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一種腐生葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基及其制備方法

文檔序號(hào):537531閱讀:977來源:國知局
專利名稱:一種腐生葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域,具體涉及ー種腐生葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基及其制備方法。
背景技術(shù)
腐生葡萄球菌(Staph, saparophytics)為低毒力條件致病菌,感染后癥狀不典型,且呈現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象,給臨床診斷和治療帶來一定困難,高效可靠的檢驗(yàn)方法已是必然需要。所謂微生物培養(yǎng)是ー種用人工方法使微生物生長繁殖的技木,而選擇性選擇性培養(yǎng)基是用來促進(jìn)或抑制一定類型的生物體(如細(xì)胞或細(xì)菌等)而設(shè)計(jì)的選擇性培養(yǎng)基,利用這種選擇性培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。目前臨床上普遍使用的葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基為甘露醇高鹽瓊脂(Manitol SaltAgar),用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)。培養(yǎng)基成分為蛋白胨、雞蛋蛋白液、D-甘露醇、氯化鈉、酚紅、瓊脂。金黃色葡萄球菌菌落為黃色,大腸桿菌和沙門氏菌菌落為無色。但是,該種培養(yǎng)基并不能選擇性培養(yǎng)腐生葡萄球菌,其原因在于在目前的選擇性培養(yǎng)基中金黃色葡萄球菌比腐生葡萄球菌生長更快,很快覆蓋了培養(yǎng)基,腐生葡萄球菌無法生長。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是針對以上現(xiàn)有技術(shù)的不足,提供一種對腐生葡萄球菌分離率高的選擇性培養(yǎng)基。本發(fā)明解決其技術(shù)問題的技術(shù)方案是一種腐生葡萄球菌選擇 性培養(yǎng)基,其特征在,配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有
麥芽浸粉15g ;
雞蛋蛋白液150ml ;
氯化鈉5g ;
枸櫞酸鎂0. 5g ;
瓊脂15g ;
假細(xì)錐甲素8 12mg;
山柑子萜酮0. 5 g ;
磷酸ニ氫鉀0. 2g ;
蒸餾水加至1000ml。優(yōu)化方案中,每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅5mg。優(yōu)化方案中,每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有L-半胱氨酸0. lg。優(yōu)化方案中,每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的百合水煮液200 300ml。最優(yōu)化方案中,姆IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅5mg ;L-半胱氨酸0.1g ;濃度200g/L的百合水煮液20(T300ml。一種腐生葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基的制備方法,其特征在于包括以下步驟
(1)取百合加水煮沸I小時(shí),過濾,取濾液,調(diào)整體積到濃度為200g/L,得百合水煮液;
(2)取麥芽浸粉;雞蛋蛋白液;氯化鈉;枸櫞酸鎂;瓊脂;假細(xì)錐甲素;山柑子萜酮;磷酸ニ氫鉀;L-半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得百合水煮液中,混勻過濾后,蒸餾水定容,低溫滅菌2次,每次45 min,滅菌后分裝。其中所述的麥芽浸粉、雞蛋蛋白液提供碳氮源和能量;枸櫞酸鎂和磷酸ニ氫鉀為緩沖劑,并可以抑制雜菌生長山-半胱氨酸屬氨基酸類,為營養(yǎng)劑;瓊脂是選擇性培養(yǎng)基的凝固劑;假細(xì)錐甲素對于金葡菌具有特異的抑菌作用,對于腐生葡萄球菌無效;雞蛋蛋白液含有各種多肽、脂肪、生長因子、激素等,這些物質(zhì)對促進(jìn)腐生葡萄球菌的繁殖和生長都是很重要的因素,此外雞蛋蛋白液還具有維持選擇性培養(yǎng)基PH值恒定的作用。山柑子萜酮為腐生葡萄球菌特異性營養(yǎng)劑,可以特異性的促進(jìn)產(chǎn)色葡萄球菌繁殖。銅離子屬于重金 屬離子,在5mg/L這個(gè)濃度劑量下,沉積于金葡菌內(nèi)部,導(dǎo)致胞壁消失或變薄,核糖體聚集成團(tuán)塊,最終導(dǎo)致細(xì)菌變形及破裂,呈現(xiàn)重金屬源性損傷,而腐生葡萄球菌對重金屬的運(yùn)輸能力和滲透能力低于金葡菌,也即重金屬的抗性較高,故而加入硫酸銅可以有效地抑制金葡菌生長。百合為百合科植物卷丹Lilium lancifolium Thunb 、百合Lilium brown iiF. E. Brown var. viridulum Baker 或細(xì)葉百合 Lilium pumilum DC.的干燥肉質(zhì)鱗葉,含有蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉、還元糖、維生素B1、B2、泛酸、維生素C、P -胡蘿卜素等多種成分,可以提供能量代謝、細(xì)胞發(fā)育、新陳代謝因子,有助于促進(jìn)腐生葡萄球菌生長,尤其是重金屬環(huán)境下菌落的生長。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較,具有檢出可靠、腐生葡萄球菌分離率高的特點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)際情況,對本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說明。實(shí)施例1,配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素8mg ;山柑子職酮0. 5 g ;磷酸ニ氫鐘0. 2g ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥牙浸粉;雞蛋蛋白液;氣化納;構(gòu)橡Ife續(xù);瓊脂;假細(xì)錐甲素;山柑子萜酮;磷酸ニ氫鉀溶于蒸餾水中,混勻過濾后,蒸餾水定容,低溫滅菌2次,每次45 min,滅菌后分裝。實(shí)施例2,配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素12mg ;山柑子職酮0. 5 g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;硫酸銅5mg ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥芽浸粉;雞蛋蛋白液;氯化鈉;枸櫞酸鎂;瓊脂;假細(xì)錐甲素;山柑子萜酮;磷酸ニ氫鉀;硫酸銅溶于蒸餾水中,混勻過濾后,蒸餾水定容,低溫滅菌2次,毎次45 min,滅菌后分裝。實(shí)施例3,配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素IOmg ;山柑子職酮0. 5 g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;L-半胱氨酸0.1g ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥芽浸粉;雞蛋蛋白液;氯化鈉;枸櫞酸鎂;瓊脂;假細(xì)錐甲素;山柑子萜酮;磷酸ニ氫鉀;L-半胱氨酸溶于蒸餾水中,混勻過濾后,蒸餾水定容,低溫滅菌2次,毎次45 min,滅菌后分裝。
實(shí)施例4,配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素9mg ;山柑子職酮0. 5 g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;濃度200g/L的百合水煮液200ml ;蒸懼水加至1000ml。制備方法
(1)取百合加水煮沸I小時(shí),過濾,取濾液,調(diào)整體積到濃度為200g/L,得百合水煮液;
(2)取麥芽浸粉;雞蛋蛋白液;氯化鈉;枸櫞酸鎂;瓊脂;假細(xì)錐甲素;山柑子萜酮;磷酸ニ氫鉀溶于步驟I所得百合水煮液中,混勻過濾后,蒸餾水定容,低溫滅菌2次,毎次45min,滅菌后分裝。實(shí)施例5,配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素Ilmg ;山柑子職酮0. 5 g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;硫酸銅5mg ;L-半胱氨酸0.1g ;濃度200g/L的百合水煮液300ml ;蒸懼水加至1000ml。制備方法為
(1)取百合加水煮沸I小時(shí),過濾,取濾液,調(diào)整體積到濃度為200g/L,得百合水煮液;
(2)取麥芽浸粉;雞蛋蛋白液;氯化鈉;枸櫞酸鎂;瓊脂;假細(xì)錐甲素;山柑子萜酮;磷酸ニ氫鉀山-半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得百合水煮液中,混勻過濾后,蒸餾水定容,低溫滅菌2次,每次45 min,滅菌后分裝。所述的百合水煮液濃度為200g/L,指的是每升百合水煮液中含有生藥200g。本發(fā)明所得腐生葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基具有檢出可靠、腐生葡萄球菌分離率高的特點(diǎn),為臨床資料充分證明,有關(guān)資料如下。I對象與方法。1.1選擇性培養(yǎng)基制備共設(shè)3組,分別為對照組、實(shí)施例1方案組、實(shí)施例5方案組。對照組為葡萄球菌選擇性瓊脂110 (CHAPMAN瓊脂),配方為胰酪蛋白胨、酵母浸粉、明膠、D-甘露醇、乳糖、氯化鈉、磷酸氫ニ鉀、瓊脂。實(shí)施例1方案組、實(shí)施例5方案組的配方和制備方法見實(shí)施例。1. 2方法將80份經(jīng)由PCR確定腐生葡萄球菌陽性的標(biāo)本中混入金色葡萄球菌,接種于培養(yǎng)基上,在37°C下孵育24小吋。1. 3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用SPSS 13. 0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,Pく 0. 05表示有顯著性意義。2結(jié)果在80份接種標(biāo)本中,細(xì)菌培養(yǎng)分離并鑒定為腐生葡萄球菌的,實(shí)施例1方案組為72例,實(shí)施例5方案組為76例。對照組CHAPMAN瓊脂培養(yǎng)基菌落經(jīng)鑒定最后被證實(shí)均為金葡菌,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,本發(fā)明各實(shí)施例組與對照組比較具有明顯差異(P〈0. 001)。結(jié)果表明,本發(fā)明實(shí)施例腐生葡萄球菌分離率明顯高于現(xiàn)有的選擇性培養(yǎng)基。
權(quán)利要求
1.一種腐生葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基,其特征在,配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有 麥芽浸粉15g ; 雞蛋蛋白液150ml ; 氯化鈉5g ; 枸櫞酸鎂O. 5g ; 瓊脂15g ; 假細(xì)錐甲素8 12mg; 山柑子萜酮O. 5 g ; 磷酸二氫鉀O. 2g ; 蒸餾水加至1000ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腐生葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基,其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅5mg。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腐生葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基,其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有L-半胱氨酸O. lg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腐生葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基,其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的百合水煮液20(T300ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腐生葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基,其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅5mg ;L-半胱氨酸O.1g ;濃度200g/L的百合水煮液20(T300ml。
6.一種腐生葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基的制備方法,其特征在于包括以下步驟 (1)取百合加水煮沸I小時(shí),過濾,取濾液,調(diào)整體積到濃度為200g/L,得百合水煮液; (2)取麥芽浸粉;雞蛋蛋白液;氯化鈉;枸櫞酸鎂;瓊脂;假細(xì)錐甲素;山柑子萜酮;磷酸二氫鉀;L-半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得百合水煮液中,混勻過濾后,蒸餾水定容,低溫滅菌2次,每次45 min,滅菌后分裝。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種腐生葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基及其制備方法。其特征在于,配制1000ml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g;雞蛋蛋白液150ml;氯化鈉5g;枸櫞酸鎂0.5g;瓊脂15g;假細(xì)錐甲素8~12mg;山柑子萜酮0.5g;磷酸二氫鉀0.2g;蒸餾水加至1000ml。最佳優(yōu)化配方制備方法為取麥芽浸粉;雞蛋蛋白液;氯化鈉;枸櫞酸鎂;瓊脂;假細(xì)錐甲素;山柑子萜酮;磷酸二氫鉀;L-半胱氨酸及硫酸銅溶于百合水煮液中,混勻,定容,滅菌后分裝。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較,具有檢出可靠、腐生葡萄球菌分離率高的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12Q1/14GK103014123SQ201310010738
公開日2013年4月3日 申請日期2013年1月13日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月13日
發(fā)明者候素君 申請人:候素君
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