專利名稱：高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過固定化提高酶的底物耐受性的方法，尤其涉及一種高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶的制備方法。
背景技術(shù)：
2-脫氧-D-核糖-5-磷酸醛縮酶因其可以催化兩個(gè)醛分子絡(luò)合而獨(dú)特于其它三種醛縮酶，且該酶寬松的專一性允許兩個(gè)底物的共取代，一些鏈長(zhǎng)為四個(gè)氫原子以下的醛可作為受體，當(dāng)?shù)谝粋€(gè)受體是取代的乙醛時(shí)，它可以和乙醛進(jìn)行兩次連續(xù)的縮合，產(chǎn)物重排后得到穩(wěn)定的環(huán)狀縮醛，可以繼續(xù)用于合成一些有用的藥物中間體。比如2-脫氧-D-核糖-5-磷酸醛縮酶可用于催化兩分子乙醛和另一個(gè)受體醛的羥醛縮合反應(yīng)得到六氫吡喃結(jié)構(gòu)，進(jìn)而合成他汀類藥物中間體。但是幾個(gè)重要問題限制了其在大規(guī)模生產(chǎn)中的實(shí)際應(yīng)用。首先，催化劑投加量十分大，每克分離產(chǎn)物需要約200 mg的2-脫氧-D-核糖-5-磷酸醛縮酶，即20%的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。如此高的酶濃度使得合成費(fèi)用昂貴并且增加了產(chǎn)物分離的困難；第二，反應(yīng)時(shí)間需要幾天；第三，反應(yīng)物濃度受限。各種因素綜合，只有2g/L/d的體積產(chǎn)量，使得2-脫氧-D-核糖-5-磷酸醛縮酶的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值大大降低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶的制備方法。高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶的制備方法的步驟如下
1)向250mL無氧水中加入0.25 0. 35mol三價(jià)鐵鹽和0. 15 0. 2mol 二價(jià)鐵鹽，以鹽酸調(diào)整至PH =廣2，超聲處理30-40 min;升溫至70 85 °C，在1 200 1 400 rpm攪拌下， N2鼓泡25 30 min，加入9 10 mL質(zhì)量百分?jǐn)?shù)25 28%的氨水或10 15mL 10mol/L NaOH, 使溶液PH = 8-10,20^30 min后，磁分離，無氧水洗滌5 10次，再以0. 010 0. 015mol/L 乙醇水溶液洗滌3、次；
2)加入80 100mL體積百分?jǐn)?shù)為50%的乙醇水溶液，6 8 mL硅烷交聯(lián)劑，50 60 °C、 180^220 rpm攪拌5 6 h，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌3 5次；
3)加入If20 mL pH = 7的磷酸緩沖液及If 20 mL質(zhì)量百分?jǐn)?shù)5%的戊二醛水溶液， 200 rpm攪拌纊3 h，磁分離，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌5次，真空干燥，得到表面活化的磁性納米粒子微球載體；
4)配制lmg/ml的醛縮酶蛋白溶液，醛縮酶蛋白與載體的質(zhì)量比為1:廣5，在冰浴中， PH調(diào)整至5-10，200rpm,攪拌3_12h，磁分離，洗滌固定化酶，凍干，得到高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶。用Bradford法檢測(cè)固定化反應(yīng)剩余上清液的蛋白濃度；
5)將IOmg固定化的醛縮酶300mM的乙醛溶液中保存2 12h，再加入到Iml的50mM的三乙醇胺鹽酸鹽溶液，其PH為7.5，含0. Immol的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，0. 4mmol的底糖-5-磷酸，4U/ml磷酸丙糖異構(gòu)酶，llU/ml甘油磷酸脫氫酶，50°C條件下反應(yīng)后檢測(cè)；340 nm處吸光度的變化
所述的二價(jià)鐵鹽為I^eSO4 · 7H20或FeCl2 · 4H20。所述的三價(jià)鐵鹽為FeCl3 · 6H20或 Fe2(SO4)3 ·7Η20ο所述的硅烷交聯(lián)劑為氨丙基三乙氧基硅烷或氨丙基三甲氧基硅烷。所述的酸縮酶為 Escherichia coli K12 AB200068。本發(fā)明將磁性納米材料固定化醛縮酶用于催化2-脫氧-D-核糖-5-磷酸(DRP)， 得到3-磷酸甘油醛和乙醛中，其底物耐受性有顯著提高，并且大大方便酶的回收和重復(fù)利用，具有極大的工業(yè)應(yīng)用價(jià)值。


圖1磁滯曲線；
圖2表面活化的磁性納米粒子微球載體固定化醛縮酶酶掃描電子顯微鏡照片。
具體實(shí)施例方式高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶的制備方法的步驟如下
1)向250mL無氧水中加入0.25 0. 35mol三價(jià)鐵鹽和0. 15 0. 2mol 二價(jià)鐵鹽，以鹽酸調(diào)整至PH =廣2，超聲處理30-40 min;升溫至70 85 °C，在1 200 1 400 rpm攪拌下， N2鼓泡25 30 min，加入9 10 mL質(zhì)量百分?jǐn)?shù)25 28%的氨水或10 15mL 10mol/L NaOH, 使溶液PH = 8-10,20^30 min后，磁分離，無氧水洗滌5 10次，再以0. 010 0. 015mol/L 乙醇水溶液洗滌3、次；
2)加入80 100mL體積百分?jǐn)?shù)為50%的乙醇水溶液，6 8 mL硅烷交聯(lián)劑，50 60 °C、 180^220 rpm攪拌5 6 h，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌3 5次；
3)加入If20 mL pH = 7的磷酸緩沖液及If 20 mL質(zhì)量百分?jǐn)?shù)5%的戊二醛水溶液， 200 rpm攪拌纊3 h，磁分離，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌5次，真空干燥，得到表面活化的磁性納米粒子微球載體；
4)配制lmg/ml的醛縮酶蛋白溶液，醛縮酶蛋白與載體的質(zhì)量比為1:廣5，在冰浴中， PH調(diào)整至5-10，200rpm,攪拌3_12h，磁分離，洗滌固定化酶，凍干，得到高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶。用Bradford法檢測(cè)固定化反應(yīng)剩余上清液的蛋白濃度；
5)將IOmg固定化的醛縮酶300mM的乙醛溶液中保存2 12h，再加入到Iml的50mM的三乙醇胺鹽酸鹽溶液，其PH為7.5，含0. Immol的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，0. 4mmol的底物2-脫氧-D-核糖-5-磷酸，4U/ml磷酸丙糖異構(gòu)酶，llU/ml甘油磷酸脫氫酶，50°C條件下反應(yīng)后檢測(cè)；340 nm處吸光度的變化
所述的二價(jià)鐵鹽為I^eSO4 · 7H20或FeCl2 · 4H20。所述的三價(jià)鐵鹽為FeCl3 · 6H20或 Fe2(SO4)3 ·7Η20ο所述的硅烷交聯(lián)劑為氨丙基三乙氧基硅烷或氨丙基三甲氧基硅烷。所述的酸縮酶為 Escherichia coli K12 AB200068。實(shí)施例1
1)向250mL無氧水中加入0. 25mol三價(jià)鐵鹽和0. 15mol 二價(jià)鐵鹽，以鹽酸調(diào)整至pH = 1，超聲處理30-40 min;升溫至70 °C，在1 200 rpm攪拌下，N2鼓泡25 min，加入9mL 質(zhì)量百分?jǐn)?shù)25%的氨水或10 mL IOmol/L NaOH，使溶液pH = 8，20 min后，磁分離，無氧水洗滌5次，再以O(shè).OlOmol/L乙醇水溶液洗滌3次；
2)加入80mL體積百分?jǐn)?shù)為50%的乙醇水溶液，6mL硅烷交聯(lián)劑，50°C、180 rpm攪拌 5 h，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌3次；
3)加入18mL pH = 7的磷酸緩沖液及18 mL質(zhì)量百分?jǐn)?shù)5%的戊二醛水溶液，200 rpm 攪拌2 h，磁分離，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌5次，真空干燥，得到表面活化的磁性納米粒子微球載體；
4)配制lmg/ml的醛縮酶蛋白溶液，醛縮酶蛋白與載體的質(zhì)量比為1:1，在冰浴中， pH=5, 200rpm，攪拌池，磁分離，洗滌固定化酶，凍干，得到高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶。用Bradford法檢測(cè)固定化反應(yīng)中剩余上清液的蛋白濃度。載體的吸附量為 37. 1% ；
5)將IOmg固定化的醛縮酶300mM的乙醛溶液中保存2h，再加入到Iml的50mM的三乙醇胺鹽酸鹽溶液，其PH為7.5，含0. Immol的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，0. 4mmol的底物 2-脫氧-D-核糖-5-磷酸，4U/ml磷酸丙糖異構(gòu)酶，llU/ml甘油磷酸脫氫酶，50°C條件下反應(yīng)后檢測(cè)340 nm處吸光度的變化，酶比活為1. 55U/mg。實(shí)施例2
1)向250mL無氧水中加入0.35mol三價(jià)鐵鹽和0. 2mol 二價(jià)鐵鹽，以鹽酸調(diào)整至pH = 2，超聲處理340 min;升溫至85 °C，在1 400 rpm攪拌下,N2鼓泡30 min，加入10 mL質(zhì)量百分?jǐn)?shù)28%的氨水或15mL 10mol/L NaOH，使溶液pH = 10,30 min后，磁分離，無氧水洗滌10次，再以0.015mol/L乙醇水溶液洗滌4次；
2)加入100mL體積百分?jǐn)?shù)為50%的乙醇水溶液，8 mL硅烷交聯(lián)劑，60 °C >220 rpm 攪拌6 h，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌5次；
3)加入20mL pH = 7的磷酸緩沖液及20 mL質(zhì)量百分?jǐn)?shù)5%的戊二醛水溶液，200 rpm 攪拌3 h，磁分離，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌5次，真空干燥，得到表面活化的磁性納米粒子微球載體；
4)配制lmg/ml的醛縮酶蛋白溶液，醛縮酶蛋白與載體的質(zhì)量比為1:5，在冰浴中， pH=10, 200rpm，攪拌4h，磁分離，洗滌固定化酶，凍干，得到高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶。用Bradford法檢測(cè)固定化反應(yīng)中剩余上清液的蛋白濃度。載體的吸附量為 56. 1% ；
5)將IOmg固定化的醛縮酶300mM的乙醛溶液中保存4h，再加入到Iml的50mM的三乙醇胺鹽酸鹽溶液，其PH為7.5，含0. Immol的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，0. 4mmol的底物 2-脫氧-D-核糖-5-磷酸，4U/ml磷酸丙糖異構(gòu)酶，llU/ml甘油磷酸脫氫酶，50°C條件下反應(yīng)后檢測(cè)340 nm處吸光度的變化，酶比活為1. 71U/mg。實(shí)施例3
1)向250mL無氧水中加入0.3mol三價(jià)鐵鹽和0. 2mol 二價(jià)鐵鹽，以鹽酸調(diào)整至pH = 1. 5，超聲處理340 min ；升溫至85 °C，在1 400 rpm攪拌下，N2鼓泡30 min，加入10 mL 質(zhì)量百分?jǐn)?shù)28%的氨水或15mL 10mol/L NaOH，使溶液pH = 10,30 min后，磁分離，無氧水洗滌10次，再以0.015mol/L乙醇水溶液洗滌4次；
2)加入100mL體積百分?jǐn)?shù)為50%的乙醇水溶液，8 mL硅烷交聯(lián)劑，60 °C >220 rpm 攪拌6 h，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌5次；3)加入20mL pH = 7的磷酸緩沖液及20 mL質(zhì)量百分?jǐn)?shù)5%的戊二醛水溶液，200 rpm 攪拌3 h，磁分離，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌5次，真空干燥，得到表面活化的磁性納米粒子微球載體；
4)配制lmg/ml的醛縮酶蛋白溶液，醛縮酶蛋白與載體的質(zhì)量比為1:5，在冰浴中， pH=7. 5，200rpm，攪拌6h，磁分離，洗滌固定化酶，凍干，得到高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶。用Bradford法檢測(cè)固定化反應(yīng)中剩余上清液的蛋白濃度。載體的吸附量為 76. 8% ；
5)將IOmg固定化的醛縮酶300mM的乙醛溶液中保存8h，再加入到Iml的50mM的三乙醇胺鹽酸鹽溶液，其PH為7.5，含0. Immol的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，0. 4mmol的底物 2-脫氧-D-核糖-5-磷酸，4U/ml磷酸丙糖異構(gòu)酶，llU/ml甘油磷酸脫氫酶，50°C條件下反應(yīng)后檢測(cè)340 nm處吸光度的變化，酶比活為1. 92U/mg。實(shí)施例4
1)向250mL無氧水中加入0.3mol三價(jià)鐵鹽和0. 2mol 二價(jià)鐵鹽，以鹽酸調(diào)整至pH = 1. 7，超聲處理340 min ；升溫至85 °C，在1 400 rpm攪拌下，N2鼓泡30 min，加入10 mL 質(zhì)量百分?jǐn)?shù)觀％的氨水或15mL 10mol/L NaOH，使溶液pH = 9. 5,30 min后，磁分離，無氧水洗滌10次，再以0.015mol/L乙醇水溶液洗滌4次；
2)加入100mL體積百分?jǐn)?shù)為50%的乙醇水溶液，8 mL硅烷交聯(lián)劑，60 °C >220 rpm 攪拌6 h，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌5次；
3)加入20mL pH = 7的磷酸緩沖液及20 mL質(zhì)量百分?jǐn)?shù)5%的戊二醛水溶液，200 rpm 攪拌3 h，磁分離，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌5次，真空干燥，得到表面活化的磁性納米粒子微球載體；
4)配制lmg/ml的醛縮酶蛋白溶液，醛縮酶蛋白與載體的質(zhì)量比為1:5，在冰浴中， pH=7. 5，200rpm，攪拌8h，磁分離，洗滌固定化酶，凍干，得到高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶。用Bradford法檢測(cè)固定化反應(yīng)中剩余上清液的蛋白濃度。載體的吸附量為 78. 1% ；
5)將IOmg固定化的醛縮酶300mM的乙醛溶液中保存2h，再加入到Iml的50mM的三乙醇胺鹽酸鹽溶液，其PH為7. 5，含0. Immol的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，0. 4mmol的底物 2-脫氧-D-核糖-5-磷酸，4U/ml磷酸丙糖異構(gòu)酶，llU/ml甘油磷酸脫氫酶，50°C條件下反應(yīng)后檢測(cè)340 nm處吸光度的變化，酶比活為2. 47U/mg。實(shí)施例5
1)向250mL無氧水中加入0.3mol三價(jià)鐵鹽和0. 2mol 二價(jià)鐵鹽，以鹽酸調(diào)整至pH = 1. 5，超聲處理340 min ；升溫至80 °C，在1 400 rpm攪拌下，N2鼓泡30 min，加入10 mL 質(zhì)量百分?jǐn)?shù)觀％的氨水或15mL 10mol/L NaOH，使溶液pH = 9. 5,30 min后，磁分離，無氧水洗滌10次，再以0.015mol/L乙醇水溶液洗滌4次；
2)加入100mL體積百分?jǐn)?shù)為50%的乙醇水溶液，8 mL硅烷交聯(lián)劑，60 °C >220 rpm 攪拌6 h，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌5次；
3)加入20mL pH = 7的磷酸緩沖液及20 mL質(zhì)量百分?jǐn)?shù)5%的戊二醛水溶液，200 rpm 攪拌3 h，磁分離，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌5次，真空干燥，得到表面活化的磁性納米粒子微球載體；4)配制lmg/ml的醛縮酶蛋白溶液，醛縮酶蛋白與載體的質(zhì)量比為1:2，在冰浴中， pH=7. 5，200rpm，攪拌8h，磁分離，洗滌固定化酶，凍干，得到高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶。用Bradford法檢測(cè)固定化反應(yīng)中剩余上清液的蛋白濃度。載體的吸附量為 83. 1% ；
5)將IOmg固定化的醛縮酶300mM的乙醛溶液中保存2h，再加入到Iml的50mM的三乙醇胺鹽酸鹽溶液，其PH為7. 5，含0. Immol的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，0. 4mmol的底物 2-脫氧-D-核糖-5-磷酸，4U/ml磷酸丙糖異構(gòu)酶，llU/ml甘油磷酸脫氫酶，50°C條件下反應(yīng)后檢測(cè)340 nm處吸光度的變化，酶比活為2. 57U/mg。實(shí)施例6
1)向250mL無氧水中加入0.3mol三價(jià)鐵鹽和0. 2mol 二價(jià)鐵鹽，以鹽酸調(diào)整至pH = 1. 7，超聲處理340 min ；升溫至85 °C，在1 400 rpm攪拌下，N2鼓泡30 min，加入10 mL 質(zhì)量百分?jǐn)?shù)觀％的氨水或15mL 10mol/L NaOH，使溶液pH = 9. 5,30 min后，磁分離，無氧水洗滌10次，再以0.015mol/L乙醇水溶液洗滌4次；
2)加入100mL體積百分?jǐn)?shù)為50%的乙醇水溶液，8 mL硅烷交聯(lián)劑，60 °C >220 rpm 攪拌6 h，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌5次；
3)加入20mL pH = 7的磷酸緩沖液及20 mL質(zhì)量百分?jǐn)?shù)5%的戊二醛水溶液，200 rpm 攪拌3 h，磁分離，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌5次，真空干燥，得到表面活化的磁性納米粒子微球載體；
4)配制lmg/ml的醛縮酶蛋白溶液，醛縮酶蛋白與載體的質(zhì)量比為1:1，在冰浴中， pH=7. 5，200rpm，攪拌8h，磁分離，洗滌固定化酶，凍干，得到高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶。用Bradford法檢測(cè)固定化反應(yīng)中剩余上清液的蛋白濃度。載體的吸附量為 78. 1% ；
5)將IOmg固定化的醛縮酶300mM的乙醛溶液中保存12h，再加入到Iml的50mM的三乙醇胺鹽酸鹽溶液，其PH為7. 5，含0. Immol的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，0. 4mmol的底物 2-脫氧-D-核糖-5-磷酸，4U/ml磷酸丙糖異構(gòu)酶，llU/ml甘油磷酸脫氫酶，50°C條件下反應(yīng)后檢測(cè)340 nm處吸光度的變化，酶比活為2. 13U/mg。實(shí)施例7
1)向250mL無氧水中加入0.3mol三價(jià)鐵鹽和0. 2mol 二價(jià)鐵鹽，以鹽酸調(diào)整至pH = 1. 7，超聲處理340 min ；升溫至85 °C，在1 400 rpm攪拌下，N2鼓泡30 min，加入10 mL 質(zhì)量百分?jǐn)?shù)25%的氨水或15mL 10mol/L NaOH，使溶液pH = 9. 5,30 min后，磁分離，無氧水洗滌10次，再以0.015mol/L乙醇水溶液洗滌4次；
2)加入100mL體積百分?jǐn)?shù)為50%的乙醇水溶液，8 mL硅烷交聯(lián)劑，60 °C >220 rpm 攪拌6 h，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌5次；
3)加入20mL pH = 7的磷酸緩沖液及20 mL質(zhì)量百分?jǐn)?shù)5%的戊二醛水溶液，200 rpm 攪拌3 h，磁分離，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌5次，真空干燥，得到表面活化的磁性納米粒子微球載體；
4)配制lmg/ml的醛縮酶蛋白溶液，醛縮酶蛋白與載體的質(zhì)量比為1:5，在冰浴中， pH=12, 200rpm，攪拌8h，磁分離，洗滌固定化酶，凍干，得到高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶。用Bradford法檢測(cè)固定化反應(yīng)中剩余上清液的蛋白濃度。載體的吸附量為19. 1% ；
5)將IOmg固定化的醛縮酶300mM的乙醛溶液中保存2h，再加入到Iml的50mM的三乙醇胺鹽酸鹽溶液，其PH為7. 5，含0. Immol的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，0. 4mmol的底物 2-脫氧-D-核糖-5-磷酸，4U/ml磷酸丙糖異構(gòu)酶，llU/ml甘油磷酸脫氫酶，50°C條件下反應(yīng)后檢測(cè)340 nm處吸光度的變化，酶比活為1. 63U/mg。
權(quán)利要求
1.一種高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶的制備方法，其特征在于它的步驟如下1)向250mL無氧水中加入0.25 0. 35mol三價(jià)鐵鹽和0. 15 0. 2mol 二價(jià)鐵鹽，以鹽酸調(diào)整至PH =廣2，超聲處理30-40 min;升溫至70 85 °C，在1 200 1 400 rpm攪拌下， N2鼓泡25 30 min，加入9 10 mL質(zhì)量百分?jǐn)?shù)25 28%的氨水或10 15mL 10mol/L NaOH, 使溶液PH = 8-10,20^30 min后，磁分離，無氧水洗滌5 10次，再以0. 010 0. 015mol/L 乙醇水溶液洗滌3、次；2)加入80 100mL體積百分?jǐn)?shù)為50%的乙醇水溶液，6 8 mL硅烷交聯(lián)劑，50 60 °C、 180^220 rpm攪拌5 6 h，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌3 5次；3)加入If20 mL pH = 7的磷酸緩沖液及If 20 mL質(zhì)量百分?jǐn)?shù)5%的戊二醛水溶液， 200 rpm攪拌纊3 h，磁分離，用pH = 7的磷酸緩沖液洗滌5次，真空干燥，得到表面活化的磁性納米粒子微球載體；4)配制lmg/ml的醛縮酶蛋白溶液，醛縮酶蛋白與載體的質(zhì)量比為1:廣5，在冰浴中， PH調(diào)整至5-10，200rpm,攪拌3_12h，磁分離，洗滌固定化酶，凍干，得到高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶，用Bradford法檢測(cè)固定化反應(yīng)剩余上清液的蛋白濃度；5)將IOmg固定化的醛縮酶300mM的乙醛溶液中保存2 12h，再加入到Iml的50mM的三乙醇胺鹽酸鹽溶液，其PH為7.5，含0. Immol的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，0. 4mmol的底物2-脫氧-D-核糖-5-磷酸，4U/ml磷酸丙糖異構(gòu)酶，llU/ml甘油磷酸脫氫酶，50°C條件下反應(yīng)后檢測(cè)；340 nm處吸光度的變化。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶的制備方法，其特征在于所述的二價(jià)鐵鹽為!^eSO4 · 7H20或FeCl2 · 4H20。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶的制備方法，其特征在于所述的三價(jià)鐵鹽為FeCl3 · 6H20 ^Fe2(SO4)3 · 7H20。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶的制備方法，其特征在于所述的硅烷交聯(lián)劑為氨丙基三乙氧基硅烷或氨丙基三甲氧基硅烷。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶、的制備方法，其特征在于所述的醛縮酶為hcherichia coli K12 AB200068。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高底物耐受性的磁性納米載體固定化醛縮酶的制備方法，包括如下步驟1) 以二價(jià)和三價(jià)鐵鹽的混合物共沉淀制備超順磁性Fe3O4納米粒子，以硅烷偶聯(lián)劑進(jìn)行修飾，并在修飾后的微粒外表以戊二醛活化，從而得到表面活化的磁性納米粒子；2)將純化脫鹽后的醛縮酶緩沖液和磁性載體在低溫下攪拌、洗滌、冷凍干燥后得到磁性納米載體固定化醛縮酶；3)采用該磁性納米載體固定化醛縮酶為催化劑催化2-脫氧-D-核糖-5-磷酸，得到3-磷酸甘油醛和乙醛．本發(fā)明所涉及的固定化醛縮酶在催化2-脫氧-D-核糖-5-磷酸反應(yīng)中，底物乙醛耐受性顯著提高，酶的回收利用操作極大簡(jiǎn)化。
文檔編號(hào)C12N11/14GK102517276SQ20111041766
公開日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2011年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月14日
發(fā)明者吳堅(jiān)平, 徐剛, 楊立榮, 費(fèi)輝 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)