專利名稱：一種可溶細菌纖維素的制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于細菌纖維素的制備領域，特別涉及一種可溶細菌纖維素的制備方法。
背景技術：
細菌纖維素是一種由木醋桿菌等細菌分泌的胞外多糖聚合物，自然發(fā)酵成膜的細菌纖維素與普通植物纖維素一樣，都不溶于水，從而限制了其在水溶性材料方面的應用。細菌纖維素的溶解是近年來興起的一項研究，此研究大大擴展了細菌纖維素應用范圍，研究可溶性細菌纖維素經濟可行的發(fā)酵工藝，提高產率和產量，研制開發(fā)具有自主知識產權的細菌纖維素生物醫(yī)用材料是目前國內外研究的重點和難點。據研究發(fā)現靜置培養(yǎng)的木醋桿菌發(fā)酵液中存在部分低分子量的水溶性細菌纖維素，但是產量不高。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種可溶細菌纖維素的制備方法，本發(fā)明工藝簡單易行，充分利用了發(fā)酵液中的原料，通過添加多糖提高可溶纖維素的合成，添加玻璃珠或提高攪拌速度增加剪切力提高可溶纖維素產量，以及控制發(fā)酵PH值等技術得到的可溶性細菌纖維素有一定粘度。本發(fā)明的一種可溶細菌纖維素的制備方法，包括以碳源和氮源組成液體培養(yǎng)基，將細菌纖維素生產菌株接入培養(yǎng)基放在搖床上或者發(fā)酵罐中動態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，在液體培養(yǎng)基中加入多糖、酸及玻璃珠，20 32°C下培養(yǎng)3-7天后取發(fā)酵液離心，得到的上清液經有機溶劑沉淀，得到可溶細菌纖維素。所述的液體培養(yǎng)基中的碳源是以下的一種或幾種，包括甘露醇、甘油等醇類化合物，葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖等六碳糖，阿拉伯糖和木糖等五碳糖，蔗糖和麥芽糖等二糖；氮源為以下的一種或幾種，包括蛋白胨、胰蛋白胨、酵母浸膏、牛肉膏、尿素、玉米漿等有機氮源，硫酸銨、氯化銨、硝酸鈉等無機氮源。所述碳源濃度為25-100g/L，氮源濃度為3-10g/L，液體培養(yǎng)基pH值為4. 5 6. O。所述細菌纖維素生產菌株為醋酸菌屬(Acetobacter sp.)、葡萄糖酸桿菌屬 (Gluconobacter sp.)、葡糖酸醋桿菌屬(Gluconacetobacter sp.)、葡萄糖氧化桿菌 (Gluconobacter oxydans)、根瘤菌屬(Rhizobium sp.)、八疊球菌屬(Sarcina sp.)、假單胞菌屬(Pseudomounas sp.)、無色桿菌屬(Achromobacter sp.)、產喊菌屬(Alcaligenes sp.)、氣桿菌屬(Aerobacter sp.)、固氣菌屬(Azotobacter sp. )、土壤桿菌屬 (Agrobacterium sp.)、洋蔥假單胞菌(Seudomonas cepacia)、空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni)、木醋桿菌(Acetobacter xyIinum)或紅茶菌(kombucha)。所述動態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)的轉速為50-300rpm，優(yōu)選180rpm。所述多糖為羧甲基纖維素鈉、海藻酸鈉、可溶性淀粉、糊精、果膠、透明質酸、瓊脂或肝素，與液體培養(yǎng)基質量體積比為0.06g 100ml，優(yōu)選果膠。所述酸為醋酸、乳酸、檸檬酸、鹽酸、硫酸或植酸，與液體培養(yǎng)基質量體積比為0. Ig : 100ml,優(yōu)選朽1檬酸。所述玻璃珠直徑為0.添加量為10 30g,優(yōu)選直徑4mm,添加量為20g。所述有機溶劑為無水乙醇、甲醇或丙酮。所述培養(yǎng)時間優(yōu)選5天。經醇沉淀提取的可溶性細菌纖維素可再溶于水，溶于水后粘度大于水的粘度，說明提取的可溶性細菌纖維素可以增加溶液的粘度，可作為增稠劑應用于食品工業(yè)中。有益.效果本發(fā)明工藝簡單易行，采用動態(tài)搖床振蕩培養(yǎng)或發(fā)酵罐培養(yǎng)以不利于長鏈纖維素聚合的方式來提高可溶性細菌纖維素的產量，充分利用了發(fā)酵液中的原料，通過添加多糖提高可溶纖維素的合成，添加玻璃珠或提高攪拌速度增加剪切力提高可溶纖維素產量，以及控制發(fā)酵PH值等技術得到的可溶性細菌纖維素有一定粘度，制得的可溶細菌纖維素可作為增稠劑等應用于食品中。


圖I為添加多糖對可溶性細菌纖維素產量的柱狀圖；圖2為添加玻璃珠對可溶性細菌纖維素產量的折線圖；圖3為時間對可溶性細菌纖維素產量的柱狀圖；圖4為轉速對可溶性細菌纖維素產量的柱狀圖；圖5為有機酸對可溶性細菌纖維素產量的柱狀圖。
具體實施例方式下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內容之后，本領域技術人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。實施例I以25g/L甘露醇為碳源，以3g/L胰蛋白胨、5g/L酵母浸膏為氮源，組成液體培養(yǎng)基，將木醋桿菌或紅茶菌等細菌纖維素生產菌株放在搖床上動態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)。以0.06 100 (w/v)的濃度分別向50mL培養(yǎng)基中加入羧甲基纖維素鈉(CMC)、海藻酸鈉、可溶性淀粉和果膠，不添加多糖的基礎發(fā)酵培養(yǎng)基作為空白對照。將培養(yǎng)I天的種子液搖勻，在無菌操作下，以6%接種量接入種至添加有不同多糖的發(fā)酵培養(yǎng)基中。為了扣除添加的多糖對細菌纖維素產量值的影響，增加一個對照組，此對照組為在基礎培養(yǎng)基分別添加0. 06%的CMC、海藻酸鈉、可溶性淀粉和果膠，但是不接種。種子液搖勻后，放入震蕩搖床上，20-30°C下以180r/min轉速動態(tài)連續(xù)培養(yǎng)5天。取出動態(tài)培養(yǎng)的木醋桿菌發(fā)酵液， 在8000r/min轉速下高速離心lOmin，分離上清與沉淀，沉淀放入G3玻沙漏斗中于105°C烘箱中烘絕干重，稱量得到不溶性細菌纖維素的產量，產量表示為g/L(纖維素/培養(yǎng)基)。 上清用的95%乙醇以四倍體積進行沉淀，用G3玻沙漏斗抽濾，得到的沉淀放入105°C烘箱中烘絕干重，稱重，計算可溶性細菌纖維素的產量，產量表示為g/L(纖維素/培養(yǎng)基)。實驗結果見圖1，柱形圖的下部分為扣除多糖含量的細菌纖維素的產量，上部分為添加的多糖的量。由圖I可知，果膠能顯著提高可溶性細菌纖維纖維素的產量，其可溶性細菌纖維素產量為2. 96g/L，比空白對照的2. 39g/L提高了 23. 93%，但是對不溶性細菌纖維素產量的提高沒有顯著效果。添加果膠得到的不溶性細菌纖維素產量為3. 30g/L，空白對照產量為3. 40g/L，產量降低了 2. 7%。相反，CMC、海藻酸鈉和可溶性淀粉對提高可溶性細菌纖維素并無明顯效果，其可溶性細菌纖維素產量分別1.60g/L、l. 17g/L、2. 03g/L，相比對照的細菌纖維素產量降低了 33. 1%、23. 94%和15.32%。其中，CMC對可溶性細菌纖維素無顯著影響，但是能大大提高不溶性細菌纖維素的產量，添加CMC后細菌纖維素產量為8. 64g/ L，產量提高了 154. 8%?？扇苄缘矸蹖Σ蝗苄约毦w維素產量也有提高，其產量為3. 49g/ L，提高3%。對于細菌纖維素總產量來說，CMC和果膠都能提高細菌纖維素的總產量，添加 CMC對BC產量提高的效果最顯著，其產量為10. 21g/L，相比于對照的5. 72g/L，產量提高了 78. 48%，添加果膠的BC產量為6. 20g/L，相比對照產量提高了 8.4%?？扇苄缘矸酆秃Ｔ逅徕c則對BC產量的提高無明顯影響。其產量相比對照分別降低了 22. 1%和4.3%。木醋桿菌發(fā)酵液中添加CMC和果膠后，其溶液的粘度變化導致流變學性質發(fā)生變化，溶液內物質分布更加均一，有利于木醋桿菌的生長代謝，促進BC生產。實施例2將培養(yǎng)I天的種子液搖勻，在無菌操作下，以6%接種量接入種子液至50mL的分別添加有10g、20g和30g大小不同的玻璃珠的發(fā)酵培養(yǎng)基中(大玻璃珠直徑8mm，小玻璃紙直徑4mm,培養(yǎng)基由100g/L鹿糖、3g/L蛋白胨和5g/L酵母浸膏組成，pH5. 0),搖勻后,放入震蕩搖床上，30°C下以180r/min轉速動態(tài)連續(xù)培養(yǎng)5天，取出動態(tài)培養(yǎng)的木醋桿菌發(fā)酵液，在 8000r/min轉速下高速離心lOmin，分離上清與沉淀，沉淀放入G3玻沙漏斗中于105°C烘箱中烘絕干重，稱量得到不溶性細菌纖維素的產量，產量表示為g/L(纖維素/培養(yǎng)基)。上清用的95%乙醇以四倍體積進行沉淀，用G3玻沙漏斗抽濾，得到的沉淀放入105°C烘箱中烘絕干重，稱重，計算可溶性細菌纖維素的產量，產量表示為g/L(纖維素/培養(yǎng)基)。圖2顯示添加適量玻璃珠可促進BC產量，其效果隨添加量的不同而不同?？扇苄约毦w維素隨著添加大玻璃珠的量的增加而降低。當大玻璃珠添加量為IOg時，對BC產量有提高，此時可溶性細菌纖維素的產量為2. 80g/L，相比于對照的2. 24g/L，產量提高了 24.8%,大玻璃珠添加量為20g和30g時，不利于可溶性BC的生長，此時BC產量為I. 92g/L 和I. 76g/L，比對照分別降低了 14. 5%和21. 2%。對于小玻璃珠來說，添加量越大，可溶性細菌纖維素的產量就越高，但是，在添加量為IOg小玻璃珠時，其對細菌纖維素的產量提高并不明顯，細菌纖維素產量為2. 03g,比對照降低了 9. 2%，而添加量為20g和30g時，其產量分別是2. 93g/L和3. 03g/L，產量分別提高了 30. 8%和35. I %。添加小玻璃珠對可溶性細菌纖維素產量提高的效果比大玻璃珠的效果明顯。對于不溶性沉淀，添加大玻璃珠和小玻璃珠對BC產量都有明顯提高，特別是大玻璃珠，在添加量為20g時，產量為13. 52g/L對比對照產量提高了 287%，小玻璃珠在20g時細菌纖維素產量最高，此時產量為9. 07g/L,提高了 160%。分別加入IOg和20g的兩種規(guī)格的玻璃珠都能提高細菌纖維素總產量，分別加 A IOg和20g的大玻璃珠時，產量為11. 41g/L和15. 44g/L，相比對照的5. 73g/L，產量分別提高了 99. 0%m 169%。添加IOg和20g小玻璃珠時，產量分別為7. 40g/L和12. 00g/L,比對照提高了 29. 1%和109.4%。
添加玻璃珠對細菌纖維素的影響主要表現在添加玻璃珠在動態(tài)培養(yǎng)過程中能夠增加發(fā)酵液內的剪切力，木醋桿菌分泌細菌纖維素時，液體內的剪切力在一定程度上阻止了細菌纖維素之間的交聯和纏繞，進而使細菌纖維素往分子量更低的可溶性細菌纖維素方向生長，但是玻璃珠的量過多，發(fā)酵液內的剪切力太大會導致木粗桿菌細胞受損，抑制木醋桿菌的生長繁殖，不利于細菌纖維素的分泌，使得可溶性BC和不溶BC產量急劇降低。等量的小玻璃珠與大玻璃珠相比，相同的條件下在液體內產生的剪切力要小很多，對BC產量的影響也相對緩和。實施例3將培養(yǎng)I天的種子液搖勻，在無菌操作下，以6%接種量接入種至50mL的發(fā)酵培養(yǎng)基(培養(yǎng)基由50g/L甘油或葡萄糖、3g/L酵母浸膏和5g/L硫酸銨組成，pH5. 0)中，搖勻后，放入震蕩搖床，30°C下以180r/min轉速動態(tài)連續(xù)培養(yǎng)，每隔24h取樣一次，測可溶性細菌纖維素及不溶性細菌纖維素的產量。連續(xù)發(fā)酵10天，取出動態(tài)培養(yǎng)的木醋桿菌發(fā)酵液， 在8000r/min轉速下高速離心lOmin，分離上清與沉淀，沉淀放入G3玻沙漏斗中于105°C烘箱中烘絕干重，稱量得到不溶性細菌纖維素的產量，產量表示為g/L(纖維素/培養(yǎng)基)。 上清用的95%乙醇以四倍體積進行沉淀，用G3玻沙漏斗抽濾，得到的沉淀放入105°C烘箱中烘絕干重，稱重，計算可溶性細菌纖維素的產量，產量表示為g/L(纖維素/培養(yǎng)基)。由圖3可知，動態(tài)發(fā)酵條件下，發(fā)酵液在第二天時可溶性BC產量迅速上升，到第五天時達到最大，之后達產量到平穩(wěn)，第五天細菌纖維素產量為3. 81g/L，相比于之后的細菌纖維素產量3. 88g/L、3. 82g/L、3. 98g/L，質量提高不大，第十天時細菌纖維素產量為
4.28g/L，產量雖然有所上升，但是提高效率并不明顯。在發(fā)酵初期，可溶BC和不溶BC的產量都迅速增加，主要原因主要是，細菌纖維素的發(fā)酵生產是一個好氧的過程，動態(tài)發(fā)酵為細菌纖維素的生產提供了良好的有氧環(huán)境，使得木醋桿菌在氧氣及營養(yǎng)充足的情況下迅速增長繁殖，分泌大量的細菌纖維素，產量迅速增加。細菌纖維素產量達到最大值時，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分幾乎被消耗完全，細菌纖維素的發(fā)酵生產受到阻礙，同時細菌在發(fā)酵過程中分泌的一些代謝產物使培養(yǎng)基內的環(huán)境越來越不利于細菌的生長，并會使生成的細菌纖維素被部分降解，進而不溶性細菌纖維素產量下降；可溶BC產量在第五天的時候達到最大，而不溶性BC產量在第七天時產量達到最大，說明可溶性細菌纖維素與不溶性細菌纖維素的生產機制并不相同，其具體生產機制有待進一步研究。實施例4將培養(yǎng)I天的種子液搖勻，在無菌操作下，以6%接種量接入種子液至50mL的發(fā)酵培養(yǎng)基中，搖勻后，放入震蕩搖床上，30°C下分別以100r/min、150r/min、180r/min、200r/ min、250r/min的轉速動態(tài)發(fā)酵，連續(xù)培養(yǎng)5天，取出動態(tài)培養(yǎng)的木醋桿菌發(fā)酵液，在8000r/ min轉速下高速離心lOmin，分離上清與沉淀，沉淀放入G3玻沙漏斗中于105°C烘箱中烘絕干重，稱量得到不溶性細菌纖維素的產量，產量表示為g/L(纖維素/培養(yǎng)基)。上清用的 95%乙醇以四倍體積進行沉淀，用G3玻沙漏斗抽濾，得到的沉淀放入105°C烘箱中烘絕干重，稱重，計算可溶性細菌纖維素的產量，產量表示為g/L(纖維素/培養(yǎng)基)。由圖4 可知，在轉速為 100r/min、150r/min、180r/min、200r/min 范圍內，可溶性細菌纖維素產量隨轉速的增大而提高，此時產量為2. 03g/L、3. 32g/L、3. 37g/L、3. 49g/L、3. 5g/L。轉速為250r/min時，可溶性細菌纖維素的質量不再增大。不溶性細菌纖維素方面，在轉速為100r/min、150r/min、180r/min范圍內纖維素產量隨轉速增大而提高，此時其產量分別為2. 75g/L、3. 37g/L、3. 68g/L，但到200r/min、 250r/min時，產量降低。BC總產量(3_5(c))與不溶BC的產量情況相似，在搖床轉速為 180r/min 時最大，產量為 7. 05g/L，其次為 150r/min 時的 6. 69g/L，200r/min、250r/min 時， BC總產量降低。動態(tài)發(fā)酵過程中其反應器震蕩產生的攪拌力影響木醋桿菌分泌合成細菌纖維素， 其轉速對細菌纖維素的產量也就有著很大的影響，轉速低的情況下，其剪切力比較小，轉速高，剪切力較高。轉速越大，剪切力越強，對可溶性細菌纖維素的形成越有利，可溶性細菌纖維素的產量就越高。但是對不溶性細菌纖維素，在一定轉速范圍內有利于生成細菌纖維素， 但轉速過高，發(fā)酵液內分子間的剪切力過大，反而不利于不溶性細菌纖維素的產生。實施例550mL的發(fā)酵培養(yǎng)基中分別加入0.1 100 (w/v)的乳酸、檸檬酸、醋酸，調pH至
5.0，將培養(yǎng)I天的種子液搖勻，在無菌操作下，以6%接種量接入上述發(fā)酵培養(yǎng)基中，搖勻后，動態(tài)連續(xù)培養(yǎng)5天，取出動態(tài)培養(yǎng)的木醋桿菌發(fā)酵液，在8000r/min轉速下高速離心 lOmin，分離上清與沉淀，沉淀放入G3玻沙漏斗中于105°C烘箱中烘絕干重，稱量得到不溶性細菌纖維素的產量，產量表示為g/L(纖維素/培養(yǎng)基)。上清用的95%乙醇以四倍體積進行沉淀，用G3玻沙漏斗抽濾，得到的沉淀放入105°C烘箱中烘絕干重，稱重，計算可溶性細菌纖維素的產量，產量表示為g/L(纖維素/培養(yǎng)基)。在木醋桿菌生物代謝過程中戊糖循環(huán)(HMP)和檸檬酸循環(huán)(TCA) 2條代謝途徑參與了 BC的生物合成。由于糖酵解(EMP)活力缺乏或微弱，即缺乏磷酸果糖激酶或酶活力微弱，因此木醋桿菌不能在厭氧條件下代謝葡萄糖。從草酰乙酸經丙酮酸鹽，由于草酰乙酸脫羧酶和丙酮酸鹽激酶奇特的調節(jié)作用，木醋桿菌發(fā)生糖原異生作用。在這種條件下，一條代謝途徑是由己糖磷酸鹽通過異構化和磷酸化，直接合成纖維素。另一種為非直接途徑，即經過戊糖循環(huán)和糖異生途徑生成纖維素。在細菌產纖維素的過程中，發(fā)酵液中的有機酸既可將其作為碳源，又可作為能源物質起作用。因為纖維素的合成與細胞生長有關聯，添加有機酸使之參與TCA循環(huán)，在細菌的生長早期促進代謝流從纖維素的合成轉向TCA循環(huán)，產生更多的能量，加速細胞的生長，從而整體地提高了纖維素的產量。由圖5可知，添加檸檬酸對可溶性細菌纖維素產量的提高有很明顯的效果，其發(fā)酵生產的細菌纖維素產量能達到2. 71g/L，相比于對照的2. 08g/L，產量提高了 30. 6% ;而醋酸與乳酸降低了可溶性細菌纖維素的產量，其產量分別為1.67g/L和1.51g/L，相比對照，產量分別降低了 19. 7%和27.3%。不溶性細菌纖維素方面酸的影響則正好相反，醋酸與乳酸的對不溶性細菌纖維素的產量有所提高，其產量為6. 98g/L和6. 81g/L，相比對照的5. 35g/L，產量提高了 30. 5%和 27. 2%。而朽1檬酸降低了不容性細菌纖維素的產量,此時朽1檬酸的產量為5. 63g/L,比對照降低了 5. 3%。對于BC總產量來說，醋酸，檸檬酸和乳酸都能提高BC的產量，添加有機酸后這三者BC的產量分別為8. 65g/L，8. 35g/L和8. 32g/L，比對照的7. 43g/L產量分別提高了 36. 5%, 22. 4%，和 20. 3% 0對于醋酸促進細菌纖維素合成的原因，Kiyoshi認為細菌纖維素產量的提高不是因為培養(yǎng)基的PH降低而是與醋酸本身的性質有關。在細菌產纖維素的過程中，葡萄糖被降解生成高能化合物UDPG，而這種高能化合物是合成細菌纖維素的直接前體物質。如果流加的葡萄糖部分地被其它碳源如醋酸等代替，可以利用醋酸產生ATP而節(jié)約葡萄糖，這樣葡萄糖轉化細菌纖維素的量將增加。但當醋酸的濃度過大時，對細胞生長造成抑制而降低了細菌纖維素的產量。而乳酸的促進作用主要是因為纖維素的合成和細胞生長之間有一定聯系，可通過增強細菌的生長能力來提高纖維素的合成。而一定濃度范圍內的乳酸能加快木醋桿菌的細胞生長，因為乳酸在生長早期可促進代謝流從纖維素合成轉向TCA循環(huán)，能量來源于從乳酸到酮戊二酸的氧化反應，加速了細胞生長，從而提高了整體的纖維素產量?？傮w說來，在動態(tài)發(fā)酵條件下，檸檬酸促進了可溶性細菌纖維素的生產，醋酸和乳酸促進了不溶性細菌纖維素的生產，原因是動態(tài)發(fā)酵提供的有氧環(huán)境使得木粗桿菌能夠在充足的條件下充分利用醋酸和乳酸為能源物質，細菌纖維素生產反應過程中，促進了細菌纖維素的生產，可溶性細菌纖維素則是在有氧條件下充分利用了檸檬酸，具體機制有待進一步的研究。由此也可以得出，可溶性細菌纖維素的生產機制與不溶性細菌纖維素的生產機制并不相同。經醇沉淀提取的可溶性細菌纖維素可再溶于水，溶于水后粘度大于水的粘度，說明提取的可溶性細菌纖維素可以增加溶液的粘度，可作為增稠劑應用于食品工業(yè)中。
權利要求
1.一種可溶細菌纖維素的制備方法，包括以碳源和氮源組成液體培養(yǎng)基，將細菌纖維素生產菌株接入培養(yǎng)基放在搖床上或者發(fā)酵罐中動態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，在液體培養(yǎng)基中加入多糖、酸及玻璃珠，20 32°C下培養(yǎng)3-7天后取發(fā)酵液離心，得到的上清液經有機溶劑沉淀，得到可溶細菌纖維素。
2.根據權利要求I所述的一種可溶細菌纖維素的制備方法，其特征在于所述碳源為甘露醇、甘油、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、蔗糖、麥芽糖中的一種或幾種；所述氮源為蛋白胨、胰蛋白胨、酵母浸膏、牛肉膏、尿素、玉米漿、硫酸銨、氯化銨、硝酸鈉中的一種或幾種。
3.根據權利要求I所述的一種可溶細菌纖維素的制備方法，其特征在于所述碳源濃度為25-100g/L，氮源濃度為3-10g/L，液體培養(yǎng)基pH值為4. 5 6. O。
4.根據權利要求I所述的一種可溶細菌纖維素的制備方法，其特征在于所述細菌纖維素生產菌株為醋酸菌屬、葡萄糖酸桿菌屬、葡糖酸醋桿菌屬、葡萄糖氧化桿菌、根瘤菌屬、 八疊球菌屬、假單胞菌屬、無色桿菌屬、產堿菌屬、氣桿菌屬、固氮菌屬、土壤桿菌屬、洋蔥假單胞菌、空腸彎曲菌、木醋桿菌或紅茶菌。
5.根據權利要求I所述的一種可溶細菌纖維素的制備方法，其特征在于所述動態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)的轉速為50-300rpm。
6.根據權利要求I所述的一種可溶細菌纖維素的制備方法，其特征在于所述多糖為羧甲基纖維素鈉、海藻酸鈉、可溶性淀粉、糊精、果膠、透明質酸、瓊脂或肝素，與液體培養(yǎng)基質量體積比為O. 06g IOOml0
7.根據權利要求I所述的一種可溶細菌纖維素的制備方法，其特征在于所述酸為醋酸、乳酸、檸檬酸、鹽酸、硫酸或植酸，與液體培養(yǎng)基質量體積比為O. Ig 100ml。
8.根據權利要求I所述的一種可溶細菌纖維素的制備方法，其特征在于所述玻璃珠直徑為O.添加量為10 30g。
9.根據權利要求I所述的一種可溶細菌纖維素的制備方法，其特征在于所述有機溶劑為無水乙醇、甲醇或丙酮。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種可溶細菌纖維素的制備方法，包括以碳源和氮源組成液體培養(yǎng)基，將細菌纖維素生產菌株接入培養(yǎng)基放在搖床上或者發(fā)酵罐中動態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，在液體培養(yǎng)基中加入多糖、酸及玻璃珠，20～32℃下培養(yǎng)3-7天后取發(fā)酵液離心，得到的上清液經有機溶劑沉淀，得到可溶細菌纖維素。本發(fā)明工藝簡單易行，采用動態(tài)搖床振蕩培養(yǎng)或發(fā)酵罐培養(yǎng)，以不利于長鏈纖維素聚合的方式來提高可溶性細菌纖維素的產量，添加玻璃珠或提高攪拌速度增加剪切力提高可溶纖維素產量，以及控制發(fā)酵pH值等技術得到的可溶性細菌纖維素有一定粘度，制得的可溶細菌纖維素可作為增稠劑等應用于食品中。
文檔編號C12R1/02GK102586360SQ20121003420
公開日2012年7月18日 申請日期2012年2月15日 優(yōu)先權日2012年2月15日
發(fā)明者洪楓, 王華平 申請人:東華大學