內(nèi)酰胺酶檢測試紙條的制作方法
【專利摘要】一種內(nèi)酰胺酶檢測試紙條，由納米金微孔試劑(8)、試紙條(9)和青霉素G微孔試劑(10)組成，其特征在于：所述的納米金微孔試劑(8)包括背板(1)，所述的背板(1)上從左至右分別貼有帶標記的保護膜貼紙(5-1)、樣品墊(2)、纖維素膜(3)、吸水墊(4)和保護膜貼紙(5-2)，所述的纖維素膜(3)上分別設(shè)有控制線C線(7)和檢測線T線(6)，所述的C線(7)標記的是青霉素結(jié)合蛋白6特異性單克隆抗體，所述的T線(6)標記的是氨芐青霉素-牛血清白蛋白結(jié)合物。本實用新型靈敏度高，檢測范圍廣，檢測速度快，操作方便。
【專利說明】內(nèi)酰胺酶檢測試紙條
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物檢測領(lǐng)域，具體為一種內(nèi)酰胺酶檢測試紙條。
【背景技術(shù)】
[0002]P -內(nèi)酰胺酶抗生素(P-Lactam antibiotics)是一大類含有0內(nèi)酰胺環(huán)結(jié)構(gòu)的抗生素，主要包括青霉素類、頭孢菌素類、頭霉素類、碳青霉烯類和單環(huán)(6-內(nèi)酰胺等，在畜牧業(yè)生產(chǎn)中有廣泛應用。尤其是在奶牛生產(chǎn)中，該類藥物常被用來治療奶牛乳房炎和其他細菌性感染等，由此就導致了藥物可能殘留在牛奶中，可能會對人體健康造成威脅。
[0003](6-內(nèi)酰胺酶是一種天然存在的蛋白質(zhì)，具有分解多種抗生素使其效用降低或者無效的作用。動物體內(nèi)往往含量極低。由于基因工程技術(shù)的出現(xiàn)，不法分子將人工合成的^ -內(nèi)酰胺酶添加到牛奶中，以分解其中的抗生素殘留，制造所謂的“無抗奶”來欺騙下游企業(yè)和消費者，給乳業(yè)產(chǎn)業(yè)造成了嚴重后果。我國衛(wèi)生部2009年的《全國打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專項整治近期工作重點及要求》中就明確提出了嚴厲打擊在牛奶中人工添加違法添加(6-內(nèi)酰胺酶。
[0004]檢測0 -內(nèi)酰胺酶的方法較多，有碘量法、微生物培養(yǎng)抑制法以及液相色譜法等，其原理均是利用3-內(nèi)酰胺酶可以分解抗生素的特性。這些方法雖然檢測準確性較好，但檢測耗時長，在基層奶站收奶時難以迅速給出檢測結(jié)果，無法滿足實際需要。因此有必要開發(fā)出快速方便的檢測(6-內(nèi)酰胺酶的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本申請的目的在于提供一種內(nèi)酰胺酶檢測試紙條，以解決試紙條不能對牛奶中 內(nèi)酰胺酶的大規(guī)模篩選進行檢測的問題。
`[0006]為了達到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
[0007]一種內(nèi)酰胺酶檢測試紙條，由納米金微孔試劑(8)、試紙條(9)和青霉素G微孔試劑(10)組成，其特征在于:所述的納米金微孔試劑(8)包括背板(I)，所述的背板(I)上從左至右分別貼有帶標記的保護膜貼紙(5-1)、樣品墊(2)、纖維素膜(3)、吸水墊(4)和保護膜貼紙(5-2)，所述的纖維素膜(3)上分別設(shè)有控制線C線(7)和檢測線T線(6)，所述的C線(7)標記的是青霉素結(jié)合蛋白6特異性單克隆抗體，所述的T線(6)標記的是氨芐青霉素-牛血清白蛋白結(jié)合物，所述的納米金微孔試劑(8)內(nèi)設(shè)有青霉素結(jié)合蛋白6層(8-1)，所述的青霉素G微孔試劑(10)內(nèi)設(shè)有青霉素G層(10-1)。
[0008]進一步，所述的青霉素G微孔試劑(10)還包括青霉素G微孔試劑塑料微孔(10-2)，以及蓋在青霉素G微孔試劑塑料微孔(10-2)上的青霉素G微孔試劑塑料蓋(10-3)。
[0009]進一步，所述的青霉素G微孔試劑塑料微孔(10-2)上設(shè)有作為加樣體積的青霉素G微孔試劑加樣刻度線(10-4)。
[0010]進一步，8個青霉素G微孔試劑(10)組成一排。[0011]進一步，所述的納米金微孔試劑(8)還包括塑料微孔(8-2)，以及蓋在塑料微孔(8-2)上的塑料蓋(8-3)。
[0012]進一步，所述的塑料微孔(8-2)上設(shè)有作為加樣體積的加樣刻度線(8-4)。
[0013]進一步,8個納米金微孔試劑(8)組成一排。
[0014]進一步，所述的試紙條(9)的寬度為0.8cm，偏差范圍為0.78^0.82cm。
[0015]進一步，所述的納米金微孔試劑(8)、試紙條(9)和青霉素G微孔試劑(10)的個數(shù)按照1:1:1的比例密封于包裝袋或者包裝瓶中，保存在4-8°C溫度下。
[0016]本實用新型專利檢測方便，操作簡單，耗時僅8分鐘，成本低廉，可用于牛奶中^ -內(nèi)酰胺酶摻假的大規(guī)模篩選檢測，為牛奶質(zhì)量安全提供保障。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1本實用新型的試紙條(9)結(jié)構(gòu)平面俯視圖
[0018]圖2本實用新型的試紙條(9)結(jié)構(gòu)剖面示意圖
[0019]圖3本實用新型的納米金微孔試劑⑶示意圖
[0020]圖4是納米金微孔試劑(8)或青霉素G微孔試劑(10)成排的示意圖
[0021]圖5本實用新型的檢測結(jié)果判定示意圖
[0022]圖6本實用新型的青霉素G微孔試劑(10)示意圖
`[0023]背板I ;樣品墊2 ;纖維素膜3 ;吸水墊4 ;帶標記的保護膜貼紙5-1 ;保護膜貼紙5-2 ;!'線6 ;C線7 ;納米金微孔試劑8 ;青霉素結(jié)合蛋白6層8-1 ;塑料微孔8_2 ;塑料蓋8_3 ；加樣刻度線8-4 ;試紙條9 ;青霉素G微孔試劑10 ;青霉素G層10-1 ;青霉素G微孔試劑塑料微孔10-2 ;青霉素G微孔試劑塑料蓋10-3 ;青霉素G微孔試劑加樣刻度線10-4
【具體實施方式】
[0024]為了使本實用新型的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實施例，對本實用新型進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本實用新型，并不用于限定本實用新型。
[0025]內(nèi)酰胺酶檢測試紙條的組裝
[0026]1.粘貼:將樣品墊⑵、纖維素膜(3)、吸水墊⑷、帶標記的保護膜貼紙(5-1)和保護膜貼紙(5-2)參照圖2的順序逐一貼在支持背板(I)上。樣品墊(2)與纖維素膜(3)相接，纖維素膜(3)與吸水墊(4)相接，同時在樣品墊(2)和吸水墊(4)上分別貼有帶標記的保護膜貼紙(5-1)和保護膜貼紙(5-2)，其中樣品墊(2)的帶標記的保護膜貼紙(5-1)印有“MAX”標記，方便檢測使用。纖維素膜(3)上分別標記了控制線C線(7)和檢測線T線
(6)。C線(7)標記的是青霉素結(jié)合蛋白6特異性單克隆抗體，而T線(6)標記的是氨芐青霉素-牛血清白蛋白結(jié)合物。
[0027]2.切條:將粘貼好的試紙條(9)大板用切條機進行切割，每個試紙條(9)的寬度為0.8cm，偏差范圍為0.78、.82cm，切割好的試紙條(9)儲藏在室溫下備用。
[0028]3.納米金微孔試劑(8)的組裝:采用自動化加樣裝置定量的將納米金顆粒標記的青霉素結(jié)合蛋白6加到塑料微孔(8-2)中形成青霉素結(jié)合蛋白6層(8-1)，置于凍干機冷凍干燥。冷凍干燥的納米金微孔試劑(8)用塑料蓋(8-3)蓋好，儲藏于4-8°C備用，在塑料微孔(8-2)上設(shè)有作為加樣體積的加樣刻度線(8-4)，一般為了方便使用8個納米金微孔試劑
(8)組成一排，供檢測使用。
[0029]4.青霉素G微孔試劑(10)的組裝:將青霉素G標準品溶解至:T4U/L，采用自動化加樣裝置定量的將青霉素G標準品加到塑料微孔(10-2)，用凍干機冷凍干燥后呈現(xiàn)白色或者淺白色，如圖6所示，存放于青霉素G微孔試劑塑料微孔(10-2)中形成青霉素G層(10-1)。青霉素G微孔試劑塑料微孔(10-2)用合適的青霉素G微孔試劑塑料蓋(10-3)密封。一般而言，如圖4所示，8個微孔練成一排，與相應數(shù)量的檢測試紙條、相應數(shù)量的青霉素結(jié)合蛋白6納米金微孔試劑一起配套作為小包裝密封。每個青霉素G微孔試劑(10)上有青霉素G微孔試劑加樣刻度線(10-4)，作為加樣體積的標記。
[0030]5.試紙條(9)、納米金微孔試劑(8)和青霉素G微孔試劑(10)的組裝:將制備好的試紙條(9)和納米金微孔試劑(8)以及青霉素G微孔試劑(10)的個數(shù)按照1:1:1的數(shù)量比例密封于包裝袋或者包裝瓶中，密封好后存放于4-8°C備用，常規(guī)方法是將一條青霉素G微孔試劑(10) (8孔)、一條納米金微孔試劑(8) (8孔)和8條試紙條(9)放置在單個獨立包裝中。
[0031]內(nèi)酰胺酶檢測試紙條的使用
[0032]1.樣品的準備:
[0033]將待檢測的生鮮乳取樣后恢復至室溫，樣品應無沉淀和雜質(zhì)，不能太粘稠。現(xiàn)場采集的樣本最佳。
[0034]2.試紙條(9)的準備:
[0035]根據(jù)樣品數(shù)量將需要使用的試紙條(9)從冷藏環(huán)境中突出后，靜置30分鐘使之恢復到室溫，然后從密封包裝中取出相應數(shù)量的試紙條(9)和納米金微孔試劑(8)。所有實驗操作應在水平的實驗臺或者相應環(huán)境上操作，環(huán)境溫度無特殊限制。
[0036]3.檢測操作:
[0037](I)準備陽性對照:將準備好的樣品用一次性塑料吸管或者微量移液器吸取200 yl，加入到已經(jīng)去掉蓋的納米金微孔試劑(8)中。注意:一個納米金微孔試劑(8)對應一個試紙條(9)，只能檢測一個樣品，不能重復使用。
[0038](I)準備樣品:將準備好的樣品用一次性塑料吸管或者微量移液器吸取250 Ul牛奶樣品，加入到已經(jīng)去掉蓋的青霉素G微孔試劑(10)中。注意:一個青霉素G微孔試劑(10)對應一個試紙條(9)，只能檢測一個樣品，不能重復使用。
[0039](2)混勻:用移液器將牛奶樣本上下吸打若干次，使之與青霉素G微孔試劑(10)中的青霉素G標準品充分混勻。
[0040](3)加樣品:將準備好的含有青霉素G的樣品用一次性塑料吸管或者微量移液器吸取200 iU，加入到已經(jīng)去掉蓋的納米金微孔試劑⑶中。注意:一個納米金微孔試劑(8)對應一個試紙條，只能檢測一個樣品，不能重復使用。
[0041](4)混合:用微量移液器或者一次性塑料吸管上下吸打納米金微孔試劑(8)中的液體使之充分混勻，室溫靜置3min?；靹蚝蟮奈⒖讘尸F(xiàn)粉紅色或者淺粉色等。
[0042](5)插條:取出試紙條，并將其的帶標記的保護膜貼紙(5-1)插入微孔中。請不要用手指或者其他物體觸碰試紙條(9)的中段，即含有T線(6)和C線(7)的纖維素膜(3)。
[0043](6)計時:插條后開始計時5分鐘,觀察C線(7)是否出現(xiàn),如果5min內(nèi)C線(7)已經(jīng)出現(xiàn)，即可判讀結(jié)果；如果C線(7)沒有出現(xiàn)，請延長2分鐘使液體爬升至C線(7)出現(xiàn)后判讀結(jié)果。
[0044]4.結(jié)果判定:圖5
[0045]陰性:如圖5第I個所示，C線(7)顯色，而T線(6)也顯色，且T線(6)顏色較C線(7)深；
[0046]陽性:C線(7)顯色，T線(6)顏色與C線(7)顏色相比較:
[0047]無效:如圖5中的第4和5個所示，C線(7)不顯示。
[0048]以上所述僅為本實用新型的較佳實施例而已，并不用以限制本實用新型，本實用新型涉及的材料均為已知材料，凡在本實用新型的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本實用新型的保護范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種內(nèi)酰胺酶檢測試紙條，由納米金微孔試劑(8)、試紙條(9)和青霉素G微孔試劑(10)組成，其特征在于:所述的納米金微孔試劑(8)包括背板(I)，所述的背板(I)上從左至右分別貼有帶標記的保護膜貼紙(5-1)、樣品墊(2)、纖維素膜(3)、吸水墊(4)和保護膜貼紙(5-2)，所述的纖維素膜(3)上分別設(shè)有控制線C線(7)和檢測線T線(6)，所述的C線(7)標記的是青霉素結(jié)合蛋白6特異性單克隆抗體，所述的T線(6)標記的是氨芐青霉素-牛血清白蛋白結(jié)合物，所述的納米金微孔試劑(8)內(nèi)設(shè)有青霉素結(jié)合蛋白6層(8-1)，所述的青霉素G微孔試劑(10)內(nèi)設(shè)有青霉素G層(10-1)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種內(nèi)酰胺酶檢測試紙條，其特征在于:所述的青霉素G微孔試劑(10)還包括青霉素G微孔試劑塑料微孔(10-2)，以及蓋在青霉素G微孔試劑塑料微孔(10-2)上的青霉素G微孔試劑塑料蓋(10-3)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種內(nèi)酰胺酶檢測試紙條，其特征在于:所述的青霉素G微孔試劑塑料微孔(10-2)上設(shè)有作為加樣體積的青霉素G微孔試劑加樣刻度線(10-4)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種內(nèi)酰胺酶檢測試紙條，其特征在于:8個青霉素G微孔試劑(10)組成一排。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種內(nèi)酰胺酶檢測試紙條，其特征在于:所述的納米金微孔試劑(8)還包括塑料微孔(8-2)，以及蓋在塑料微孔(8-2)上的塑料蓋(8-3)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種內(nèi)酰胺酶檢測試紙條，其特征在于:所述的塑料微孔(8-2)上設(shè)有作為加樣體積的加樣刻度線(8-4)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種內(nèi)酰胺酶檢測試紙條，其特征在于:8個納米金微孔試劑(8)組成一排。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種內(nèi)酰胺酶檢測試紙條，其特征在于:所述的試紙條(9)的寬度為0.8cm，偏差范圍為0.78?0.82cm。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一所述的一種內(nèi)酰胺酶檢測試紙條，其特征在于:所述的納米金微孔試劑(8)、試紙條(9)和青霉素G微孔試劑(10)的數(shù)量按照1:1:1的比例密封于包裝袋或者包裝瓶中，保存在4-8 °C溫度下。
【文檔編號】G01N33/577GK203385734SQ201320541341
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2013年9月2日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月2日
【發(fā)明者】楊春江, 張曉燕, 李妍, 袁永欣, 馬孝斌 申請人:北京納百景弈生物科技有限公司