專利名稱：一種檢測空調(diào)濾網(wǎng)和吸塵器灰塵中塵螨變應(yīng)原的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及塵螨變應(yīng)原檢測的方法，具體地說是一種運用納米磁性粒子酶聯(lián)免疫測定技術(shù)檢測空調(diào)空氣過濾網(wǎng)灰塵和吸塵器收集灰塵中塵螨變應(yīng)原Der pII和Der fII含量的方法。
背景技術(shù)：
過敏性疾病(如哮喘、過敏性鼻炎、過敏性皮炎等)是臨床上的常見病、多發(fā)病，據(jù)2000年WHO/IAACI報告指出近些年來哮喘的發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢。全國部分城市對青少年哮喘流行病學(xué)統(tǒng)計(ISSAC調(diào)查)哮喘發(fā)病率為3.3％-5.1％，遠(yuǎn)較10年前(約1％)升高；目前全國至少有一千萬以上兒童患哮喘。
過敏性疾病是由于各種接觸或吸入變應(yīng)原引起的，變應(yīng)原大部分為蛋白質(zhì)，也可為多肽或糖類以及人工合成的物質(zhì)如藥物等。最常見的變應(yīng)原是塵螨。塵螨是強烈的變應(yīng)原之一，可引起的全身性變態(tài)反應(yīng)疾病包括變應(yīng)性哮喘、變應(yīng)性鼻球結(jié)膜炎、特應(yīng)性濕疹/皮炎、變應(yīng)性蕁麻疹等。螨性變應(yīng)疾病占各種變態(tài)反應(yīng)疾病的70％左右。在我國和世界的大部分地區(qū)，分布最廣泛的、研究最深入的兩種引起全身性變態(tài)反應(yīng)疾病的塵螨包括戶塵螨和粉塵螨。它們喜好在溫暖、潮濕環(huán)境中繁衍，經(jīng)深圳大學(xué)生命科學(xué)院劉志剛教授領(lǐng)導(dǎo)的課題組調(diào)查發(fā)現(xiàn)空調(diào)空氣濾網(wǎng)也是它們嗜好的棲居場所之一?？照{(diào)使用一段時間后，空氣濾網(wǎng)上就會有許多絮狀的附著物，這些附著物來源于人體脫落的皮屑、棉質(zhì)纖維、打掃衛(wèi)生、花粉、脫換衣服、吸煙等產(chǎn)生的懸浮物集聚而成。粉塵螨和戶塵螨喜歡生長在這種溫暖、潮濕并且有皮屑等食物的環(huán)境中。如果不定期或從未清洗空氣濾網(wǎng)，那么，空調(diào)一開，空氣濾網(wǎng)上的塵螨以及塵螨分泌排泄物等致敏物就會吹出來，附在人體皮膚上或吸入后沉積在呼吸道中，從而產(chǎn)生皮膚瘙癢、鼻塞、打噴嚏或哮喘等過敏性疾病。人們在密封空調(diào)室內(nèi)工作、生活和學(xué)習(xí)時間越來越多，因而室內(nèi)空調(diào)空氣濾網(wǎng)灰塵中塵螨變應(yīng)原也可成為室內(nèi)主要的致敏因素之一。
室內(nèi)環(huán)境一般泛指人們的生活居室、勞動、工作的辦公室和室內(nèi)場所、進(jìn)行其他室內(nèi)活動的公共場所等。室內(nèi)環(huán)境已成為現(xiàn)代人類生活、工作和進(jìn)行其他活動的主要場所。近年的國內(nèi)外研究資料表明，城市居民每天約70％-90％的時間在各種室內(nèi)環(huán)境中度過，因此，室內(nèi)空氣環(huán)境質(zhì)量的好壞，對人體健康的影響越來越大。
室內(nèi)生物性污染主要有生物性過敏原和病原微生物等。生物性過敏原主要是塵螨、真菌、細(xì)菌和花粉等室內(nèi)的空氣微生物，誘發(fā)人體出現(xiàn)過敏性變態(tài)反應(yīng)疾病，如過敏性鼻炎、哮喘等。其中塵螨是最主要的過敏原之一。
為了預(yù)防和控制室內(nèi)塵螨生物性過敏原污染，深圳大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院劉志剛教授領(lǐng)導(dǎo)的課題組進(jìn)行了新一代健康家電的研制，主要包括防治塵螨的空調(diào)和帶HEPA濾網(wǎng)的除螨吸塵器。
為了監(jiān)控空調(diào)和室內(nèi)其它地方塵螨污染狀況，并能定量反映出來，本發(fā)明運用納米磁性粒子酶聯(lián)免疫測定技術(shù)檢測空調(diào)空氣濾網(wǎng)灰塵和吸塵器收集灰塵中塵螨變應(yīng)原Der p II和Der fII的含量。
塵螨II組過敏原(Der p II和Der fII)是分子量為15KDa，有幾乎相同的N-端氨基酸序列的蛋白，也是通過螨蟲的胃腸道排泄的最主要的塵螨過敏原之一。
本發(fā)明通過納米磁性粒子酶聯(lián)免疫測定技術(shù)，測定空調(diào)空氣濾網(wǎng)灰塵和吸塵器收集灰塵中塵螨變應(yīng)原Der p II和Der fII的含量來時室內(nèi)塵螨污染狀況進(jìn)行監(jiān)控。具有地說通過PBS緩沖液提取空調(diào)空氣濾網(wǎng)灰塵和吸塵器收集灰塵中Der p II和Der fII作為檢測樣品。分別采用Der p II和Der fII單克隆抗體包裹納米磁性粒子，與待測樣品結(jié)合，再加入堿性磷酸酶標(biāo)記的Der p II、Der fII多抗，經(jīng)37℃溫育后形成固相包被抗體-抗原-酶標(biāo)記二抗復(fù)合物。洗滌、分離后加入底物AMPPD作為化學(xué)發(fā)光劑，AMPPD在堿性磷酸酶的催化作用下，迅速去磷酸，生產(chǎn)中介體AMPD。AMPD很快分解，從高能激發(fā)狀態(tài)，回到低能量的穩(wěn)定態(tài)，同時發(fā)射光子，這種發(fā)光穩(wěn)定、持續(xù)時間可長達(dá)1小時。通過光量子閱讀系統(tǒng)記錄發(fā)光強度，并從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出待測過敏原Der p II和Der fII的含量。通過灰塵總量分別計算出空調(diào)空氣濾網(wǎng)灰塵和吸塵器收集灰塵中塵螨變應(yīng)原Der p II和Der fII總含量。
本發(fā)明不僅提供了室內(nèi)塵螨污染狀況的檢測的技術(shù)手段，而且為健康家電包括空調(diào)和吸塵器的研制提供技術(shù)基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明通過納米磁性粒子酶聯(lián)免疫測定技術(shù)，測定空調(diào)空氣濾網(wǎng)灰塵和吸塵器收集灰塵中塵螨變應(yīng)原Der p II和Der fII的含量來對室內(nèi)塵螨污染狀況進(jìn)行監(jiān)控。具有地說通過PBS緩沖液提取空調(diào)空氣濾網(wǎng)灰塵和吸塵器收集灰塵中Der p II和Der fII作為檢測樣品。分別采用Der p II和Der fII單克隆抗體包裹納米磁性粒子，與待測樣品結(jié)合，再加入堿性磷酸酶標(biāo)記的Der p II、Der fII多抗，經(jīng)37℃溫育后形成固相包被抗體-抗原-酶標(biāo)記二抗復(fù)合物。洗滌、分離后加入底物AMPPD作為化學(xué)發(fā)光劑，AMPPD在堿性磷酸酶的催化作用下，迅速去磷酸，生產(chǎn)中介體AMPD。AMPD很快分解，從高能激發(fā)狀態(tài)，回到低能量的穩(wěn)定態(tài)，同時發(fā)射光子，這種發(fā)光穩(wěn)定、持續(xù)時間可長達(dá)1小時。通過光量子閱讀系統(tǒng)記錄發(fā)光強度，并從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出待測過敏原Der p II和Der fII的含量。通過灰塵總量分別計算出空調(diào)空氣濾網(wǎng)灰塵和吸塵器收集灰塵中塵螨變應(yīng)原Der p II和Der fII總含量。
本發(fā)明不僅提供了室內(nèi)塵螨污染狀況檢測的技術(shù)手段，而且為健康家電包括空調(diào)和吸塵器的研制提供技術(shù)基礎(chǔ)。
具體實施例方式
本發(fā)明的內(nèi)容，通過以下的實施例作具體說明實施例1空調(diào)空氣濾網(wǎng)灰塵的收集及其塵螨過敏原Der p II和Der fII的提取打開家用分體空調(diào)室內(nèi)進(jìn)氣口蓋子，輕輕取出空氣濾網(wǎng)，將其放在一張大的干凈的白紙上，用干凈的刷子將濾網(wǎng)上的灰塵刷下，收集并稱量總重量。先將總收集的灰塵研磨，再按每毫克灰塵加入200ulPBS(pH7.4)緩沖液，攪拌30分鐘，將其轉(zhuǎn)入收集管中，在8℃條件按每分鐘200轉(zhuǎn)振蕩24小時，按5000g離心20分鐘，收集離心上清，用0.45μm膜過濾除去漂浮物。過濾后液體即為待測樣品。
實施例2吸塵器收集灰塵中塵螨過敏原Der p II和Der fII的提取用帶HEPA濾網(wǎng)的家用吸塵器對室內(nèi)地面、墻面、床下、床被、家具表面等地方進(jìn)行吸塵，輕輕取出灰塵收集裝置并將其中的灰塵收集一起稱量其總重量。先將總收集的灰塵研磨，再按每毫克灰塵加入200ul PBS(pH7.4)緩沖液，攪拌30分鐘，將其轉(zhuǎn)入收集管中，在8℃條件按每分鐘200轉(zhuǎn)振蕩24小時，按5000g離心20分鐘，收集離心上清，用0.45μm膜過濾除去漂浮物。過濾后液體即為待測樣品。
實施例3空調(diào)空氣濾網(wǎng)灰塵提取樣品中Der p II和Der fII含量的測定取實施例1提取的待測樣品100ul進(jìn)行測定。分別采用Der p II、Der fII單抗包裹納米磁性粒子，與待測樣品結(jié)合，再加入堿性磷酸酶標(biāo)記的Der p II、Der fII多抗，經(jīng)37℃溫育后形成固相包被抗體-抗原-酶標(biāo)記二抗復(fù)合物。洗滌、分離后加入底物AMPPD作為化學(xué)發(fā)光劑，AMPPD在堿性磷酸酶的催化作用下，迅速去磷酸，生產(chǎn)中介體AMPD。AMPD很快分解，從高能激發(fā)狀態(tài)，回到低能量的穩(wěn)定態(tài)，同時發(fā)射光子，這種發(fā)光穩(wěn)定、持續(xù)時間可長達(dá)1小時。通過光量子閱讀系統(tǒng)記錄發(fā)光強度，并從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出待測過敏原Derp II和Der fII的含量。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制采用深圳大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院劉志剛教授領(lǐng)導(dǎo)的課題組通過基因工程表達(dá)的Der p II和Der fII重組蛋白作標(biāo)準(zhǔn)品。通過灰塵總量分別計算出空調(diào)空氣濾網(wǎng)灰塵中塵螨變應(yīng)原Der p II和Der fII總含量。
實施例4吸塵器收集灰塵提取樣品中Der p II和Der fII含量的測定取實施例2提取的待測樣品100ul進(jìn)行測定。分別采用Der p II、Der fII單抗包裹納米磁性粒子，與待測樣品結(jié)合，再加入堿性磷酸酶標(biāo)記的Der p II、Der fII多抗，經(jīng)37℃溫育后形成固相包被抗體-抗原-酶標(biāo)記二抗復(fù)合物。洗滌、分離后加入底物AMPPD作為化學(xué)發(fā)光劑，AMPPD在堿性磷酸酶的催化作用下，迅速去磷酸，生產(chǎn)中介體AMPD。AMPD很快分解，從高能激發(fā)狀態(tài)，回到低能量的穩(wěn)定態(tài)，同時發(fā)射光子，這種發(fā)光穩(wěn)定、持續(xù)時間可長達(dá)1小時。通過光量子閱讀系統(tǒng)記錄發(fā)光強度，并從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出待測過敏原Derp II和Der fII的含量。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制采用深圳大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院劉志剛教授領(lǐng)導(dǎo)的課題組通過基因工程表達(dá)的Der p II和Der fII重組蛋白作標(biāo)準(zhǔn)品。通過灰塵總量分別計算出吸塵器收集灰塵中塵螨變應(yīng)原Der p II和Der fII總含量。
權(quán)利要求
1.一種檢測空調(diào)空氣濾網(wǎng)灰塵和吸塵器收集灰塵中塵螨變應(yīng)原的方法。具體地說通過PBS緩沖液提取收集的灰塵作為檢測樣品。分別采用Der p II、Der f II單抗包裹納米磁性粒子，與待測樣品結(jié)合，再加入堿性磷酸酶標(biāo)記的Der p II、Der f II多抗，經(jīng)37℃溫育后形成固相包被抗體-抗原-酶標(biāo)記二抗復(fù)合物。洗滌、分離后加入底物AMPPD作為化學(xué)發(fā)光劑，AMPPD在堿性磷酸酶的催化作用下，迅速去磷酸，生產(chǎn)中介體AMPD。AMPD很快分解，從高能激發(fā)狀態(tài)，回到低能量的穩(wěn)定態(tài)，同時發(fā)射光子，這種發(fā)光穩(wěn)定、持續(xù)時間可長達(dá)1小時。通過光量子閱讀系統(tǒng)記錄發(fā)光強度，并從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出待測樣品中過敏原Der p II和Der f II的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法檢測空調(diào)空氣濾網(wǎng)灰塵中塵螨變應(yīng)原Der p II和Der f II含量的方法。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測吸塵器收集灰塵中塵螨變應(yīng)原Derp II和Der f II含量的方法。
4.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的方法應(yīng)用于評估空調(diào)防治塵螨功效的測試。
5.根據(jù)權(quán)利要1和3所述的方法應(yīng)用于評估吸塵器清除室內(nèi)塵螨功效的測試。
全文摘要
過敏性疾病是由于吸入或接觸各種變應(yīng)原引起的，其中，屋塵螨和粉塵螨引起的變應(yīng)疾病約占70％。本發(fā)明運用納米磁性粒子酶聯(lián)免疫測定技術(shù)檢測空調(diào)空氣過濾網(wǎng)灰塵和吸塵器收集灰塵中塵螨變應(yīng)原的含量。具體地說通過PBS提取收集的灰塵作為檢測樣品。分別采用Der p II、Der fII單抗包裹納米磁性粒子，與待測樣品結(jié)合，再加入堿性磷酸酶標(biāo)記的Der p II、Der fII多抗，經(jīng)溫育后形成固相包被的復(fù)合物。洗滌、分離后加入底物AMPPD作為化學(xué)發(fā)光劑，AMPPD在堿性磷酸酶的催化作用下，迅速去磷酸，生產(chǎn)中介體AMPD。AMPD分解后發(fā)射光子。通過閱讀系統(tǒng)記錄發(fā)光強度，并從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出待測樣品的濃度。
文檔編號G01N33/546GK1614420SQ20041005139
公開日2005年5月11日 申請日期2004年9月9日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月9日
發(fā)明者劉志剛, 吉坤美, 劉曉宇, 王廣偉, 蔡成郁, 喻海瓊, 高波, 黃志堅, 康敏雄 申請人:深圳大學(xué)