專利名稱：低分子量五味子多糖及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，涉及一種低分子量五味子多糖的制備方法及其在抗肝癌和提高機體免疫力方面的應用。
背景技術：
惡性腫瘤是世界公認的對人類健康危害最嚴重的疾病之一，其危害程度僅次于心血管疾病。據國際癌癥研究機構GL0B0CAN 2008統(tǒng)計報告報道(Jemal，A.，Bray, F.，Center, M. M. , Ferlay, J. , Ward,E., Forman,D.. Global Cancer Statistics. CA A CancerJournal for Clinicians. 2011,61 (2) ,69-90 ；GL0B0CAN 2008, Cancer Incidence andMortality Worldwide :International Agency for Research on Cancer ;Available at http://globocan. iarc. fr/.), 2008年,全球有1270萬新發(fā)癌癥病例,760萬人死于癌癥， 預測2030年，癌癥死亡病例預計上升72%，死亡人數由2008年的760萬上升至1300萬人?？梢?，惡性腫瘤已是當今世界影響社會發(fā)展的重大問題之一。肝癌是常見的惡性腫瘤疾病，據統(tǒng)計(GL0B0CAN 2008, Cancer Incidence and Mortality Worldwide :InternationalAgency for Research on Cancer ；Available at http: //globocan. iarc. fr/. ) 2008 年全球有69. 4萬人死于肝癌，其死亡率在全球范圍內排第三位，且肝癌的發(fā)病率有增長趨勢。治療腫瘤的藥物很多，但由于腫瘤細胞與正常組織細胞間缺少根本性的代謝差異，大多數抗腫瘤藥在抑制或殺傷腫瘤細胞的同時也會對機體的某些正常細胞、組織和器官造成損害，對人體產生毒性，在很大程度上制約了藥物的使用。因此，研究開發(fā)高效低毒抗腫瘤藥物是當前研究的重點課題之一。多糖是一種天然高分子化合物，具有抗腫瘤、免疫調節(jié)、抗氧化等多種活性，且毒性低、安全性高，有著很好的抗腫瘤藥物應用前景(龐春紅.多糖藥理作用研究進展.浙江中醫(yī)藥大學學報，2011,35(4) :639-640.)。于榮敏等申請了專利“一種具有抗腫瘤作用的紅豆杉多糖的制備方法及用途”(申請?zhí)?00910192993. 6)，發(fā)現不同濃度的紅豆杉多糖溶液對多種癌細胞(人乳腺腫瘤細胞MCF-7、人纖維瘤細胞HT1080、人宮頸癌細胞Hela、人慢性髓性細胞K562、人前列腺癌細胞PC3、人肝癌細胞SMMC7721、人急性早幼粒白血病細胞HL-60)均具有抑制作用，且抑制作用與濃度呈線性關系。朱振元等申請的專利“一種具有抗腫瘤活性的水溶性低分子蟲草多糖及其制備方法和用途”(申請?zhí)?00910070325. 6)，發(fā)現該多糖對人肝癌細胞株Bel-7204和人胃癌細胞株SGC-7901的增殖有顯著地抑制效果，對植入小鼠體內的S180腫瘤細胞的生長具有明顯的抑制作用，并可提高機體免疫功能。五味子為木蘭科五味子(Schisandra chinensis (Turcz. )Baill,俗稱北五味子)或華中五味子(S. sphenanthera Rehd. et Wils,俗稱南五味子)的干燥成熟果實，因其果實甘、酸、辛、苦、咸五味，故名五味子，又名五梅子、玄及、會及、山花椒等。具有收斂固澀、益氣生津和補腎寧心之功效，用于久咳虛喘、夢遺滑精、遺尿尿頻、久瀉不止、自汗、盜汗、津傷口渴和心悸失眠等癥，為中醫(yī)常用滋陰強腎藥，廣泛應用于肝炎、神經衰弱等病的治療。五味子資源豐富，含有木脂素、多糖、揮發(fā)油等多種活性成分，是一種開發(fā)前景廣闊的藥食兼用的中藥材。多糖作為五味子中重要活性成分之一，現代藥理學研究表明，其具有抗腫瘤、免疫促進、升白細胞、保肝、抗衰老和降血糖等多種藥理作用(聞舒，仰榴青，趙婷，趙江麗，鄒艷敏.五味子多糖的最新研究進展[J].江蘇大學學報，(醫(yī)學版)，2009，19 (4)366-368.)，已成為人們關注的焦點。朱蓓薇等申請的專利“五味子活性成分多糖的制備方法”(申請?zhí)?00710159047. 2)，提供了一種從五味子中提取活性成分多糖的方法。于赫等研究發(fā)現五味子粗多糖具有體內抗腫瘤活性，且可提高荷瘤小鼠的機體免疫。(于赫，李冀，齊彥.五味子多糖對肝癌小鼠腫瘤生長的抑制作用及其免疫學機理初探.中醫(yī)藥信息，2010，27 (2) :26-27 ;于赫，李冀，王艷杰.五味子多糖對H22荷瘤小鼠血清IL-2、IL-10和VEGF表達的干預作用研.中醫(yī)藥學報2010，38 (2) :39-41 ;于赫，李冀，李淑蓮五味子多糖對H22荷瘤小鼠血清Zn、Se水平變化的于預作用研究.中醫(yī)藥信息，2010，27 (3) :25-26.)。許河玉等發(fā)現一種純五味子多糖(含量60. 3mg/g)可在細胞水平上有效地抑制survivin表達，增加細胞的凋亡率(許珂玉，肖建英.味子多糖對甲狀腺癌細胞株SW579凋亡及survivin表達的影.吉林大學學報，2011，37 (2) :279-284.)。本發(fā)明人對五味子多糖進行分離純化，確定多糖組分的結構特征，研究五味子多糖純化組分體內抗肝癌(HepG-2)活性。但目前有關五味子多糖純化組分體內抗人肝癌細胞H印G-2的研究未見國內外文獻報 道，也未見相應專利公開。

發(fā)明內容
基于以上背景技術中存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種具有腫瘤治療作用的中草藥有效部位-低分子量五味子多糖組分的制備方法與其藥物應用。一、本發(fā)明的第一個目的在于提供一種低分子量五味子多糖組分(SCPPll)?！N低分子量五味子多糖(SCPPll),該多糖分子量為3. 4X IO3Da ;單糖組成為甘露糖(man)葡萄糖(glu)半乳糖(gal) = I 11.38 3. 55 ;該多糖具有a -糖苷鍵和P -糖苷鍵；該多糖具有(I — 3)-a _glucan(葡聚糖)；該多糖具有三股螺旋結構。二、本發(fā)明的第二個目的在于提供上述低分子量五味子多糖組分(SCPPll)的制備方法，按照下述步驟進行(I)五味子粗多糖的提取方法將原料水洗，60°C烘干，粉碎，并置索氏提取器中，石油醚(餾程60-90°C)脫脂15h，過濾，濾渣60°C烘干，備用；脫脂五味子粉末以料液比I : 8-1 12，在溫度80-100°C水中提取3-5h，提取1-3次，合并上清液，上清液經濃縮后，加入乙醇醇沉，使得多糖的濃縮液中乙醇濃度為80%，所得沉淀離心、經冷凍干燥24-48h后得五味子粗多糖；取五味子粗多糖適量，復溶后使用三氯乙酸法除蛋白，除蛋白后的糖液透析凍干，得到脫蛋白五味子多糖。(2)低分子量五味子多糖的制備取脫蛋白五味子多糖，用適量水溶解，離心除去不溶物，上清液通過DEAE-52離子交換柱進行分離；逐步以0-0. 2mol/L的NaCl水溶液洗脫，用硫酸-苯酚法繪制洗脫曲線，根據洗脫曲線分別收取合并洗脫液，其中Omol/L NaCl水溶液(即水)的洗脫液經濃縮、透析后，上葡聚糖凝膠柱，以0. lmol/L NaCl水溶液洗脫，根據洗脫曲線收取合并洗脫液，經濃縮、透析、凍干得低分子量五味子多糖。
三、本發(fā)明的第三個目的在于提供低分子量五味子多糖組分(SCPPll)作為抗肝癌藥物和提高機體免疫功能保健品中的應用。四、根據本發(fā)明，該多糖主要以口服的給藥形式使用，口服給藥形式主要有片劑、膠囊和顆粒劑等。該發(fā)明的優(yōu)點是本發(fā)明是以中藥五味子為原料，經石油醚脫脂、熱水浸提、過濾、濃縮、醇沉、離子交換層析等工藝制備而成，操作簡單，成本低廉；體內抗肝癌(HepG-2)活性研究表明，該水溶性低分子量五味子多糖組分可顯著抑制腫瘤增長，并且毒性低，可顯著提高小鼠自身免疫和體內抗氧化活性；該多糖組分可作為抗肝癌藥物和提高機體免疫功能保健品。


圖I 是 SCPPll 的 IR 譜圖； 圖2 是 SCPPll 的 13C-NMR 譜圖；圖3是SCPPlI-Congo red復合物的最大吸收波長變化趨勢圖；圖4是SCPPlI對荷瘤小鼠分泌TNF- a和IL-2的影響，其中(a)對TNF- a的影響；(b)對IL-2的影響。
具體實施例方式實施例I將原料水洗，60°C烘干，粉碎，并置索氏提取器中，石油醚(餾程60-90°C)脫脂15h，過濾，濾渣60°C烘干，備用。稱取IOOg脫脂五味子粉末，置于圓底燒瓶中，按料液比I 8、浸提時間3h、浸提溫度80°C，在熱水浴中回流浸提I次，冷卻后離心，合并上清液；上述清液經減壓濃縮，加入4倍體積95%乙醇進行沉淀，使得多糖的濃縮液中乙醇濃度為80%，所得沉淀經離心、冷凍干燥24h后得五味子粗多糖樣品粉末；取五味子粗多糖適量，復溶后使用三氯乙酸法除蛋白，降蛋白后的糖液透析凍干，得到脫蛋白五味子多糖。實施例2將原料水洗，60°C烘干，粉碎，并置索氏提取器中，石油醚(餾程60-90°C )脫脂15h，過濾，濾渣60°C烘干，備用。稱取IOOg脫脂五味子粉末，置于圓底燒瓶中，按料液比I 10、浸提時間4h、浸提溫度90°C，在熱水浴中回流浸提2次，冷卻后離心，合并上清液；上述清液經減壓濃縮，加入4倍體積95 %乙醇進行沉淀，使得多糖的濃縮液中乙醇濃度為80%，所得沉淀經離心、冷凍干燥36h后得五味子粗多糖樣品粉末；取五味子粗多糖適量，復溶后使用三氯乙酸法除蛋白，降蛋白后的糖液透析凍干，得到脫蛋白五味子多糖。實施例3將原料水洗，60°C烘干，粉碎，并置索氏提取器中，石油醚(餾程60-90°C )脫脂15h，過濾，濾渣60°C烘干，備用。稱取IOOg脫脂五味子粉末，置于圓底燒瓶中，按料液比I 12、浸提時間5h、浸提溫度100°C，在熱水浴中回流浸提3次，冷卻后離心，合并上清液；上述清液經減壓濃縮，加入4倍體積95%乙醇進行沉淀，使得多糖的濃縮液中乙醇濃度為80%，所得沉淀經離心、冷凍干燥48h后得五味子粗多糖樣品粉末；取五味子粗多糖適量，復溶后使用三氯乙酸法除蛋白，降蛋白后的糖液透析凍干，得到脫蛋白五味子多糖。
實施例4五味子多糖的制備步驟一、脫蛋白五味子多糖的純化I、實驗材料I. I藥品與試劑脫蛋白五味子多糖；DEAE-52纖維素交換樹脂,英國Whatman公司；sephadex G-100,英國 Whatman 公司。Dextran T-10, T-40, T-70, T-500, T-2000 和 Blue Dextran T-2000, Pharmacia 公司 。I. 2 儀器UV-7502PC可見分光光度計，上海茂欣儀器有限公司層析柱1. 6cmX 50cm,上海滬西分析儀器廠有限公司DHL-A電腦恒流泵，上海滬西分析儀器廠有限公司DBS-100電腦自動分部收集器，上海滬西分析儀器廠有限公司2、實驗方法稱取上述實施例1-3中制備的脫蛋白五味子多糖200mg，溶于IOmL蒸餾水中，充分溶解后離心，將上清液滴加到DEAE-52層析柱中，0-0. 2mol/L的NaCl水溶液進行洗脫，使用DHL-A恒流泵,控制流速lmL/min,用自動分部收集器收集。6min收集一管,每管收集6mL,收集液每管用苯酚-硫酸法跟蹤檢測，以蒸餾水為空白，于490nm的波長下測定吸光度，直到不再有糖檢出。根據洗脫曲線，合并各洗脫峰的洗脫液，其中水洗脫液部分減壓濃縮，凍干，上述步驟所得多糖組分上葡聚糖凝膠柱，用0. Imol/LNaCI水溶液洗脫，使用DHL-A恒流泵，控制流速0. 3mL/min,用分部自動收集器收集,每管收集3mL,收集液每管用苯酹-硫酸法跟蹤檢測，以蒸餾水為空白，于490nm的波長下測定吸光度，直到不再有糖檢出。繪制洗脫曲線，合并洗脫峰的洗脫液，用蒸餾水透析72h，減壓濃縮，凍干得到五味子多糖組分(SCPPll)。3、實驗結果得到水溶性低分子量五味子多糖組分(SCPPll)。步驟二、水溶性低分子量五味子多糖的物化性質及結構特征I、實驗材料I. I藥品與試劑五味子多糖；氯化鈉、硫酸、三氯乙酸、苯酚、氫氧化鈉、鹽酸、醋酸鈉、鹽酸羥胺、肌醇、吡唆、醋酸酐、葡萄糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖、高碘酸鈉、剛果紅等均為分析純。I. 2 儀器LC-10AVP高效液相色譜系統(tǒng)，日本島津TSK-GEL G4000PW (7. 5 X 300mm)，TOSOH 公司預柱TSK-GUARDCOLUMN PffH(7. 5 X 75mm)，TOSOH 公司ALPHA2-4冷凍干燥設備，德國CHRIST公司PHS-2C型酸度計，上海分析儀器廠R-200型旋轉蒸發(fā)器,瑞士 Biichi公司
GC 2010氣相色譜系統(tǒng)，日本島津RTS-5 氣相毛細管柱，(30mX0. 32mm)NEXUS 670智能型傅立葉紅外光譜儀，美國尼高利公司核磁共振儀，Braker2、實驗方法2. I分子量的測定按照多糖的常規(guī)方法，以分子量已知的T-10，T-40, T-70, T-500和T-2000為標準，LC-10AVP島津高效液相色譜系統(tǒng)，色譜柱為TSK-GEL G4000Pff(7. 5 X 300mm)，流動相為0. 003mol/L的醋酸鈉溶液，流速0. 8mL/min ;檢測器SHIMADZU RID-10A，溫度25°C。多糖溶 液過0. 45 ii m的濾膜，進樣10 u L02. 2單糖組成分析精密稱取多糖樣品5mg于安瓿瓶中，用2mol/L的硫酸溶液溶解，封口，100°C烘箱中加熱水解8h后，水解液加碳酸鋇中和至中性，以4000r/min離心除去BaSO4沉淀，上清液冷凍干燥。水解產物經乙酰化后用島津GC 2010氣相色譜系統(tǒng)分析。2.3IR 測定取Img經干燥的多糖樣品，與100 200mg經干燥的KBr粉末在瑪瑙研缽中輕輕研磨均勻(在紅外燈下操作)。經壓片機壓成薄片，于NEXUS 670智能型傅立葉紅外光譜儀測定獲得紅外光譜圖。2.4NMR 測定取多糖樣品20mg經D2O交換3次后，溶于0. 5mLD20中，用BRUKER400型核磁共振儀，13C-NMR (100MHz，溫度 673. 2K)(參見圖 2)。2. 5剛果紅實驗稱取五味子多糖組分5mg,加入2mL蒸懼水和2mL80 u mol/L的剛果紅試劑,之后逐漸加入lmol/L的NaOH溶液，使混合液的濃度從0逐漸提高到0. 5mol/L(0、0. 1,0. 15,0. 2、0. 25,0. 3,0. 35,0. 4,0. 45,0. 5mol/L)，并用紫外可見光譜儀掃描，測定各堿性梯度下最大吸光值(參比為2mL蒸餾水和2mL80 u mol/L的剛果紅試劑，逐漸加入lmol/L的NaOH溶液，使混合液的濃度從0逐步提高到0. 5mol/L)，以NaOH濃度為橫坐標，最大吸收波長為縱坐標繪圖。3、實驗結果SCPPll分子量為3. 4 X IO3DatjSCPPll由甘露糖，葡萄糖和半乳糖組成，其摩爾比為甘露糖葡萄糖半乳糖=I 11.38 3. 55。五味子多糖在3395011^2927011^13840^1和1025-1152CHT1處均出現強吸收峰，(為糖的特征吸收峰，其中3395cm—1為-OH伸縮振動峰、2927CHT1和1384CHT1分別為亞甲基的C-H伸縮振動峰和C-H彎曲振動峰、1025-1152CHT1為吡喃糖環(huán)的振動峰)852(31^1和893CHT1特征吸收峰表明，SCPPll同時具有a-糖苷鍵和運-糖苷鍵；855011_1和931011_1特征吸收峰表明，50 11具有(I — 3) - a-glucan。圖2為五味子多糖的 13C-NMR 譜圖，5 104ppm, 6 102ppm, 6 99ppm, 3 95ppm 和 S91ppm 為異頭碳的化學位移，表明SCPPll同時具有a-糖苷鍵和￠-糖苷鍵；S77 70ppm之間的峰為未發(fā)生取代的C2、C3、C4、C5的化學位移；3 61和5 60ppm為未發(fā)生取代的C6的化學位移。另外，170 180ppm未見碳信號，表明其不含糖醛酸，與紅外和組成分析結果一致。圖3為SCPPll與剛果紅形成了絡合物的最大吸收波長變化，絡合物的最大吸收波長較剛果紅的最大吸收波長紅移。當NaOH濃度升高時，絡合物的最大吸收波長急劇下降，說明高濃度的NaOH破壞了多糖的螺旋結構，使其解體為單股線團，而導致最大吸收波長下降，推測SCPPll具有三螺旋結構。試驗一五味子多糖組分體內抗肝癌OfepG-2)活性研究I儀器、材料與試劑I. I 儀器Spectra Max I9O 酶標儀，美國 molecular device 公司Sigma 1-13高速臺式離心機，Sigma公司數控恒溫水浴鍋，鞏義市英峪予華儀器廠 HSS-I型恒溫浴槽，江蘇金壇醫(yī)療儀器廠，中國BS124S型電子天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司勻漿機，德國IKA公司I. 2材料與試劑I. 2. I實驗動物ICR小鼠，雌性，體重20±2g，清潔級，購于揚州大學比較醫(yī)學中心，合格證編號SCXK(蘇)2007-0001。實驗前檢疫3d，飼養(yǎng)溫度為21±1°C，濕度為60±5%。1.2. 2實驗試劑與藥品五味子多糖(自制)；5_氟脲嘧啶；生理鹽水；苦味酸；IL-2酶聯免疫試劑盒；TNF_ a酶聯免疫試劑盒；丙二醛(MDA)試劑盒；超氧化物岐化酶(SOD)試劑盒；南京建成生物工程研究所；冰醋酸、CaCl2等都為市售分析純。I. 3統(tǒng)計學處理數據用SPSS15.0統(tǒng)計軟件進行處理。結果用S 表示，兩組間差異采用t_檢驗；多組間差異采用單因素方差分析(One-way AN0VA)。P < 0. 05有統(tǒng)計學意義。2實驗方法2. I荷瘤小鼠瘤株的保種、傳代及移植瘤模型建立(I)瘤株的保種取體重20土 2g的昆明小鼠2 3只，每只接0. 2ml，腹腔接種Ifeps腹水瘤瘤株，定期每7 9天傳一代。(2)腋下移植瘤模型的建立取腹腔傳代7天且生長良好的H印s腹水瘤小鼠，脫頸椎處死，75 %乙醇消毒動物皮膚，在無菌條件下，剪開小鼠腹腔，吸取生長良好的腹水，觀察腹水顏色(腹水為乳白色無絮狀沉淀物者為佳，血性腹水則不可用)并用臺盼藍染色法觀察活細胞數(活細胞數> 98% );腹水用生理鹽水稀釋，吹打混勻，細胞計數板計數，調整細胞數為2X IO7個活細胞/mL ;取昆明種小鼠，右側腋部皮膚常規(guī)酒精消毒，持ImL注射器于小鼠右腋下皮下注射0. 2mL瘤細胞懸液，制成局灶性腫瘤模型。2. 2實驗分組與給藥50只雌性小鼠于實驗前適應喂養(yǎng)3天，接種后次日將其隨機分為5組，每組10只，設正常組、模型組、陽性對照組(5-Fu)、SCPPll高、低兩個劑量組；接種24h后開始給藥，每天I次，連續(xù)10d。(灌胃量均為0. 2mL/只，腹腔注射0. Iml/只)分組、劑量和給藥途徑如下正常組健康小鼠，每天灌胃相同劑量的生理鹽水(0. 2mL/10g/d, i. g) +腹腔注射生理鹽水(0. lmL/10g/d, i. p)，自由進食和飲水；模型組接種小鼠，每天灌胃相同劑量的生理鹽水(0. 2mL/10g/d, i. g) +腹腔注射生理鹽水(0. lmL/10g/d, i. p)，自由進食和飲水；
5-氟尿喃唳組接種小鼠,每天灌胃相同劑量的生理鹽水(0. 2mL/10g/d, i. g) +腹腔注射相同劑量的5-Fu(25mg/kg/d，i. p)，自由進食和飲水；五味子多糖給藥組接種小鼠，分高、低兩個劑量組，①SCPPll-H每天分別灌胃相同劑量五味子多糖(200mg/kg/d, i. g/),自由進食和飲水；②SCPPll-L每天分別灌胃相同劑量五味子多糖(50mg/kg/d, i. g/),自由進食和飲水；2. 3相關考察指標2. 3. I、動物生長狀況每日觀察動物一次，觀察動物精神狀況、行為和毛色有無異常，稱重并記錄以了解動物體重變化情況(O、14天稱重)。2. 3. 2、器官指數和抑瘤率末次給藥后次日，禁食8h，稱體重，摘眼球取血后處死；取出瘤塊、胸腺、脾臟、心、肝、腎，經生理鹽水洗滌后用濾紙吸干，稱重。按下式計算抑瘤率和各臟器指數抑瘤率(%) = (C-T)/CX 100%式中C為模型對照組平均瘤重，T為實驗組平均瘤重。臟器指數=臟器重量(mg) /體重(g)2. 3. 3、血液學指標末次給藥24小時候后眼球取血0. 5 lmL，收集血液于抗凝管(紫色EDTA_K2 ；血常規(guī)(血液細胞分析)中，充分混勻后，于4°C冰箱儲存，備用。進行血常規(guī)分析。2. 3. 4、血液生化指標末次給藥24h后摘眼球取血0. 5 lmL，收集血液，放置4h后離心，3000r/min離心15min，取血清置于4保存，備用。測定谷丙轉氨酶(ALT)和谷草轉氨酶(AST)。酶聯免疫試劑盒測定血清中IL-2和TNF-a的含量。2. 3. 5、對心肝腎組織中SOD和MDA的影響心、肝、腎各取150-400mg左右置于IOml離心管中，加入7ml生理鹽水，制成5%的組織勻漿，經3000rpm/min離心后，取上清液，用試劑盒測定丙二醛(MDA)和超氧化物岐化酶(SOD)的含量。2. 3. 6、數據統(tǒng)計數據用SPSS15. 0統(tǒng)計軟件進行處理。結果用S 表示，用組間one-way ANOVA檢驗比較各給藥組與對照組之間的顯著性。P < 0. 05有統(tǒng)計學意義。3、實驗結果
3. I SCPPll對H印G-2荷瘤小鼠腫瘤生長的影響表I SCPPll對IfepG-2荷瘤小鼠抗腫瘤活性的影響
權利要求
1.一種低分子量五味子多糖,其特征在于該多糖分子量為3. 4X IO3 Da ;單糖組成為甘露糖(man):葡萄糖(glu):半乳糖(gal) = I : 11.38 : 3. 55 ;該多糖具有a -糖苷鍵和￠-糖苷鍵；該多糖具有(I —3) - a -葡聚糖(glucan);該多糖具有三股螺旋結構。
2.權利要求I所述的一種低分子量五味子多糖的制備方法，其特征在于按照下述步驟進行 (I)五味子粗多糖的提取方法 將原料水洗，60°C烘干，粉碎，并置索氏提取器中，餾程60-90°C石油醚脫脂15 h，過濾，濾渣60 °C烘干，備用； 脫脂五味子粉末以料液比1:8-1:12，在溫度80-100°C水中提取3-5h，提取I_3次，合并上清液，上清液經濃縮后，加入乙醇醇沉，使得多糖的濃縮液中乙醇濃度為80%，所得沉淀離心、經冷凍干燥24-48h后得五味子粗多糖；取五味子粗多糖適量，復溶后使用三氯乙酸法除蛋白，降蛋白后的糖液透析凍干，得到脫蛋白五味子多糖； (2)低分子量五味子多糖的制備 取脫蛋白五味子粗多糖，用適量水溶解，離心除去不溶物，上清液通過DEAE-52離子交換柱進行分離；逐步以0-0.2 mol/L的NaCl水溶液洗脫，用硫酸-苯酚法繪制洗脫曲線，根據洗脫曲線分別收取合并洗脫液，其中0 mol/L NaCl水溶液即水的洗脫液經濃縮、透析后，上葡聚糖凝膠柱，以0.1 mol/L NaCl水溶液洗脫，根據洗脫曲線收取合并洗脫液，經濃縮、透析、凍干得低分子量五味子多糖。
3.權利要求I所述的一種低分子量五味子多糖在制備抗肝癌藥物中的應用。
4.權利要求I所述的一種低分子量五味子多糖在制備提高機體免疫功能的保健品中應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了低分子量五味子多糖及其制備方法和用途，屬于醫(yī)藥技術領域。該多糖組分的分子量為3.4×103Da；單糖組成為甘露糖︰葡萄糖︰半乳糖=1︰11.38︰3.55；具有(1→3)-α–glucan(葡聚糖)和三螺旋結構。本發(fā)明的SCPP11多糖組分的體內抗肝癌活性表明，其具有顯著地抗肝癌(HepG-2)活性，可顯著抑制肝癌的生長，并與5-Fu相比，該多糖組分毒性低，可顯著增強小鼠自身免疫能力和體內抗氧化活性。本發(fā)明水溶性低分子量五味子多糖活性成分明確，質量可控，可用作抗肝癌藥物或提高機體免疫功能的保健品。
文檔編號A23L1/09GK102757510SQ201210132340
公開日2012年10月31日 申請日期2012年4月28日 優(yōu)先權日2012年4月28日
發(fā)明者仰榴青, 任月娜, 吳向陽, 李芳 , 茆廣華, 趙婷, 鄒燁 申請人:江蘇大學