專利名稱：來自辣椒疫霉菌的肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶pccat1及其編碼基因與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶及其編碼基因與應(yīng)用，特別涉及來自辣椒疫霉菌的肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶及其編碼基因與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)屬真菌門、鞭毛菌亞門、卵菌綱、霜霉目。辣椒疫霉菌是一種寄主范圍廣的致病菌，除侵染辣椒外，還侵染其它作物。周啟明等報道侵染9科21種栽培植物和雜草；任光馳等試驗結(jié)果認(rèn)為該菌可危害爺子、黃瓜、番爺、豇豆、菜豆、白菜、甘藍(lán)、蘿卜、胡蘿卜、桃、杏、蘋果等。對蔥、蒜侵染力弱，對柑桔及馬鈴薯莖、葉不侵染。對辣椒的致病力最強(qiáng)。 辣椒疫病是由辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)所引起的一種土傳病害，可經(jīng)雨水、土壤、氣流等多種途徑傳播，除了引起大面積死秧外，還可造成葉片枯萎、果實腐爛、莖桿出現(xiàn)壞死斑，以及萎蔫死亡等多種癥狀。中國首次于20世紀(jì)40年代在江蘇報道此病的發(fā)生，此后陸續(xù)有相關(guān)報道，且表現(xiàn)為逐年加重的趨勢。80年代以來，辣椒疫病在全國各地普遍發(fā)生，新疆、北京、黑龍江、貴州、上海、青海、云南、陜西、甘肅、廣東以及長江流域尤為嚴(yán)重。辣椒疫病是辣椒栽培及生產(chǎn)上一種世界性分布較廣的毀滅性病害，該病發(fā)病周期短，流行速度快，給生產(chǎn)上帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。深入開展辣椒疫霉菌致病基因的分離及鑒定對辣椒疫霉菌所導(dǎo)致的多種植物病害的防治與研究具有重要的實踐意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供一種肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶。本發(fā)明所提供的肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶，名稱為PCCAT1，來源于辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici) SD33,是如下 a)或 b)的蛋白質(zhì)a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；b)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與辣椒疫霉菌致病性相關(guān)的由a)衍生的蛋白質(zhì)。其中，序列表中序列2由638個氨基酸殘基組成。為了使上述(a)中的蛋白便于純化，可在由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表I所示的標(biāo)簽。表I標(biāo)簽的序列
標(biāo)簽殘基序列
Poly-Arg5-6 (通常為 5 個)RRRRR
權(quán)利要求
1.一種蛋白，是如下a)或b)的蛋白質(zhì) a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； b)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與辣椒疫霉菌致病性相關(guān)的由a)衍生的蛋白質(zhì)。
2.編碼權(quán)利要求I所述蛋白的核酸分子。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的核酸分子，其特征在于所述核酸分子為如下I)或2)或3)所不的基因 1)其編碼序列是序列表中序列I的DNA分子； 2)在嚴(yán)格條件下與I)限定的DNA分子雜交且編碼權(quán)利要求I所述蛋白的DNA分子； 3)與I)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同源性且編碼權(quán)利要求I所述蛋白的DNA分子。
4.下述I)-4)中的任一種生物材料 1)含有權(quán)利要求2或3所述核酸分子的表達(dá)盒； 2)含有權(quán)利要求2或3所述核酸分子的重組表達(dá)載體； 3)含有權(quán)利要求2或3所述核酸分子的重組微生物； 4)含有權(quán)利要求2或3所述核酸分子的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系。
5.制備權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的方法，包括將權(quán)利要求I所述的蛋白質(zhì)的編碼基因在生物細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)得到權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的步驟；所述生物細(xì)胞為微生物細(xì)胞、植物細(xì)胞或非人動物細(xì)胞。
6.制備表達(dá)權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的重組微生物的方法，包括將權(quán)利要求I所述的蛋白質(zhì)的編碼基因?qū)胨拗魑⑸锛?xì)胞，得到表達(dá)權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的重組微生物的步驟。
7.權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)、權(quán)利要求2或3所述的核酸分子或權(quán)利要求4所述的生物材料的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用為下述I) -3)中任一種 1)權(quán)利要求I所述的蛋白質(zhì)在作為肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶中的應(yīng)用； 2)權(quán)利要求I所述的蛋白質(zhì)在調(diào)控辣椒疫霉圃致病性中的應(yīng)用； 3)權(quán)利要求2或3所述的核酸分子或權(quán)利要求4所述的生物材料在制備肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶中的應(yīng)用。
8.一種鑒定辣椒疫霉菌殺菌劑的方法，包括如下a) -e)中的任一步驟 a)鑒定所述待檢測物質(zhì)是否抑制權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的表達(dá)，如所述待測物質(zhì)能抑制權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的表達(dá)，則所述待測物質(zhì)為候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；如所述待測物質(zhì)不能抑制權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的表達(dá)，則所述待測物質(zhì)為非候選的辣椒疫霉菌殺菌劑； b)鑒定所述待檢測物質(zhì)是否降低權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，如所述待測物質(zhì)能降低權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，則所述待測物質(zhì)為候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；如所述待測物質(zhì)不能降低權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，則所述待測物質(zhì)為非候選的辣椒疫霉菌殺菌劑； c)鑒定所述待檢測物質(zhì)是否抑制權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄，如所述待測物質(zhì)能抑制權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄，則所述待測物質(zhì)為候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；如所述待測物質(zhì)不能抑制權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄，則所述待測物質(zhì)為非候選的辣椒疫霉菌殺菌劑； d)鑒定所述待檢測物質(zhì)是否降低權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄水平，如所述待測物質(zhì)能降低權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄水平，則所述待測物質(zhì)為候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；如所述待測物質(zhì)不能降低權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄水平，則所述待測物質(zhì)為非候選的辣椒疫霉菌殺菌劑； e)鑒定所述待檢測物質(zhì)是否使權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)失活，如所述待測物質(zhì)能使權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)失活，則所述待測物質(zhì)為候選的辣椒疫霉菌殺菌劑；如所述待測物質(zhì)不能使權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)失活，則所述待測物質(zhì)為非候選的辣椒疫霉菌殺菌劑。
9.具有如下I)-5)中至少一種功能的物質(zhì)在制備辣椒疫霉菌殺菌劑中的應(yīng)用 1)抑制權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的表達(dá)； 2)抑制權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄； 3)降低權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的表達(dá)水平； 4)降低權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄水平； 5)使權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)失活。
10.擴(kuò)增權(quán)利要求2或3所述的核酸分子的全長或其任意片段的引物對。
全文摘要
本發(fā)明公開了來自辣椒疫霉菌的肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶PCCAT1及其編碼基因與應(yīng)用。本發(fā)明所提供的肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶PCCAT1，是如下a)或b)的蛋白質(zhì)a)由序列表中序列2第所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；b)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與辣椒疫霉菌致病性相關(guān)的由a)衍生的蛋白質(zhì)。本發(fā)明為進(jìn)一步研制辣椒疫霉病菌分子檢測技術(shù)、辣椒疫霉菌所導(dǎo)致的多種植物病害的防治與研究提供了技術(shù)基礎(chǔ)。
文檔編號C12N1/21GK102634496SQ20121013661
公開日2012年8月15日 申請日期2012年5月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月4日
發(fā)明者張修國 申請人:山東農(nóng)業(yè)大學(xué)