專利名稱：使用胎盤干細胞對骨相關癌的治療的制作方法
技術領域：
本文提供了使用組織培養(yǎng)貼壁胎盤干細胞(在本文中稱為PDAC)和/或骨髓來源的間質(zhì)干細胞(BM-MSC)治療骨相關癌(例如，多發(fā)性骨髓瘤)，抑制骨相關癌細胞(例如，多發(fā)性骨髓瘤細胞或軟骨肉瘤細胞)增殖和抑制骨相關癌(例如，多發(fā)性骨髓瘤、軟骨肉瘤及其他骨相關癌(例如，腫瘤))生長的方法。
2.背景技術
多發(fā)性骨髓瘤(也稱為MM、骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤或卡勒氏病)是一類漿細胞癌，漿細胞是產(chǎn)生抗體的免疫系統(tǒng)細胞。多發(fā)性骨髓瘤的癥狀包括骨痛、感染、腎衰竭、貧血和骨病變。這種疾病被認為是不可醫(yī)治的,并且只有如來那度胺(REVL1MID )的少數(shù)治療方法可用并且是有希望的。照此，存在對多發(fā)性骨髓瘤新型治療方法的需要。到目前為止，尚未對非造血組織培養(yǎng)貼壁胎盤干細胞抑制骨相關癌(例如，多發(fā)性骨髓瘤)生長或抑制骨相關癌細胞增殖的能力進行描述。3.發(fā)明概述在一個方面，本文提供了治療患有骨相關癌的個體的方法，其包括向所述個體施用治療有效量的分離的組織培養(yǎng)貼壁胎盤干細胞(在本文中還稱為PDAC (胎盤源貼壁細胞))、這類胎盤干細胞的分離群體或包含胎盤干細胞的分離細胞群體；和/或分離的骨髓來源的間質(zhì)干細胞(BM-MSC)或包含BM-MSC的骨髓。在一種實施方式中，本文提供了治療患有骨相關癌的個體的方法，其包括向所述個體施用治療有效量的胎盤干細胞和/或BM-MSC，其中所述治療有效量的胎盤干細胞和/或BM-MSC改善(例如，可檢測地改善)了所述骨相關癌的一種或多種癥狀,或者降低(例如，可檢測地降低)了所述骨相關癌的發(fā)展。在具體的實施方式中，所述骨相關癌是多發(fā)性骨髓瘤。在具體的實施方式中，所述骨相關癌是軟骨肉瘤。在其他實施方式中，所述骨相關癌是骨癌、神經(jīng)母細胞瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、前列腺癌或骨纖維肉瘤。在具體的實施方式中，所述骨相關癌不是前列腺癌。在其他實施方式中，所述骨相關癌包括實性腫瘤。在另一種實施方式中，所述個體是哺乳動物。在另一種實施方式中，所述個體是人。在另一種實施方式中，所述施用所述胎盤干細胞導致比施用相等數(shù)目的骨髓來源的間質(zhì)干細胞更大的(例如，可檢測地更大的)所述一種或多種癥狀的改善。在某些實施方式中，所述骨髓來源的間質(zhì)干細胞是CD34_、CD45_、CD73+和/或CD105+中的一種或多種。在某些實施方式中，所述個體表現(xiàn)出骨病變，例如，由所述骨相關癌造成的骨病變，例如，在X射線放射照片上可見的骨病變。在其他實施方式中，所述個體不表現(xiàn)出骨病變，例如，由所述骨相關癌造成的骨病變，例如，在X射線放射照片上可見的骨病變。在其他實施方式中，所述施用導致骨病變的出現(xiàn)或發(fā)病的延緩，所述骨病變例如，由所述骨相關癌造成的骨病變，例如，在X射線放射照片上可見的骨病變或由癌的治療造成的骨病變。在某些實施方式中，將所述胎盤干細胞和/或所述BM-MSC靜脈內(nèi)施用給所述個體。在其他實施方式中，就細胞總數(shù)而言，所述治療方法包括向所述個體施用至少約I X 107、5 X 107、I X 108、5 X 108、I X 109、5 X 109、I X 1010、5 X IO10 或 I X IO11 個胎盤干細胞和 /或BM-MSC。在另一個具體的實施方式中，在所述施用之前，所述胎盤干細胞、所述BM-MSC或兩者已體外增殖了不超過2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、
23、24、25、26、27、28、29或30次群體倍增。在另一種實施方式中，將所述胎盤干細胞和/或BM-MSC在骨病變(例如，由所述骨相關癌造成的骨病變)處或附近施用于所述個體。在另一種實施方式中，所述治療方法另外包括向所述個體施用一種或多種抗癌化合物。在本文任何實施方式的另一種實施方式中，在所述施用之前已將所述胎盤干細胞和/或BM-MSC冷凍 保存并融化。在一種實施方式中，所述治療方法可以包括對(I)所述個體中骨病變的數(shù)目或程度；(2)所述個體中破骨細胞前體的數(shù)目或(3)所述個體中多發(fā)性骨髓瘤細胞的數(shù)目中的一種或多種在所述施用前確定一次或多次和/或在所述施用后確定一次或多次，例如，在所述施用前至少一次和在所述施用后至少一次。在某些實施方式中，所述治療有效量的胎盤干細胞和/或BM-MSC降低(例如，可檢測地降低)了所述個體中所述骨病變的數(shù)目或嚴重程度，或者降低了所述個體中所述骨病變的數(shù)目或嚴重程度的提高速度，例如，如可通過骨密度測定法或X射線確定的。在其他實施方式中，所述治療有效量的胎盤干細胞和/或BM-MSC降低(例如，可檢測地降低)了所述個體中破骨細胞前體的數(shù)目，例如，如使用對破骨細胞前體特異的抗體以檢測(例如)個體的周圍血液或骨髓中的破骨細胞前體所確定的。在其他實施方式中，所述治療有效量的胎盤干細胞和/或BM-MSC降低了所述個體中骨相關癌細胞(例如，多發(fā)性骨髓瘤細胞)的數(shù)目，例如，如使用對這些細胞(例如，多發(fā)性骨髓瘤細胞或漿細胞)特異的抗體(例如，對細胞標志物CD28或CD138特異的抗體)通過對來自所述個體的有核血細胞的細胞計數(shù)(例如，通過流式細胞術)或抗體染色可確定的，或者如可通過評價來自所述個體的血液中M蛋白水平確定的。在其他實施方式中，與施用所述胎盤干細胞之前所述細胞的數(shù)目相比，所述胎盤干細胞和/或BM-MSC將所述骨相關癌細胞或所述破骨細胞前體的數(shù)目降低了至少(例如)10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98% 或 99%。在另一種實施方式中，所述個體患有軟骨肉瘤；例如，所述骨相關癌是軟骨肉瘤。在某些實施方式中，所述治療方法包括對所述個體中的軟骨肉瘤細胞數(shù)目或所述個體中的骨病變(例如，軟骨肉瘤造成的塊)數(shù)目中的一種或多種在所述施用前確定一次或多次和/或在所述施用后確定一次或多次。在另一個方面，本文提供了抑制骨相關癌細胞增殖的方法，其包括將所述骨相關癌細胞與多個胎盤干細胞和/或BM-MSC接觸足以使所述胎盤干細胞和/或BM-MSC與未與胎盤干細胞和/或BM-MSC接觸的多個所述骨相關癌細胞相比抑制(例如，可檢測地抑制)所述骨相關癌細胞增殖的時間，例如，如可通過所述骨相關癌細胞數(shù)目的減少(例如，可檢測的減少)或所述骨相關癌細胞數(shù)目增加的可檢測減緩確定的。在某些實施方式中，所述骨相關癌細胞是多發(fā)性骨髓瘤細胞。在所述方法的另一種實施方式中，所述骨相關癌細胞是軟骨肉瘤細胞。在其他實施方式中，所述骨相關癌細胞是骨癌細胞、神經(jīng)母細胞瘤細胞、骨肉瘤細胞、尤文氏肉瘤細胞、脊索瘤細胞、骨惡性纖維組織細胞瘤細胞或骨纖維肉瘤細胞。在另一個具體的實施方式中，所述骨相關癌細胞屬于實性腫瘤。在所述方法的某些實施方式中，所述接觸是在體外進行的。在某些其他實施方式中，所述接觸是在體內(nèi)進行的。在某些實施方式中，所述接觸是在包含所述骨相關癌細胞的個體中進行的，例如，在患有由所述細胞弓I起的疾病的個體中進行。在其他實施方式中，所述接觸是在包含多發(fā)性骨髓瘤細胞的個體中進行的，例如，在患有多發(fā)性骨髓瘤的個體中進行。在某些實施方式中，所述個體是哺乳動物，例如，人。在另一個具體的實施方式中，所述接觸包括將所述胎盤干細胞靜脈內(nèi)施用至所述個體中。在另一個具體的實施方式中，所述接觸包括將所述胎盤干細胞和/或BM-MSC在所述個體的骨病變處或附近施用至所述個體。在另一種實施方式中，所述抑制骨相關癌細胞(例如，多發(fā)性骨髓瘤細胞)增殖的 方法另外包括將所述骨相關癌細胞與一種或多種抗癌化合物接觸，例如，與治療有效量的一種或多種抗癌化合物接觸。在另一種實施方式中，所述方法包括向所述個體施用至少約1X107、5X107、1X108、5X108、1X109、5X109 或 I X 101。個胎盤干細胞和 / 或 BM-MSC。在某些實施方式中，所述胎盤干細胞和/或BM-MSC和/或兩者已體外增殖了不超過2、3、4、5、
6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29 或 30 次群體倍增。在其他實施方式中，與在不存在所述胎盤干細胞和/或BM-MSC的情況下相等所述骨相關癌細胞數(shù)目的增殖相比，所述胎盤干細胞和/或BM-MSC將所述骨相關癌細胞的增殖抑制 7 至少(例如)10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%，例如,可通過所述骨相關癌細胞數(shù)目的可檢測減少或所述骨相關癌細胞數(shù)目增加的可檢測減緩確定的，或者如可通過具有所述癌細胞的個體中骨病變的數(shù)目和/或嚴重性的可檢測降低確定的。在其他實施方式中，在所述接觸之前已將所述胎盤干細胞或BM-MSC或兩者冷凍保存并融化。在另一種實施方式中，所述方法包括在所述接觸之前確定所述胎盤干細胞抑制(例如，可檢測地抑制)所述骨相關癌細胞樣品的增殖。在另一種實施方式中，本文提供了減少破骨細胞前體成熟為破骨細胞的方法，其包括將所述破骨細胞前體與多個胎盤干細胞和/或BM-MSC接觸，其中所述多個胎盤干細胞和/或BM-MSC為足以減少(例如，可檢測地減少)從所述破骨細胞前體向破骨細胞成熟的多個細胞，例如，可通過由于所述接觸使破骨細胞數(shù)目可檢測的減少或破骨細胞數(shù)目增加的減緩確定的。在另一種實施方式中，本文提供了提高破骨細胞前體凋亡的方法，其包括將所述破骨細胞前體與多個胎盤干細胞和/或BM-MSC接觸，其中所述多個胎盤干細胞和/或BM-MSC是足以提高(例如，可檢測地提高)破骨細胞前體凋亡的多個細胞。在某些實施方式中，所述破骨細胞前體凋亡的提高是通過來自所述個體的破骨細胞前體的膜聯(lián)蛋白V的可檢測增加和/或碘化丙啶染色所檢測的。在某些實施方式中，所述破骨細胞前體位于個體中，例如，患有骨相關癌(例如，多發(fā)性骨髓瘤、軟骨肉瘤或本文所述的其他骨相關癌中的一種)的個體。在某些其他實施方式中，所述方法包括將所述破骨細胞前體與來那度胺接觸，例如，將來那度胺施用至具有所述破骨細胞前體的個體。在上述方法的某些實施方式中，所述接觸在體外發(fā)生。在其他實施方式中，所述接觸在體內(nèi)發(fā)生。在另一種實施方式中，所述接觸在人中發(fā)生。在另一種實施方式中，所述接觸在患有骨相關癌的個體中發(fā)生，例如，在具有骨相關癌細胞或患有由這類細胞引起的疾病的個體中發(fā)生。在另一種實施方式中，所述個體是具有多發(fā)性骨髓瘤或多發(fā)性骨髓瘤細胞的個體。在另一種實施方式中，所述個體具有至少一種多發(fā)性骨髓瘤的癥狀。在另一種實施方式中，所述個體具有至少一種由多發(fā)性骨髓瘤引起的骨病變。在上述方法的某些實施方式中，所述胎盤干細胞為以下一種或多種(I)貼壁至組織培養(yǎng)塑料制品；(2)如可通過流式細胞術檢測的⑶34—、⑶10+、⑶105+和⑶200+ ;和/或(3)具有分化為成骨或軟骨形成細胞的能力，例如，體內(nèi)分化或體外分化或兩者。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞貼壁至組織培養(yǎng)塑料制品；為如可通過流式細胞術檢測的⑶34'⑶10+、⑶105+和⑶200+ ;和具有分化為具有成骨或軟骨形成細胞的一種或多種特征 (例如，骨細胞或軟骨細胞的特征)的細胞的能力，例如，體內(nèi)分化或體外分化或兩者。在其他實施方式中，所述胎盤干細胞另外具有分化為具有神經(jīng)細胞或神經(jīng)源性細胞的一種或多種特征(例如，神經(jīng)元的特征)；膠質(zhì)細胞的一種或多種特征(例如，神經(jīng)膠質(zhì)或星形細胞的特征)；成脂細胞的一種或多種特征(例如，脂肪細胞的特征)；胰腺細胞的一種或多種特征；和/或心肌細胞的一種或多種特征的細胞的能力。在本文中胎盤干細胞的每個實施方式的具體實施方式
中，所述胎盤干細胞是分離的胎盤干細胞。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞是⑶34'⑶10+、⑶105+和⑶200+，以及⑶44+、⑶45'⑶90+、⑶166+、KDR-或⑶133-中的一種或多種。在更具體的實施方式中，所述胎盤干細胞是 CD34'CD10+、CD105+ 和 CD200+、CD44+、CD45'CD90+、CD166+、KDIT 和 CD133'在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞是⑶34'⑶10+、⑶105+和⑶200+，以及HLA ABC+、HLADR，DQ，DP、CD80、CD86、CD98-或I3D-Ll+中的一種或多種。在更具體的實施方式中，所述胎盤干細胞是 CD34 -、CD10+、CD105+ 和 CD200+、HLA ABC+、HLA DR, DQ, DP ^、CD80 ^、CD86 ^、⑶98-和ro-Ll+。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞是⑶34'⑶10+、⑶105+和⑶200+，以及 CD38'CD45'CD80'CD86'CD133'HLA-DR，DP, DQ'SSEA3'SSEA4'CD29+、CD44+、CD73+、CD90+、CD105+、HLA-A, B, C+、PDL1+、ABC-p+和/或OCT-4+中的一種或多種，如可通過流式細胞術和/或RT-PCR檢測的。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞是⑶34—、⑶45—、⑶10+、⑶90+、⑶105+和⑶200+，如通過流式細胞術可檢測的。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞是⑶34 ^、⑶45 ^、⑶10+、⑶80 ^、⑶86 ^、⑶90+、⑶105+和⑶200+，如可通過流式細胞術檢測的。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞是⑶34 —、⑶45 —、⑶10+、⑶80 —、⑶86 _、⑶90+、CD105+ 和 CD200+，并且另外是 CD29+、CD38' CD44+、CD54+、SH3+ 或 SH4+ 中的一種或多種，如通過流式細胞術可檢測的。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞是⑶34 _、⑶38 _、⑶45 _、CD10+、CD29+、CD44+、CD54+、CD73+、CD8(T、CD86' CD90+、CD105+ 和 CD200+，如可通過流式細胞術檢測的。在另一種實施方式中，所述⑶34'⑶10+、⑶105+和⑶200+胎盤干細胞另外是CD3、CD9、CD 117、CD 133、CD 146+、CD 166+、KDR- (VEGFR2 ^ )、HLA-A, B, C+、HLA-DP, DQ, DIT 或編程死亡-I配體(PDLl)+中的一種或多種，或它們的任意組合。在另一個具體的實施方式中，所述胎盤干細胞是 CD3、CD9、CD34 ^、CD38 ^、CD45 ^、CD 10+、CD29+、CD44+、CD54+、CD73+、CD8(T、CD86 ' CD90+、CD105+、CDl 17、CD133、CD146+、CD 166+、CD200+、KDR- (VEGFR2 —)、HLA-A, B, C+、HLA-DP, DQ, DR_或編程死亡-I配體(PDLl) +，如可通過流式細胞術檢測的。在另一種實施方式中，本文所述的任何胎盤干細胞另外是ABC-p+，如通過流式細胞術可檢測的，或OCT-4+ (P0U5F1+)，例如，可通過RT-PCR確定的，其中ABC-p是胎盤特異性ABC轉運蛋白(也稱為乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)和耐米托蒽醌蛋白(MXR))。在另一種實施方式中，本文所述的任何胎盤干細胞另外是SSEA3_或SSEA4_，例如，如通過流式細胞術可確定的，其中SSEA3是階段特異性胚胎抗原3，而SSEA4是階段特異性胚胎抗原4。在另一種實施方式中，本文所述的任何胎盤干細胞另外是SSEA3_和SSEA4_。在本文所述方法的另一種實施方式中，本文所述的分離的胎盤干細胞的任何胎盤干細胞群體另外是 MHC-I+ (例如，HLA-A、B、C+)、MHC-II_ (例如，HLA_DP、DQ、DR_)或 HLA_G_中的一種或多種。在另一種實施方式中，本文所述的任何胎盤干細胞另外是MHC-I+ (例如，HLA-A、B、C+)、MHC-ir (例如，HLA-DP、DQ、DlO 和 HLA-G-中的每一個。在另一種實施方式中，所述⑶34_、⑶10+、⑶105+、⑶200+胎盤干細胞另外是⑶3_、 CD9' CD29+、CD38' CD44+、CD54+、CD80' CD86' CD146+、CD166+、SH3.或 SH4.中的一種或多種。在另一種實施方式中，所述⑶34'⑶10+、CD105+、CD200+胎盤干細胞另外是⑶44+。在另一種實施方式中，所述⑶34'⑶10+、⑶105+、⑶200+胎盤干細胞另外是⑶3_、⑶9_、CD13+、CD29+、CD33+、CD38' CD44+、CD45' CD54+、CD62E' CD62L' CD62P' SH3+ (CD73+)、SH4. (CD73+)、CD80_、CD86_、CD90+、SH2+ (CD105+)、CD106/VCAM+、CD117'CD144/VE-鈣粘素l0\ CD184/CXCR4、CD133、OCT-4+、SSEA3 ^、SSEA4^、ABC-p+、KDR- (VEGFR2 ^ ), HLA-A, B, C+、HLA-DP, DQ, DR_、HLA_G_或編程死亡-I配體(PDL1) +中的一種或多種，或者它們的任意組合。在另一種實施方式中，所述⑶34'⑶10+、CD105+、CD200+胎盤干細胞另外是⑶13+、CD29+、CD33+、CD38 ^、CD44+、CD45 ^、CD54/ICAM+、CD62E ^、CD62L' CD62P ^、SH3+ (CD73+)、SH4+(CD73+)、CD80 ^、CD86 ^、CD90+、SH2. (CD105+)、CD106/VCAM+、CDl 17-、CD144/VE-鈣粘素 diD1、CD146+、CD166+、CD184/CXCR4 ^、CD133 ^、OCT-4+、SSEA3 ^、SSEA4 ^、ABC-p+、KDR- (VEGFR2 ^ )、HLA-A, B, C+、HLA-DP, DQ, DR' HLA-G-和編程死亡-I 配體(PDL1) +。在本文所公開的方法的其他實施方式中，所述分離的胎盤干細胞是CD200+和HLA-G- ;CD73+、CD105+和 CD200+ ;CD200+和 OCT-4+ ;CD73+、CD105+和 HLA-G- ;CD73+和 CD105+ ；或0CT-4+ ;或者它們的任意組合。在本文所公開的方法的某些實施方式中，所述胎盤干細胞是⑶10+、⑶29+、⑶34_、CD38、CD44+、CD45、CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3、SSEA4、OCT-4+、MHC-I+或 ABC-p+中的一種或多種，其中ABC-p是胎盤特異性ABC轉運蛋白(也稱為乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)和耐米托蒽醌蛋白(MXR))。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞是⑶10+、⑶29+、⑶34'CD38'CD44+、CD45'CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3'SSEA4-和 0CT-4+。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞是 CD10+、CD29+、CD34 ^、CD38 ^、CD45 ^、CD54+、SH2+、SH3+ 和 SH4+。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞是CD10+、CD29+、CD34-、CD38 -、CD45 -、CD54+、SH2+、SH3+、SH4+和0CT-4+。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞是CD10+、CD29+、CD34-、CD38-、⑶44+、⑶45 ^、⑶54+、⑶90+、MHC-l+、SH2+、SH3+、SH4+。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞是0CT-4+和ABC-p+。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞是SH2+、SH3+、SH4+和0CT-4+。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞是0CT-4+、CD34_、SSEA3_和 SSEA4_。在具體的實施方式中，所述 OCT-4+、CD34' SSEA3-和 SSEA4-胎盤干細胞另外是 CD10+、CD29+、CD34' CD44+、CD45' CD54+、CD90+、SH2+、SH3+和SH4+。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞是0CT-4+和⑶34—，以及SH3+或SH4+。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞是⑶34—，以及⑶10+、CD29+、CD44+、CD54+、CD90+或0CT-4+。在某些實施方式中，所述胎盤干細胞是CD10+、CD34-、CD105+和 CD200+。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞是⑶10+、⑶29+、⑶44+、⑶45'⑶54/ICAM—、CD62-E_、CD62-L_、CD62_P_、CD80_、CD86_、CD103_、CD104_、CD105+、CD106/VCAM+、CD144/VE-鈣粘素 dini、CD184/CXCR4' β 2-微球蛋白 dim,MHC-Idim,MHC-1Γ ,HLA-Gdim 和 / 或 PDLldin1。在某些實施方式中，這些胎盤干細胞或分離的胎盤干細胞群體至少為CD29+和CD54_。在另一種實施方式中，這些胎盤干細胞至少為⑶44+和⑶106+。在另一種實施方式中，這些胎盤干細胞至少為⑶29+。在任何上述特征的某些實施方式中，通過流式細胞術確定了細胞標志物的表達(例如，分化或免疫原性標志物簇)。在某些其他實施方式中，通過RT-PCR確定了細胞標志 物的表達。 在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞，例如，所述⑶10+、⑶34'⑶105+、⑶200+細胞，例如，聚集體中的細胞，以比相等數(shù)目的骨髓來源的間質(zhì)干細胞更高的水平(例如，可檢測地更高水平)表達一種或多種基因，其中所述一種或多種基因是以下一種或多種，或者全部，ACTG2、ADARBI、AMIG02、ARTS-1、B4GALT6、BCHE、C11orf9、CD200、C0L4AI、C0L4A2、CPA4、DMD, DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3,PKP2、RTN1、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN 和 ZC3H12A，并且其中所述骨髓來源的間質(zhì)干細胞在培養(yǎng)中已經(jīng)歷了與所述分離的胎盤干細胞所經(jīng)歷的傳代次數(shù)相等的傳代次數(shù)。在某些實施方式中，通過(例如)RT_PCR或微陣列分析(例如，使用U133-A微陣列(Affymetrix))確定了所述一種或多種基因的所述表達。在另一種實施方式中，當在包含60%DMEM-LG (例如，得自Gibco)和40%MCDB_201 (例如，得自Sigma) ；2%胎牛血清(例如，得自Hyclone Labs) ；1X胰島素-轉鐵蛋白-硒(ITS) ；1X亞油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA) ； 10_9M地塞米松(例如，得自Sigma) ； 10_4M抗壞血酸2-磷酸酯(例如，得自Sigma);表皮生長因子10ng/mL (例如,得自R&D Systems);和血小板源生長因子(PDGF-BB)10ng/mL (例如，得自R&D Systems)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)(例如)約3至約35次之間任何次數(shù)的群體倍增時，所述胎盤干細胞表達(例如，差異表達)所述一個或多個基因。在另一種實施方式中，當在包含60%DMEM-LG (例如，得自Gibco)和40%MCDB_201 (例如，得自Sigma) ；2%胎牛血清(例如，得自Hyclone Labs)；lX胰島素-轉鐵蛋白-硒(ITS);1 X亞油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA) ;10_9M地塞米松(例如，得自Sigma) ;10_4M抗壞血酸2-磷酸酯(Sigma);表皮生長因子10ng/mL (例如，得自R&D Systems);和血小板源生長因子(PDGF-BB) 10ng/mL(例如，得自R&D Systems)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)約3至約35次群體倍增時，所述胎盤干細胞表達(例如，差異表達)所述一個或多個基因。在某些實施方式中，所述胎盤干細胞以比相等數(shù)目的骨髓來源的間質(zhì)干細胞(BM-MSC)更高的水平(例如，可檢測地更高水平)表達⑶200和ARTSl (I型腫瘤壞死因子氨肽酶調(diào)控因子);ARTS-1和LRAP (白血球源性精氨酸氨肽酶);IL6 (白細胞介素_6)和TGFB2(轉化生長因子，P2);IL6和KRT18 (角蛋白18);IER3 (即刻早期反應蛋白3)、MEST (中胚層特異性轉錄本同源物)和TGFB2 KD200和IER3 KD200和IL6 KD200和KRT18 KD200和LRAP ;CD200和MEST ;CD200和NFE2L3 (核因子(網(wǎng)織紅細胞源性2)樣3);或者CD200和TGFB2，其中所述骨髓來源的間質(zhì)干細胞在培養(yǎng)中已經(jīng)歷了與所述胎盤干細胞所經(jīng)歷的傳代次數(shù)相等的傳代次數(shù)。在其他實施方式中，所述胎盤干細胞以比相等數(shù)目的骨髓來源的間質(zhì)干細胞BM-MSC更高的水平(例如，可檢測地更高水平)表達ARTS-I、⑶200、IL6和LRAP ；ARTS-I、IL6、TGFB2、IER3、KRT18 和 MEST ;CD200、IER3、IL6、KRT18、LRAP、MEST、NFE2L3 和TGFB2 ;ARTS-1、CD200、IER3、IL6、KRT18、LRAP、MEST、NFE2L3 和 TGFB2 ;或者 IER3、MEST 和TGFB2，其中所述骨髓來源的間質(zhì)干細胞在培養(yǎng)中已經(jīng)歷了與所述胎盤干細胞所經(jīng)歷的傳代次數(shù)相等的傳代次數(shù)。在多種實施方式中，本文所公開的方法中有用的所述胎盤干細胞包含在細胞群體內(nèi)，所述細胞群體至少 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、
80%、85%、90%、95%、98%或99%的細胞是所述胎盤干細胞。在某些其他實施方式中，所述細胞群體中的胎盤干細胞基本不含具有母體基因型的細胞；例如，所述群體中至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98% 或 99% 的胎盤干細胞具有胎兒基因型，即，是胎兒來源的。在某些其他實施方式中，包含所述胎盤干細胞的細胞群體基本不含具有母體基因型的細胞；例如，所述群體中至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%的細胞具有胎兒基因型，S卩，是胎兒來源的。在某些其他實施方式中，包含所述胎盤干細胞的細胞群體包含具有母體基因型的細胞；例如，所述群體中至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98% 或 99%的細胞具有母體基因型，即，是母體來源的。在本文任何胎盤干細胞實施方式的實施方式中，當胎盤細胞群體在允許胚狀體樣體(embryoid-like body)形成的條件下培養(yǎng)(例如，在增殖條件下培養(yǎng))時，胎盤干細胞有利于包含所述分離的胎盤干細胞的胎盤細胞群體中一個或多個胚狀體樣體的形成。在本文所公開的任何胎盤干細胞或BM-MSC的某些實施方式中，所述細胞是哺乳動物細胞，例如，人細胞。在某些實施方式中，本文所述的任何胎盤干細胞和/或BM-MSC對受體是自體同源的，例如，患有骨相關癌的個體，例如，患有多發(fā)性骨髓瘤或具有骨相關癌癥狀(例如，多發(fā)性骨髓瘤癥狀)的個體。在某些其他實施方式中，胎盤干細胞和/或BM-MSC對受體是異源的，例如，患有骨相關癌的個體，例如，患有多發(fā)性骨髓瘤或具有骨相關癌癥狀(例如，多發(fā)性骨髓瘤癥狀)的個體。在本文所公開的治療方法或抑制骨相關癌細胞增殖的方法的某些實施方式中，在所述施用前將胎盤干細胞和/或BM-MSC冷凍保存。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞得自細胞庫，例如，胎盤干細胞庫。在另一種實施方式中，所述BM-MSC得自骨髓來源的間質(zhì)干細胞庫。在本文胎盤干細胞的任何實施方式中，胎盤干細胞在生長培養(yǎng)基(例如，配制以促進(例如)在生長培養(yǎng)基中增殖期間增殖的培養(yǎng)基)中培養(yǎng)期間一般不分化。在另一種實施方式中，所述胎盤干細胞不需要飼養(yǎng)層來增殖，例如，當在生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)時不需要飼養(yǎng)層來增殖。在另一種實施方式中，僅由于在不存在飼養(yǎng)細胞層的情況下培養(yǎng)，因此所述胎盤干細胞在培養(yǎng)時不分化。在本文分離的BM-MSC的任何實施方式中，細胞在生長培養(yǎng)基(即，配制以促進(例如)在生長培養(yǎng)基中增殖期間增殖的培養(yǎng)基)中培養(yǎng)期間一般不分化。在另一種實施方式中，所述分離的BM-MSC不需要飼養(yǎng)層來增殖，例如，當在生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)時不需要飼養(yǎng)層來增殖。在另一種實施方式中，僅由于在不存在飼養(yǎng)細胞層的情況下培養(yǎng)，因此所述分離的BM-MSC在培養(yǎng)時不分化。在某些實施方式中，通過已排去血液并灌注以除去殘余血液；已排去血液但未灌注以除去殘余血液；或即未排去血液又未灌注以除去殘余血液的產(chǎn)后胎盤的灌注獲得了所述胎盤干細胞。在另一個具體的實施方式中，通過胎盤組織的物理和/或酶促破環(huán)獲得了所述胎盤干細胞。在另一個具體的實施方式中，通過培養(yǎng)部分胎盤并允許胎盤干細胞從所述部分胎盤中增殖獲得了所述胎盤干細胞。
在以下5. 2節(jié)中詳細說明了在本文所提供的方法中有用的胎盤干細胞的細胞表面、分子和遺傳標志物特征。在所述方法的另一個具體實施方式
中，治療有效量的所述胎盤干細胞和/或BM-MSC是導致骨相關癌(例如，多發(fā)性骨髓瘤)的一種或多種癥狀的消除、可檢測的改善、嚴重程度的減輕或進展的減緩的多個細胞。在具體的實施方式中，骨相關癌的所述癥狀(例如，多發(fā)性骨髓瘤的所述癥狀)是骨病變。在另一個具體的實施方式中，如(例如)通過密度測定法或骨礦物含量(BMC)所測量的，如(例如)通過密度測定法所測量的，所述治療有效量的胎盤干細胞和/或BM-MSC提高(例如，可檢測地提高)了接受所述細胞的個體的至少一塊骨中的骨礦物密度(BMD)。在另一個具體的實施方式中，例如，如通過X射線、MRI或CAT掃描等可見的，所述治療有效量的胎盤干細胞和/或BM-MSC減少(例如，可檢測地減少)了骨病變，例如，由所述骨相關癌所引起的至少一種骨病變。在另一個具體的實施方式中，將所述胎盤干細胞和/或BM-MSC在所述骨相關癌所引起的骨病變處或附近施用(即，病灶內(nèi)施用)于患有骨相關癌(例如，多發(fā)性骨髓瘤)的個體。在如上所述的方法的另一個具體實施方式
中，通過彈丸注射施用所述分離的胎盤干細胞和/或BM-MSC。在另一個具體的實施方式中，通過靜脈內(nèi)輸注施用所述胎盤干細胞和/或BM-MSC。在具體的實施方式中，所述靜脈內(nèi)輸注是約I至約8小時內(nèi)的靜脈內(nèi)輸注。在另一個具體的實施方式中，顱內(nèi)施用所述胎盤干細胞和/或BM-MSC。在另一個具體的實施方式中，腹膜內(nèi)施用所述分離的胎盤干細胞。在另一個具體的實施方式中，動脈內(nèi)施用所述胎盤干細胞和/或BM-MSC。在所述治療方法的另一個具體的實施方式中，肌內(nèi)、皮內(nèi)、皮下或眼內(nèi)施用所述胎盤干細胞和/或BM-MSC。在如上所述的方法的另一種實施方式中，通過(例如)在由骨相關癌所引起的骨病變處或附近向所述個體手術植入包含所述細胞的物質(zhì)組合物來施用所述胎盤干細胞和/或BM-MSC。在具體的實施方式中，所述物質(zhì)組合物是基質(zhì)或支架。在另一個具體的實施方式中，所述基質(zhì)或支架是水凝膠。在另一個具體的實施方式中，所述基質(zhì)或支架是脫細胞化組織。在另一個具體的實施方式中，所述基質(zhì)或支架是合成生物可降解組合物。在另一個具體的實施方式中，所述基質(zhì)或支架是泡沫。在另一個具體的實施方式中，所述基質(zhì)或支架是生理學可用的陶瓷材料，例如，磷酸一鈣、磷酸二鈣、磷酸三鈣、α-磷酸三鈣、β-磷酸三鈣和磷酸四鈣、羥基磷灰石、氟磷灰石、硫酸鈣、氟化鈣、氧化鈣、碳酸鈣、磷酸鎂鈣、生物活性玻璃(例如，B10GLASS*)或它們中任何的混合物。在另一個具體的實施方式中，所述基質(zhì)或支架是多孔生物相容性陶瓷材料(例如，SURGIBONE'ENDOBON氣GEROSil等)或礦化膠原骨移植產(chǎn)物(例如，HEALOS ,VITOSS \ RHAK0SS 和COMOS妒等)。在如上所述的方法的另一個具體實施方式
中，將所述胎盤干細胞和/或BM-MSC —次施用至所述個體。在另一個具體的實施方式中，以兩次或更多次獨立的施用將所述胎盤干細胞和/或BM-MSC施用于所述個體。在另一個具體的實施方式中,所述施用包括施用約I X IO4至I X IO5個胎盤干細胞和/或BM-MSC (例如，每千克所述個體)。在另一個具體的實施方式中，所述施用包括施用約I X IO5至I X IO6個胎盤干細胞和/或BM-MSC/千克所述個體。在另一個具體的實施方式中，所述施用包括施用約IX IO6至IX IO7個胎盤干細胞和/或BM-MSC/千克所述個體。在另一個具體的實施方式中，所述施用包括施用約IX IO7至
IX IO8個胎盤干細胞和/或BM-MSC/千克所述個體。在其他具體的實施方式中，所述施用包含施用約IX IO6至約2 X IO6個胎盤干細胞和/或BM-MSC/千克所述個體；約2 X IO6至約3 X IO6個胎盤干細胞和/或BM-MSC/千克所述個體；約3 X IO6至約4 X IO6個胎盤干細 胞和/或BM-MSC/千克所述個體；約4 X IO6至約5 X IO6個胎盤干細胞和/或BM-MSC/千克所述個體；約5 X IO6至約6 X IO6個胎盤干細胞和/或BM-MSC/千克所述個體；約6 X IO6至約7 X IO6個胎盤干細胞和/或BM-MSC/千克所述個體；約7 X IO6至約8 X IO6個胎盤干細胞和/或BM-MSC/千克所述個體；約8 X IO6至約9 X IO6個胎盤干細胞和/或BM-MSC/千克所述個體；或約9 X IO6至約I X IO7個胎盤干細胞和/或BM-MSC/千克所述個體。在另一個具體的實施方式中，所述施用包括施用約I X IO7至約2 X IO7個胎盤干細胞和/或BM-MSC/千克所述個體至所述個體。在另一個具體的實施方式中，所述施用包括施用約1.3X107至約I. 5 X IO7個胎盤干細胞和/或BM-MSC/千克所述個體至所述個體。在另一個具體的實施方式中，所述施用包括施用多至約3 X IO7個胎盤干細胞和/或BM-MSC/千克所述個體至所述個體。在具體的實施方式中，所述施用包括施用約5 X IO6至約2 X IO7個胎盤干細胞和/或BM-MSC至所述個體。在另一個具體的實施方式中，所述施用包括以約20毫升溶液將約150 X IO6個胎盤干細胞和/或BM-MSC施用至所述個體。在如上所述的方法的某些實施方式中，按細胞數(shù)目計，所述BM-MSC以比所述胎盤干細胞一般至少大50%的量使用。在具體的實施方式中，所述施用包括施用約5 X IO6至約2 X IO7個胎盤干細胞和/或BM-MSC至所述個體，其中所述細胞包含在含有10%葡聚糖(例如，葡聚糖_40)、5%人血清白蛋白和可選地免疫抑制劑的溶液中。在另一個具體的實施方式中，所述施用包括靜脈內(nèi)施用約5 X IO7至3 X IO9個胎盤干細胞和/或BM-MSC。在具體的實施方式中，所述施用包括靜脈內(nèi)施用約9 X IO8個胎盤干細胞和/或BM-MSC或約I. 8 X IO9個胎盤干細胞和/或BM-MSC。在另一個具體的實施方式中，所述施用包括病灶內(nèi)施用約5 X IO7至IX IO8個胎盤干細胞和/或BM-MSC。在另一個具體的實施方式中，所述施用包括病灶內(nèi)施用約9X IO7個胎盤干細胞和/或BM-MSC。在所述治療方法的另一個具體實施方式
中，在骨相關癌(例如，多發(fā)性骨髓瘤)的診斷或骨相關癌的一種或多種癥狀的發(fā)展的21-30天內(nèi)(例如，21天)；7天內(nèi)；48小時內(nèi)；或24小時內(nèi)將所述胎盤干細胞和/或BM-MSC施用于所述個體。在某些實施方式中，可以通過基因工程設計在本文所提供的方法中使用的胎盤干細胞和/或BM-MSC以產(chǎn)生抑制骨相關癌細胞(例如，多發(fā)性骨髓瘤細胞)生長或增殖的一種或多種蛋白質(zhì)。例如，在某些實施方式中，所述一種或多種蛋白質(zhì)可以包括骨保護素、一種或多種骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP);—種或多種連接蛋白，例如，連接蛋白26 (Cx26)和/或連接蛋白43 (Cx43);骨橋蛋白；或活化素A。在其他實施方式中，已工程設計了胎盤干細胞和/或BM-MSC，從而當所述腫瘤細胞與所述胎盤干細胞和/或BM-MSC接觸時與不表達外源IFN-β或IL-2的這些細胞相比使所述胎盤干細胞和/或BM-MSC (例如)以導致腫瘤細胞增殖更大(例如，可檢測地更大)的抑制的量表達外源IFN-β或IL-2。本文還提供了包含這些基因工程胎盤干細胞和/或BM-MSC的藥物組合物以用于在抑制骨相關癌細胞(例如，多發(fā)性骨髓瘤細胞)的生長或增殖中使用，或者用于治療具有骨相關癌細胞(例如，多發(fā)性骨髓瘤細胞)的個體。3. I 定義如本文所使用的，當涉及說明的數(shù)值時，術語“約”表示所說明的數(shù)值正或負10%內(nèi)的值。
如本文所使用的，在骨相關癌的背景中“骨病變”表示由骨相關癌所引起的或者是骨相關癌癥狀的骨生長或結構的異常。在非限制性實例中，多發(fā)性骨髓瘤一般導致溶骨性病變，它是由骨脫礦物質(zhì)所引起的骨蝕空區(qū)。在另一個非限制性實例中，軟骨肉瘤一般導致以一個或多個骨的生長為特征的病變，通常包括可以鈣化的軟骨生長。如本文所使用的，“骨髓來源的間質(zhì)干細胞”也稱為BM-MSC，它是指獲自骨髓的或者從獲自骨髓的間質(zhì)干細胞培養(yǎng)的間質(zhì)干細胞，例如，美國專利No. 5486359中所公開的細胞，該專利的公開內(nèi)容作為參考并入本文。如本文所使用的，術語“骨相關癌”是指在疾病的任何期影響或轉移至患有癌的個體中一個或多個骨的癌。例如，由于癌影響了骨，因此多發(fā)性骨髓瘤是骨相關癌；多發(fā)性骨髓瘤的一個方面是至少部分由于多發(fā)性骨髓瘤細胞分泌的細胞因子所導致的破骨細胞活性的上調(diào)所引起的骨病變的發(fā)展。如本文所使用的，在將胎盤干細胞與骨相關癌細胞接觸的背景下“接觸”涵蓋(但不要求)將細胞放置如此接近從而使它們實際彼此物理接觸(例如，在多孔板等中的共培養(yǎng))，和將細胞放置在相同空間內(nèi)而無實際物理接觸，但在相同空間中(例如，在TRANSWEIX 培養(yǎng)系統(tǒng))或者施用給個體(例如，人)。如本文所使用的“接觸”涵蓋在(例如)單個容器(例如，培養(yǎng)皿、燒瓶、小瓶等)中將胎盤干細胞和骨相關癌細胞體外放置在一起。“接觸”還涵蓋(例如)在相同個體(例如，哺乳動物，例如，小鼠、大鼠、狗、貓、綿羊、山羊、馬、人等)中將胎盤干細胞和腫瘤細胞放置在一起或體外放置。例如，可以通過將胎盤干細胞靜脈內(nèi)施用至患有所述骨相關癌的個體或者通過直接注射到腫瘤位點(例如，由骨相關癌所引起的骨病變)等來將胎盤干細胞與骨相關癌細胞接觸。可以通過將胎盤干細胞和骨相關癌細胞靜脈內(nèi)施用至(例如)實驗動物來使胎盤干細胞與骨相關癌細胞接觸。如本文所使用的，術語“SH2”是指結合細胞標志物⑶105上的表位的抗體。因此，稱為SH2+的細胞是CD105+。如本文所使用的，術語“SH3”和“SH4”是指結合細胞標志物⑶73上所存在的表位的抗體。因此，稱為SH3+和/或SH4+的細胞是⑶73+。胎盤具有在其中發(fā)育的胎兒的基因型，但是在妊娠期間它還與母體組織緊密物理接觸。照此，如本文所使用的，術語“胎兒基因型”表示胎兒的基因型，例如，與從中獲得如本文所述的特定的分離胎盤干細胞的胎盤有關的胎兒基因型，與帶有胎兒的母體的基因型相反。如本文所使用的，術語“母體基因型”表示帶有胎兒的母體的基因型，例如，與從中獲得如本文所述的特定的分離胎盤干細胞的胎盤有關的胎兒。如本文所使用的，如果在(例如)干細胞的收集和/或培養(yǎng)期間從干細胞中除去了至少50%、60%、70%、80%、90%、95%或至少99%的干細胞與之天然相聯(lián)系的其他細胞，那么干細胞(例如，胎盤干細胞)得到“分離”。如本文所使用的，當涉及細胞時，“多能的”表示細胞具有分化成一些(但不必需是所有)體細胞類型或者分化成具有一些(但不必需是所有)體細胞類型的特征的細胞或者分化成三種胚層中的一種或多種的細胞的能力。在某些實施方式中，例如，如以下5. 2節(jié)中所述的具有分化成具有神經(jīng)細胞、軟骨形成細胞和/或生骨細胞特征的細胞的能力的分離胎盤干細胞(PDAC)是多能細胞，如本文所使用的，術語“分離的細胞群體”表示基本上與組織(例如，從中獲得或分離細胞群體的胎盤)的其他細胞分離的細胞群體。在某些實施方式中，細胞群體與至少50%、 55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%的組織(例如，從中獲得或分離細胞群體的胎盤)的其他細胞分離。如本文所使用的，術語“胎盤干細胞”是指來源于哺乳動物胎盤的干細胞或祖細胞，例如，如下所述，作為原代分離細胞或培養(yǎng)細胞而不考慮該細胞是否是原代細胞、原代細胞培養(yǎng)的一部分或者已在原代培養(yǎng)后傳代。如果細胞顯示出與一種或多種類型的干細胞有關的標志物或基因表達譜；在培養(yǎng)中復制至少10-40次的能力；和分化成顯示出三種胚層中一種或多種的分化細胞的特征的細胞的能力中的一種、兩種或三種，那么認為該細胞(例如，“胎盤干細胞”)是“干細胞”。除非在本文中另作說明，否則術語“胎盤”包括臍帶。在某些實施方式中，本文所公開的分離的胎盤細胞(例如，胎盤干細胞)在分化條件下體外分化、體內(nèi)分化或兩者。如本文所使用的，當標志物通過(例如)抗體介導或核酸介導的檢測在背景上是可檢測的時，細胞或細胞群體對特定標志物是“陽性的”。例如，可以通過抗體的使用或者基于編碼該標志物的基因或mRNA的序列通過寡核苷酸探針或引物來完成特定標志物的檢測。例如，由于CD73在胎盤干細胞上是以比背景(與(例如)抗體同型對照相比)更大(例如，可檢測地更大)的量可檢測的，因此胎盤干細胞對于(例如)CD73是陽性的。當由細胞所提供或表達時標志物可用于將該細胞與至少一種其他細胞類型進行區(qū)分或可用于選擇或分離該細胞時，該細胞對于標志物也是陽性的。在(例如)抗體介導的檢測的背景中，作為存在特定細胞表面標志物的指示，“陽性”表示使用對該標志物特異的抗體(例如，熒光標記抗體)該標志物是可檢測的；“陽性”還是指顯示出處于在(例如)血細胞計數(shù)器中產(chǎn)生高于(例如，可檢測地高于)背景的信號的量的標志物的細胞。例如，當用對CD200特異的抗體標記(例如，可檢測地標記)細胞并且來自該抗體的信號高于(例如，可檢測地高于)對照(例如，同型對照的背景)的信號時，則該細胞是“⑶200+”。例如，如果如(例如)通過如RT-PCR、狹縫印跡等檢測RNA的方法所確定的，在來自細胞或細胞群體的RNA中所檢測的0CT-4RNA的量可檢測地大于背景時，可以將細胞或細胞群體確定為0CT-4+。在某些實施方式中，如果0CT-4是使用RT-PCR可檢測的，則確定0CT-4存在并且細胞為“0CT-4+”。除非在本文中另作說明，否則使用抗體檢測分化(“CD”)標志物簇。就HLA-G而言，在某些實施方式中，如果群體中大于5%的細胞對HLA-G是陽性的(例如，用抗HLA-G抗體可檢測地染色)，則胎盤干細胞群體對HLA-G是陽性的。如本文所使用的，對除HLA-G以外的所有標志物，如果(例如)與對照(例如，背景或同型對照)相比使用對該標志物特異的抗體時細胞標志物是不可檢測的，或者使用核酸基檢測方法(例如，RT-PCR)時是不可檢測的，則胎盤干細胞對特定細胞標志物是“陰性的”。例如，當未使用對⑶34特異的抗體可重復、可檢測地將細胞標記至比對照(例如，背景或同型對照)更大的程度時，則細胞是“CD34_”。使用適當?shù)膶φ詹⑹褂闷渌?例如)核酸介導的檢測方法，可以以類似的方式使用抗體將標志物(例如，未檢測到或不可檢測的標志物)確定為陽性或陰性的。除非在本文中另作說明，否則使用抗體檢測分化(“CD”)標志物簇。就HLA-G而言，在某些實施方式中，如果群體中5%或更少的細胞對HLA-G是陽性的(例如，用抗HLA-G抗體可檢測地染色)，則胎盤干細胞群體對HLA-G是陰性的。
如本文所使用的，當涉及在流式細胞術中可檢測的標志物的表達時，符號“低(low)”或“模糊(dim)”表示所表達的該標志物小于所測試細胞的10%,或者在(例如)流式細胞術中由該標志物所發(fā)出的熒光小于背景之上的llog。如本文所使用的，“治療”涵蓋了疾病、病癥或病況或其任何參數(shù)或癥狀的治愈、補救、改善、嚴重程度的減輕或者時間過程的縮短。
4.


圖I :胎盤干細胞改善了實驗大鼠中骨缺損的修復。Y軸如通過面積所評價的顱骨骨缺損的閉合程度。X軸-條件=RHEALOSr ; HEALOSr與骨形態(tài)發(fā)生蛋白2 (BMP-2)相結合；HEALOSs)和胎盤干細胞；HEALOSs)和骨髓來源的間質(zhì)干細胞(BM-MSC);或者無修復作用(空白)。星號表示相對于對照，HEALOS+4結合骨形態(tài)發(fā)生蛋白
2(bmp-2);hEAJLOS 結合胎盤干細胞；以及HEALOS*5結合BM-Msc中缺損修復的顯著改善(P〈0. 05)。圖2 :胎盤干細胞抑制破骨細胞前體的分化。X軸破骨細胞(OC);未與胎盤干細胞或骨髓來源的間質(zhì)干細胞(BM-MSC)共培養(yǎng)的破骨細胞前體。Y軸所形成的成熟破骨細胞的數(shù)目。圖3 :胎盤干細胞降低了來自不同個體的腫瘤細胞的生長。用編碼熒光素酶的基因轉染多發(fā)性骨髓瘤細胞(細胞系BN、JB, ARPU U266、Dn和Hale)并與(從左至右在每種條件下)胎兒間質(zhì)干細胞(FB-MSC)、患者骨髓來源的間質(zhì)干細胞(Pt-MSC)，或胎盤干細胞共培養(yǎng)。將幾周后多發(fā)性骨髓瘤細胞生長的降低表示為相比于和FB-MSC共培養(yǎng)的多發(fā)性骨髓瘤細胞的熒光素酶表達，與胎盤干細胞或Pt-MSC共培養(yǎng)的多發(fā)性骨髓瘤細胞中熒光素酶表達的倍數(shù)值。圖4 :TRANS\VELL#實驗圖，其中在膜的下側培養(yǎng)胎盤干細胞或間質(zhì)干細胞,而在膜的上側培養(yǎng)多發(fā)性骨髓瘤細胞。圖5 :胎盤干細胞(PDAC)和胎兒骨髓來源的間質(zhì)干細胞(胎兒MSC)對來自六位不同患者的多發(fā)性骨髓瘤細胞的抑制(X軸)。Y軸與在不存在胎盤干細胞的情況下培養(yǎng)的骨髓瘤細胞相比的百分比活力。圖6 :胎盤干細胞降低了 SCID-rab/SCID-hu小鼠中多發(fā)性骨髓瘤細胞的生長。通過如通過ELISA所評價的來自小鼠的血清中存在的人抗體的滴度來評價多發(fā)性骨髓瘤細胞的數(shù)目。Pre-Rx :施用骨髓瘤細胞之前人抗體的滴度。2WK、4WK :單獨(對照)或與胎盤干細胞一起施用多發(fā)性骨髓瘤細胞兩周和四周后人抗體的滴度。圖7 :如通過X射線所評價的，SCID-rab/SCID-hu小鼠中骨植入物的骨質(zhì)量密度的變化。BMD:骨礦物密度。圖8-9 :胎盤干細胞對骨髓瘤骨疾病和腫瘤生長的影響是劑量依賴性的并且與胎兒MSC可比較。植入患者兩骨髓瘤細胞的SCID-rab小鼠。(A-C)—旦建立高腫瘤負荷，對宿主病灶內(nèi)注射賦形劑，O. 1,0. 5和IXlO6個胎盤干細胞，或使用HyStem-C水凝膠載體皮下植入5 X IO6個胎盤干細胞(有關詳細內(nèi)容參見方法)(6-7只小鼠/組)。
圖8 :處理前(Pre-Rx)、用胎盤干細胞處理后2周和4周時人免疫球蛋白(Ig)的變化。IL=O. I、0. 5或IX IO6個細胞的病灶內(nèi)施用。SC=細胞的皮下施用。CONT=對照(無細胞)。圖9 :所植入的骨髓瘤骨與預處理水平相比的骨礦物密度的變化。IL=O. 1,0. 5或IX IO6個細胞的病灶內(nèi)施用。SC=細胞的皮下施用。CONT=對照(無細胞)。圖10 :對宿主病灶內(nèi)注射賦形劑或者I X IO6個胎盤干細胞或MSC。圖10顯示了所植入的骨髓瘤骨與預處理水平相比的骨礦物密度的變化。左側條件對照(無細胞);中間條件胎盤干細胞；右側條件骨髓來源的間質(zhì)干細胞。圖11 :對宿主病灶內(nèi)注射賦形劑或者I X IO6個胎盤干細胞或MSC。圖11顯示了處理前(Pre-Rx)和實驗結束時人Ig的變化。左側條件對照(無細胞)；中間條件胎盤干細胞；右側條件骨髓來源的間質(zhì)干細胞。圖12 :在存在或不存在胎盤干細胞的情況下，在培養(yǎng)或共培養(yǎng)的第5天，每孔多發(fā)性骨髓瘤細胞系細胞(U-266、RPMI-8226、L363和0MP-2)的平均數(shù)(n=3)的比較。為對照和實驗條件的每個多發(fā)性骨髓瘤細胞系提供了 P-值。圖13A-13C :對于多發(fā)性骨髓瘤細胞系H929 (圖13A)、0PM_2 (圖13B)和LPl (圖13C)，成視網(wǎng)膜細胞瘤(Rb)蛋白在絲氨酸780 (S780)或絲氨酸807和811 (S807/S811)處的磷酸化作用的降低。D2 :共培養(yǎng)的第2天。D4 :共培養(yǎng)的第4天。GM =Rb磷酸化作用提高/降低的幾何平均數(shù)。Λ :幾何平均數(shù)的變化。圖14 :在存在I μ M來那度胺的情況下培養(yǎng)時所形成的破骨細胞數(shù)目。粗水平線代表對照孔中形成的破骨細胞的數(shù)目。圖15 :當與僅胎盤干細胞(PDAC)、骨髓來源的間質(zhì)干細胞(BM-MCS)或者PDAC和來那度胺的組合一起共培養(yǎng)時所形成的破骨細胞的數(shù)目。5.發(fā)明詳述5. I使用分離的胎盤干細胞和/或間質(zhì)干細胞治療骨相關癌本文提供了治療患有骨相關癌的個體的方法，其包括向所述個體施用分離的胎盤干細胞，具體地，以下5. 2節(jié)中詳細說明的在本文中還稱為PDAC(胎盤源貼壁細胞)的分離的胎盤干細胞，和/或骨髓來源的間質(zhì)干細胞(BM-MSC)，例如，所述細胞之一或兩者的治療有效量。骨相關癌無限制地包括多發(fā)性骨髓瘤、骨癌、神經(jīng)母細胞瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、骨纖維肉瘤、前列腺癌或以骨轉移為特征的任何形式的轉移性癌。在某些實施方式中，骨相關癌不包括前列腺癌。在某些實施方式中，分離的胎盤干細胞和/或BM-MSC的施用是治療有效的以減少、改善或逆轉與骨相關癌有關的一種或多種癥狀，例如，由癌對個體中一個或多個骨的影響(例如，可歸因于骨相關癌的骨缺損)所引起的，與之相關聯(lián)或與之有關的癥狀。如本文所提供的用胎盤干細胞和/或BM-MSC對骨相關癌的治療可以發(fā)生在如以下所討論的第二抗癌療法之前、之后或同時發(fā)生。因此，在一種實施方式中，在用第二抗癌療法治療癌之前治療了作為骨相關癌的癥狀的骨缺損。在另一種實施方式中，在用第二抗癌療法治療癌的同時或者接近同時治療了作為骨相關癌的癥狀的骨缺損。在另一種實施方式中，在用第二抗癌療法治療癌之后治療了作為骨相關癌的癥狀的骨缺損。在一個方面，本文提供了治療患有骨相關癌的個體的方法，其包括向所述個體施用治療有效量的胎盤干細胞和/或BM-MSC。在一種實施方式中，本文提供了治療患有骨相關癌的個體的方法，其包括向所述個體施用一段時間的治療有效量的胎盤干細胞和/或 BM-MSC從而使所述胎盤干細胞和/或BM-MSC足以改善(例如,可檢測地改善)所述骨相關癌的一種或多種癥狀，或者降低(例如，可檢測地降低)所述骨相關癌的發(fā)展。在具體的實施方式中，所述骨相關癌是多發(fā)性骨髓瘤。在另一個具體的實施方式中，所述骨相關癌是肉瘤。在其他具體的實施方式中，所述骨相關癌是骨癌、神經(jīng)母細胞瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤或骨纖維肉瘤。在另一個具體的實施方式中，所述骨相關癌包括實性腫瘤。在另一個具體的實施方式中，所述骨相關癌不是前列腺癌。如本文所使用的，“施用一段時間足以”等涵蓋了(例如)施用細胞(例如，單位細胞)，然后在足以確定所述一種或多種癥狀中任何變化的時間內(nèi)評價骨相關癌(例如，多發(fā)性骨髓瘤)的一種或多種癥狀，例如，在 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23小時，或者I、2、3、4、5或6天，或者1、2、3或4周等的時間過程內(nèi)。如果未檢測到變化，則可以進行一次或多次后續(xù)施用。在某些實施方式中，骨相關癌(例如，多發(fā)性骨髓瘤)的治療包括將一定量(例如，治療有效量)的分離的胎盤干細胞和/或BM-MSC施用至具有骨相關癌細胞(例如，多發(fā)性骨髓瘤細胞)的個體，其中所述胎盤干細胞和/或BM-MSC中的至少一些直接接觸骨相關癌細胞中的至少一些，例如，在所述胎盤干細胞和/或BM-MSC的至少一些和所述骨相關癌細胞的至少一些之間存在直接細胞-細胞接觸。在某些其他實施方式中，骨相關癌(例如，多發(fā)性骨髓瘤)的治療包括將一定量(例如，治療有效量)的胎盤干細胞和/或BM-MSC施用至具有骨相關癌細胞(例如，多發(fā)性骨髓瘤細胞)的個體，其中沒有或基本沒有所述胎盤干細胞和/或BM-MSC直接接觸所述骨相關癌細胞，例如，在大部分或任何所述胎盤干細胞和/或BM-MSC和所述骨相關癌細胞之間沒有或基本沒有直接細胞-細胞接觸。在某些實施方式中，將胎盤干細胞和/或BM-MSC病灶內(nèi)(例如)直接施用到由骨相關癌所引起的一個或多個骨病變或施用到其附近(例如，約1-5厘米內(nèi))。在某些實施方式中，將胎盤干細胞和/或BM-MSC與基質(zhì)(例如，可注射基質(zhì))結合施用。在某些其他實施方式中，將胎盤干細胞和/或BM-MSC與海藻酸鹽或與富血小板血漿結合施用到患有骨相關癌的個體。在某些其他實施方式中，將胎盤干細胞和/或BM-MSC與固體基質(zhì)(例如，骨替代物，以下5. 7. 4節(jié)中所述的基質(zhì)或骨替代物)結合施用給患有骨相關癌的個體。
在某些其他實施方式中，將胎盤干細胞和/或BM-MSC靜脈內(nèi)施用給個體。可以從任何容器并且通過醫(yī)學上適合于液體(例如，包含細胞的液體)遞送的任何遞送系統(tǒng)將胎盤干細胞和/或BM-MSC施用給個體。這些容器可以是(例如)無菌塑料袋、燒瓶、罐或者可以容易地從中分配胎盤干細胞或BM-MSC的其他容器。例如，所述容器可以是血袋或者是適合于液體靜脈內(nèi)施用至受者的其他醫(yī)學上可用的塑料袋。病灶內(nèi)或靜脈內(nèi)施用可以在單個劑量中包含(例如)約至少或者不超過I X 105、5X105、1X106、5X106、1X107、5X107、1X108、5X108、1X109、5X109、1X1010、5X1010、I X IO11個或更多個分離的胎盤干細胞和/或BM-MSC。在某些實施方式中，BM-MSC的劑量包含比胎盤干細胞(例如，PDAC)的劑量多約50%的細胞。在一種實施方式中，病灶內(nèi)或靜脈內(nèi)施用可以在單一劑量中包含約2X IO8個胎盤干細胞。在另一種實施方式中，病灶內(nèi)或靜脈內(nèi)施用可以在單一劑量中包含約8X108個胎盤干細胞。在治療過程中，可以施用一次或多于一次的分離的胎盤干細胞。優(yōu)選地，所施用的胎盤干細胞包含至少50%或以上的活細胞(也就是，在胎盤干細胞群體中至少約50%、 60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%的胎盤干細胞是功能性的或活的)。優(yōu)選地，在群體中至少約60%的細胞是有活力的。更優(yōu)選地，在藥物組合物中群體中至少約70%、80%、90%、95%或99%的細胞是有活力的。除治療骨相關癌癥狀(例如，多發(fā)性骨髓瘤的癥狀，如骨病變)之外，分離的胎盤干細胞和/或BM-MSC的施用可以抑制骨相關癌細胞(例如，多發(fā)性骨髓瘤細胞)的增殖或生長。增殖的抑制可以涵蓋(例如)降低腫瘤細胞的生長或增殖速率或者殺死一些或全部腫瘤細胞。因此，在另一個方面，本文提供了抑制骨相關癌細胞增殖的方法，其包括將所述多個腫瘤細胞與多個胎盤干細胞和/或BM-MSC接觸足以使所述胎盤干細胞和/或BM-MSC與未與胎盤干細胞和/或BM-MSC接觸的多個所述骨相關癌細胞相比抑制(例如，可檢測地抑制)所述骨相關癌細胞的增殖的一段時間，例如，可通過在處理后這些細胞數(shù)目可檢測的減少或在處理后這些細胞數(shù)目增加的可檢測的減緩確定的。在具體的實施方式中，所述骨相關癌細胞是多發(fā)性骨髓瘤細胞、骨癌細胞、神經(jīng)母細胞瘤細胞、骨肉瘤細胞、尤文氏肉瘤細胞、軟骨肉瘤細胞、脊索瘤細胞、骨惡性纖維組織細胞瘤細胞、轉移到骨的癌的細胞、前列腺癌細胞或骨纖維肉瘤細胞。在另一個具體的實施方式中，所述骨相關癌細胞是實性腫瘤細胞或是實性腫瘤范圍內(nèi)的細胞。在另一個具體的實施方式中，所述骨相關癌細胞不是前列腺癌細胞。在另一個具體的實施方式中，所述接觸是在體外進行的。在另一個具體的實施方式中，通過(例如)將所述細胞施用于具有骨相關癌(例如，多發(fā)性骨髓瘤或軟骨肉瘤)細胞的個體在體內(nèi)進行所述接觸。在另一個具體的實施方式中，所述個體是哺乳動物。在另一個具體的實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一個具體的實施方式中，所述接觸包括將所述胎盤干細胞和/或BM-MSC靜脈內(nèi)施用至所述個體。在另一個具體的實施方式中，所述接觸包括將所述胎盤干細胞和/或BM-MSC在由所述骨相關癌所引起的骨病變處或附近(例如)病灶內(nèi)或骨內(nèi)施用至所述個體。在另一種實施方式中，通過將所述骨相關癌細胞與胎盤干細胞和/或BM-MSC接觸抑制骨相關癌細胞(例如，多發(fā)性骨髓瘤細胞)增殖的方法另外包括將所述骨相關癌細胞與一種或多種抗癌化合物(例如，5. I. 3節(jié)中的一種或多種抗癌化合物)接觸，例如，將一種或多種所述抗癌化合物施用至所述個體。在另一種實施方式中，所述方法包括將至少I X IO7個胎盤干細胞和/或BM-MSC以總細胞數(shù)目施用至所述個體。在另一個具體的實施方式中，所述方法包括將至少IXio8個胎盤干細胞和/或BM-MSC以總細胞數(shù)目施用至所述個體。在另一個具體的實施方式中，在施用之前所述胎盤干細胞和/或BM-MSC已體外增殖了不超過30次群體倍增。在另一個具體的實施方式中，在施用之前所述胎盤干細胞和/或BM-MSC已體外增殖了不超過10次群體倍增。在另一個具體的實施方式中，在所述接觸之前已將所述胎盤干細胞和/或BM-MSC冷凍保存并融化。在所述方法的另一個具體的實施方式中，與(例如)在不存在所述胎盤干細胞和/或BM-MSC的情況下相等數(shù)目的骨相關癌細胞的增殖相比，所述胎盤干細胞和/或BM-MSC將所述骨相關癌細胞的增殖抑制了(例如)至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或 90%。在某些實施方式中，可以通過(例如)比較施用胎盤干細胞和/或BM-MSC前后來自患有骨相關癌的個體的組織(例如，血液)樣品中骨相關癌細胞的數(shù)目來評價增殖的減少百分比。在另一個具體的實施方式中，所述方法包括在所述接觸之前確定所述胎盤干細胞和/或BM-MSC抑制(例如，可檢測地抑制)所述骨相關癌細胞樣品的增殖。在該實施方式中，例如，可以通過(例如)抽取胎盤干細胞和/或BM-MSC群體的樣品(例如，來自干細胞庫的單位或批的樣品等)來確定胎盤干細胞和/或BM-MSC抑制所述骨相關癌細胞樣品的增殖。在任何本文所公開的方法中，例如，本文所公開的治療方法、抑制腫瘤生長的方法或抑制破骨細胞成熟的方法，胎盤干細胞(例如，PDAC)或BM-MSC可以單獨使用，或者胎盤干細胞和BM-MSC可以組合使用。當組合使用時，可以將所述細胞混合從而使它們是同時可施用的，例如，在相同的細胞單元中；或者可以是單獨可施用的，例如，維持在單獨的細胞單元(例如，單獨的血液型袋)中。當組合使用時，胎盤干細胞和BM-MSC的施用可以一起同時發(fā)生，或者可以在分開的時間發(fā)生。本文還提供了減少破骨細胞前體成熟為破骨細胞的方法,其包括將所述破骨細胞前體與多個分離的胎盤干細胞和/或BM-MSC (例如，分離的BM-MSC或骨髓中的BM-MSC)接觸，其中所述多個胎盤干細胞和/或BM-MSC是足以減少(例如，可檢測地減少)破骨細胞從所述破骨細胞前體成熟的多個胎盤干細胞和/或BM-MSC。在具體的實施方式中，所述接觸是在體外發(fā)生的。在另一個具體的實施方式中，所述接觸是在體內(nèi)發(fā)生的。在另一個具體的實施方式中，所述接觸是在哺乳動物，例如，在人中發(fā)生的。在另一個具體的實施方式中，所述接觸是在具有多發(fā)性骨髓瘤或包含多發(fā)性骨髓瘤細胞或具有多發(fā)性骨髓瘤的一種或多種癥狀的個體中發(fā)生的。在另一個具體的實施方式中，所述多發(fā)性骨髓瘤的一種或多種癥狀包括一種或多種骨病變，或者由破骨細胞的活性所引起的骨疼。在另一種實施方式中，本文提供了提高破骨細胞前體細胞凋亡的方法，其包括將所述破骨細胞前體與多個胎盤干細胞和/或BM-MSC (例如，分離的BM-MSC或骨髓中的BM-MSC)接觸，其中所述多個胎盤干細胞和/或BM-MSC是足以提高(例如，可檢測地提高)破骨細胞前體細胞凋亡的多個胎盤干細胞和/或BM-MSC。在具體的實施方式中，所述接觸是在體外發(fā)生的。在另一個具體的實施方式中，所述接觸是在體內(nèi)發(fā)生的。在另一個具體的實施方式中，所述接觸是在人中發(fā)生的。在另一個具體的實施方式中，所述接觸是在具有多發(fā)性骨髓瘤或包含多發(fā)性骨髓瘤細胞或具有多發(fā)性骨髓瘤的一種或多種癥狀的個體中發(fā)生的。在另一個具體的實施方式中，所述多發(fā)性骨髓瘤的一種或多種癥狀包括一種或多種骨病變，或者由破骨細胞的活性所引起的骨疼。在另一個具體的實施方式中，破骨細胞前體細胞凋亡的所述增加是通過來自所述個體的破骨細胞前體的膜聯(lián)蛋白V的可檢測增加和碘化丙啶染色所檢測的。在任何上述實施方式中，所述胎盤干細胞和/或BM-MSC可以是基因工程胎盤干細胞，例如，以下5. 7. 2節(jié)中所述的基因工程細胞。在任何本文所公開的方法中，所述個體是哺乳動物。在具體的實施方式中，所述哺乳動物是人。在任何本文所公開的方法中，所述BM-MSC可以是分離的骨髓來源的間質(zhì)干細胞，例如，培養(yǎng)或購自商業(yè)來源的BM-MSC，或者可以是骨髓內(nèi)所包含的BM-MSC，例如，骨髓吸出物、粗骨髓等。
_0] 5. I. I多發(fā)性骨髓瘤的治療本文提供了治療具有多發(fā)性骨髓瘤的個體的方法，其包括向所述個體施用胎盤干細胞和/或BM-MSC，其中所述分離的胎盤干細胞具有以下5. 2節(jié)中所述特征的任意組合或全部。多發(fā)性骨髓瘤是漿細胞癌，漿細胞是產(chǎn)生抗體的免疫系統(tǒng)細胞。該疾病通常具有三種主要特征骨病變，其發(fā)展可以導致骨疼和血鈣升高；貧血；和腎衰竭。在某些實施方式中，本文提供了治療具有一種或多種多發(fā)性骨髓瘤相關疾病或病況或其癥狀的個體的方法。在具體的實施方式中，所述多發(fā)性骨髓瘤相關疾病或病況是意義未明的單克隆丙種球蛋白病(MGUS)、冒煙型骨髓瘤(例如，冒煙型多發(fā)性骨髓瘤)、孤立性衆(zhòng)細胞瘤、良性單克隆丙種球蛋白病、無癥狀單克隆丙種球蛋白病(asymptomaticmonoclonal gammopathy)、非骨髓瘤性單克隆丙種球蛋白病、分散性單株丙種球蛋白病、隱源性單克隆丙種球蛋白病、無癥狀單克隆丙種球蛋白病(lanthanic monoclonalgammopathy)、初期單克隆丙種球蛋白病、血免疫球蛋白異常、無癥狀副免疫球蛋白血癥(paraimmunoglobulinemia)或特發(fā)性副蛋白血癥。在某些實施方式中，具有冒煙型骨髓瘤的人顯示出血液副蛋白，但是未顯示出多發(fā)性骨髓瘤的其他癥狀。在某些實施方式中，癥狀如下所述。骨病變和骨疼-骨髓瘤細胞分泌破骨細胞激活因子，它是激活破骨細胞以分解骨的細胞因子，從而產(chǎn)生了疼痛性骨病變。這些骨病變在(例如)X射線放射照片中是可見的，它們在本質(zhì)上是溶解性的并且通常作為其中骨表現(xiàn)為缺少或“沖孔”的一種或多種區(qū)域出現(xiàn)。骨髓瘤骨疼通常涉及脊柱和肋骨，并且隨著活動而惡化?？赡艽嬖诔掷m(xù)局部疼痛并且它們可以指示病理性骨折。脊椎的涉及可能會導致脊髓壓迫。骨的分解還導致鈣向血液的釋放，從而引起血鈣過多及其相關癥狀。貧血-骨髓瘤中所發(fā)現(xiàn)的貧血通常是正常紅細胞性貧血和正常色素性貧血，并且是由于通過浸潤性瘤細胞的正常骨髓替換以及細胞因子對正常紅細胞產(chǎn)生(造血作用)的抑制所引起的。腎衰竭-多發(fā)性骨髓瘤還往往會導致腎衰竭，它可能會急性和慢性發(fā)展。多發(fā)性骨髓瘤中的腎衰竭很大程度上可歸因于在破骨細胞分解所存在的骨時所發(fā)展的血鈣過多。腎衰竭還是由輕鏈(也稱為凝溶蛋白)分泌的小管損傷所引起的，其可以表示為范科尼綜合征(II型腎小管性酸中毒)。其他原因包括淀粉樣蛋白的小球沉積、高尿酸血、復發(fā)性感染(例如，腎盂腎炎)以及腫瘤細胞的局部浸潤。腎衰竭可以與血清肌酐的較高水平有關。多發(fā)性骨髓瘤還可以具有如下的其他癥狀。感染-由于免疫系統(tǒng)被破壞，因此多發(fā)性骨髓瘤的另一種常見癥狀是感染。提高的感染風險是由彌漫性低丙種球蛋白血所引起的免疫缺陷所造成的，而這種免疫缺陷是由正?？贵w產(chǎn)生的減少和破壞的提高所造成的。最常見的感染是肺炎和腎盂腎炎。在多發(fā)性骨髓瘤患者中引起疾病的常見肺炎病原體包括肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae),而引起腎盂腎炎的常見病原體包括大腸桿菌(Escherichia coli)。通常，感染在化學療法開始后的最初幾個月中發(fā)生。神經(jīng)學癥狀-多發(fā)性骨髓瘤的癥狀包括神經(jīng)學病況譜，其包括由于血鈣過多性頭痛所引起的虛弱、精神混亂和疲勞；視覺變化和視網(wǎng)膜病，其根據(jù)副蛋白的性質(zhì)可以是由于血液粘度過高所造成的(參見下文)。其他神經(jīng)學癥狀包括神經(jīng)根痛、腸或膀胱控制的喪失 (例如，由于導致脊髓壓迫的脊髓受累)和腕管綜合征以及其他神經(jīng)病(例如，由于通過淀粉樣蛋白的周圍神經(jīng)浸潤)。在隨后提供的病例中，多發(fā)性骨髓瘤可以導致截癱。副蛋白的存在-多發(fā)性骨髓瘤的診斷性癥狀是血液和/或尿中副蛋白的存在，副蛋白是單克隆蛋白(M蛋白)，例如，通過漿細胞無性增殖所產(chǎn)生的免疫球蛋白輕鏈或免疫球蛋白片段?？梢酝ㄟ^瓊脂糖凝膠電泳或者通過使用抗免疫球蛋白輕或重鏈的一種或多種抗體的免疫固定來分析來自個體的尿和/或血清中的蛋白質(zhì)從而確定副蛋白的存在。在某些實施方式中，當存在下列癥狀或病征時診斷了癥狀性多發(fā)性骨髓瘤在骨髓活體組織檢查中無性漿細胞構成了 10%以上的細胞，或者在其他組織(例如，漿細胞瘤)的活組織檢查中以任意量存在；血清或尿中的副蛋白；末梢器官損害(相關器官或組織損傷)的跡象，例如，血鈣過多(例如，每分升血液中大于約12mg的折合鈣，或者血液中大于約2. 75mmol的折合I丐)、可歸因于骨髓瘤的腎機能不全、定義為血紅蛋白〈10g/dL血液的貧血、骨病變(例如，溶解性病變或伴隨壓縮骨折的骨質(zhì)疏松癥)、頻繁的嚴重感染(>2次/年)、其他器官的淀粉樣變性(淀粉樣蛋白的沉積)和高粘稠度綜合征(血液粘度升高)，例如，大于I. 8厘泊的血液粘度，例如，至少2、3、4或5厘泊的血液粘度。在某些實施方式中，具有多發(fā)性骨髓瘤的個體屬于以下組之一。在一種實施方式中，具有多發(fā)性骨髓瘤的個體從未對該疾病進行治療。在另一種實施方式中，該個體具有反應性骨髓瘤；即，對治療起反應的多發(fā)性骨髓瘤。在具體的實施方式中，這種個體由于治療而表現(xiàn)出至少50%的M蛋白(副蛋白)的減少。在另一個具體的實施方式中，該個體由于治療而表現(xiàn)出25%至50%之間的M蛋白的減少。在另一種實施方式中，所述個體具有穩(wěn)定性多發(fā)性骨髓瘤，它是指對治療不起反應(例如，M蛋白的減少未達到50%)但又不發(fā)展或惡化的骨髓瘤。在另一種實施方式中，所述個體具有進行性多發(fā)性骨髓瘤，它是指正在惡化的活性骨髓瘤(例如，M蛋白提高和器官惡化或者組織損傷或末梢器官損害)。在另一種實施方式中，所述個體具有復發(fā)性多發(fā)性骨髓瘤，它是指開始對治療起反應但隨后開始再次發(fā)展的骨髓瘤疾病。在具體的實施方式中，所述個體在初始治療后復發(fā)或者在后續(xù)治療后復發(fā)。在另一種實施方式中，所述個體具有難治性多發(fā)性骨髓瘤。在具體的實施方式中，所述難治性多發(fā)性骨髓瘤是對初始治療不起反應的多發(fā)性骨髓瘤。在另一個具體的實施方式中，所述難治性多發(fā)性骨髓瘤是對后續(xù)治療不起反應的復發(fā)性多發(fā)性骨髓瘤。在另一個具體的實施方式中，所述難治性多發(fā)性骨髓瘤是不起反應的進行性難治性疾病，它是指正在發(fā)展的難治性疾病。在另一個具體的實施方式中，所述難治性多發(fā)性骨髓瘤是不起反應的非進行性難治性疾病，它是指未惡化的難治性疾病。因此，在一種實施方式中，本文提供了治療具有多發(fā)性骨髓瘤的個體的方法，其包括向所述個體施用分離的胎盤干細胞和/或BM-MSC (例如，分離的BM-MSC或骨髓中的BM-MSC)，其中所述施用導致進展的可檢測減緩、惡化的可檢測減輕和/或多發(fā)性骨髓瘤的一種或多種癥狀(例如，無限制地，本文所述的多發(fā)性骨髓瘤的任意一種或多種癥狀)的可檢測改善。在具體的實施方式中，所述一種或多種癥狀包括與正常相比血液或尿鈣的升高、骨病變的存在、貧血或腎衰竭。在另一個具體的實施方式中，所述一種或多種癥狀包括漿細胞，例如，在骨髓活體組織檢查中構成10%以上細胞或者在其他組織(例如，漿細胞瘤)的活組織檢查中以任意量存在的的無性漿細胞；血清或尿中的副蛋白；和/或末梢器官損害的跡象。在另一個具體的實施方式中，所述一種或多種癥狀是血液中鈣濃度大于約2. 75mmol/L、腎機能不全、每分升血液中小于約IOg的血紅蛋白、骨病變的存在或除骨髓以外的一種 或多種器官的淀粉樣變性。在另一個具體的實施方式中，所述癥狀是感染，例如，由高丙種球蛋白血癥所引起的感染。在某些實施方式中，所述感染是肺炎或腎盂腎炎。在某些實施方式中，所述感染在化學療法(例如，治療所述多發(fā)性骨髓瘤的化學療法)開始后的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月內(nèi)發(fā)生。在另一個具體的實施方式中，所述癥狀是神經(jīng)學癥狀。在其他具體的實施方式中，所述神經(jīng)學癥狀是虛弱、精神混亂、疲勞、頭痛、視覺變化、視網(wǎng)膜病、神經(jīng)根痛、腸或膀胱控制的喪失、腕管綜合征和/或截癱。在具體的實施方式中，本文提供了治療具有多發(fā)性骨髓瘤的個體的方法，其包括向所述個體施用胎盤干細胞和/或BM-MSC (例如，分離的BM-MSC或骨髓中的BM-MSC)，其中所述施用導致所述個體的一種或多種器官或組織中的多發(fā)性骨髓瘤細胞(例如，無性多發(fā)性骨髓瘤細胞)數(shù)目的可檢測減少。在具體的實施方式中，本文提供了治療具有多發(fā)性骨髓瘤的個體的方法，其包括向所述個體施用分離的胎盤干細胞和/或BM-MSC (例如，分離的BM-MSC或骨髓中的BM-MSC)，其中所述施用導致所述個體血液中血紅蛋白的可檢測提高，例如，提高到正常范圍內(nèi)。如下表IA中所示，根據(jù)個體年齡和性別正常血紅蛋白水平的變化表IA
權利要求
1.一種抑制骨相關癌細胞增殖的方法，包括與未接觸胎盤干細胞的多個骨相關癌細胞相比，將所述骨相關癌細胞與多個胎盤干細胞接觸足以使所述胎盤干細胞抑制所述骨相關癌細胞增殖的一段時間， 其中，所述胎盤干細胞貼壁至組織培養(yǎng)塑料制品，是可通過流式細胞術檢測的CD34_、⑶10+、⑶105+和⑶200+，并且不是滋養(yǎng)層、細胞滋養(yǎng)層或骨髓來源的間質(zhì)干細胞。
2.根據(jù)權利要求I所述的方法，其中，所述骨相關癌細胞是多發(fā)性骨髓瘤細胞。
3.根據(jù)權利要求I所述的方法，其中，所述骨相關癌細胞是軟骨肉瘤細胞。
4.根據(jù)權利要求I所述的方法，其中，所述骨相關癌細胞是骨癌細胞、神經(jīng)母細胞瘤細胞、骨肉瘤細胞、尤文氏肉瘤細胞、脊索瘤細胞、骨惡性纖維組織細胞瘤細胞、前列腺癌細胞或骨纖維肉瘤細胞。
5.根據(jù)權利要求I所述的方法，其中，所述骨相關癌細胞不是前列腺癌細胞。
6.根據(jù)權利要求I所述的方法，其中，所述胎盤細胞是可通過流式細胞術檢測的CD34 ^、CD45 ^、CD10+、CD90+、CD105+ 和 CD200+。
7.根據(jù)權利要求I所述的方法，其中，所述胎盤細胞是可通過流式細胞術檢測的CD34 ^、CD45 ^、CD10+、CD80 ^、CD86 ^、CD90+、CD105+ 和 CD200+，。
8.根據(jù)權利要求I所述的方法，其中，所述接觸在體外進行。
9.根據(jù)權利要求I所述的方法，其中，所述接觸在體內(nèi)進行。
10.根據(jù)權利要求9所述的方法，其中，所述接觸包括將所述胎盤干細胞施用至具有所述骨相關癌細胞的人類個體。
11.根據(jù)權利要求10所述的方法，其中，所述接觸包括在由所述骨相關癌所引起的骨病變處或附近將所述胎盤干細胞施用至所述個體。
12.根據(jù)權利要求10所述的方法，其中，所述接觸包括將至少IXlO8個所述胎盤干細胞施用至所述個體。
13.根據(jù)權利要求I所述的方法，其中，與在不存在所述胎盤細胞的情況下相當數(shù)目的骨相關癌細胞的增殖相比，所述胎盤細胞將所述骨相關癌細胞的增殖抑制了至少50%。
14.一種治療患有骨相關癌的人類個體的方法，包括向所述個體施用治療有效量的胎盤干細胞，所述治療有效量的胎盤干細胞足以使所述胎盤干細胞改善所述骨相關癌的一種或多種癥狀或減緩所述骨相關癌發(fā)展的一段時間， 其中，所述胎盤干細胞貼壁至組織培養(yǎng)塑料制品，是可通過流式細胞術檢測的CD34_、⑶10+、⑶105+和⑶200+ ;不是滋養(yǎng)層、細胞滋養(yǎng)層或骨髓來源的間質(zhì)干細胞，并且具有分化為成骨細胞或軟骨形成細胞的能力。
15.根據(jù)權利要求14所述的方法，其中，所述骨相關癌是多發(fā)性骨髓瘤。
16.根據(jù)權利要求14所述的方法，其中，所述骨相關癌是軟骨肉瘤。
17.根據(jù)權利要求14所述的方法，其中，所述骨相關癌是骨癌、神經(jīng)母細胞瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、脊索瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、前列腺癌或骨纖維肉瘤。
18.根據(jù)權利要求14所述的方法，其中，所述骨相關癌細胞不是前列腺癌細胞。
19.根據(jù)權利要求14所述的方法，其中，所述胎盤干細胞是可通過流式細胞術檢測的CD34 ^、CD45 ^、CD10+、CD90+、CD105+ 和 CD200+。
20.根據(jù)權利要求14所述的方法，其中，所述胎盤干細胞是可通過流式細胞術檢測的CD34' CD45' CD10+、CD80' CD86' CD90+、CD105+ 和 CD200+，。
21.根據(jù)權利要求14所述的方法，其中，將所述胎盤干細胞靜脈內(nèi)施用于所述個體。
22.根據(jù)權利要求14所述的方法，其中，在由所述骨相關癌所引起的骨病變處或附近將所述胎盤干細胞施用至所述個體。
23.根據(jù)權利要求14所述的方法，包括將至少IX IO8個胎盤細胞施用至所述個體。
24.根據(jù)權利要求14所述的方法，其中，與在不存在所述胎盤細胞的情況下相當數(shù)目的細胞的增殖相比，所述胎盤細胞將所述骨相關癌細胞的增殖抑制了至少50%。
全文摘要
本文提供了利用胎盤細胞(例如，本文所述的胎盤干細胞)和這些胎盤細胞的群體來抑制骨相關癌細胞(例如，多發(fā)性骨髓瘤或軟骨肉瘤細胞)的增殖和生長的方法。本文還提供了治療具有骨相關癌細胞的個體的方法。
文檔編號C12N5/074GK102822330SQ201180016168
公開日2012年12月12日 申請日期2011年1月25日 優(yōu)先權日2010年1月26日
發(fā)明者張小葵, 施繆爾·雅科比, 薩沙·阿布拉門遜 申請人:人類起源公司