專利名稱：季也蒙假絲酵母菌株在清除棒曲霉素中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種酵母菌株在清除棒曲霉素中的應(yīng)用，特別涉及季也蒙假絲酵母 (Candida guilliermondii)在清除棒曲霉素中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
棒曲霉素(Patulin)是部分青霉屬和曲霉屬真菌的次生代謝產(chǎn)物。它對(duì)人及動(dòng)物具有廣泛而強(qiáng)烈的毒性作用。急性毒性表現(xiàn)為抽搐、痙攣、皮下組織水腫、肺腸充血、腸炎、 無(wú)尿直至死亡；慢性毒性可導(dǎo)致胃潰瘍，并具有抑制免疫、致畸性以及潛在的致癌性等，還有可能影響男性的生育能力。棒曲霉素能溶于水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和氯仿，微溶于乙醚、苯，不溶于石油醚，在酸性條件下化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。在具有棒曲霉素產(chǎn)生能力的真菌中，部分真菌是植物致病菌，其中最主要的一種是擴(kuò)展青霉病菌(Penicillium expansum)。這種病原菌是世界范圍內(nèi)引起果實(shí)采后腐爛的最重要的病原菌之一，常見(jiàn)的寄主包括蘋(píng)果、梨、葡萄、櫻桃、桃、草莓等等。它在引起果實(shí)腐爛的同時(shí)，會(huì)向果實(shí)組織中分泌大量的棒曲霉素。在果汁加工產(chǎn)業(yè)中，如果腐爛的果實(shí)混入原材料中，那么生產(chǎn)出的果汁就會(huì)有不同程度的棒曲霉素殘留，給消費(fèi)者(特別是兒童)的身體健康帶來(lái)危害。基于棒曲霉素對(duì)人體健康的潛在危害，世界上很多國(guó)家都對(duì)果汁產(chǎn)品中棒曲霉素的最大限量做了規(guī)定，EU、USFDA規(guī)定果汁產(chǎn)品中棒曲霉素的最大限量為 50 μ g/kg, WHO建議人每天棒曲霉素的攝入量不超過(guò)O. 4 μ g/kg體重。由于果汁通常為酸性，而棒曲霉素在酸性條件下性質(zhì)穩(wěn)定，因此果汁中一旦污染了棒曲霉素后很難自然分解。目前，主要通過(guò)吸附、微波處理等物理手段進(jìn)行去除，但效果不是十分理想，亟需研發(fā)新型的棒曲霉素脫除手段。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)的新用途。本發(fā)明所提供的新用途具體為季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)在清除棒曲霉素中的應(yīng)用。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii) 具體為在中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心編號(hào)為2. 63的季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)。在所述應(yīng)用中，所述季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)CGMCC No. 2. 63 和含有棒曲霉素的樣品反應(yīng)初始時(shí)，所述季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii) CGMCC No. 2. 63與待清除棒曲霉素的配比范圍為IOOOcfu I μ g至4000cfu lyg，具體如 IOOOcfu : I μ g>2000cfu : I μ g 或 4000cfu : I μ g。所述含有棒曲霉素的樣品為液體時(shí)，所述含有棒曲霉素的樣品中棒曲霉素的濃度為 50-200 μ g/mL,如 50 μ g/mL、100 μ g/mL 或 200 μ g/mL。在所述應(yīng)用中，所述季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)CGMCC No. 2. 63
3和含有棒曲霉素的樣品在25-28°C反應(yīng)，如26°C。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述含有棒曲霉素的樣品具體為含有棒曲霉素的培養(yǎng)液，如2XNYDB液體培養(yǎng)基。所述2XNYDB液體培養(yǎng)基的pH為5. 4，溶質(zhì)為葡萄糖、大豆蛋白胨、牛肉膏和酵母提取物，溶劑為水，所述葡萄糖的終濃度為20g/L，所述大豆蛋白胨的終濃度為10g/L，所述牛肉膏的終濃度為2g/L，所述酵母提取物的終濃度為15g/L。將所述季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)CGMCC No. 2. 63與所述含有棒曲霉素的樣品反應(yīng)的時(shí)間至少為2天。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述時(shí)間具體為2天、4 天或6天。在應(yīng)用季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)CGMCC No. 2. 63清除棒曲霉素的過(guò)程中，涉及檢測(cè)將所述季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)CGMCC No. 2. 63與所述含有棒曲霉素的樣品反應(yīng)后的反應(yīng)液中是否有棒曲霉素殘留的步驟。上述檢測(cè)棒曲霉素殘留的具體方法可為薄層層析法。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述薄層層析法所用層析板具體為預(yù)制板；所用的展開(kāi)劑具體為甲苯、乙酸乙酯和90%甲酸水溶液(體積比為5 4 I)的混合液；所用的顯色劑具體為O. 5% (O. 5g/100ml)的MBTH -HCl -H2O(3-甲基_2苯并噻唑酮腙水合鹽酸鹽)。 判斷所述培養(yǎng)液中是否有棒曲霉素殘留的具體方法為若在所述層析板上出現(xiàn)橙黃色反應(yīng)點(diǎn)，則說(shuō)明所述培養(yǎng)液中有所述棒曲霉素殘留；反之，則說(shuō)明所述培養(yǎng)液中沒(méi)有所述棒曲霉素殘留。實(shí)驗(yàn)證明，季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)CGMCC No. 2. 63可以在含有棒曲霉素的培養(yǎng)液中快速增殖，并可以快速脫除培養(yǎng)液中高濃度的棒曲霉素，將濃度為 2X 105cfu/ml 的季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)CGMCC No. 2. 63細(xì)胞分別接種到含有50μ g/ml、100l·! g/ml和200 μ g/ml棒曲霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，2天后三個(gè)濃度的培養(yǎng)液均檢測(cè)不到棒曲霉素殘留。因此，本發(fā)明所提供的應(yīng)用將為果汁等食品中棒曲霉素殘留的脫除提供新的解決方案。


圖I為棒曲霉素對(duì)季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii) CGMCC No. 2. 63生長(zhǎng)影響的分析結(jié)果。其中，縱坐標(biāo)為酵母菌株濃度。圖2為季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii) CGMCC No. 2. 63對(duì)培養(yǎng)液中棒
曲霉素清除的分析結(jié)果。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)是從中國(guó)科學(xué)院微生物研究所獲得， 菌株編號(hào)2. 63。酵母菌(Candida guilliermondii)CGMCC No. 2. 63菌落為乳白色，表面光滑，邊緣有褶皺，在NYDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好。NYDA培養(yǎng)基(平板)葡萄糖10，大豆蛋白胨5，牛肉膏1，酵母提取物7. 5，瓊脂 18，單位g/L ；pH5. 5。
NYDB液體培養(yǎng)基葡萄糖10，大豆蛋白胨5，牛肉膏I，酵母提取物7. 5，單位g/L ； pH5. 5。2倍濃度NYDB液體培養(yǎng)基葡萄糖20，大豆蛋白胨10，牛肉膏2，酵母提取物15， 單位g/L ；pH5. 4。實(shí)施例I、棒曲霉素對(duì)季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)CGMCC No. 2. 63 生長(zhǎng)的影響I、季也蒙假絲酵母(Candidaguilliermondii)CGMCC No. 2. 63 菌種的活化取_20°C保存的季也蒙假絲酵母(Candidaguilliermondii)CGMCC No. 2. 63，將其在NYDA平板上劃線培養(yǎng)。在26°C培養(yǎng)72小時(shí)后，從生長(zhǎng)良好的季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)單菌落上挑取酵母菌細(xì)胞接種到NYDB液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，培養(yǎng)溫度26 °C，搖床轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分鐘。2、棒曲霉素標(biāo)準(zhǔn)品母液的配制所述棒曲霉素為棒曲霉素標(biāo)準(zhǔn)品，購(gòu)于青島生工公司，使用時(shí)配制成濃度為Img/ ml的母液。配制方法為準(zhǔn)確稱取IOmg棒曲霉素標(biāo)準(zhǔn)品,溶于IOml蒸懼水中，充分?jǐn)嚢枞芙?，并使用O. 22 μ m微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾滅菌。3、含有不同濃度棒曲霉素的培養(yǎng)液的配制使用2倍濃度的NYDB培養(yǎng)液、棒曲霉素標(biāo)準(zhǔn)品母液和無(wú)菌水，按照表I中的配比配制出分別含有O μ g/ml, 50 μ g/ml, 100 μ g/ml和200 μ g/ml的棒曲霉素的培養(yǎng)液。表I含不同濃度棒曲霉素的培養(yǎng)液的配方
權(quán)利要求
1.季也蒙假絲酵母(Candidaguilliermondii)在清除棒曲霉素中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用中，所述季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)和含有棒曲霉素的樣品反應(yīng)初始時(shí)，所述季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)與待清除棒曲霉素的配比為IOOOcfu : I μ g至 4000cfu : I μ g。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述含有棒曲霉素的樣品中棒曲霉素的濃度為 50-200 μ g/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用中，所述季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)和含有棒曲霉素的樣品在25_28°C反應(yīng)。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種酵母菌株在清除棒曲霉素中的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的應(yīng)用為季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)在清除棒曲霉素中的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)證明，季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)能夠快速脫除培養(yǎng)液中高濃度的棒曲霉素，將濃度為2×105cfu/ml的季也蒙假絲酵母(Candida guilliermondii)細(xì)胞分別接種到含有50μg/ml、100μg/ml和200μg/ml棒曲霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，2天后三個(gè)濃度的培養(yǎng)液均檢測(cè)不到棒曲霉素殘留。本發(fā)明所提供的應(yīng)用將為果汁等食品中棒曲霉素殘留的脫除提供新的解決方案。
文檔編號(hào)A23L1/015GK102578676SQ20121004542
公開(kāi)日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年2月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月24日
發(fā)明者宗元元, 徐勇, 李博強(qiáng), 田世平, 秦國(guó)政 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院植物研究所