(duì)應(yīng)的含甘草查爾酮A溶 液與96孔培養(yǎng)板中，密封后置37°C 5% CO2培養(yǎng)箱中靜置孵育24h，觀察甘草查爾酮A溶液 的抗菌作用。
[0028] 5.結(jié)果判斷
[0029] 藥物和菌共孵育24h后，各孔取100 μ 1涂THB或LB平板，37°C 5 % CO2培養(yǎng)箱中 靜置培養(yǎng)24h，以完全無菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度定為MIC。當(dāng)陽性對(duì)照孔（即不含藥物）內(nèi) 細(xì)菌明顯生長(zhǎng)試驗(yàn)才有意義。
[0030] 三·實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0031] 如表1所示，半數(shù)抑菌濃度平板實(shí)驗(yàn)證實(shí)甘草查爾酮A對(duì)變形鏈球菌、豬鏈球菌血 清2型，A族鏈球菌均有明顯的抑制效果，最低抑菌濃度在μ g/ml水平。然后分別測(cè)試甘 草查爾酮A對(duì)變形鏈球菌菌株ATCC55677 (圖2)，A族鏈球菌G519 (圖3)以及豬鏈球菌菌 株05ZYH33(圖4)生長(zhǎng)抑制情況，這些細(xì)菌的生長(zhǎng)速度在加入甘草查爾酮A后明顯受到抑 制。
[0032] 表1.甘草查爾酮A對(duì)各菌株的最低抑制濃度（MIC)
[0033]

【權(quán)利要求】
1. 甘草查爾酮A在制備抗菌藥物中的用途。
2. 甘草查爾酮A在制備抗菌食品添加劑中的用途。
3. 甘草查爾酮A在制備抗菌化妝品中的用途。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1到3任一所述用途，其中細(xì)菌為鏈球菌。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述用途，其中細(xì)菌為變形鏈球菌。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述用途，其中細(xì)菌為豬鏈球菌。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述用途，其中細(xì)菌為A族鏈球菌。
【文檔編號(hào)】A23L1/30GK104337799SQ201310315081
【公開日】2015年2月11日 申請(qǐng)日期:2013年7月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月25日
【發(fā)明者】姜永強(qiáng), 鄭玉玲, 郝淮杰, 王燕子, 鄭新, 江華, 惠文佳 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所