專利名稱：來自辣椒疫霉菌的阿魏酸酯酶pcfae2及其編碼基因與應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種阿魏酸酯酶及其編碼基因與應用，特別涉及來自辣椒疫霉菌的阿魏酸酯酶PCFAE2及其編碼基因與應用。
背景技術：
辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)屬真菌門、鞭毛菌亞門、卵菌綱、霜霉目。辣椒疫霉菌是一種寄主范圍廣的致病菌，除侵染辣椒外，還侵染其它作物。周啟明等報道侵染9科21種栽培植物和雜草；任光馳等試驗結果認為該菌可危害爺子、黃瓜、番爺、 豇豆、菜豆、白菜、甘藍、蘿卜、胡蘿卜、桃、杏、蘋果等。對蔥、蒜侵染カ弱，對柑桔及馬鈴薯莖、葉不侵染。對辣椒的致病力最強。辣椒疫病是由辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)所引起的一種土傳病害，可經雨水、土壌、氣流等多種途徑傳播，除了引起大面積死秧外，還可造成葉片枯萎、果實腐爛、莖桿出現(xiàn)壞死斑，以及萎蔫死亡等多種癥狀。中國首次于20世紀40年代在江蘇報道此病的發(fā)生，此后陸續(xù)有相關報道，且表現(xiàn)為逐年加重的趨勢。80年代以來，辣椒疫病在全國各地普遍發(fā)生，新疆、北京、黑龍江、貴州、上海、青海、云南、陜西、甘肅、廣東以及長江流域尤為嚴重。辣椒疫病是辣椒栽培及生產上ー種世界性分布較廣的毀滅性病害，該病發(fā)病周期短，流行速度快，給生產上帶來嚴重的經濟損失。深入開展辣椒疫霉菌致病基因的分離及鑒定對辣椒疫霉菌所導致的多種植物病害的防治與研究具有重要的實踐意義。

發(fā)明內容
本發(fā)明的ー個目的是提供一種阿魏酸酯酶。本發(fā)明所提供的阿魏酸酯酶，名稱為PCFAE2，來源于辣椒疫霉菌(Phytophthoracapsici) SD33,是如下a)或b)或c)的蛋白質a)由序列表中序列2第21-569位所示的氨基酸序列組成的蛋白質；b)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；c)將序列表中序列2所示的氨基酸序列或序列2第21-569位所示的氨基酸序列經過ー個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與辣椒疫霉菌致病性相關的由a)衍生的蛋白質。其中，序列表中序列2由569個氨基酸殘基組成，第1-20位氨基酸組成信號肽。a)所述的蛋白質是阿魏酸酯酶的成熟蛋白，b)所述的蛋白質是阿魏酸酯酶的前體蛋白。為了使上述(a)中的蛋白便于純化，可在由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質的氨基末端或羧基末端連接上如表I所示的標簽。表I標簽的序列
權利要求
1.一種蛋白，是如下a)或b)或c)的蛋白質 a)由序列表中序列2第21-569位所示的氨基酸序列組成的蛋白質； b)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質； c)將序列表中序列2所示的氨基酸序列或序列2第21-569位所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與辣椒疫霉菌致病性相關的由a)衍生的蛋白質。
2.編碼權利要求I所述蛋白的核酸分子。
3.根據權利要求2所述的核酸分子，其特征在于所述核酸分子為如下I)或2)或3)或4)所示的基因 1)其編碼序列是序列表中序列I的第61-1710位核苷酸的DNA分子； 2)其編碼序列是序列表中序列I的第1-1710位核苷酸的DNA分子； 3)在嚴格條件下與I)或2)限定的DNA分子雜交且編碼權利要求I所述蛋白的DNA分子; 4)與I)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同源性且編碼權利要求I所述蛋白的DNA分子。
4.下述I)-4)中的任一種生物材料 1)含有權利要求2或3所述核酸分子的表達盒； 2)含有權利要求2或3所述核酸分子的重組表達載體； 3)含有權利要求2或3所述核酸分子的重組微生物； 4)含有權利要求2或3所述核酸分子的轉基因細胞系。
5.制備權利要求I所述蛋白質的方法，包括將權利要求I所述的蛋白質的編碼基因在生物細胞中進行表達得到權利要求I所述蛋白質的步驟；所述生物細胞為微生物細胞、植物細胞或非人動物細胞。
6.制備表達權利要求I所述蛋白質的重組微生物的方法，包括將權利要求I所述的蛋白質的編碼基因導入宿主微生物細胞，得到表達權利要求I所述蛋白質的重組微生物的步驟。
7.權利要求I所述蛋白質、權利要求2或3所述的核酸分子或權利要求4所述的生物材料的應用，其特征在于所述應用為下述I) -3)中任一種 1)權利要求I所述的蛋白質在作為阿魏酸酯酶中的應用； 2)權利要求I所述的蛋白質在調控辣椒疫霉圃致病性中的應用； 3)權利要求2或3所述的核酸分子或權利要求4所述的生物材料在制備阿魏酸酯酶中的應用。
8.一種鑒定辣椒疫霉菌殺菌劑的方法，包括如下a) -e)中的任一步驟 a)鑒定所述待檢測物質是否抑制權利要求I所述蛋白質的表達，如所述待測物質能抑制權利要求I所述蛋白質的表達，則所述待測物質為候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；如所述待測物質不能抑制權利要求I所述蛋白質的表達，則所述待測物質為非候選的辣椒疫霉菌殺菌劑； b)鑒定所述待檢測物質是否降低權利要求I所述蛋白質的表達水平，如所述待測物質能降低權利要求I所述蛋白質的表達水平，則所述待測物質為候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；如所述待測物質不能降低權利要求I所述蛋白質的表達水平，則所述待測物質為非候選的辣椒疫霉菌殺菌劑； c)鑒定所述待檢測物質是否抑制權利要求I所述蛋白質的編碼基因的轉錄，如所述待測物質能抑制權利要求I所述蛋白質的編碼基因的轉錄，則所述待測物質為候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；如所述待測物質不能抑制權利要求I所述蛋白質的編碼基因的轉錄，則所述待測物質為非候選的辣椒疫霉菌殺菌劑； d)鑒定所述待檢測物質是否降低權利要求I所述蛋白質的編碼基因的轉錄水平，如所述待測物質能降低權利要求I所述蛋白質的編碼基因的轉錄水平，則所述待測物質為候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；如所述待測物質不能降低權利要求I所述蛋白質的編碼基因的轉錄水平，則所述待測物質為非候選的辣椒疫霉菌殺菌劑； e)鑒定所述待檢測物質是否使權利要求I所述蛋白質失活，如所述待測物質能使權利要求I所述蛋白質失活，則所述待測物質為候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；如所述待測物質不能使權利要求I所述蛋白質失活，則所述待測物質為非候選的辣椒疫霉菌殺菌劑。
9.具有如下I)-5)中至少一種功能的物質在制備辣椒疫霉菌殺菌劑中的應用 1)抑制權利要求I所述蛋白質的表達； 2)抑制權利要求I所述蛋白質的編碼基因的轉錄； 3)降低權利要求I所述蛋白質的表達水平； 4)降低權利要求I所述蛋白質的編碼基因的轉錄水平； 5)使權利要求I所述蛋白質失活。
10.擴增權利要求2或3所述的核酸分子的全長或其任意片段的引物對。
全文摘要
本發(fā)明公開了來自辣椒疫霉菌的阿魏酸酯酶PCFAE2及其編碼基因與應用。本發(fā)明所提供的阿魏酸酯酶PCFAE2，是如下a)或b)或c)的蛋白質a)由序列表中序列2第21-569位所示的氨基酸序列組成的蛋白質；b)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；c)將序列表中序列2所示的氨基酸序列或序列2第21-569位所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與辣椒疫霉菌致病性相關的由a)衍生的蛋白質。本發(fā)明為進一步研制辣椒疫霉病菌分子檢測技術、辣椒疫霉菌所導致的多種植物病害的防治與研究提供了技術基礎。
文檔編號C12N15/11GK102676468SQ20121016406
公開日2012年9月19日 申請日期2012年5月24日 優(yōu)先權日2012年5月24日
發(fā)明者張修國 申請人:山東農業(yè)大學