專利名稱：塵螨過(guò)敏原Derf24和Derf25及其基因和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
:本發(fā)明涉及塵螨過(guò)敏原Der f 24和Der f 25及其基因和應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
: 過(guò)敏性疾病(如哮喘、過(guò)敏性鼻炎等)是臨床上的常見(jiàn)病、多發(fā)病，世界各國(guó)過(guò)敏性疾病的總發(fā)病率高達(dá)10-30%，是當(dāng)前世界性的重大衛(wèi)生學(xué)問(wèn)題，目前我國(guó)現(xiàn)有哮喘患者2000多萬(wàn)，過(guò)敏性鼻炎患者5000多萬(wàn)，并且其發(fā)病率和死亡率仍呈上升趨勢(shì)，近二十年來(lái)發(fā)病率幾乎翻了一倍。在引起過(guò)敏性疾病的眾多吸入性過(guò)敏原中，塵螨是導(dǎo)致呼吸道變態(tài)反應(yīng)性疾病的最重要因素。自從Voorhorst和Spieksma (1964)首次證實(shí)塵螨及代謝產(chǎn)物是屋塵中的主要過(guò)敏原以來(lái)，世界各國(guó)(歐美國(guó)家、日本、中國(guó)等)變態(tài)反應(yīng)學(xué)工作者通過(guò)大量調(diào)查也一致證實(shí)塵螨是世界性的主要變應(yīng)原。塵螨在過(guò)敏性疾病患者特異性免疫診斷中陽(yáng)性率約70-80%。自從Noon和Freeman( 1911)首次應(yīng)用梯牧草花粉變應(yīng)原浸液(allergenextract)用于治療花粉癥以來(lái)，脫敏治療至今已有90多年的歷史。隨著對(duì)變態(tài)反應(yīng)疾病發(fā)病機(jī)制的深入研究以及免疫治療機(jī)制的進(jìn)一步了解，WHO (1997)建議將變應(yīng)原浸液改稱為變應(yīng)原疫苗(allergen vaccine)，并且在《WHO有關(guān)免疫治療的指導(dǎo)文件》(1998)指出:(I)鼓勵(lì)應(yīng)用和發(fā)展標(biāo)準(zhǔn)化的變應(yīng)原疫苗；(2)成功的免疫治療取決于高質(zhì)量的變應(yīng)原疫苗。因此，研制出新一代高效變應(yīng)原疫苗仍是國(guó)內(nèi)外該領(lǐng)域研究熱點(diǎn)。由于塵螨系醫(yī)學(xué)節(jié)肢動(dòng)物，結(jié)構(gòu)和成份復(fù)雜，盡管目前人們?cè)趬m螨數(shù)百種蛋白中已初步鑒定出16種過(guò)敏原成份，研究顯示塵螨含有的過(guò)敏原多達(dá)30余種。就某一個(gè)塵螨過(guò)敏病人而言，他可能僅對(duì)塵螨中的一類或數(shù)類過(guò)敏原蛋白產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)。而目前在臨床上用于塵螨過(guò)敏患者診斷和脫敏治療的仍然為塵螨粗浸液，其中含有大量對(duì)患者非特異的過(guò)敏原及其它雜質(zhì)，這嚴(yán)重阻礙了塵螨過(guò)敏原試劑標(biāo)準(zhǔn)化的制定及其在臨床上的使用。所以進(jìn)一步探明塵螨過(guò)敏原的確切組分，將會(huì)為塵螨過(guò)敏患者帶來(lái)個(gè)體化的脫敏治療
發(fā)明內(nèi)容
:本發(fā)明的目的在于提供兩種塵螨過(guò)敏原Der f 24和Der f 25基因及其應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案如下:Der f24屬于一類alpha-actinin蛋白家族，由885個(gè)氨基酸組成,分子量約90kDa。其氨基酸序列(SEQ ID N0:1)如下:MTQDGYMQQEEEEffEREGLLDPAffEKQQRKTFTAffCNSHLRKAGTQIDNIEEDFRNGLKL 60MLLLEVISGETLGKPDRGKMRFHKIANVNKALDFIESKGVKLVSIGAEEIVDGNSKMTLG 120LIWTIILRFAIQDISVEEMTAKEGLLLWCQRKTAPYKNVNVQNFHLSWKDGLAFCALIHR 180HRPDLIDYGKLRKDNPMDNFNLAFDVAEKHLNIPRMLDAEDVVYTAKPDERAIMTYVSWY 240YHAFHGAQQAETAANRICKVLKVNQDNERLMEEYERLASDLLEffIRRTTPffLENRTTDNT 300LPGTQKKLEEFRSYRRQHKPPRVEQKANLETNFNTLQTKLRLSKRPAYMPSEGKMVSDIT 360
GAWKGLESAEKGFEEWLLSEMMRLERLDHLAQKFKHKADIHEEWTQGKEEMLVSHDFRQC 420KLNEIKALKKKHEAFESDLAAHQDRVEQIAAIAQELNALGYHDIASINARCQRICDQWDR 480LGTLTTRRRQALDEAEQILEKVDLFHLEFAKRAAPFNNWLDETREDLVDMFIVHSIEEIQ 540QLIDAHESFKNTLGEADKEYKTIVGLAQEVQPMATQYQIPGGLENPYTTLTPEVITTKWR 600DVKQLVPQRDHTLQTELIRQQCNENLRRQFAEKANVVGPWIERQMDAVTAIGMGMQGTLE 660DQLQRLHEYDQAVVQYRPHVDDLEKIHQEVQEAMIFENRYTQYTMETLRVGWEQLLTSIH 720RNINEVENQILTRDSKGITQEQLNEFRTSFNHFDKKRTGRLAPEEFKSCLVSLGYNIRND 780DRPEFRRILAIVDPNKTGYVHFDAFLDFMTREYTDTDTAEQMIDSFRILAGDKPYITADE 840LRRELPPDQAEYCIRRMTPYNGQCAVPGALDYRSFSTALYGESDL885Der f 25屬于一類憐酸丙糖異構(gòu)酶蛋白家族(Triosephosphate isomerase)，分子量約34 kDa ο Der f 25由247個(gè)氨基酸組成，其氨基酸序列如下(SEQ ID N0:3):MGRKFFVGGNWKMNGNKTAIKEIVDFLKNGPLDSNVEVVVGVPAIYLMLCKNILPDNIRV 60AAQNCYKVDKGAFTGEISPAMIKDVGAEWVILGHSERRNVFGESDQLIGEKVEHALQEGL 120HVIACIGELLEEREAGKTTEVVFRQTQVISKHVKDWFKVVLAYEPVWAIGTGKTASPQQA 180QEVHQKLRQCFSENVSPQIAETIRIIYGGSVTANNAKELASQADVDGFLVGGASLKPEFV 240QIVNARQ247塵螨過(guò)敏原Dei* f 24和Dei* f 25基因克隆步驟包括:塵螨總RNA提取，mRNA純化，mRNA反轉(zhuǎn)錄及cDNA文庫(kù)構(gòu)建，設(shè)計(jì)引物，利用PCR方法擴(kuò)增編碼基因?；驕y(cè)序結(jié)果表明塵螨過(guò)敏原Der f 24的編碼基因(GenBank accession KC305498)由2658個(gè)核苷酸組成，該基因的5’端至3’端序列為(核苷酸序列為SEQ ID NO:2):
權(quán)利要求
1.塵螨過(guò)敏原Derf 24和Der f 25，其特征在于分別由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO: 3所示的氨基酸序列組成。
2.編碼塵螨過(guò)敏原Derf 24和Der f 25的基因，其特征在于分別由SEQ ID NO: 2和SEQ ID N0:4所示的核苷酸序列組成。
3.權(quán)利要求1所述的塵螨過(guò)敏原Derf 24和Der f 25在制備治療塵螨過(guò)敏性疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及塵螨過(guò)敏原Derf24和Derf25及其基因和應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。塵螨過(guò)敏原Derf24和Derf25、分別由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列組成。編碼塵螨過(guò)敏原Derf24和Derf25的基因，分別由SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列組成。所述的塵螨過(guò)敏原Derf24和Derf25在制備治療塵螨過(guò)敏性疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果在于提供塵螨過(guò)敏原Derf24和Derf25及其基因，塵螨過(guò)敏原Derf24和Derf25能夠作為制備治療塵螨過(guò)敏性疾病藥物的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C12N15/61GK103214565SQ201310033790
公開(kāi)日2013年7月24日 申請(qǐng)日期2013年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月29日
發(fā)明者賴仞, 安輸, 容明強(qiáng), 李東升 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所