專利名稱：檢測(cè)抗體和抗原的免疫測(cè)定裝置的制作方法
檢測(cè)抗體和抗原的免疫測(cè)定裝置
背景技術(shù)：
I.現(xiàn)有和相關(guān)申請(qǐng)
本申請(qǐng)要求2009年2月16日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/338，303和2010年12月10日提交的美國(guó)序列號(hào)12/965，258的優(yōu)先權(quán)。2.發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明廣泛地涉及免疫測(cè)定裝置及其使用方法。更具體而言，本發(fā)明涉及用于檢測(cè)體液中的配體的快速層析測(cè)試條帶。甚至更具體地，本發(fā)明涉及“第四代檢測(cè)”，其可以用于臨床診斷目的同時(shí)檢測(cè)抗原和抗體。3.現(xiàn)有技術(shù)
已有多種配體-受體測(cè)定法被應(yīng)用于檢測(cè)體液，如血液、尿液或唾液中是否存在通常稱為配體的各種物質(zhì)。這些測(cè)定法涉及抗原抗體反應(yīng)，包含放射性、酶、熒光或肉眼可見的聚苯乙烯或金屬溶膠標(biāo)記在內(nèi)的合成綴合物，以及專門設(shè)計(jì)的反應(yīng)室。在所有這些測(cè)定法中，都具有受體，例如對(duì)所選配體或抗原具特異性的抗體，以及用于檢測(cè)所述配體-受體反應(yīng)產(chǎn)物是否存在、一些情況下檢測(cè)其含量的工具。一些測(cè)試設(shè)計(jì)成用來進(jìn)行定量測(cè)定，但在多數(shù)情況下所需要的只是陽性/陰性的定性指示。這種定性測(cè)定法的實(shí)例包括血型檢測(cè)、大多數(shù)種類的尿檢、驗(yàn)孕、以及AIDS檢測(cè)。對(duì)于這些測(cè)試來說，優(yōu)選肉眼可見的指示物，例如存在凝集現(xiàn)象或者顏色改變。即使是定性測(cè)定也必須非常靈敏，因?yàn)橥ǔy(cè)試流體中感興趣的配體的濃度很小。假陽性也很麻煩，特別是利用凝集反應(yīng)和其它快速檢測(cè)法例如浸潰條(dipstick )和變色測(cè)試的情況下。由于這些問題，人們已經(jīng)開發(fā)出了所謂的“夾心”測(cè)定法和采用金屬溶膠或其它種類有色顆粒的其它靈敏檢測(cè)機(jī)制。在“夾心”測(cè)定法中，目標(biāo)分析物例如抗原“夾在”標(biāo)記抗體和固定在固相載體上的抗體之間。通過觀察結(jié)合抗原-標(biāo)記抗體復(fù)合物的存在和/或含量讀取所述測(cè)定結(jié)果。在“竟?fàn)幮浴泵庖邷y(cè)定法中，將結(jié)合到固相表面上的抗體與含有未知量抗原分析物的樣品以及相同種類的標(biāo)記抗原相接觸。然后測(cè)定結(jié)合到固相表面上的標(biāo)記抗原含量以提供對(duì)樣品中抗原分析物含量的間接測(cè)定結(jié)果。由于這些和其它測(cè)定法既可檢測(cè)抗體也可檢測(cè)抗原，故其通常稱為免疫化學(xué)配體-受體測(cè)定法或者簡(jiǎn)稱為免疫測(cè)定法。固相免疫測(cè)定裝置，無論是夾心還是竟?fàn)幮偷?，均可提供?duì)生物流體樣品，如血液、尿液或唾液中的分析物的靈敏檢測(cè)。固相免疫測(cè)定裝置包括固相載體，其結(jié)合有配體-受體對(duì)的一個(gè)成員，通常是抗體、抗原或半抗原。固相載體的早期通用形式有平板、試管、或聚苯乙烯珠，它們是放射性免疫測(cè)定和酶免疫測(cè)定領(lǐng)域公知的。近十年來，采用了許多多孔材料作為固相載體，例如尼龍、硝酸纖維素、醋酸纖維素、玻璃纖維以及其它的多孔聚合物。已經(jīng)記載了許多利用多孔材料作為免疫化學(xué)成分，如抗原、半抗原或抗體的固相載體的設(shè)備齊全的(self-contained)免疫測(cè)定試劑盒。這些試劑盒通常設(shè)計(jì)成浸潰式、流通式、或者遷移式。 在浸潰條測(cè)定的更通用形式中，典型的有家用懷孕和排卵檢測(cè)試劑盒，是將免疫化學(xué)成分，例如抗體結(jié)合在固相上。將該測(cè)定裝置“浸入”懷疑含有未知抗原分析物的樣品中以進(jìn)行孵育。然后同時(shí)或者在孵育一段時(shí)間之后加入酶標(biāo)記抗體。然后洗滌該裝置并插入含有所述酶的底物的第二種溶液。如果存在的話，酶標(biāo)記與所述底物相互作用，引起有色產(chǎn)物形成，它們要么作為沉淀物沉積到所述固相上，要么在所述底物溶液中產(chǎn)生可見的顏色變化。流通(flow-thixnigh)式免疫測(cè)定裝置設(shè)計(jì)成無需進(jìn)行浸潰條測(cè)定法相關(guān)的大量孵育步驟和繁瑣的洗滌步驟。Valkris等人的美國(guó)專利US 4632901中公開了一種裝置，其包括結(jié)合到施加液態(tài)樣品的多孔膜或?yàn)V片上的抗體(對(duì)目標(biāo)抗原分析物有特異性)。隨著液體流過所述膜，目標(biāo)分析物與抗體結(jié)合。加入樣品后接著加入標(biāo)記抗體。對(duì)標(biāo)記抗體的可見檢測(cè)提供樣品中目標(biāo)抗原分析物是否存在的指示。Korom等人的EP-A0299359公開了一種流通裝置的變形方式，其中用作試劑輸送系統(tǒng)的膜中加入了標(biāo)記抗體。浸潰條和流通式免疫測(cè)定裝置對(duì)于多個(gè)加樣和洗滌步驟的需要增加了低訓(xùn)練程度的個(gè)人和家庭用戶得到錯(cuò)誤測(cè)定結(jié)果的可能性。在遷移式測(cè)定中，用需要進(jìn)行測(cè)定的試劑浸潰膜。設(shè)置分析物檢測(cè)區(qū)，在其中結(jié)合有標(biāo)記的分析物并讀取測(cè)定標(biāo)記。例如，參見Tom等人的美國(guó)專利US 4366241和Zuk等人的US 4596275。然而，由于樣品中存在或形成了不希望有的固體成分，其阻斷了標(biāo)記分析物通往檢測(cè)區(qū)的通道，因而經(jīng)常降低了遷移式測(cè)定的靈敏度。遷移式測(cè)定裝置內(nèi)通常包含已連接到有色標(biāo)記上的試劑(即綴合物)，從而可以不用添加其它的物質(zhì)就能夠可見性地檢測(cè)到測(cè)定結(jié)果。例如，參見Bernstein的美國(guó)專利US 4770853。這些標(biāo)記有金溶膠顆粒，例如Leuvering在美國(guó)專利US 4313734中所述，染色溶膠顆粒，如Gribnau等人在美國(guó)專利US4373932中所述，染色乳膠，如May等人的WO88/08534中所述，以及脂質(zhì)體包裹的染料，如Campbell等人的US 4703017中所述。這些有色標(biāo)記通常受到合適固定方法的限制。而且，它們需要相對(duì)大量的配體分子并涉及昂貴的試劑，因而增加了成本。最近，引入了“第四代”快速檢測(cè)免疫測(cè)定裝置。所述“第四代”裝置旨在同時(shí)檢測(cè)具體疾病的抗原和抗體。然而，所述“第四代”裝置面臨著與前述裝置相同的問題。發(fā)明簡(jiǎn)述
本發(fā)明提供了一種第四代快速檢測(cè)免疫測(cè)定裝置，其中所述分析物沿著與攜帶綴合物的緩沖液不同的路徑遷移。本發(fā)明的免疫測(cè)定裝置是高靈敏度的并且使用小體積樣品也可提供準(zhǔn)確結(jié)果。本發(fā)明的裝置可用于不同種類的體液并且可與多種不同疾病的檢測(cè)聯(lián)合使用。上述這些目的在下文將進(jìn)行詳細(xì)論述，據(jù)此提供了干燥和液態(tài)綴合物免疫測(cè)定裝置系統(tǒng)。本發(fā)明的系統(tǒng)包括測(cè)試單元，所述測(cè)試單元具有接收緩沖溶液的第一緩沖液接收部位；和第一吸收性材料，其限定第一緩沖溶液的第一水平流動(dòng)通道；第二吸收性材料，其限定不同于所述第一水平流動(dòng)通道的第二水平流動(dòng)通道，用于提供給第一緩沖液接收部位或第二緩沖液接收部位的相同或不同緩沖溶液；第三吸收性材料，其限定用于樣品接收部位處的樣品的第三水平流動(dòng)通道，所述第三水平流動(dòng)通道不同于所述第一和第二水平流動(dòng)通道，用于樣品接收部位處的樣品的第四流動(dòng)通道，所述第四水平流動(dòng)通道不同于所述第一、第二和第三水平流動(dòng)通道；位于第一和第三吸收性材料接合處的第一測(cè)試區(qū)具有固定抗原或抗體之一的第一測(cè)試線或測(cè)試部位；以及位于第二和第四吸收性材料接合處的第二測(cè)試區(qū)具有固定抗原或抗體的另一種的第二測(cè)試線或測(cè)試部位。用于本發(fā)明的目的，當(dāng)術(shù)語“不同的”與詞語“流動(dòng)通道”或“遷移路徑”結(jié)合使用時(shí)，應(yīng)被理解為是指“沒有液體流通，除非(i)經(jīng)由測(cè)試區(qū)，或者(ii)在緩沖液接收或樣品接收部位”。在本發(fā)明的測(cè)試單元設(shè)置在一殼體中的情況下，所述殼體具有鄰近所述第一緩沖液接收部位的第一開口和鄰近所述樣品接收部位的樣品接收開口。當(dāng)采用第二緩沖液接收部位時(shí)，所述殼體具有鄰近所述第二緩沖液接收部位的第二緩沖液接收開口。在第一測(cè)試線上方的殼體上設(shè)有第一視窗，在第二測(cè)試線上方的殼體上設(shè)有第二視窗。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式中，所述第三吸收性材料和第四吸收性材料是連接在一個(gè)樣品接收墊上的分開件。可替代性地，如果需要，所述第三和第四吸收性材料可以彼此整合在一起。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式中，所述第一吸收性材料和第二吸收性材料也可以是·連接在相同緩沖液接收墊或兩個(gè)不同緩沖液接收墊上的分開件。然而，如果需要，在采用一個(gè)緩沖液接收墊的實(shí)施方式中，所述第一和第二吸收性材料可以彼此整合在一起。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，具有與每個(gè)測(cè)試部位相鄰的對(duì)照線或部位。在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述第一、第二、第三和第四吸收性材料的材質(zhì)、厚度和長(zhǎng)度可以進(jìn)行選擇以調(diào)節(jié)液態(tài)樣品和液態(tài)緩沖液到達(dá)所述測(cè)試部位的時(shí)間。在本發(fā)明的干燥綴合物系統(tǒng)中，第一干燥綴合物設(shè)置在第一開口和測(cè)試部位之間。所述第一干燥綴合物載于所述第一吸收性材料的上面或內(nèi)部，使得當(dāng)緩沖液加入第一開口時(shí)，第一吸收性材料將緩沖液芯吸到第一綴合物上，然后由緩沖液攜帶到第一測(cè)試部位。所述第二干燥綴合物同樣載于所述第二吸收性材料的上面或內(nèi)部，使得當(dāng)緩沖液加入第一或第二 (如果有)開口時(shí)，所述第二吸收性材料將緩沖液芯吸到第二綴合物上，然后由緩沖液攜帶到第二測(cè)試部位。在本發(fā)明的液態(tài)綴合物系統(tǒng)中，設(shè)置有第一緩沖液-綴合物液態(tài)子系統(tǒng)，將其施加到第一開口。然后所述第一吸收性材料將第一緩沖液-綴合物子系統(tǒng)芯吸到第一測(cè)試部位。設(shè)置有第二緩沖液-綴合物液態(tài)子系統(tǒng)，將其施加到第二開口。然后所述第二吸收性材料將第二緩沖液-綴合物子系統(tǒng)芯吸到第二測(cè)試部位。應(yīng)當(dāng)明白的是，本發(fā)明的系統(tǒng)可以與不同種類的樣品，例如血液、尿液、唾液以及糞便聯(lián)合使用，并可用于測(cè)試任何配體的存在。在應(yīng)用血液、唾液或糞便的情況下，可以在將其加入樣品接收開孔之前先將所述血液、唾液或糞便進(jìn)行稀釋或與緩沖液混合。或者，在一些情況下，可以將所述樣品加入樣品接收開孔，然后再將稀釋液加入同一孔中。本發(fā)明的測(cè)試單元優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)，因?yàn)楸景l(fā)明的測(cè)試單元克服了綴合物和樣品中的分析物之間的聚集/凝集問題，這在針對(duì)較大分析物如細(xì)菌或聚合病毒的傳統(tǒng)層析免疫測(cè)定中是個(gè)大問題。特別是在傳統(tǒng)的層析免疫測(cè)定中，細(xì)菌和綴合抗體之間的復(fù)合物難以遷移到測(cè)試線并容易滯留在測(cè)試條帶的底部或襯墊內(nèi)。本發(fā)明中在樣品到達(dá)測(cè)試部位之前分析物和綴合物之間沒有復(fù)合物結(jié)合，因?yàn)樗龇治鑫锸峭ㄟ^其自身的通道施加到測(cè)試部位的，而綴合物也獨(dú)自遷移。這樣，本發(fā)明的系統(tǒng)極其靈敏和具有特異性。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，參考詳細(xì)說明并結(jié)合所提供的附圖，本發(fā)明的其它目的和優(yōu)點(diǎn)將更加顯而易見。附圖簡(jiǎn)述
圖I是本 發(fā)明第一種實(shí)施方式的頂視圖。圖IA是圖I的第一種實(shí)施方式的抗體測(cè)試部分的示意圖。圖IB是圖I的第一種實(shí)施方式的抗原測(cè)試部分的示意圖。圖2是包含在殼體內(nèi)的本發(fā)明的第一種實(shí)施方式的頂視圖。圖3是本發(fā)明第二種實(shí)施方式的頂視示意圖。圖4是包含在殼體內(nèi)的本發(fā)明的第二種實(shí)施方式的頂視圖。圖5是適用于測(cè)試登革熱抗體和抗原并且包含在殼體內(nèi)的本發(fā)明的第二種實(shí)施方式的頂視圖。圖6是適用于測(cè)試艾滋病毒和結(jié)核抗體和抗原并且包含在殼體內(nèi)的本發(fā)明的第二種實(shí)施方式的頂視圖。圖7是適用于測(cè)試多個(gè)抗體和抗原并且包含在殼體內(nèi)的本發(fā)明的第二種實(shí)施方式的頂視圖。優(yōu)選實(shí)施方式詳述
現(xiàn)參見

圖1、1A和1B，提供了第四代免疫測(cè)定測(cè)試裝置410。測(cè)試裝置410被示為用于測(cè)試HIV 1/2抗體和P24抗原的測(cè)試裝置(S卩，其為HIV檢測(cè)裝置)，但如下文相對(duì)于圖5-7所討論的，使用本發(fā)明，可以提供許多其它類型的抗體/抗原測(cè)試。如所示，測(cè)試裝置410包括限定第一、第二、第三和第四水平流動(dòng)通道的第一吸收性或吸水性材料412a、第二吸收性或吸水性材料412b、第三吸收性或吸水性材料414a和第四吸收性或吸水性材料414b。第一吸收性材料412a優(yōu)選地包括最少兩個(gè)且優(yōu)選地三個(gè)或四個(gè)區(qū)域并且可以由數(shù)種材料制成。第一區(qū)域431a (有時(shí)稱為過濾區(qū))位于條帶412a的第一端并且延伸至位于與第二吸收性材料414a的接合處的第二區(qū)域433a (有時(shí)稱為測(cè)試區(qū))。第一區(qū)域431a可以由附接的過濾器(未示出)組成或具有附接的過濾器，并且可以具有含所需抗原(例如蛋白質(zhì)A)的綴合物439a，并且附接的有色標(biāo)記物沉積并固定于其上或者沉積并固定在其所附接的綴合物墊(未示出)上。第一吸收性材料可以由吸收性或吸水性材料的薄膜組成，所述吸收性或吸水性材料的薄膜一般由硝化纖維與塑料背襯(未示出)制成。第一區(qū)域431a適用于接收緩沖溶液，以使緩沖溶液接觸該綴合物，從而使該綴合物移動(dòng)，并且將攜帶綴合物的緩沖溶液芯吸至第二區(qū)域433a。第二(測(cè)試)區(qū)域433a包括該薄膜的第二部分，該第二部分優(yōu)選地被印有測(cè)試線450a (圖1A)，所述測(cè)試線450a具有固定在該膜上的如本領(lǐng)域熟知的抗原。包括薄膜的第三部分的任選的第三區(qū)域435a (有時(shí)稱為對(duì)照區(qū))也可以被印有對(duì)照線460a (圖1A)，所述對(duì)照線460a —般含有如本領(lǐng)域熟知的綴合物抗原的抗體。如果需要，則可以提供任選的第四區(qū)域437a (有時(shí)稱為儲(chǔ)液區(qū))作為也如本領(lǐng)域熟知的芯吸儲(chǔ)液庫(kù)。第四區(qū)域437a可以包括相對(duì)較厚的吸收性紙(未示出)。優(yōu)選地，所有區(qū)域的底層和/或覆蓋物是具有將吸收性材料保持在適當(dāng)位置的粘附劑的薄的、優(yōu)選透明的塑料膜或卡片(未示出)。該卡片可以在條帶412a的端部被切割出開口以使得其不阻斷液體進(jìn)入第一吸收性條帶412a。第二吸收性材料412b同樣優(yōu)選地包括至少兩個(gè)且優(yōu)選地三個(gè)或四個(gè)區(qū)域并且同樣可以由數(shù)種材料制成。第一區(qū)域431b (有時(shí)稱為過濾區(qū))位于條帶412b的第一端并且延伸至位于與第二吸收性材料414b的接合處的第二區(qū)域433b (有時(shí)稱為測(cè)試區(qū))。第一區(qū)域431b可以由附接的過濾器(未示出)組成或具有附接的過濾器，并且可以具有含所需抗體的綴合物43%，并且附接的有色標(biāo)記物沉積并固定于其上或者沉積并固定在其所附接的綴合物墊(未示出)上。第一吸收性材料可以由吸收性或吸水性材料的薄膜組成，所述吸收性或吸水性材料的薄膜一般由硝化纖維與塑料背襯(未示出)制成。第一區(qū)域431b適用于接收緩沖溶液，以使緩沖溶液接觸該綴合物，從而使該綴合物移動(dòng)，并且將攜帶綴合物的緩沖溶液芯吸至第二區(qū)域433b。第二(測(cè)試)區(qū)域433b包括該薄膜的第二部分，該第二部分優(yōu)選地被印有測(cè)試線450b (圖1B)，所述測(cè)試線450b具有固定在該膜上的如本領(lǐng)域熟知的P24抗體。包括薄膜的第三部分的任選的第三區(qū)域435b (有時(shí)稱為對(duì)照區(qū))也可以被印有對(duì)照線460b (圖IB)，所述對(duì)照線460b —般含有如本領(lǐng)域熟知的抗小鼠抗體(如果綴合物439使用小鼠抗體)。如果需要，則任選的第四區(qū)域437b (有時(shí)稱為儲(chǔ)液區(qū))可以被提供作為也如本領(lǐng)域熟知的芯吸儲(chǔ)液庫(kù)。第四區(qū)域437b可以包括相對(duì)較厚的吸收性紙(未示出)。優(yōu)選地，所有區(qū)域的底層和/或覆蓋物是具有將吸收性材料保持在適當(dāng)位置的粘附劑的薄的、優(yōu)選透明的塑料膜或卡片(未示出)。該卡片可以在條帶412b的端部被切割出開口以使得其不阻斷液體進(jìn)入第一吸收性條帶412b。
第三吸收性材料414a也可以由數(shù)種材料制成并且優(yōu)選地包括兩個(gè)區(qū)域461a、463a。第一區(qū)域461a (有時(shí)稱為過濾區(qū))可以包括過濾器或襯墊(未示出)以及一般由硝化纖維與背襯(未示出)制成的薄膜或吸收性或吸水性材料的第一部分。第一區(qū)域461a旨在在其第一端處接收樣品并且第一區(qū)域延伸至第二區(qū)域463a。第二區(qū)域463a包括與第一吸收性材料412a的第二區(qū)域433a接觸的薄膜的第二部分。如圖I和IA表明，第一吸收性材料412a和第三吸收性材料414a被布置成使得所述膜彼此接觸(它們形成接合部)，使得測(cè)試線450a有效地位于所述膜之間(而非背襯接觸所述膜或彼此接觸)。因此，測(cè)試線450a可以印在第三吸收性材料414a的第二區(qū)域463a上，而非第一吸收性材料412a的第二區(qū)域433a上；或者在第一吸收性材料412a的第二區(qū)域433a以外，測(cè)試線450a還印在第三吸收性材料414a的第二區(qū)域463a上。如果需要，可以使用具有將第三吸收性材料保持在適當(dāng)位置的粘附劑的薄塑料膜或卡片(未示出)。第四吸收性材料414b也可以由數(shù)種材料制成并且優(yōu)選地包括兩個(gè)區(qū)域461b、463b。第一區(qū)域461b (有時(shí)稱為過濾區(qū))可以包括過濾器或襯墊(未示出)以及一般由硝化纖維與背襯(未示出)制成的薄膜或吸收性或吸水性材料的第一部分。第一區(qū)域461b旨在在其第一端處接收樣品并且第一區(qū)域延伸至第二區(qū)域463b。第二區(qū)域463b包括與第二吸收性材料412b的第二區(qū)域433b接觸的薄膜的第二部分。如圖I和IB表明，第二吸收性材料412b和第四吸收性材料414b被布置成使得所述膜彼此接觸(而非背襯接觸所述膜或彼此接觸)，并且使得測(cè)試線450b有效地位于所述膜之間。因此，測(cè)試線450b可以印在第四吸收性材料414b的第二區(qū)域463b上，而非第二吸收性材料412b的第二區(qū)域433b上；或者在第二吸收性材料412b的第二區(qū)域433b以外，測(cè)試線450b還印在第四吸收性材料414b的第二區(qū)域463b上。如果需要，可以使用具有將第三吸收性材料保持在適當(dāng)位置的粘附劑的薄塑料膜或卡片(未示出)。在吸收性材料412a、412b、414a、414b由標(biāo)準(zhǔn)型硝化纖維膜與背襯制成的情況下，期望樣品遷移和緩沖液綴合物遷移膜具有不同的孔徑。例如，如果條帶412a (用于綴合物遷移)具有3μ的孔徑，并且膜414a (用于樣品遷移)具有15μ的孔徑，則施加于膜414a的樣品將傾向于遷移并停留在樣品膜414a中并且將不傾向于遷移至綴合物膜412a中。此夕卜，可能期望的是膜412a和412b具有不同的孔徑。因此，例如，攜帶抗體綴合物的膜可能大于攜帶抗原綴合物的膜。如圖I中所見，四種吸收性材料呈現(xiàn)出"H"形，其中第一和第二吸收性材料形成"H"的兩側(cè)，而第三和第四吸收性材料形成〃H〃的中間橫臂。應(yīng)了解，四種吸收性材料可以以其它排列方式來布置。參見圖2，應(yīng)了解，圖1、1A和IB的測(cè)試裝置410可以被設(shè)置在殼體470的內(nèi)部。殼體470具備用于接收樣品(和緩沖液，如果需要的話)的樣品接收開孔471和兩個(gè)緩沖液接收開孔472a、472b。開孔471直接位于吸收性條帶414a、414b的第一區(qū)域461a、461b上方，使得沉積在開孔471中的樣品將流動(dòng)至吸收性條帶414a和414b上。同樣地，開孔472a和472b直接位于吸收性條帶412a、412b的第一區(qū)域431a、431b上方，使得沉積在開孔472a、472b中的緩沖液將流動(dòng)至各自吸收性條帶412a、412b上。另外，殼體470具備窗口475a、475b。窗口 475a、475b分別位于測(cè)試線450a、450b上方，使得測(cè)試線可以透過所述窗 口可見。如果需要，則所述窗口可以由透明塑料組成。在提供了第三區(qū)域435a、435b的情況下，窗口 475a、475b優(yōu)選地延伸至各自對(duì)照線460a、460b上方。應(yīng)理解，因?yàn)閷⑾蛭招圆牧?14a、414b提供相同樣品，所以吸收性材料414a、414b任選地可以由單片(整片)材料制成。如果需要，則可以提供樣品接收墊(未示出)以接收該樣品并將該樣品提供給組成吸收性材料414a和414b的單片材料或各片材料。圖I的免疫測(cè)定410優(yōu)選地按以下使用。首先，可能含有抗體和/或抗原的所需量的樣品(例如10微升，未示出)被提供至第三和第四吸收性材料414a、414b (通過開孔471，如果使用殼體470的話)并且被允許通過第三和第四吸收性材料414a、414b而遷移至其各自的第二區(qū)域463a、463b，所述第二區(qū)域463a、463b分別與第一和第二吸收性材料412a、412b的第二區(qū)域433a、433b接觸。任選地，在將樣品提供至第三和第四吸收性材料之后，可以將優(yōu)選被測(cè)的量的液體例如緩沖溶液加入(通過開孔471，如果使用殼體470的話)以幫助樣品的遷移。所加緩沖液的量可能取決于所用樣品的類型(例如血液、尿液、唾液等等)。無論如何，樣品到達(dá)測(cè)試線450a、450b，所述測(cè)試線450a、450b被印在第一和第二吸收性材料的第二區(qū)域433a、433b的頂上或者被輸注于其中。在所需量的時(shí)間之后，此時(shí)樣品中的HIV抗體(如果存在)有機(jī)會(huì)與固定在測(cè)試線450a上的HIV抗原結(jié)合以及樣品中的HIV抗原(如果存在)有機(jī)會(huì)與固定在測(cè)試線450b上的HIV P24抗體結(jié)合，將優(yōu)選被測(cè)的量的液體例如緩沖溶液(未示出)加入第一和第二吸收性材料412a、412b (通過開孔472a、472b，如果使用殼體470的話)。應(yīng)注意，可以通過各個(gè)開孔添加不同類型的緩沖溶液，從而允許優(yōu)化該系統(tǒng)的敏感度。在足以允許綴合物439a、439b遷移至測(cè)試部位450a、450b (和對(duì)照部位460a、460b，如果提供的話)的另一段時(shí)間之后，檢查(通過窗口 475a、475b，如果使用殼體470的話)測(cè)試部位450a、450b (和對(duì)照部位460a、460b，如果提供的話)以便確定樣品是否為“陽性”。通常，當(dāng)測(cè)試部位450a和對(duì)照部位460a均顯示有色的線時(shí)，獲得指示樣品中存在HIVl或HIV2抗體的“陽性”測(cè)試。當(dāng)僅對(duì)照部位460a顯示有色的線時(shí)，獲得指示樣品中缺少抗體存在的“陰性”測(cè)試。類似地，在測(cè)試部位450b和對(duì)照部位460b均顯示有色的線的情況下獲得指示樣品中存在HIV P24抗原的“陽性”測(cè)試，而當(dāng)僅對(duì)照部位460b顯示有色的線時(shí)獲得指示樣品中缺少P24抗原存在的“陰性”測(cè)試。通過向殼體470提供編號(hào)和/或字母來指示開孔471是用于接收樣品(和任選地某些緩沖液)且將被首先使用，以及指示開孔472a、472b是用于接收緩沖溶液且將被其次地使用，可以促進(jìn)本發(fā)明的方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解免疫測(cè)定410起到以下作用。因?yàn)闇y(cè)試線450a具有固定在膜上的抗原，所以如果測(cè)試樣品含有該抗原的抗體，則該抗體將在測(cè)試線上使其自身與抗原結(jié)合。此后，當(dāng)使含有與有色標(biāo)記物連接的抗體的抗原的綴合物439a遷移至測(cè)試線時(shí)，如果測(cè)試樣品含有目前保持在測(cè)試線450a上的抗體，則該綴合物的抗原將使其自身與抗體結(jié)合并且該有色標(biāo)記物將導(dǎo)致在測(cè)試部位450a處顯現(xiàn)有色線。如果測(cè)試樣品不含有抗體，則該綴合物將不具有用于在測(cè)試線450a處結(jié)合的抗體，并且在測(cè)試部位450a處將沒有有色線顯現(xiàn)。另一方面，因?yàn)閷?duì)照線460a具有抗體，該綴合物的抗原將總是與對(duì)照線460a·中的抗體結(jié)合，從而如果綴合物到達(dá)對(duì)照部位460a處則導(dǎo)致在對(duì)照部位460a處顯現(xiàn)有色線。因此，如果向測(cè)試單元提供足夠緩沖溶液，則應(yīng)該總是在對(duì)照部位460a處顯現(xiàn)有色線，從而提供用于該測(cè)試的對(duì)照。類似地，因?yàn)闇y(cè)試線450b具有固定在膜上的抗體，所以如果測(cè)試樣品含有該抗體的抗原，則該抗原將在測(cè)試線450b上使其自身與抗體結(jié)合。此后，當(dāng)使含有與有色標(biāo)記物連接的該抗原的抗體的綴合物43%遷移至測(cè)試線時(shí)，如果測(cè)試樣品含有目前保持在測(cè)試線450b上的抗原，則該綴合物43%的抗原將使其自身與抗原結(jié)合并且該有色標(biāo)記物將導(dǎo)致在測(cè)試部位450b處顯現(xiàn)有色線。如果測(cè)試樣品不含有抗原，則該綴合物將不具有用于在測(cè)試線450b處結(jié)合的抗原，并且在測(cè)試部位450b處將沒有有色線顯現(xiàn)。另一方面，因?yàn)閷?duì)照線460b具有經(jīng)選擇與該綴合物中抗體類型相同的所選抗體(例如小鼠抗體)，所以該綴合物的抗體將總是在對(duì)照線460b中與所選抗體結(jié)合，從而如果該綴合物到達(dá)對(duì)照部位460b處則導(dǎo)致在對(duì)照部位460b處顯現(xiàn)有色線。因此，如果向測(cè)試單元提供足夠緩沖溶液，則應(yīng)該總是在對(duì)照部位460b處顯現(xiàn)有色線，從而提供用于該測(cè)試的對(duì)照。根據(jù)本發(fā)明的其它實(shí)施方式，而未在測(cè)試單元中(例如在吸收性材料412a、412b上)提供具有連接有色標(biāo)記物的所需抗原或抗體的干燥綴合物沉積物439a、439b，該測(cè)試單元完全不包括干燥綴合物。相反，使用(濕)緩沖液綴合物子系統(tǒng)。因此，在樣品已沉積在吸收性材料414a、414b上之后，第一緩沖液_綴合物子系統(tǒng)(采用與抗原的綴合物加緩沖液)被沉積在吸收性材料412a上并被允許遷移至測(cè)試線450a，而第二緩沖液-綴合物子系統(tǒng)(采用含抗體的綴合物加緩沖液)被沉積在吸收性材料412b上并且被允許遷移至測(cè)試線450b。根據(jù)本發(fā)明的另一實(shí)施方式，在殼體的底部提供窗口，而非將視窗提供在殼體的頂部中。現(xiàn)轉(zhuǎn)到圖3，參見本發(fā)明的另一實(shí)施方式。如所示，測(cè)試裝置510包括限定第一、第二、第三和第四水平流動(dòng)通道的第一吸收性或吸水性材料512a、第二吸收性或吸水性材料512b、第三吸收性或吸水性材料514a和第四吸收性或吸水性材料514b。第一吸收性材料512a優(yōu)選地包括最少兩個(gè)且優(yōu)選地三個(gè)或四個(gè)區(qū)域并且可以由數(shù)種材料制成。第一區(qū)域531a (有時(shí)稱為過濾區(qū))位于條帶512a的第一端并且延伸至位于與第二吸收性材料514a的接合處的第二區(qū)域533a (有時(shí)稱為測(cè)試區(qū))。第一區(qū)域531a可以由附接的過濾器(未示出)組成或具有附接的過濾器，并且可以具有含所需抗原(例如蛋白質(zhì)A)的綴合物539a，并且附接的有色標(biāo)記物沉積并固定于其上或者沉積并固定在其所附接的綴合物墊(未示出)上。第一吸收性材料可以由吸收性或吸水性材料的薄膜組成，所述吸收性或吸水性材料的薄膜一般由硝化纖維與塑料背襯(未示出)制成。第一區(qū)域531a適用于接收緩沖溶液，以使緩沖溶液接觸該綴合物，從而使該綴合物移動(dòng)，并且將攜帶綴合物的緩沖溶液芯吸至第二區(qū)域533a。第二(測(cè)試)區(qū)域533a包括該薄膜的第二部分，該第二部分優(yōu)選地被印有測(cè)試線550a (圖4)，所述測(cè)試線550a具有固定在該膜上的如本領(lǐng)域熟知的抗原。包括薄膜的第三部分的任選的第三區(qū)域535a (有時(shí)稱為對(duì)照區(qū))也可以被印有對(duì)照線560a(圖4)，所述對(duì)照線560a通常含有如本領(lǐng)域熟知的綴合物抗原的抗體。如果需要，則任選的第四區(qū)域537a (有時(shí)稱為儲(chǔ)液區(qū))可以被提供作為也如本領(lǐng)域熟知的芯吸儲(chǔ)液庫(kù)。第四區(qū)域537a可以包括相對(duì)較厚的吸收性紙(未示出)。優(yōu)選地，所有區(qū)域的底層和/或覆蓋物是具有將吸收性材料保持在適當(dāng)位置的粘附劑的薄的、優(yōu)選透明的塑料膜或卡片(未示出)。該卡片可以在條帶512a的端部被切割出開口以使得其不阻斷液體進(jìn)入第一吸收性條帶512a。
第二吸收性材料512b同樣優(yōu)選地包括至少兩個(gè)且優(yōu)選地三個(gè)或四個(gè)區(qū)域并且同樣可以由數(shù)種材料制成。第一區(qū)域531b (有時(shí)稱為過濾區(qū))位于條帶512b的第一端并且延伸至位于與第二吸收性材料514b的接合處的第二區(qū)域533b (有時(shí)稱為測(cè)試區(qū))。第一區(qū)域531b可以由附接的過濾器(未示出)組成或具有附接的過濾器，并且可以具有含所需抗體的綴合物53%，并且附接的有色標(biāo)記物沉積并固定于其上或者沉積并固定在其所附接的綴合物墊(未示出)上。第一吸收性材料可以由吸收性或吸水性材料的薄膜組成，所述吸收性或吸水性材料的薄膜一般由硝化纖維與塑料背襯(未示出)制成。第一區(qū)域531b適用于接收緩沖溶液，以使緩沖溶液接觸該綴合物，從而使該綴合物移動(dòng)，并且將攜帶綴合物的緩沖溶液芯吸至第二區(qū)域533b。第二(測(cè)試)區(qū)域533b包括該薄膜的第二部分，該第二部分優(yōu)選地被印有測(cè)試線550b (圖4)，所述測(cè)試線550b具有固定在該膜上的如本領(lǐng)域熟知的P24抗體。包括薄膜的第三部分的任選的第三區(qū)域535b (有時(shí)稱為對(duì)照區(qū))也可以被印有對(duì)照線560b (圖4)，所述對(duì)照線560b通常含有如本領(lǐng)域熟知的抗小鼠抗體。如果需要，則任選的第四區(qū)域537b (有時(shí)稱為儲(chǔ)液區(qū))可以被提供作為也如本領(lǐng)域熟知的芯吸儲(chǔ)液庫(kù)。第四區(qū)域537b可以包括相對(duì)較厚的吸收性紙(未示出)。優(yōu)選地，所有區(qū)域的底層和/或覆蓋物是具有將吸收性材料保持在適當(dāng)位置的粘附劑的薄的、優(yōu)選透明的塑料膜或卡片(未示出)。該卡片可以在條帶512b的端部被切割出開口以使得其不阻斷液體進(jìn)入第一吸收性條帶512b。應(yīng)了解，第一和第二吸收性材料512a、512b經(jīng)成型具有使得它們可以相接的曲線或角度。如下文所述，這允許緩沖液(或緩沖液加綴合物的亞復(fù)合體)被加入單個(gè)位置，而非如參考圖I和圖2描述的兩個(gè)位置。因此，吸收性材料514a、514b任選地由單片(整片)材料制成。第三吸收性材料514a也可由數(shù)種材料制成并且優(yōu)選地包括兩個(gè)區(qū)域561a、563a。第一區(qū)域561a (有時(shí)稱為過濾區(qū))可以包括過濾器或襯墊(未示出)以及一般由硝化纖維與背襯(未示出)制成的薄膜或吸收性或吸水性材料的第一部分。第一區(qū)域561a旨在在其第一端處接收樣品并且第一區(qū)域延伸至第二區(qū)域563a。第二區(qū)域563a包括與第一吸收性材料512a的第二區(qū)域533a接觸的薄膜的第二部分。如圖3表明，第一吸收性材料512a和第三吸收性材料514a被布置成使得所述膜彼此接觸(而非背襯接觸所述膜或彼此接觸)，并且使得測(cè)試線550a有效地位于所述膜之間。因此，測(cè)試線550a可以被印在第三吸收性材料514a的第二區(qū)域563a上，而非印刷在第一吸收性材料512a的第二區(qū)域533a上；或者在第一吸收性材料512a的第二區(qū)域533a之外，測(cè)試線550a還印在第三吸收性材料514a的第二區(qū)域563a上。如果需要，可以使用具有將第三吸收性材料保持在適當(dāng)位置的粘附劑的薄塑料膜或卡片(未示出)。第四吸收性材料514b也可以由數(shù)種材料制成并且優(yōu)選地包括兩個(gè)區(qū)域561b、563b。第一區(qū)域561b (有時(shí)稱為過濾區(qū))可以包括過濾器或襯墊(未示出)以及一般由硝化纖維與背襯(未示出)制成的薄膜或吸收性或吸水性材料的第一部分。第一區(qū)域561b旨在在其第一端處接收樣品并且第一區(qū)域延伸至第二區(qū)域563b。第二區(qū)域563b包括與第二吸收性材料512b的第二區(qū)域533b接觸的薄膜的第二部分。如圖I和IB表明，第二吸收性材料512b和第四吸收性材料514b被布置成使得所述膜彼此接觸(而非背襯接觸所述膜或彼此接觸)，并且使得測(cè)試線550b有效地位于所述膜之間。因此，測(cè)試線550b可以印在 第四吸收性材料514b的第二區(qū)域563b上，而非第二吸收性材料512b的第二區(qū)域533b上；或者在第二吸收性材料512b的第二區(qū)域533b之外，測(cè)試線550b還可以印刷在第四吸收性材料514b的第二區(qū)域563b上。如果需要，可以使用具有將第三吸收性材料保持在適當(dāng)位置的粘附劑的薄塑料膜或卡片(未示出)。在吸收性材料512a、512b、514a、514b由標(biāo)準(zhǔn)型硝化纖維膜與背襯制成的情況下，期望樣品遷移和緩沖液綴合物遷移膜具有不同的孔徑。例如，如果條帶512a (用于綴合物遷移)具有3μ的孔徑，并且膜514a (用于樣品遷移)具有15μ的孔徑，則施加于膜514a的樣品將傾向于遷移并停留在樣品膜514a中并且將不傾向于遷移至綴合物膜512a中。如圖3中所見，四種吸收性材料呈現(xiàn)出〃A〃形，其中第一和第二吸收性材料形成"A"的兩側(cè)，而第三和第四吸收性材料形成"A"的中間橫臂。應(yīng)了解，四種吸收性材料可以以其它排列來布置。參見圖4，應(yīng)了解圖3的測(cè)試裝置510可以被設(shè)置在殼體570內(nèi)部。殼體570具備用于接收樣品(和緩沖液，如果需要的話)的樣品接收開孔571和單個(gè)緩沖液接收開孔572。開孔571直接位于吸收性條帶514a、514b的第一區(qū)域561a、561b上方，使得沉積于開孔571中的樣品將流動(dòng)至吸收性條帶514a和514b上。同樣地，開孔572直接位于吸收性條帶512a、512b的第一區(qū)域531a、531b上方，使得沉積于開孔572中的緩沖液流動(dòng)至各自吸收性條帶512a、512b上。另外，殼體570具備窗口 575a、575b。窗口 575a、575b分別位于測(cè)試線550a、550b上方，使得該測(cè)試線可以透過所述窗口可見。如果需要，則所述窗口可以由透明塑料組成。在提供了第三區(qū)域535a、535b的情況下，窗口 575a、575b優(yōu)選地延伸至各自對(duì)照線560a、560b上方。應(yīng)理解，因?yàn)閷⑾蛭招圆牧?14a、514b提供相同樣品，所以吸收性材料514a、514b任選地可以由單片(整片)材料制成。如果需要，則可以提供樣品接收墊(未示出)以接收該樣品并將該樣品提供給組成吸收性材料514a和514b的單片材料或各片材料。圖3的免疫測(cè)定510優(yōu)選地按以下使用。首先，可能含有抗體和/或抗原的所需量的樣品(例如10微升，未示出)被提供至第三和第四吸收性材料514a、514b (通過開孔571，如果使用殼體570的話)并且被允許通過第三和第四吸收性材料514a、514b而遷移至其各自的第二區(qū)域563a、563b，所述第二區(qū)域563a、563b分別與第一和第二吸收性材料512a,512b的第二區(qū)域533a、533b接觸。任選地，在將樣品提供至第三和第四吸收性材料之后，可以將優(yōu)選被測(cè)的量的液體例如緩沖溶液加入(通過開孔571，如果使用殼體570的話)以幫助樣品的遷移。所加緩沖液的量可能取決于所用樣品的類型(例如血液、尿液、唾液等等)。無論如何，樣品到達(dá)測(cè)試線550a、550b，所述測(cè)試線550a、550b被印在第一和第二吸收性材料的第二區(qū)域533a、533b的頂上或者被輸注于其中。在所需量的時(shí)間之后，此時(shí)樣品中的HIV抗體(如果存在)有機(jī)會(huì)與固定在測(cè)試線550a上的HIV抗原結(jié)合，以及樣品中的HIV抗原(如果存在)有機(jī)會(huì)與固定在測(cè)試線550b上的HIV P24抗體結(jié)合，將優(yōu)選被測(cè)的量的液體例如緩沖溶液(未示出)加入至第一和第二吸收性材料512a、512b (通過開孔572，如果使用殼體570的話)。在足以允許綴合物539a、539b遷移至測(cè)試部位550a、550b (和對(duì)照部位560a、560b，如果提供的話)的另一段時(shí)間之后，檢查(通過窗口 575a、575b，如果使用殼體570的話)測(cè)試部位550a、550b (和對(duì)照部位560a、560b，如果提供的 話)以便確定樣品是否為“陽性”。通常，當(dāng)測(cè)試部位550a和對(duì)照部位560a均顯示有色的線時(shí)，獲得指示樣品中存在HIVl或HIV2抗體的“陽性”測(cè)試。當(dāng)僅對(duì)照部位560a顯示有色的線時(shí)，獲得指示樣品中缺少抗體存在的“陰性”測(cè)試。類似地，在測(cè)試部位550b和對(duì)照部位560b均顯示有色的線的情況下獲得指示樣品中存在HIV P24抗原的“陽性”測(cè)試，而當(dāng)僅對(duì)照部位560b顯示有色的線時(shí)獲得指示樣品中缺少P24抗原存在的“陰性”測(cè)試。通過向殼體570提供編號(hào)和/或字母來指示開孔571是用于接收樣品(和任選地某些緩沖液)且將被首先使用，以及指示開孔572是用于接收緩沖溶液且將被其次地使用，可以促進(jìn)本發(fā)明的方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)明白，本發(fā)明的實(shí)施方式可以采用許多不同的材料實(shí)現(xiàn)。例如，通常包括非常薄的惰性薄膜、條帶、片層或膜層的吸收性材料(一種或多種)可以由硝化纖維、濾紙、二氧化硅制成，或者由例如，微孔或微粒的紡織或無紡纖維或其組合物制成。多種合適的材料及其組合記載于Gordon等人的美國(guó)專利#4960691, Zuk等人的美國(guó)專利#4956275中，這里均引入全文作為參考。通常，硝化纖維或其它吸收性材料設(shè)有如上所述的薄的非多孔性惰性塑料背襯層。因此，根據(jù)本發(fā)明的其它一些實(shí)施方式，第一、第二、第三和第四吸收性材料的材質(zhì)、厚度和長(zhǎng)度可加以選擇以調(diào)節(jié)液態(tài)樣品和液態(tài)緩沖液(或緩沖液-綴合物子系統(tǒng))到達(dá)測(cè)試部位的時(shí)間。通過對(duì)樣品/分析物以及緩沖液或緩沖液-綴合物子系統(tǒng)設(shè)置單獨(dú)的遷移通道，還可以選擇材料以提高系統(tǒng)的靈敏度。在類似的方式中，應(yīng)當(dāng)明白的是吸收性材料可以以任何方式成型，并可采取如本領(lǐng)域所知的任何尺寸。因此，為了幫助加速芯吸，所述吸收性材料可以呈鑰匙形，其中所述條帶在接收緩沖液的開孔以及測(cè)試部位和對(duì)照部位處具有較小的寬度，而在儲(chǔ)液區(qū)具有較大的寬度。這種設(shè)置在Charlton等人的美國(guó)專利#5989921中所示，這里引入其全文作為參考。在任何情況下，一般來說，測(cè)試條帶長(zhǎng)度顯著大于寬度，并且寬度顯著大于厚度。事實(shí)上，在本發(fā)明的至少某些實(shí)施方式中，所述條帶在測(cè)試區(qū)域應(yīng)當(dāng)很薄(例如Imm厚)并且基本上透明，這樣測(cè)試線和對(duì)照線可以很容易通過測(cè)試條帶看到。此外，所述殼體和吸收性材料可以整合在開放式的測(cè)流平臺(tái)上，該平臺(tái)上設(shè)有具有微柱的注模聚合物，所述微柱通過改變柱高度、直徑、形狀和/或間距能夠精確控制流動(dòng)。這種平臺(tái)主要采用與殼體和吸收性芯吸材料相同的材料，并由Uppsala, Sweden的AmicAB出售，參見例如，www. amic. Se。由于注模的聚合物通?？梢允峭该鞯模收麄€(gè)殼體都可以看作“視窗”，通過它可以觀察測(cè)試線/部位和對(duì)照線/部位。應(yīng)當(dāng)明白的是，根據(jù)所構(gòu)建的測(cè)試類型(例如驗(yàn)孕、HIV、結(jié)核(TB)、朊病毒、尿液分析/藥檢、心肌標(biāo)記物、癌標(biāo)記物、Chagas病、衣原體、口腔細(xì)菌(SM/LC)、流感病毒A、流感病毒B、腺病毒、輪狀病毒、鏈球菌A、其它細(xì)菌或病毒等等，甚至是獸醫(yī)應(yīng)用例如CPV (犬細(xì)小病毒)、FIV (貓免疫缺陷病毒)、FeLV (貓白血病病毒)、以及心絲蟲病)，感興趣的抗體和抗原將有所不同，因而在測(cè)試條帶中使用的抗原和抗體需要與之相適應(yīng)。同樣，所述綴合物的抗原或抗體也需要與之相適應(yīng)。在一些情況下(例如HIV)，測(cè)試條帶中可以采用與綴合物中相同的抗原，因?yàn)镠IV抗體的結(jié)合位點(diǎn)會(huì)在測(cè)試部位處結(jié)合HIV抗原，其仍具有另外的HIV抗體結(jié)合位點(diǎn)用以結(jié)合抗原-綴合物，而在其它情況下，可能需要不同的抗原。類似地，應(yīng)當(dāng)明白根據(jù)所構(gòu)建的測(cè)試類型，如果具有對(duì)照部位的話也需要與之相適應(yīng)。因此，例如在HIV抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中，測(cè)試區(qū)識(shí)別的配體為HIVl和/或HIV2抗體，則測(cè)試區(qū)的抗原可 以是肽HIVl (例如gp41/gpl20)和肽HIV2 ( gp36 )的混合物和/或重組抗原。綴合物可以是綴合到蛋白A、蛋白A/G、抗人IgG/IgM、肽或重組抗原的有色乳膠或膠體金。圖5-7顯示了不同類型的測(cè)試。圖5顯示了登革熱(發(fā)熱)的第四代檢測(cè)。圖5中描述的裝置610是以與第二種實(shí)施方式(圖3)的測(cè)試裝置510相同的方式構(gòu)建的，具有與圖4的實(shí)施方式中采用的類似的殼體670，除了用于裝置610所用的測(cè)試線和綴合物不同并且殼體上的標(biāo)記物可以不同。更具體而言，裝置610使用第一套測(cè)試線650al、650a2用于檢測(cè)樣品中的登革熱抗體(登革熱Ab)。測(cè)試線650al具有抗人IgM抗體，而測(cè)試線650a2具有抗人IgG抗體。如本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解的，測(cè)試樣品中的IgM和IgG抗體將分別在測(cè)試線650al和650a2捕獲，不管抗體是登革熱抗體或是其它傳染病抗體。然而，裝置610中的第一綴合物是具有金標(biāo)記物的重組登革熱抗原，其僅與登革熱抗體結(jié)合。結(jié)果是，僅當(dāng)?shù)歉餆酙gM或登革熱IgG抗體在測(cè)試線650al和650a2捕獲時(shí)，綴合物才被捕獲，顯示如圖5所示的陽性測(cè)試。因?yàn)镮gM抗體是早期標(biāo)記物，其僅發(fā)生在感染的早期，而IgG通常在感染的后期開始出現(xiàn)，圖5的登革熱測(cè)試具有單獨(dú)的測(cè)試線650al和650a2以檢測(cè)登革熱IgM和/或登革熱IgG抗體。然而，如果不需要區(qū)分，可采用具有重組登革熱抗原的單一測(cè)試線，所述綴合物可以是與將在測(cè)試線被捕獲的登革熱IgM和登革熱IgG抗體結(jié)合的任何所需綴合物。優(yōu)選地，第一對(duì)照線660a設(shè)置在測(cè)試線650al、650a2的下游。如圖5所示，測(cè)試裝置610還包括登革熱抗原(登革熱Ag)檢測(cè)測(cè)試線650b。測(cè)試線650b具有抗登革熱NSl (非結(jié)構(gòu)性糖蛋白)單克隆抗體，其將捕獲NSl抗原。用于裝置610的第二綴合物優(yōu)選是相同的或不同的針對(duì)NSl抗原的單克隆抗體，所述抗體與如金溶膠的標(biāo)記物綴合。同樣優(yōu)選設(shè)置第二對(duì)照線660b。圖6顯示了 HIV和結(jié)核病(TB)的第四代檢測(cè)。圖6描述的裝置710是以與第二種實(shí)施方式(圖3)的測(cè)試裝置510相同的方式構(gòu)建的，具有與圖4的實(shí)施方式中采用的類似的殼體770，除了用于裝置710所用的測(cè)試線和綴合物不同并且殼體上的標(biāo)記物可以不同，并且抗原檢測(cè)與第一和第三吸收條帶結(jié)合進(jìn)行，而抗體檢測(cè)與第二和第四吸收條帶結(jié)合進(jìn)行。更具體而言，裝置710使用第一套測(cè)試線750al、750a2用于檢測(cè)樣品中的HIV1/2和TB抗體。測(cè)試線750al具有HIVl和HIV2重組抗原或合成肽，而測(cè)試線750a2具有重組TB抗原雞尾酒或融合。用于抗體檢測(cè)的第一綴合物優(yōu)選是具有金溶膠的蛋白質(zhì)A和/或抗人IgM綴合物。結(jié)果是，如果樣品中有HIVl或HIV2抗體，所述抗體將在測(cè)試線750al被抗原或合成肽捕獲，如果樣品中有TB抗體，則它們將在測(cè)試線750a2被抗原雞尾酒或融合捕獲。當(dāng)緩沖液加入測(cè)試裝置710中并且蛋白質(zhì)A和/或抗人IgM綴合物遷移至測(cè)試線750al、750a2處，所述綴合物如果在測(cè)試線750al處存在，則其將被HIVl或HIV2抗體捕獲，如果在測(cè)試線750a2處存在，則其將被TB抗體捕獲。優(yōu)選地，第一對(duì)照線760a設(shè)置在測(cè)試線750al、750a2 的下游。測(cè)試裝置710還包括測(cè)試線750b l、750b2用于分別檢測(cè)HIV. P24抗原和TB-LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)抗原。更具體而言，測(cè)試線750b I具有將捕獲p24 HIV抗原的抗HIV.P24單克隆和/或多克隆抗體，而抗原測(cè)試線750b2具有將捕獲TB LAM抗原的LAM抗體。在測(cè)試裝置710中用于抗原檢測(cè)的“第二綴合物”是綴合物的混合物，其包括抗-HIV. P24單克隆或多克隆抗體與如金溶膠的標(biāo)記物綴合的綴合物、和LAM抗體與抗-HIV. P24單克隆或 多克隆綴合物中使用的相同的或不同的標(biāo)記物綴合的綴合物。如果LAM抗體綴合物使用不同的標(biāo)記物，當(dāng)HIV和TB抗原同時(shí)存在時(shí)，測(cè)試線750b2處顯現(xiàn)的顏色可與測(cè)試線750b I處顯現(xiàn)的顏色不同。第二對(duì)照線660b同樣優(yōu)選設(shè)置。在圖7中大概顯示了用于多抗體和多抗原測(cè)試的第四代測(cè)試。測(cè)試裝置810是以與第二種實(shí)施方式(圖3)的測(cè)試裝置510相同的方式構(gòu)建的，具有與圖4的實(shí)施方式中采用的類似的殼體870，除了用于裝置810所用的測(cè)試線和綴合物不同并且殼體上的標(biāo)記物可以不同。如圖7所示，具有5條具有不同抗原的測(cè)試線850al、850a2、850a3、850a4、850a5以檢測(cè)不同的抗體，同時(shí)具有5條提供不同抗體的另外的測(cè)試線850bl、850b2、850b3、850b4、850b5以檢測(cè)不同抗原。測(cè)試裝置810可用于檢測(cè)過敏或多種感染疾病。對(duì)于本發(fā)明的所有實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)明白，綴合物的標(biāo)記物可以采取多種形式，包括不同種類的金屬溶膠，有色乳膠，各種酶類等等。盡管本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式提供了一種肉眼容易看見的檢測(cè)信號(hào)，但應(yīng)當(dāng)明白本發(fā)明還包括可通過紫外線或其它技術(shù)如熒光鏡來檢測(cè)的其它標(biāo)記物。因此，應(yīng)當(dāng)明白的是，可以提供一種能夠通過諸如熒光鏡或數(shù)字讀取儀之類的自動(dòng)讀取裝置讀取的、采用本發(fā)明的測(cè)試單元的系統(tǒng)。本發(fā)明提高了靈敏度但不損害測(cè)試的特異性。靈敏度提高的主要原因是通過不同的遷移通道改進(jìn)了樣品到測(cè)試區(qū)的遷移，以及在綴合標(biāo)記物與測(cè)試區(qū)復(fù)合物反應(yīng)之前測(cè)試區(qū)中分析物與結(jié)合位點(diǎn)的有效結(jié)合。例如，在HIV測(cè)試的情況下，施加到第三吸收性條帶上的血清樣品中的HIV特異性抗體將遷移到第一測(cè)試區(qū)并與HIV測(cè)試線結(jié)合。血液中再?zèng)]有其它的免疫球蛋白G (IgG)會(huì)結(jié)合到測(cè)試區(qū)中固定的HIV抗原上。當(dāng)緩沖液加入第一吸收性條帶，使蛋白A與乳膠或金的綴合物遷移到測(cè)試區(qū)時(shí)，所述蛋白A綴合物將與已在測(cè)試線處被HIV肽所捕獲的HIV抗體的FC部分結(jié)合。由于蛋白A與HIV抗體的FC部分之間的結(jié)合非常牢固，僅需要提供少量的HIV抗體就能檢測(cè)到。這樣就與血液樣品中所有人IgG (包括HIV抗體)在遷移到測(cè)試線之前都要與蛋白A結(jié)合的傳統(tǒng)測(cè)流層析HIV測(cè)試系統(tǒng)形成了鮮明對(duì)比，因?yàn)榈鞍譇會(huì)非特異性地結(jié)合所有的IgG。因此，全部的蛋白A、IgG、金/乳膠復(fù)合物都將遷移到含有HIV抗原的測(cè)試線處。而之后只有HIV抗體、蛋白A、金/乳膠綴合物會(huì)與HIV抗原結(jié)合。然而，由于樣品中有大量的非相關(guān)IgG和少量的HIV抗體存在，因而存在沒有足夠的HIV抗體與蛋白A結(jié)合，故有色線不可見的風(fēng)險(xiǎn)。類似地，當(dāng)血液血清樣品中存在HIV特異性抗原時(shí)，在第四吸收條帶中遷移的抗原將到達(dá)第二測(cè)試區(qū)，并將與含有HIVP24抗體的第二測(cè)試線結(jié)合。當(dāng)緩沖溶液加入第二吸收條帶引起抗體/標(biāo)記物綴合物遷移至第二測(cè)試區(qū)時(shí)，綴合物中的抗體將與第二測(cè)試線中已捕獲的抗原結(jié)合。本文已經(jīng)記載和舉例說明了多種免疫測(cè)定實(shí)施方式及其使用方法。盡管記載了本發(fā)明的具體實(shí)施方式
，但并不意味著本發(fā)明僅限于此，其表示本發(fā)明的范圍應(yīng)大到本領(lǐng)域允許的程度，并且應(yīng)該同樣理解說明書。因此，盡管說明書中記載利用抗原/抗體反應(yīng)進(jìn)行配體結(jié)合，但也可以采用其它的配體結(jié)合機(jī)制，例如適配體結(jié)合、核酸結(jié)合、酶結(jié)合等等。同樣，盡管記載該測(cè)試單元具有單條線用于檢測(cè)一種配體，兩條線用于檢測(cè)兩種配體，五條測(cè)試線用于檢測(cè)五種配體，但應(yīng)當(dāng)明白可以采用不同數(shù)量的線來檢測(cè)不同數(shù)量的抗體。此夕卜，盡管所記載的測(cè)試單元在殼體頂壁具有開孔用于接收樣品和緩沖液或者緩沖液-綴合·物子系統(tǒng)，但應(yīng)當(dāng)明白也可以在所述殼體的端壁或側(cè)壁設(shè)置一個(gè)或兩個(gè)開孔。類似地，盡管記載的吸收性材料優(yōu)選包括薄塑料背襯層，但應(yīng)當(dāng)明白也可以只在某些部位設(shè)置所述塑料被襯層或者根本不設(shè)置。在僅設(shè)置部分背襯層或不設(shè)背襯層的情況下，測(cè)試和對(duì)照部位可以位于所述吸收性材料的任何一側(cè)或者兩側(cè)。而且，盡管所述測(cè)試區(qū)和對(duì)照區(qū)如所示包括測(cè)試線和對(duì)照線，但應(yīng)當(dāng)明白所述測(cè)試和對(duì)照部位也可以有不同的構(gòu)造，例如環(huán)形、方形、橢圓形、虛線等等。事實(shí)上，測(cè)試部位和對(duì)照部位的構(gòu)造可以互不相同。同樣，盡管本發(fā)明描述采用相互垂直的吸收性材料，但應(yīng)當(dāng)明白所述殼體也可以不必相互垂直，只要為分析物/樣品以及緩沖液-綴合物子系統(tǒng)提供不同的遷移通道。本領(lǐng)域技術(shù)人員還應(yīng)當(dāng)明白，所述殼體還可以有其它方式的改變以包括每條測(cè)試線的單獨(dú)的窗口。同樣，盡管本發(fā)明是結(jié)合使用加入綴合物遷移通道和可選擇性的樣品遷移通道的緩沖液進(jìn)行說明的，但應(yīng)當(dāng)明白，可以根據(jù)需要選擇一種或多種緩沖液，并根據(jù)要實(shí)施的一種或多種測(cè)試將其加入遷移通道。因此，通常使用例如磷酸鹽緩沖液或TRIS (三羥甲基氨基甲烷)緩沖液的緩沖液。然而，本發(fā)明意在包括使用包括水在內(nèi)的任何稀釋液。此外，如果需要的話，所述稀釋液可以在將樣品加入到吸收性材料之前加入并混合到樣品中，或者可以先將樣品沉積之后加入稀釋液。同樣，可以采用任何能夠使綴合物遷移的稀釋液，并且可將其與綴合物在液態(tài)綴合物系統(tǒng)中進(jìn)行預(yù)混合，或者將其提供到干燥綴合物系統(tǒng)中綴合物的遷移通道上。而且，應(yīng)理解，本文所公開的測(cè)試和方法的方面可與前文引用的U. S.序列號(hào)11/908,071中包含的任何的方面和教導(dǎo)結(jié)合。因而本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)明白，在不偏離其要求保護(hù)的精神和范圍的情況下，本發(fā)明還可以做出其它的改變。
權(quán)利要求
1.一種用于檢測(cè)樣品的免疫測(cè)定裝置，包括 第一、第二、第三和第四吸收性或吸水性材料，其限定第一、第二、第三和第四水平流動(dòng)通道，所述第一和第二流動(dòng)通道用于第一和第二綴合物的遷移，所述第三和第四流動(dòng)通道用于樣品的遷移，其中用于檢測(cè)樣品中一種或多種不同抗體的存在的第一測(cè)試區(qū)域位于第一和第三流動(dòng)通道的接合處，用于檢測(cè)樣品中一種或多種不同抗原的存在的第二測(cè)試區(qū)域位于第二和第四流動(dòng)通道的接合處。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的測(cè)定裝置，進(jìn)一步包括 包含所述第一、第二、第三和第四吸收性或吸水性材料的殼體，所述殼體具有用于接收樣品的第一開孔，以及用于接收引起所述第一和第二綴合物遷移的液體的至少一個(gè)第二開孔。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的免疫測(cè)定裝置，其中 所述至少一個(gè)第二開孔是單個(gè)第二開孔。
4.根據(jù)權(quán)利要求I的免疫測(cè)定裝置，其中 所述第一和第二吸收性或吸水性材料彼此整合在一起。
5.根據(jù)權(quán)利要求I的免疫測(cè)定裝置，其中 所述第三和第四吸收性或吸水性材料彼此整合在一起。
6.根據(jù)權(quán)利要求I的免疫測(cè)定裝置，其中 所述第一、第二、第三和第四吸收性或吸水性材料布置成“H”形狀和“A”形狀中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求I的免疫測(cè)定裝置，其中 所述第一測(cè)試區(qū)域包括多個(gè)檢測(cè)線，用于檢測(cè)多種不同抗體的存在。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的免疫測(cè)定裝置，其中 所述第二測(cè)試區(qū)域包括多個(gè)檢測(cè)線，用于檢測(cè)多種不同抗原的存在。
9.根據(jù)權(quán)利要求I的免疫測(cè)定裝置，其中 所述第一吸收性或吸水性材料具有第一孔徑，所述第二吸收性或吸水性材料具有第二孔徑，并且所述第二孔徑比所述第一孔徑大。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的免疫測(cè)定裝置，其中 所述第三吸收性或吸水性材料具有第三孔徑，并且所述第三孔徑比所述第二孔徑大。
11.根據(jù)權(quán)利要求I的免疫測(cè)定裝置，其中 所述第一測(cè)試區(qū)域包括含有Hiv抗原的第一測(cè)試線，所述第二測(cè)試區(qū)域包括含有HIV抗體的第二測(cè)試線。
12.根據(jù)權(quán)利要求I的免疫測(cè)定裝置，其中 所述第一測(cè)試區(qū)域包括含有IgM抗體的第一測(cè)試線，和含有IgG抗體的第二測(cè)試線，并且所述第一綴合物含有帶標(biāo)記物的登革熱抗原。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的免疫測(cè)定裝置，其中 所述第二測(cè)試區(qū)域包括含有抗登革熱抗體的第三測(cè)試線。
14.根據(jù)權(quán)利要求I的免疫測(cè)定裝置，其中 所述第一測(cè)試區(qū)域包括含有HIV抗原或合成肽的第一測(cè)試線，和含有TB抗原的第二測(cè)試線，并且所述第二測(cè)試區(qū)域包括含有HIV抗體的第三測(cè)試線和含有脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)抗體的第四測(cè)試線。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的免疫測(cè)定裝置，其中 所述第二綴合物包含與第一標(biāo)記物綴合的抗-HIV. P24單克隆或多克隆抗體，和與第二標(biāo)記物綴合的LAM抗體的綴合物的混合物。
全文摘要
一種第四代免疫測(cè)定裝置，其包括第一、第二、第三和第四吸收性或吸水性材料，所述材料限定第一、第二、第三和第四水平流動(dòng)通道。所述第一和第二流動(dòng)通道用于第一和第二綴合物的遷移，而所述第三和第四流動(dòng)通道用于液體樣品的遷移。用于檢測(cè)一種或多種不同抗體的存在的第一測(cè)試區(qū)域位于第一和第三流動(dòng)通道的接合處，用于檢測(cè)一種或多種不同抗原的存在的第二測(cè)試區(qū)域位于第二和第四流動(dòng)通道的接合處。任選向吸收性材料提供殼體，其具有用于接收樣品的開口，以及一個(gè)或多個(gè)用于接收緩沖溶液或綴合物-緩沖液亞復(fù)合物的開口。所述殼體還可在測(cè)試區(qū)域上具有視窗。
文檔編號(hào)C12M1/34GK102947439SQ201180019396
公開日2013年2月27日 申請(qǐng)日期2011年2月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月16日
發(fā)明者J.埃斯范迪亞里 申請(qǐng)人:生化診斷系統(tǒng)公司