專利名稱：一種固定化l-天冬酰胺酶反應(yīng)器的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種固定化L-天冬酰胺酶反應(yīng)器。
背景技術(shù)：
L-天冬酰胺酶是ー種從Escherichia coli中提取的ー種藥物,應(yīng)用于治療急性淋巴細(xì)胞白血病(Krejci O, Starkova J, Otova B, Madzo J, Kalinova M, Hrusak O, TrkaJ(2004) Leukemia 18:434-441)。自1967年，L-天冬酰胺酶就作為治療兒童急性淋巴細(xì)胞白血病的重要組成藥物。這種酶可以水解血清中的L-天冬酰胺導(dǎo)致細(xì)胞凋亡和損害蛋白質(zhì)的合成。但是這種酶作為藥物存在嚴(yán)重的副作用，包括腎臟毒性、過(guò)敏反應(yīng)、胰腺炎及中樞神經(jīng)毒性等，并且會(huì)降低凝血因子的合成。為了避免這些副作用，L-天冬酰胺酶可以進(jìn)行化學(xué)修飾，包埋或固定于載體上。其中采用將酶固定于某種材料并且建立體外循環(huán)系統(tǒng)(ESS)具有較好的優(yōu)勢(shì)。ESS系統(tǒng)是將L-天冬酰胺酶固定于柱體、中空纖維或血液透析膜 等(Jackson JA, Halvorson HR, Furlong JW, Lucast KD, Shore, JD(1979)J. Pharmacol. Exp.Ther 209:271-274),然后血液流過(guò)酶反應(yīng)器酶解血清中的L-天冬酰胺再流回體內(nèi)，實(shí)現(xiàn)疾病的治療。這種方法不需要將藥物注入體內(nèi)，因此可以避免副作用的發(fā)生。而為了適應(yīng)這種方法的發(fā)展，需要尋找并建立新的生物相容性良好、低毒性的酶固定化材料。在過(guò)去的幾十年中，酶固定方法可以克服游離酶在酶反應(yīng)過(guò)程中的眾多缺點(diǎn)，可以快速、高效和高通量的進(jìn)行酶解研究。許多新發(fā)展的材料已經(jīng)被應(yīng)用于酶的固定化，比如娃材料(Rao KS, Rani SU, Charyulu DK, Kumarb KN, Lee BK, Lee HY, Kawai T (2006)Anal ChimActa 576:177-183)、納米顆粒(Mukhopadhyay K, Phadtare S，Vinod VP, KumarA, Rao M, Chaudhari RV, Sastry M (2003) Langmuir 19:3858-3863)、碳納米管(Wang S，ChenZ, Yang PY,Chen G(2008)Proteomics 8:1785-1788)及其它表面固定材料已經(jīng)被應(yīng)用于酶固定。因此尋找新的生物相容性好的酶固定化材料成為生物傳感和生物醫(yī)藥領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)傳統(tǒng)的固定化酶的載體比表面積小，且容易造成酶失活，儲(chǔ)存穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)，本發(fā)明提供了ー種新型的納米金固定化L-天冬酰胺酶反應(yīng)器及其制備方法。本發(fā)明所提供的納米金固定化L-天冬酰胺酶反應(yīng)器是按照包括下述步驟的方法制備得到的I)將納米金溶液與L-天冬酰胺酶溶液混勻，室溫?cái)嚢鐿. 5-5小時(shí)(優(yōu)選I小吋)，然后置于2-8°C靜置反應(yīng)12-24小時(shí)(優(yōu)選24小吋)，得到L-天冬酰胺酶-納米金聚集體溶液；2)制備內(nèi)壁修飾疏基娃燒偶聯(lián)劑的毛細(xì)管柱；3)將所述L-天冬酰胺酶-納米金聚集體溶液流經(jīng)步驟2)處理后的毛細(xì)管并與其內(nèi)壁充分接觸，在2-8°C放置反應(yīng)12-24小時(shí)(優(yōu)選24小吋)，利用巰基與納米金的反應(yīng)使L-天冬酰胺酶-納米金聚集體固定于毛細(xì)管柱內(nèi)壁，得到納米金固定化L-天冬酰胺酶反應(yīng)器。其中，步驟I)中所述納米金溶液中納米金的平均粒徑為13_22nm。本發(fā)明中的納米金可采用檸檬酸三鈉法制備得到。所述L-天冬酰胺酶溶液的濃度為4. 5-225. OU/mL。L-天冬酰胺酶活力測(cè)定在規(guī)定條件下，每分鐘催化L-天冬酰胺水解釋放I μ mol氨的酶量定義為I個(gè)酶活力単位(U)。在制備L-天冬酰胺酶-納米金聚集體吋，需保證L-天冬酰胺酶相對(duì)于納米金是過(guò)量的。當(dāng)采用如下方法制備納米金溶液時(shí)，所述納米金溶液與上述L-天冬酰胺酶溶液的體積比可為1:1-1:5。
納米金溶液制備方法將氯金酸(I. OmM, 10. OmL)煮沸后，快速加入I. OmL新配制的檸檬酸酸三鈉(38. 8mM)溶液中，加熱同時(shí)快速攪拌，溶液變?yōu)槟G色，進(jìn)而變?yōu)榫萍t色，再繼續(xù)攪拌10分鐘，用三蒸水稀釋3倍后，即得到待用的納米金溶液。步驟2)中制備內(nèi)壁修飾巰基硅烷偶聯(lián)劑的毛細(xì)管柱的具體方法如下1)將毛細(xì)管內(nèi)壁進(jìn)行活化；2)將巰基硅烷偶聯(lián)劑與甲醇按照體積比1:4-1:1進(jìn)行混合(優(yōu)選1:4)，將混合溶液流經(jīng)活化后的毛細(xì)管并與其內(nèi)壁充分接觸，然后室溫放置反應(yīng)12-24小時(shí)(優(yōu)選12小時(shí))，得到內(nèi)壁修飾疏基娃燒偶聯(lián)劑的毛細(xì)管柱。所述巰基硅烷偶聯(lián)劑具體可為(3-巰基丙基)-三甲氧基硅烷等。其中，對(duì)毛細(xì)管內(nèi)壁進(jìn)行活化的方法可按照下述方法進(jìn)行將毛細(xì)管先依次用氫氧化鈉溶液、水進(jìn)行清洗；再依次用鹽酸溶液、水依次進(jìn)行清洗；最后用有機(jī)溶劑如丙酮、甲醇或四氫呋喃沖洗，氮?dú)獯蹈?。所述氫氧化鈉溶液的濃度可為O. 1-1. 0M，氫氧化鈉溶液清洗的時(shí)間為O. 5-2小時(shí)(優(yōu)選2小時(shí))。所述鹽酸溶液的濃度可為O. 1-1. OM(優(yōu)選I. 0M),鹽酸溶液清洗的時(shí)間為10-30分鐘(優(yōu)選10分鐘)。水清洗的時(shí)間可為10-30分鐘(優(yōu)選10分鐘)。所述毛細(xì)管的長(zhǎng)度可為5-50cm。上述方法得到的納米金固定化L-天冬酰胺酶反應(yīng)器可放置于4°C保存?zhèn)溆?。此外，納米金作為酶固定化材料在制備固定化L-天冬酰胺酶中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明制備的L-天冬酰胺酶固定化酶的方法結(jié)合了納米金比表面積大、生物相容性良好、方便鍵合酶的特點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)了 L-天冬酰胺酶在毛細(xì)管通道內(nèi)壁的固定，且有效提高了 L-天冬酰胺酶對(duì)于L-谷氨酰胺的酶解效率。該固定化酶反應(yīng)器制備過(guò)程簡(jiǎn)單，提高酶的利用率及效率，有利于開(kāi)發(fā)L-天冬酰胺酶的新型給藥方法并為疾病的診斷和治療提供研究依據(jù)。


圖I為納米金(A)及酶-納米金聚集體(B)的透射電鏡和酶-納米金聚集體鍵合毛細(xì)管內(nèi)壁(C)及其部分放大(D)的掃描電鏡表征圖。
具體實(shí)施例方式下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于此。下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法；所述試劑和材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑獲得。下述實(shí)施例中所用的L-天冬酰胺酶的比活力為225. OU/mg。實(shí)施例中所用的納米金的制備方法具體如下將氯金酸(I. OmM, 10. OmL)煮沸后，快速加入I. OmL新配制的檸檬酸酸三鈉(38. 8mM)溶液中，加熱同時(shí)快速攪拌，溶液變?yōu)槟v色，進(jìn)而變?yōu)榫萍t色，再繼續(xù)攪拌10分鐘，所得到的納米金溶液用三蒸水稀釋3倍后備 用。所制備的納米金平均粒徑20nm，最大吸收波長(zhǎng)522nm。將納米金溶液與L-天冬酰胺酶溶液按照I: I (v/v)混勻，室溫?cái)嚢鐸小吋，再放置于4°C冰箱反應(yīng)24小吋，即可得到L-天冬酰胺酶-納米金聚集體溶液。將不同長(zhǎng)度的毛細(xì)管(5_50cm)進(jìn)行清洗用I. OM氫氧化鈉溶液進(jìn)行沖洗2小時(shí)，水沖洗10分鐘，I. OM鹽酸溶液和水依次進(jìn)行清洗10分鐘，有機(jī)溶劑丙酮沖洗5分鐘后氮?dú)獯蹈?。?3-巰基丙基)-三甲氧基硅烷與甲醇(體積比1:4)混勻后，溶液負(fù)壓流過(guò)毛細(xì)管柱，室溫放置12小時(shí)后用甲醇和水反復(fù)沖洗，備用。將納米金溶液-L-天冬酰胺酶溶液聚集體流過(guò)毛細(xì)管柱并且在4°C放置反應(yīng)24小吋，多余未反應(yīng)的酶-納米金聚集體用去離子水沖洗，實(shí)現(xiàn)了 L-天冬酰胺酶的固定。用于固定化的酶為L(zhǎng)_天冬酰胺酶。納米金的形貌和粒徑通過(guò)透射電鏡和紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)進(jìn)行表征；L_天冬酰胺酶-納米金聚集體在毛細(xì)管內(nèi)壁的鍵合通過(guò)掃描電鏡進(jìn)行表征；載酶量通過(guò)Bradford方法測(cè)定(Ma JF, Liang Z, Qiao XQ, Deng QL, Tao DY, Zhang LH, Zhang YK (2008) AnalChem80:2949-2953);酶固定于納米金上的活性及酶-納米金聚集體固定于毛細(xì)管內(nèi)壁的活性測(cè)定根據(jù)(Qiao J, Qi L, Ma H. M, Chen Y, Wang MX, Wang DX (2010) Electrophoresis31:1565-1571 ；Qiao J, Qi L, Mu XY，Chen Y(2011)Analyst 136:2077-2083)。實(shí)施例I、制備納米金固定化L-天冬酰胺酶反應(yīng)器I)將納米金溶液與L-天冬酰胺酶溶液(濃度225. OU/mL)按照I: I (v/v)混勻，室溫?cái)嚢鐸小時(shí)，再放置于4°C冰箱反應(yīng)24小時(shí)，得到L-天冬酰胺酶-納米金聚集體溶液。2)將30cm毛細(xì)管用I. OM氫氧化鈉溶液進(jìn)行沖洗2小時(shí)，水沖洗10分鐘，I. OM鹽酸溶液和水依次進(jìn)行清洗10分鐘，有機(jī)溶劑丙酮沖洗5分鐘后氮?dú)獯蹈伞Ｓ?3-巰基丙基)-三甲氧基硅烷與甲醇(體積比1:4)混勻后溶液負(fù)壓流過(guò)毛細(xì)管柱，室溫放置12小時(shí)后用甲醇和水反復(fù)沖洗，即得到內(nèi)壁修飾巰基硅烷偶聯(lián)劑的毛細(xì)管柱，備用。3)將納米金溶液-L-天冬酰胺酶溶液聚集體流過(guò)毛細(xì)管柱并且在4°C放置反應(yīng)24小吋，多余未反應(yīng)的酶-納米金聚集體用去離子水沖洗，實(shí)現(xiàn)了 L-天冬酰胺酶的固定，于4 °C下儲(chǔ)存?zhèn)溆谩DI為納米金(A)及酶-納米金聚集體(B)的透射電鏡和酶-納米金聚集體鍵合毛細(xì)管內(nèi)壁(C)及其部分放大(D)的掃描電鏡表征圖。透射電鏡結(jié)果表明酶-納米金聚集體的粒徑比納米金有所増加，酶成功的鍵合到納米金表面；掃描電鏡結(jié)果表明酶-納米金聚集體也成功的鍵合到毛細(xì)管內(nèi)壁。 L-天冬酰胺酶-納米金聚集體在30cm長(zhǎng)毛細(xì)管內(nèi)壁的固載量通過(guò)Bradford方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果為O. 017 μ g。固定化酶的活性通過(guò)酶動(dòng)力學(xué)常數(shù)來(lái)進(jìn)行表征，酶固定于納米金上的酶動(dòng)力學(xué)常數(shù)Km=II. 3 μ M, Vmax=428. 5 μ M · mirT1 · (mg L-Asnase)—1 ;酶-納米金聚集體固定于毛細(xì)管內(nèi)壁的酶動(dòng)力學(xué)常數(shù)Km=142. 8 μ M, Vmax = 1294. 6 μ M · mirT1 · (mg L-Asnase)'實(shí)施例2、制備納米金固定化L-天冬酰胺酶反應(yīng)器I)將納米金溶液與L-天冬酰胺酶溶液(4. 5U/mL)按照1:1 (v/v)混勻，室溫?cái)嚢鐸小時(shí)，然后置于4°C冰箱反應(yīng)24小時(shí)，得到L-天冬酰胺酶-納米金聚集體溶液。2)將5cm毛細(xì)管用I. OM氫氧化鈉溶液進(jìn)行沖洗2小時(shí)，水沖洗10分鐘，I. OM鹽 酸溶液和水依次進(jìn)行清洗10分鐘，有機(jī)溶劑丙酮沖洗5分鐘后氮?dú)獯蹈?。?3-巰基丙基)-三甲氧基硅烷與甲醇(體積比1:4)混勻后溶液負(fù)壓流過(guò)毛細(xì)管柱并與其內(nèi)壁充分接觸，室溫放置12小時(shí)后，用甲醇和水反復(fù)沖洗，即得到內(nèi)壁修飾巰基硅烷偶聯(lián)劑的毛細(xì)管柱，備用。3)將納米金-L-天冬酰胺酶聚集體溶液流過(guò)毛細(xì)管柱并且在4°C放置反應(yīng)24小時(shí)，多余未反應(yīng)的酶-納米金聚集體用去離子水沖洗，實(shí)現(xiàn)了 L-天冬酰胺酶的固定，將得到的納米金固定化L-天冬酰胺酶反應(yīng)器于4°C下儲(chǔ)存?zhèn)溆?。該反?yīng)器中固定化L-天冬酰胺酶的活性與實(shí)施例I中固定化酶活性基本相同，兩者之間無(wú)顯著性差異。實(shí)施例3、制備納米金固定化L-天冬酰胺酶反應(yīng)器I)將納米金溶液與L-天冬酰胺酶溶液(11. 2U/mL)按照I : I (v/v)混勻，室溫?cái)嚢鐸小時(shí)，再放置于4°C冰箱反應(yīng)24小時(shí)，得到L-天冬酰胺酶-納米金聚集體溶液。2)將IOcm毛細(xì)管用I. OM氫氧化鈉溶液進(jìn)行沖洗2小時(shí)，水沖洗10分鐘，I. OM鹽酸溶液和水依次進(jìn)行清洗10分鐘，有機(jī)溶劑丙酮沖洗5分鐘后氮?dú)獯蹈伞Ｓ?3-巰基丙基)-三甲氧基硅烷與甲醇(體積比1:4)混勻后溶液負(fù)壓流過(guò)毛細(xì)管柱，室溫放置12小時(shí)后用甲醇和水反復(fù)沖洗，即得到內(nèi)壁修飾巰基硅烷偶聯(lián)劑的毛細(xì)管柱，備用。3)將納米金溶液-L-天冬酰胺酶溶液聚集體流過(guò)毛細(xì)管柱并且在4°C放置反應(yīng)24小吋，多余未反應(yīng)的酶-納米金聚集體用去離子水沖洗，實(shí)現(xiàn)了 L-天冬酰胺酶的固定，于4 °C下儲(chǔ)存?zhèn)溆谩Ｔ摲磻?yīng)器中固定化L-天冬酰胺酶的活性與實(shí)施例I中固定化酶活性基本相同，兩者之間無(wú)顯著性差異。實(shí)施例4、制備納米金固定化L-天冬酰胺酶反應(yīng)器I)將納米金溶液與L-天冬酰胺酶溶液(濃度56. OU/mL)按照1:1 (v/v)混勻，室溫?cái)嚢鐸小時(shí)，再放置于4°C冰箱反應(yīng)24小時(shí)，得到L-天冬酰胺酶-納米金聚集體溶液。2)將15cm毛細(xì)管用I. OM氫氧化鈉溶液進(jìn)行沖洗2小時(shí)，水沖洗10分鐘，I. OM鹽酸溶液和水依次進(jìn)行清洗10分鐘，有機(jī)溶劑丙酮沖洗5分鐘后氮?dú)獯蹈伞Ｓ?3-巰基丙基)-三甲氧基硅烷與甲醇(體積比1:4)混勻后溶液負(fù)壓流過(guò)毛細(xì)管柱，室溫放置12小時(shí)后用甲醇和水反復(fù)沖洗，即得到內(nèi)壁修飾巰基硅烷偶聯(lián)劑的毛細(xì)管柱，備用。
3)將納米金溶液-L-天冬酰胺酶溶液聚集體流過(guò)毛細(xì)管柱并且在4°C放置反應(yīng)24小吋，多余未反應(yīng)的酶-納米金聚集體用去離子水沖洗，實(shí)現(xiàn)了 L-天冬酰胺酶的固定，于4 °C下儲(chǔ)存?zhèn)溆?。該反?yīng)器中固定化L-天冬酰胺酶的活性與實(shí)施例I中固定化酶活性基本相同，兩者之間無(wú)顯著性差異。實(shí)施例5、制備納米金固定化L-天冬酰胺酶反應(yīng)器I)將納米金溶液與L-天冬酰胺酶溶液(濃度112. 5U/mL)按照I: I (v/v)混勻，室溫?cái)嚢鐸小時(shí)，再放置于4°C冰箱反應(yīng)24小時(shí)，得到L-天冬酰胺酶-納米金聚集體溶液。2)將50cm毛細(xì)管用I. OM氫氧化鈉溶液進(jìn)行沖洗2小時(shí)，水沖洗10分鐘，I. OM鹽酸溶液和水依次進(jìn)行清洗10分鐘，有機(jī)溶劑丙酮沖洗5分鐘后氮?dú)獯蹈?。?3-巰基丙基)-三甲氧基硅烷與甲醇(體積比1:4)混勻后溶液負(fù)壓流過(guò)毛細(xì)管柱，室溫放置12小時(shí) 后用甲醇和水反復(fù)沖洗，即得到內(nèi)壁修飾巰基硅烷偶聯(lián)劑的毛細(xì)管柱，備用。3)將納米金溶液-L-天冬酰胺酶溶液聚集體流過(guò)毛細(xì)管柱并且在4°C放置反應(yīng)24小吋，多余未反應(yīng)的酶-納米金聚集體用去離子水沖洗，實(shí)現(xiàn)了 L-天冬酰胺酶的固定，于
4°C下儲(chǔ)存?zhèn)溆?。該反?yīng)器中固定化L-天冬酰胺酶的活性與實(shí)施例I中固定化酶活性基本相同，兩者之間無(wú)顯著性差異。
權(quán)利要求
1.一種制備納米金固定化L-天冬酰胺酶反應(yīng)器的方法，包括下述步驟 1)將納米金溶液與L-天冬酰胺酶溶液混勻，室溫?cái)嚢鐿.5-5小時(shí)，然后置于2-8°C靜置反應(yīng)12-24小時(shí)，得到L-天冬酰胺酶-納米金聚集體溶液； 2)制備內(nèi)壁修飾疏基娃燒偶聯(lián)劑的毛細(xì)管柱； 3)將所述L-天冬酰胺酶-納米金聚集體溶液流經(jīng)步驟2)處理后的毛細(xì)管并與其內(nèi)壁充分接觸，在2-8°C放置反應(yīng)12-24小時(shí)，利用巰基與納米金的反應(yīng)使L-天冬酰胺酶-納米金聚集體固定于毛細(xì)管柱內(nèi)壁，得到納米金固定化L-天冬酰胺酶反應(yīng)器。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟I)中所述納米金溶液中納米金的平均粒徑為13-22nm。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于步驟I)中所述納米金溶液是采用檸檬酸三鈉法制備得到的；所述L-天冬酰胺酶溶液的濃度為4. 5-225. OU/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于步驟2)中制備內(nèi)壁修飾巰基硅烷偶聯(lián)劑的毛細(xì)管柱的方法如下 1)將毛細(xì)管內(nèi)壁進(jìn)行活化； 2)將巰基硅烷偶聯(lián)劑與甲醇按照體積比1:4-1:1進(jìn)行混合，將混合溶液流經(jīng)活化后的毛細(xì)管并與其內(nèi)壁充分接觸，然后室溫放置反應(yīng)12-24小時(shí)，得到內(nèi)壁修飾巰基硅烷偶聯(lián)劑的毛細(xì)管柱。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述將毛細(xì)管內(nèi)壁進(jìn)行活化的方法如下將毛細(xì)管先依次用氫氧化鈉溶液、水進(jìn)行清洗；再依次用鹽酸溶液、水依次進(jìn)行清洗；最后用有機(jī)溶劑沖洗，氮?dú)獯蹈伞?br> 6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述氫氧化鈉溶液的濃度為O.1-1. 0M，氫氧化鈉溶液清洗的時(shí)間為O. 5-2小時(shí)； 所述鹽酸溶液的濃度為O. 1-1. 0M，所述鹽酸溶液的清洗時(shí)間為10-30分鐘； 所述水的清洗時(shí)間為10-30分鐘。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述毛細(xì)管柱的長(zhǎng)度為5_50cmo
8.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述方法制備得到的納米金固定化L-天冬酰胺酶反應(yīng)器。
9.納米金作為酶固定化材料在制備固定化L-天冬酰胺酶中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種新型的納米金固定化L-天冬酰胺酶反應(yīng)器及其制備方法。所述酶反應(yīng)器是按照包括下述步驟的方法制備得到的以檸檬酸鈉方法制備的納米金為酶固定化材料，利用納米金具有大的比表面積、良好的生物相容性的特點(diǎn)，使酶吸附到納米金的表面，制備酶-納米金的聚集體；在毛細(xì)管內(nèi)壁修飾巰基硅烷偶聯(lián)劑，利用巰基與納米金的作用，將酶-納米金聚集體固定于毛細(xì)管內(nèi)壁，實(shí)現(xiàn)L-天冬酰胺酶的固定。該固定化酶的方法結(jié)合了納米金大比表面積的特點(diǎn)有效的提高了L-天冬酰胺酶對(duì)于L-谷氨酰胺的酶解效率。該固定化酶反應(yīng)器制備過(guò)程簡(jiǎn)單，提高了酶的利用率及效率，有利于開(kāi)發(fā)L-天冬酰胺酶的新型給藥方法并為疾病的診斷和治療提供研究依據(jù)。
文檔編號(hào)C12M1/40GK102816693SQ20121013779
公開(kāi)日2012年12月12日 申請(qǐng)日期2012年5月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月4日
發(fā)明者齊莉, 喬娟, 李雅萍, 木肖玉 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院化學(xué)研究所