專利名稱：一種富含磷酸鹽的保健飲品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種可以提高機(jī)體端粒酶活性的富含磷酸鹽的保健飲品，屬于延遲生物衰老的保健飲品技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
隨著社會(huì)的發(fā)展和人類生活質(zhì)量的提高，人們?cè)絹?lái)越關(guān)注健康，越來(lái)越期盼壽命的延長(zhǎng)，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外生物科學(xué)工作者利用果蠅研究了多種因素對(duì)壽命的影響。吳亦帆等研究發(fā)現(xiàn)刺梨原汁有促進(jìn)果繩生長(zhǎng)發(fā)育和延緩衰老過(guò)程的作用。許今博等研究表明新疆紫草提取物AE- I、AE- II對(duì)果蠅均能延長(zhǎng)雌雄果蠅的平均壽命和最高壽命，并使果蠅的生存曲線顯著右移。黃代青應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法研究表明桑葉提取液對(duì)氧自由基中的羥自由基具有相當(dāng)強(qiáng)的清除作用，在劑量比中醫(yī)大辭典規(guī)定的大3倍以上時(shí)，并不降低果蠅的平均壽命，且對(duì)果蠅的最高壽命均有一定程度的提高。李連德等研究發(fā)現(xiàn)，從蟲(chóng)草深層發(fā)酵產(chǎn)物中提 取的多糖對(duì)果蠅具有延緩衰老的作用，來(lái)源于ATOl的胞內(nèi)、胞外多糖效果最好，延壽效果隨純度的增大而提高。生物體所含的大量元素包括C、H、O、N、P、S,其中磷是人體含量較多的元素之一。成人體內(nèi)磷含量約為600-900g，約占體重的1%。它不但是構(gòu)成人體的重要成分，而且參與生命活動(dòng)中一些非常重要的代謝過(guò)程。因此磷的充分?jǐn)z入對(duì)生物體的各項(xiàng)生命活動(dòng)具有重要的作用。在我國(guó)湖北省中部的鐘祥鎮(zhèn)千年來(lái)素有長(zhǎng)壽縣之稱。如今這里生活著77位百歲老人。鐘祥磷礦鎮(zhèn)是全市磷礦石品位最高的一個(gè)鎮(zhèn)。這些高齡人群的密集分布地恰恰是鐘祥的磷礦區(qū)域及其輻射圈。鐘祥人長(zhǎng)壽的主要原因之一可能是由于本地生活用水中含較高濃度的磷元素造成。因此可以推測(cè)，在一定范圍內(nèi)，高濃度的磷元素?cái)z入可能對(duì)人體具有一定的延緩衰老作用。研究表明，在動(dòng)物體內(nèi)磷元素的攝入主要通過(guò)擴(kuò)散機(jī)制，以無(wú)機(jī)離子的形式在腸道被吸收。另外，在磷礦區(qū)排放的廢水中磷元素主要以KH2PO4形式存在，KH2PO4是允許在食品中使用的添加劑，在飲料中的使用限度為2g/Kg，對(duì)生物體飼喂一定的KH2PO4不會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生有害的影響。因此，利用磷酸鹽KH2PO4飼喂生物體有望揭示攝入磷元素對(duì)其各種生理指標(biāo)的影響。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種可以提高機(jī)體端粒酶活性的富含磷酸鹽的保健飲品。本發(fā)明的富含磷酸鹽的保健飲品的組成是以水作為溶劑，每升溶液中含有80 400mg的食品級(jí)磷酸二氫鉀(KH2PO4)15本發(fā)明的富含磷酸鹽的保健飲品的組成是經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)確定的。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本申請(qǐng)人進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)研究
將小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只。對(duì)照CK組小鼠正常培養(yǎng)，五個(gè)處理組小鼠均通過(guò)背部皮下注射D-半乳糖建立為衰老模型，分別標(biāo)記為T(mén)O T4組，每個(gè)處理組飲用水中添加KH2PO4,使其終濃度依次為0mg/L、3. 2mg/L、16mg/L、80mg/L、400mg/L。每天觀察記錄小鼠的飲水量及生活狀況，6周后處死小鼠，檢查其腦、肝組織端粒酶活性及丙二醛(MDA)的含量。通過(guò)對(duì)D-半乳糖衰老模型小鼠和對(duì)照小鼠飼喂含有不同KH2PO4濃度的飲用水，6周后檢測(cè)結(jié)果表明與對(duì)照組相比，D-半乳糖衰老模型小鼠的腦、肝組織中丙二醛的含量明顯升高。在飲用含有不同濃度KH2PO4的飲用水后，均能不同程度降低小鼠體內(nèi)丙二醛的含量。當(dāng)飲用水中KH2PO4濃度為80mg/L時(shí)，降低效果較為顯著(表I)。表I不同濃度KH2PO4對(duì)衰老小鼠腦肝組織丙二醛(MDA)含量的影響
八MDA (rmo I /rog)
腦組織肝組織
對(duì)照_934rbQ.44__8.84土0.68·
TO17,98 土0.91# 17.29 ±O.S5#
Tl_17.45=t=1.54__HSO 土 1.67
T217.2 *7 ±1.821β.38±Ο.Ι8
3_16.43 土 1*23- IS.g 土O.雜*
T416.77+0.7815.95 ±1.99
* 與TO組比較，p〈0. 05，差異達(dá)到顯著水平。# :與對(duì)照組比較，p〈0. 05，差異達(dá)到顯著水平
對(duì)腦、肝組織中端粒酶的活性的檢測(cè)表明，D-半乳糖衰老模型小鼠的腦、肝組織中端粒酶的活性明顯降低，衰老小鼠的飲用水中添加不同濃度的KH2PO4均能夠提高端粒酶的活性，當(dāng)添加KH2PO4濃度為80mg/L時(shí)，端粒酶活性提高的效果最為明顯(表2)。表2不同濃度無(wú)機(jī)磷對(duì)衰老小鼠腦肝組織端粒酶活性的影響
#_端粒酶(rmoI /g)_
匁-腦組織:MTmm
對(duì)照 O. 26士 α 013O. 15士 CL OlO
TOO. 12土 O. 007#O. 08±0. 009—
Tl__O. 16± O. 006O. 09=b0. 008
T2O. 17±0. 018O. IOzb O. 003*
_ 3__O. 19 土 O. 006*O. 12士 O. 019木
T4O. 18+: O. 021O· IidbCX 007
*:與TO組比較，p〈0. 05，差異達(dá)到顯著水平.
#:與對(duì)照組比較，p〈0. 05，差異達(dá)到顯著水平.
## p<0. 01，差異達(dá)到極顯著水平.通過(guò)小鼠檢測(cè)獲知80mg/L的KH2PO4溶液可以提高其端粒酶活性和降低其體內(nèi)的丙二醛(MDA)含量，推測(cè)一定量的KH2PO4溶液對(duì)生物體壽命有所影響，因此利用大腸桿菌和果蠅為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，對(duì)其培養(yǎng)基中分別添加一定量的KH2PO4,檢測(cè)對(duì)其生長(zhǎng)的影響情況。對(duì)大腸桿菌的實(shí)驗(yàn)接種DH5 α大腸桿菌到LB培養(yǎng)基(胰蛋白胨10g，酵母浸出物5g，氯化鈉5g，蒸餾水1000ml，pH 7. 0-7. 2)，培養(yǎng)過(guò)夜后，接種ImL同濃度的菌液到分別含有 0mg/L、0. 64mg/L、3. 2mg/L、16mg/L、80mg/L、400mg/L、2g/L、5g/L、10g/L、25g/L KH2PO4 的LB培養(yǎng)基中，37°C，160rpm搖床培養(yǎng)4h。8000rpm，5min離心收集菌體，測(cè)量其重量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在培養(yǎng)基中添加不同濃度的KH2PO4對(duì)大腸桿菌的生長(zhǎng)狀況有明顯影響。以大腸桿菌菌體凈重為指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)表明，當(dāng)KH2PO4濃度為O. 64 2000 mg/L時(shí)，大腸桿菌菌體凈重比不添加KH2PO4的對(duì)照均有不同程度的增加，當(dāng)KH2PO4濃度為3. 2mg/L 時(shí)，大腸桿菌菌體凈重達(dá)到85. 35mg,比對(duì)照的菌體凈重70. 95mg增加最為明顯。因此,培養(yǎng)基中添加一定的KH2PO4對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，添加3. 2mg/L的KH2PO4對(duì)大腸桿菌生 長(zhǎng)促進(jìn)作用最大。當(dāng)培養(yǎng)基中KH2PO4濃度達(dá)到5000mg/L以上時(shí)，大腸桿菌的菌體凈重相對(duì)于對(duì)照組表現(xiàn)出逐漸減少，因此，高濃度的KH2PO4對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)具有抑制作用(圖I)。對(duì)果蠅的實(shí)驗(yàn)以野生型黒腹果蠅為實(shí)驗(yàn)材料，收集處女蠅，接種到含有Omg/L、O. 64mg/L、3. 2mg/L、16mg/L、80mg/L、400mg/L KH2PO4 的果蜆培養(yǎng)基(水 1L,玉米粉 105g,鹿糖75g，瓊脂7. 5g，丙酸6. 25ml，酵母粉20g)。25°C進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)處理共接種果蠅40只。接種后每天觀察果蠅生活狀況，并記錄果蠅死亡情況，繪制果蠅壽命曲線圖。試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)果蠅飼喂少量的KH2PO4均可以不同程度延長(zhǎng)果蠅的壽命。在培養(yǎng)基中添加的KH2PO4濃度為16mg/L時(shí)，果蠅壽命得到延長(zhǎng)的現(xiàn)象最為明顯。添加的KH2PO4濃度高于16mg/L時(shí)，果蠅壽命雖得到延長(zhǎng)，但隨培養(yǎng)基中KH2PO4濃度的增加果蠅壽命延長(zhǎng)的程度呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)，因此，在培養(yǎng)基中添加16mg/L的KH2PO4濃度對(duì)果蠅的生存最為有利(圖2)。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，由于大腸桿菌細(xì)胞是直接接觸到培養(yǎng)基中的KH2PO4溶液，吸收效率高，因此3. 2mg/L為其最適濃度。對(duì)果蠅的試驗(yàn)中，食物和水分來(lái)源均來(lái)自培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中含有16mg/L的KH2PO4濃度對(duì)果蠅的生存最為有利。對(duì)于小鼠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，試驗(yàn)中只在飲用水中添加KH2PO4,其飼喂飼料中并未添加，因此其飲用水中含有80mg/L的KH2PO4對(duì)小鼠的端粒酶活性提高和丙二醛(MDA)含量降低最為有利。由于小鼠作為哺乳動(dòng)物的模式生物，其生活方式最接近于人類，因此本發(fā)明的富含磷酸鹽的保健飲品可以主要借鑒小鼠實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)結(jié)果，考慮到80mg/L的KH2PO4對(duì)提高小鼠機(jī)體端粒酶活性的效果最佳，而400mg/L的KH2PO4溶液對(duì)小鼠端粒酶活性的提高效果與80mg/L的KH2PO4溶液效果基本持平。因此本富含磷酸鹽的保健飲品組成確定為每升水添加80 400mg的食品級(jí)KH2PO4。本發(fā)明的磷酸鹽保健飲品的最佳組成是每升水溶液中含有80mg的食品級(jí)磷酸二氫鉀(KH2PO4)15本發(fā)明所說(shuō)的富含磷酸鹽的保健飲品制備方法簡(jiǎn)單，用食品級(jí)KH2PO4配制成水溶液，即直接利用食品級(jí)KH2PO4配置成80 400mg/L的飲用水,其中，水可用礦泉水、純凈水、自來(lái)水均可。每天堅(jiān)持飲用，可起到提高人體端粒酶活性、延緩衰老的保健效果。
按照大腸桿菌培養(yǎng)基中添加2000 5000 mg/L的KH2PO4可能會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生負(fù)面影響計(jì)算，如果礦泉水中添加的KH2PO4濃度為400mg/L，則人體每人每天服用本飲品的上限為5升。本發(fā)明取得的有益效果是本保健飲品制備方法簡(jiǎn)單，長(zhǎng)期飲用，能夠顯著提高機(jī)體組織中端粒酶的活性，降低體內(nèi)丙二醛(MDA)的含量，拮抗自由基損傷，從而起到延緩衰老的積極作用，對(duì)機(jī)體無(wú)害。還可以按照一定濃度添加到飲料中，堅(jiān)持服用能起到延緩機(jī)體衰老的功效。


圖I為不同濃度的KH2PO4對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的影響。當(dāng)KH2PO4濃度為3. 2mg/L時(shí)，大腸桿菌菌體凈重達(dá)到85. 35mg,比對(duì)照的菌體凈重70. 95mg增加最為明顯。圖2為不同濃度KH2PO4的添加對(duì)果蠅壽命影響，在培養(yǎng)基中添加的KH2PO4濃度為16mg/L時(shí),果蜆壽命得到延長(zhǎng)的現(xiàn)象最為明顯。
具體實(shí)施例方式下面的實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受實(shí)施例的限制。實(shí)施例I
取小鼠20只，利用背部皮下注射D-半乳糖方法人工誘導(dǎo)為衰老模型。同時(shí)將其分為對(duì)照組和處理組，處理組飲用水組成為每升水中含有IOOmg的食品級(jí)KH2PO4,對(duì)照組飲用水中不添加KH2PO4，兩組飼料配方均為玉米粉27%、麩皮19%、大米16%、豆餅16%、魚(yú)粉13%、鈣粉3%、骨粉3%、酵母粉2.3%、食鹽0.5%、復(fù)合維生素0.1%、微量元素0.1%，不做其他任何特殊處理。每天觀察記錄小鼠的飲水量及生活狀況，6周后處死小鼠，檢查其肝組織端粒酶活性及丙二醛(MDA)的含量。通過(guò)對(duì)處理組和對(duì)照組小鼠的檢測(cè)，結(jié)果表明對(duì)照組相小鼠的肝組織中丙二醛的含量為18. 23±0. 68，與飲用水中添加IOOmg的KH2PO4處理組小鼠的肝組織中丙二醛含量15. 70±0. 12具有顯著差異。對(duì)照組相小鼠的肝組織端粒酶活性檢測(cè)為O. 07±0. 006，處理組小鼠的肝組織端粒酶活性為O. 10±0. 002兩者之間具有顯著差異。上述檢測(cè)表明，在衰老小鼠的飲用水中每升水中添加IOOmg的KH2PO4能夠顯著提高其肝組織端粒酶的活性，降低其肝組織中的丙二醛含量。實(shí)施例2
取小鼠20只，利用背部皮下注射D-半乳糖方法人工誘導(dǎo)為衰老模型。同時(shí)將其分為對(duì)照組和處理組，處理組飲用水中添加200mg/L的KH2PO4,對(duì)照組飲用水中不添加KH2PO4,兩組飼料配方均為玉米粉27%、麩皮19%、大米16%、豆餅16%、魚(yú)粉13%、鈣粉3%、骨粉3%、酵母粉2.3%、食鹽0.5%、復(fù)合維生素0.1%、微量元素O. 1%，不做其他任何特殊處理。每天觀察記錄小鼠的飲水量及生活狀況，6周后處死小鼠，檢查其肝組織端粒酶活性及丙二醛(MDA)的含量。通過(guò)對(duì)處理組和對(duì)照組小鼠的檢測(cè)，結(jié)果表明對(duì)照組相小鼠的肝組織中丙二醛的含量為19. 26±0. 37，與飲用水中添加200mg/L的KH2PO4處理組小鼠的肝組織中丙二醛含量16. 85±0. 17具有顯著差異。對(duì)照組相小鼠的肝組織端粒酶活性檢測(cè)為O. 09±0. 002，處理組小鼠的肝組織端粒酶活性為O. 12±0. 011兩者之間具有顯著差異。上述檢測(cè)表明，在衰老小鼠的飲用水中添加200mg/L的KH2PO4同樣能夠顯著提高其肝組織端粒酶的活性，降低其肝組織中的丙二醛含量。實(shí)施例3
取小鼠20只，利用背部皮下注射D-半乳糖方法人工誘導(dǎo)為衰老模型。同時(shí)將其分為對(duì)照組和處理組，處理組飲用水中添加300mg/L的KH2PO4,對(duì)照組飲用水中不添加KH2PO4,兩組飼料配方均為玉米粉27%、麩皮19%、大米16%、豆餅16%、魚(yú)粉13%、鈣粉3%、骨粉3%、酵母粉2.3%、食鹽0.5%、復(fù)合維生素0.1%、微量元素O. 1%，不做其他任何特殊處理。每天觀察記錄小鼠的飲水量及生活狀況，6周后處死小鼠，檢查其肝組織端粒酶活性及丙二醛(MDA)的含量。通過(guò)對(duì)處理組和對(duì)照組小鼠的檢測(cè)，結(jié)果表明對(duì)照組相小鼠的肝組織中丙二醛的含量為18. 21 ±0. 87，與飲用水中添加300mg/L的KH2PO4處理組小鼠的肝組織中丙二醛含量16. 12±0. 52具有顯著差異。對(duì)照組相小鼠的肝組織端粒酶活性檢測(cè)為O. 07±0. 011，處理組小鼠的肝組織端粒酶活性為O. 10±0. 005兩者之間具有顯著差異。上述檢測(cè)表明，在衰老小鼠的飲用水中添加300mg/L的KH2PO4同樣也能顯著提高其肝組織端粒酶的活性，降低其肝組織中的丙二醛含量。實(shí)施例4
取小鼠20只，利用背部皮下注射D-半乳糖方法人工誘導(dǎo)為衰老模型。同時(shí)將其分為對(duì)照組和處理組，處理組飲用水中添加400mg/L的KH2PO4,對(duì)照組飲用水中不添加KH2PO4,兩組飼料配方均為玉米粉27%、麩皮19%、大米16%、豆餅16%、魚(yú)粉13%、鈣粉3%、骨粉3%、酵母粉2.3%、食鹽0.5%、復(fù)合維生素0.1%、微量元素O. 1%，不做其他任何特殊處理。每天觀察記錄小鼠的飲水量及生活狀況，6周后處死小鼠，檢查其肝組織端粒酶活性及丙二醛(MDA)的含量。通過(guò)對(duì)處理組和對(duì)照組小鼠的檢測(cè)，結(jié)果表明對(duì)照組相小鼠的肝組織中丙二醛的含量為17. 62 ± O. 59，與飲用水中添加400mg/L的KH2PO4處理組小鼠的肝組織中丙二醛含量15. 75±0. 64具有顯著差異。對(duì)照組相小鼠的肝組織端粒酶活性檢測(cè)為O. 08±0. 007，處理組小鼠的肝組織端粒酶活性為O. 10±0. 015兩者之間具有顯著差異。上述檢測(cè)表明，在衰老小鼠的飲用水中添加400mg/L的KH2PO4也能顯著提高其肝組織端粒酶的活性，降低其肝組織中的丙二醛含量。實(shí)施例5
取小鼠20只，利用背部皮下注射D-半乳糖方法人工誘導(dǎo)為衰老模型。同時(shí)將其分為對(duì)照組和處理組，處理組飲用水中添加80mg/L的KH2PO4，對(duì)照組飲用水中不添加KH2PO4，兩組飼料配方均為玉米粉27%、麩皮19%、大米16%、豆餅16%、魚(yú)粉13%、鈣粉3%、骨粉3%、酵母粉2.3%、食鹽0.5%、復(fù)合維生素0.1%、微量元素O. 1%，不做其他任何特殊處理。每天觀察記錄小鼠的飲水量及生活狀況，6周后處死小鼠，檢查其肝組織端粒酶活性及丙二醛(MDA)的含量。通過(guò)對(duì)處理組和對(duì)照組小鼠的檢測(cè)，結(jié)果表明對(duì)照組相小鼠的肝組織中丙二醛·的含量為17. 49 ± O. 47，與飲用水中添加80mg/L的KH2PO4處理組小鼠的肝組織中丙二醛含量14. 63±0. 37具有極顯著差異。對(duì)照組相小鼠的肝組織端粒酶活性檢測(cè)為O. 06±0. 001，處理組小鼠的肝組織端粒酶活性為O. 10±0. 002兩者之間具有極顯著差異。
上述檢測(cè)表明，在衰老小鼠的飲用水中添加80mg/L的KH2PO4能極顯著提高其肝組織端粒酶的活性，降低其肝組織中的丙二醛含量。
權(quán)利要求
1.一種富含磷酸鹽的保健飲品，其特征在于其組成如下以水作為溶劑，每升水溶液中含有食品級(jí)磷酸二氫鉀(KH2PO4) 80 400mg。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的富含磷酸鹽的保健飲品，其特征在于每升水溶液中含有食品級(jí)磷酸二氫鉀(KH2PO4) 80mg。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種富含磷酸鹽的保健飲品。利用食品級(jí)磷酸二氫鉀(KH2PO4)，以一定濃度配制成飲用水，每升水溶液中含有80～400mg的食品級(jí)磷酸二氫鉀(KH2PO4)。長(zhǎng)期飲用，可以達(dá)到提高機(jī)體端粒酶活性的效果。本發(fā)明制備方法簡(jiǎn)單，成本低，對(duì)生物體無(wú)害。應(yīng)用范圍廣，可以按照一定濃度添加到飲料中，堅(jiān)持服用能起到延緩機(jī)體衰老的功效。
文檔編號(hào)A23L2/38GK102934829SQ20121048384
公開(kāi)日2013年2月20日 申請(qǐng)日期2012年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月26日
發(fā)明者葛榮朝, 李小敏, 李明明, 喬玉倩, 李越, 何寧, 吳瓊, 楊秋爽, 郗亞萍, 楊帥 申請(qǐng)人:河北師范大學(xué)