專利名稱：一種座殼孢次生代謝產(chǎn)物的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種座殼孢次生代謝產(chǎn)物的提取方法。技術(shù)背景
座殼孢(AscAer1SOflia)是蟲生真菌的重要成員，隸屬于子囊菌門、糞菌綱、肉座菌目、麥角菌科。座殼孢孢子具有殺粉虱活性，并有商品化的制劑。經(jīng)研究其代謝產(chǎn)物也具有殺粉虱、蚜蟲等的活性，而且由于代謝產(chǎn)物不受溫度、雨水等環(huán)境因素的影響，因此具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。不僅在農(nóng)藥方面有一定的應(yīng)用價(jià)值，在醫(yī)藥方面也具有潛在的開發(fā)價(jià)值，已研究座殼孢代謝產(chǎn)物在抗結(jié)核桿菌、瘧原蟲、腫瘤細(xì)胞等方面也有一定的活性，所以若要大規(guī)模提取應(yīng)用，首先要考慮提取方法的優(yōu)化。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的提供一種優(yōu)化座殼孢次級(jí)代謝物的提取方法，用該方法提取的次級(jí)代謝物質(zhì)量多，種類豐富，為大規(guī)模生產(chǎn)次級(jí)代謝物提供了參考條件。本發(fā)明提供了一種座殼孢次生代謝產(chǎn)物的提取方法，所述方法的具體步驟為
1)初級(jí)、次級(jí)培養(yǎng)座殼孢菌(邱君志等，昆蟲病原真菌粉虱座殼孢對(duì)煙粉虱侵染行為的初步研究.菌物學(xué)報(bào)，2004,23(1) :115 121)活化后，取菌塊接種到PDB培養(yǎng)基中，在13(Tl60r/min、24 28°C條件下連續(xù)培養(yǎng)7 10天即初級(jí)培養(yǎng)，按8% 10%接種量再次轉(zhuǎn)接到PDB培養(yǎng)基中，在24°C 28°C條件下靜止培養(yǎng)35 40天即得次級(jí)代謝產(chǎn)物；
2)冷浸提取菌液與菌絲體過濾分離，菌絲體在3°C 12°C的有機(jī)溶劑中浸泡48 100小時(shí)，過濾得浸泡液，旋蒸溫度控制在35°C 40V得浸膏，回收有機(jī)溶劑；
3)搖瓶萃取加水溶解浸膏，水與浸膏重量比為50:1 100:1,將水溶物倒入分液漏斗中，加入I 2倍的乙酸乙酯進(jìn)行搖瓶萃取,搖瓶轉(zhuǎn)速為150r/min 280r/min,搖20 60min后靜止IOOmin 200min,取乙酸乙酯部分,旋蒸濃縮得到粗提物，回收乙酸乙酯。所述PDB培養(yǎng)基的制備為200g馬鈴薯，20g葡萄糖，沸水煮30min，經(jīng)4層紗布過濾后加單蒸水定容至1L。更優(yōu)選的，所述步驟2)菌絲體在4°C 10°C的有機(jī)溶劑浸泡48 72小時(shí)。所述步驟2)中的有機(jī)溶劑為丙酮、乙醇、甲醇中的任一種。更優(yōu)選的，步驟3)所述的搖瓶萃取條件為200 250r/min搖20 40min后靜止100 150mino步驟3)所獲得的粗提取物通過GC-MS (氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用)檢測。本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)
本發(fā)明提供了一種優(yōu)化座殼孢次級(jí)代謝物的提取方法，用該方法提取的次級(jí)代謝物質(zhì)量多，種類豐富，且應(yīng)用GC-MS進(jìn)行檢測物質(zhì)更精確，為大規(guī)模生產(chǎn)座殼孢的次級(jí)代謝物提供了參考條件。


圖1為實(shí)施例1座殼孢菌揮發(fā)性成分GC-MS總離子流圖譜；圖2為實(shí)施例2座殼孢菌揮發(fā)性成分GC-MS總離子流圖譜；
圖3為實(shí)施例3座殼孢菌揮發(fā)性成分GC-MS總離子流圖譜；
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明，但是本發(fā)明不限于此。以下各實(shí)施例中PDB培養(yǎng)基的制備為200g馬鈴薯，20g葡萄糖，沸水煮30min，經(jīng)4層紗布過濾后加單蒸水定容至1L。實(shí)施例1 :1)座殼孢菌活化后，取菌塊接種到PDB培養(yǎng)基中，在130r/min、24°C條件下連續(xù)培養(yǎng)7天即初級(jí)培養(yǎng)，按8%接種量再次轉(zhuǎn)接到PDB培養(yǎng)基中，在24°C條件下靜止培養(yǎng)35天即次級(jí)代謝產(chǎn)物。
2)菌液與菌絲體過濾分離，將菌絲體在3°C、甲醇中浸泡48小時(shí)，過濾得浸泡液，溫度在35°C下旋蒸濃縮得浸膏，回收甲醇。3)加水溶解浸膏(水浸膏重量比=50:1 )，將水溶物倒入分液漏斗中，加入I倍的乙酸乙酯進(jìn)行搖瓶萃取，搖瓶轉(zhuǎn)速為150r/min搖60min,靜止IOOmin,取乙酸乙酯部分，旋蒸濃縮得粗提物，回收乙酸乙酯。4)用色譜甲醇將粗提物配成濃度為lmg/ml的溶液，用于GC-MS檢測，結(jié)果見圖1和表I。表I座殼孢菌揮發(fā)性成分的GC-MS分析
權(quán)利要求
1.一種座殼孢次生代謝產(chǎn)物的提取方法，其特征在于所述方法的具體步驟為 1)初級(jí)、次級(jí)培養(yǎng)座殼孢菌活化后，取菌塊接種到PDB培養(yǎng)基中，在130 160r/min、24 28°C條件下連續(xù)培養(yǎng)7 10天即初級(jí)培養(yǎng)，按8% 10%接種量再次轉(zhuǎn)接到PDB培養(yǎng)基中，在24°C 28°C條件下靜止培養(yǎng)35 40天即得次級(jí)代謝產(chǎn)物； 2)冷浸提取菌液與菌絲體過濾分離，菌絲體在3°C 12°C的有機(jī)溶劑中浸泡48 100小時(shí)，過濾得浸泡液，旋蒸溫度控制在35°C 40V得浸膏，回收有機(jī)溶劑； 3)搖瓶萃取加水溶解浸膏，水與浸膏重量比為50:1 100:1,將水溶物倒入分液漏斗中，加入I 2倍的乙酸乙酯進(jìn)行搖瓶萃取,搖瓶轉(zhuǎn)速為150r/min 280r/min,搖20 60min后靜止IOOmin 200min,取乙酸乙酯部分,旋蒸濃縮得到粗提物，回收乙酸乙酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種座殼孢次生代謝產(chǎn)物的提取方法，其特征在于所述TOB培養(yǎng)基的制備為200g馬鈴薯,20g葡萄糖,沸水煮30min,經(jīng)4層紗布過濾后加單蒸水定容至IL0
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種座殼孢次生代謝產(chǎn)物的提取方法，其特征在于所述步驟2)中的菌絲體在4°C 10°C的有機(jī)溶劑浸泡48 72小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種座殼孢次生代謝產(chǎn)物的提取方法，其特征在于所述步驟2)中的有機(jī)溶劑為丙酮、乙醇、甲醇中的任一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種座殼孢次生代謝產(chǎn)物的提取方法，其特征在于步驟3)所述的搖瓶萃取條件為200 250r/min搖20 40min后靜止100 150min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種座殼孢次生代謝產(chǎn)物的提取方法，其特征在于步驟3)所獲得的粗提取物通過GC-MS檢測。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種座殼孢次生代謝產(chǎn)物的提取方法，所述方法包括菌株的初級(jí)、次級(jí)培養(yǎng)，冷浸提取，搖瓶萃取得粗提取物，利用GC-MS檢測粗提物，應(yīng)用該提取方法得到的粗提取物質(zhì)量多、種類豐富，并且該方法設(shè)備簡單、使用成本低、易操作，為大規(guī)模生產(chǎn)提供了參考條件。
文檔編號(hào)C12P1/02GK103014066SQ20121050781
公開日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2012年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月3日
發(fā)明者邱君志, 毛麗慧, 郭慶豐, 李小霞, 何肖云, 張以盼, 孟麗雪, 曹麗萍, 邱云鋒 申請(qǐng)人:福建農(nóng)林大學(xué)