專利名稱:一種耐氧耐酸性長雙歧桿菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及食品科學技術(shù)領(lǐng)域,尤其是一種耐氧耐酸性長雙歧桿菌。
背景技術(shù):
2002年,F(xiàn)A0/WH0將益生菌定義為“活的,服用足夠數(shù)量后對宿主具有健康影響的微生物”。作為益生菌的細菌應(yīng)該具備以下條件(1)對宿主有益;( 無毒性作用和無致病作用;C3)能在消化道存活;(4)能適應(yīng)胃酸和膽鹽;( 能在消化道表面定殖;(6)能夠產(chǎn)生有用的酶類和代謝物;(7)在加工和貯存過程中能保持活性;(8)具有良好的感官特性。2005年5月四日我國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布了《益生菌類保健食品申報與評審規(guī)定》,并公布了一批可用于保健食品的益生菌菌種包括兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)、嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacterium infantis)、長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)、短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)、青春雙歧桿菌 (Bifidobacterium adolescentis)、德氏ILfflifi呆力口禾1J亞禾中(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、干酪乳桿菌干酪亞種 (Lactobacillus casei subsp. Casei)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、羅伊氏乳桿菌(LactcAacillus reuteri)。目前用于制造功能食品的益生菌主要是乳酸桿菌類和雙歧桿菌類,不同類型的益生菌作用強弱是有差異的,相比而言,雙歧桿菌調(diào)節(jié)胃腸道功能更強一些。雙歧桿菌廣泛存在于人和暖體動物的腸道、女性生殖道及反芻動物的瘤胃等環(huán)境中,它在嬰兒和成人的腸道內(nèi)都占有很高的比例,是母乳喂養(yǎng)嬰幼兒腸道的主要微生物。早在1899年,由法國巴斯德研究所的Henry Tissier第一次從母乳喂養(yǎng)嬰幼兒的糞便中分離得到雙歧桿菌,此后,它的益生作用越來越受到人們的重視,現(xiàn)在已經(jīng)成為益生菌研究領(lǐng)域的焦點。雙歧桿菌的保健功能包括(1)抑制病原菌,防止腹瀉和便秘,對腐敗菌、病原性大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、痢疾志賀菌、變形菌等具有抑制作用;( 防治高血壓和動脈硬化,雙歧桿菌可以將膽固醇轉(zhuǎn)化為人體不吸收的類固醇,降低血液中膽固醇的濃度,對高血壓和動脈硬化有一定的防治作用,雙歧桿菌還可以降低血清膽固醇和甘油二酯,具有改善脂質(zhì)代謝紊亂的作用;(3)營養(yǎng)作用,雙歧桿菌能合成多種維生素,如VB1, VB2, VB6, VB12, 葉酸,尼古酸,泛酸等,代謝產(chǎn)生的有機酸可降低環(huán)境中的PH值和肪值,有利于二價鐵、鈣及VD的吸收;(4)免疫和抗衰老作用,激活機體免疫系統(tǒng),使之保持免疫監(jiān)視和免疫清除功能,不斷地清除衰老、死亡的細胞及突變細胞,使機體不至因死亡細胞、廢物堆積而衰老; 雙歧桿菌能增加血液中超氧化物歧化酶的活性和含量,從而減少自由基參與的氧化反應(yīng)導致的機體衰老;(5)減少腸源性內(nèi)毒素的產(chǎn)生和吸收,雙歧桿菌在腸道內(nèi)可吸收利用含氮有害物質(zhì),抑制產(chǎn)胺的腐敗菌,降低腸道內(nèi)的PH值,使氨變?yōu)殡y于吸收的離子型,達到降低血氨的功效,從而減小對肝的危害;(6)抑制腫瘤的作用,雙歧桿菌可以激活機體的免疫系統(tǒng)中的巨噬細胞,增強免疫功能,減少體內(nèi)癌誘變劑的含量,使產(chǎn)生癌誘變劑的酶失活。另外,腸道腐生菌在代謝中會產(chǎn)生許多胺類致癌物質(zhì),有的還能將一些致癌前體物轉(zhuǎn)化為致癌物,雙歧桿菌通過抑制腐生菌的生長和分解致癌物質(zhì)而起到預(yù)防腸道癌的作用;(7)改善和調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào),菌群失調(diào)(雙歧桿菌大量減少)可導致腸道功能減退,兒童可引起遷延和復(fù)發(fā)性感染,高水平適宜的雙歧桿菌在腸道通過可以阻止病原體的致病作用,從而就可以糾正腸菌群失調(diào)引起的腹瀉。當然,人體內(nèi)的雙歧桿菌要在達到一定數(shù)量之后才能發(fā)揮其益生作用,目前普遍認為每克腸內(nèi)含物中的活雙歧桿菌量至少要達到IXIO7個左右,而且還要在其特定的腸道部位才發(fā)揮作用。影響雙歧桿菌最終存活率的因素有很多,包括菌種自身、氧分壓、PH值、膽鹽含量等,雙歧桿菌是專性厭氧菌,且不耐酸,在氧氣和酸度較低的條件下,生長緩慢且容易死亡,造成培養(yǎng)的難度大,生產(chǎn)的成本高,給生產(chǎn)雙歧桿菌制品的廠家?guī)砗艽蟮睦щy。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處,通過對長雙歧桿菌進行連續(xù)的耐氧和耐酸馴化,得到耐氧耐酸性長雙歧桿菌CC-I,本菌種培養(yǎng)后活菌數(shù)能達到4. 7 X IO7CFU/
mLo本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的一種耐氧耐酸性長雙歧桿菌,名稱為CC-1,分類名稱Bif idcAacterium longum,保藏編號為=CGMCC No. 4730,保藏日期2011年4月2日,保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號,保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。而且,所述耐氧耐酸性長雙歧桿菌CC-I的活菌數(shù)為4. 7 X 107CFU/mL。本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果如下本發(fā)明有效改善了雙歧桿菌的生理生化性能,增強了雙歧桿菌對氧和酸的耐受性,將耐氧耐酸長雙歧桿菌在PH值4. 0的PTYG液體培養(yǎng)基中于普通有氧條件下37°C培養(yǎng), 由傾注法活菌計數(shù)結(jié)果可知,耐氧耐酸長雙歧桿菌CC-I的活菌數(shù)能達到4. 7 X 107CFU/mL, 該濃度對雙歧桿菌制品的研究與應(yīng)用將有極其重要的作用。
圖1是本發(fā)明的耐氧耐酸長雙歧桿菌CC-I和初始長雙歧桿菌在pH值7. 0的PTYG 液體培養(yǎng)基中于厭氧條件下37°C培養(yǎng)后的菌體OD6tltl值的變化曲線。圖2是本發(fā)明的耐氧耐酸長雙歧桿菌CC-I和初始長雙歧桿菌在pH值7. 0的PTYG 液體培養(yǎng)基中于厭氧條件下37 °C培養(yǎng)后的菌體pH值的變化曲線。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例,對本發(fā)明進一步說明,下述實施例是說明性的,不是限定性的, 不能以下述實施例來限定本發(fā)明的保護范圍。1.長雙歧桿菌的馴化雙歧桿菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基PTYG成分大豆蛋白胨5g,胰蛋白胨5g,酵母浸膏10g,葡萄糖10g,L-半胱氨酸鹽酸鹽0. 5g,微量鹽溶液40mL,水IOOOmL,調(diào)pH值7. 0。微量鹽溶液成分為(IOOOmL 水)=CaCl2 0. 2g, MgSO4 · 7H20 :0. 48g, KH2PO4 :1. 0g, NaHCO3 :10. 0g, K2HPO4 1. 0g, NaCl :2. Og0
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初始菌株為實驗室現(xiàn)有長雙歧桿菌。接種量5%,培養(yǎng)溫度37°C(1)長雙歧桿菌的耐氧馴化通過逐漸增加培養(yǎng)基中氧氣分壓的方法來馴化,在每個氧氣分壓梯度下傳代5-8次反復(fù)馴化,再接種到下一個氧氣分壓梯度中培養(yǎng),每次耐氧馴化后挑選耐氧的長雙歧桿菌單菌落。本發(fā)明通過以下途徑來增加培養(yǎng)基中的氧氣分壓一是在厭氧箱中培養(yǎng),每次增加0. 02個氧分壓,最后再轉(zhuǎn)到普通培養(yǎng)條件下培養(yǎng);二是在改變培養(yǎng)環(huán)境的同時,在培養(yǎng)器皿一定的條件下,逐漸減少裝液量,即采用IOOmL的厭氧瓶,裝液量依次為100mL、80mL、 60mL、40mL、20mL。(2)長雙歧桿菌的耐酸馴化將耐氧馴化完得到的耐氧長雙歧桿菌再進行耐酸馴化,通過逐漸降低培養(yǎng)基PH值的方法馴化,pH值依次為7. 0,6. 5,6. 0,5. 5,5. 0,4. 5,4. 0,每個PH值梯度傳代5-8次,反復(fù)馴化,再接種到下一個pH值,每次耐酸馴化后挑選耐酸的長雙歧桿菌單菌落,最終得到生長能力最強的CC-I。2.耐氧耐酸長雙歧桿菌的生長特性通過分析比較初始菌和耐氧耐酸長雙歧桿菌生長的菌體0D_值、pH值、及活菌數(shù)等指標,從而可知耐氧耐酸長雙歧桿菌的生長特性。由耐氧耐酸長雙歧桿菌CC-I和初始菌同時在pH值7. 0的PTYG液體培養(yǎng)基中于厭氧條件下37°C培養(yǎng)后的菌體OD6tltl值和pH值的變化曲線可以看出,耐氧耐酸的菌株生長情況要好,并且延滯期略有縮短,活菌數(shù)相對較高,產(chǎn)酸能力也有所提高。將耐氧耐酸長雙歧桿菌CC-I和初始菌同時在pH值4. 0的PTYG液體培養(yǎng)基中于普通有氧條件下37°C培養(yǎng),由傾注法活菌計數(shù)結(jié)果可知,耐氧耐酸長雙歧桿菌的活菌數(shù)能達到4. 7X107CFU/mL,而初始菌株只能達到2. 1 X 103CFU/mL。
權(quán)利要求
1.一種耐氧耐酸性長雙歧桿菌,其特征在于名稱為CC-1,分類名稱BifidcAacterium Iongum,保藏編號為CGMCC No. 4730,保藏日期2011年4月2日,保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號,保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的耐氧耐酸性長雙歧桿菌,其特征在于所述耐氧耐酸性長雙歧桿菌CC-I的活菌數(shù)為4. 7X 107CFU/mL。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種耐氧耐酸性長雙歧桿菌,其特征在于名稱為CC-1,分類名稱Bifidobacterium longum,保藏編號為CGMCC No.4730,保藏日期2011年4月2日,保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號,保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。本發(fā)明有效改善了雙歧桿菌的生理生化性能,增強了雙歧桿菌對氧和酸的耐受性,將耐氧耐酸長雙歧桿菌在pH值4.0的PTYG液體培養(yǎng)基中于普通有氧條件下37℃培養(yǎng),由傾注法活菌計數(shù)結(jié)果可知,耐氧耐酸長雙歧桿菌CC-1的活菌數(shù)能達到4.7×107CFU/ml,該濃度對雙歧桿菌制品的研究與應(yīng)用將有極其重要的作用。
文檔編號C12R1/01GK102206599SQ20111008949
公開日2011年10月5日 申請日期2011年4月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月11日
發(fā)明者曹月婷, 李江, 李玉, 王春霞, 王穩(wěn)航, 路福平 申請人:天津科技大學