專利名稱：包含增強(qiáng)性多肽和淀粉降解酶的組合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含淀粉降解酶活性增強(qiáng)性多肽并進(jìn)一步包含淀粉降解酶的組合物。本發(fā)明還涉及增強(qiáng)性多肽，編碼增強(qiáng)性多肽的多核苷酸，包含所述多核苷酸的核酸構(gòu)建體，包含所述核酸構(gòu)建體的重組表達(dá)載體，包含所述核酸構(gòu)建體或載體的重組宿主細(xì)胞，用于產(chǎn)生所述增強(qiáng)性多肽的方法，和本發(fā)明的組合物在淀粉常規(guī)工藝包括用于產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物如特別是乙醇中的用途。
背景技術(shù)：
淀粉可由酸，多種酶，或其組合水解為更簡(jiǎn)單的糖類。用于將淀粉水解為更簡(jiǎn)單的糖類的主要酶為內(nèi)淀粉酶、外淀粉酶和脫支酶，其水解直鏈淀粉、和支鏈淀粉。直鏈淀粉主要由淀粉酶水解，而支鏈淀粉還需要脫支酶如普魯蘭酶(E. C. 3. 2. I. 41)以供完全水解。內(nèi)淀粉酶(最常見(jiàn)的為α -淀粉酶(E. C. 3. 2. I. I))，對(duì)于直鏈淀粉和支鏈淀粉的α -I, 4_連接具特異性。外淀粉酶具有水解直鏈淀粉和支鏈淀粉的α-1,4-連接和α-1,6-連接兩者的能力。常見(jiàn)的實(shí)例是淀粉匍糖苷酶(常常稱作匍糖淀粉酶)(E. C. 3. 2. I. 20)。β -淀粉酶是具有水解直鏈淀粉的α-1,4-連接的能力的酶。脫支酶例如普魯蘭酶，水解支鏈淀粉中的α-1,6-連接。脫支酶的水解產(chǎn)物主要為麥芽三糖和麥芽糖。增強(qiáng)淀粉降解酶的酶活性并改善含淀粉材料轉(zhuǎn)化為糖，特別是能夠轉(zhuǎn)化為發(fā)酵產(chǎn)物如乙醇的可發(fā)酵的糖，會(huì)是有利的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了包含淀粉降解酶活性增強(qiáng)性多肽和淀粉降解活性的組合物。本發(fā)明的組合物導(dǎo)致與不具有淀粉降解活性增強(qiáng)性多肽的相同組合物相比，增加的淀粉降解活性。本發(fā)明的組合物包含至少兩種組分增強(qiáng)性多肽和淀粉降解酶。然而，應(yīng)理解的是，所述組合物可包含多于一個(gè)每種組分。在第一個(gè)方面，本發(fā)明涉及包含多肽并進(jìn)一步包含淀粉降解酶的組合物，所述多肽包含或組成為Χ46域。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述包含或組成為Χ46域的多肽可自身不具有淀粉降解酶活性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述包含Χ46域的多肽亦具有淀粉降解活性，如下文進(jìn)一步所述。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述包含Χ46域的多肽具有普魯蘭酶、淀粉普魯蘭酶和/或淀粉酶，如α-淀粉酶活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述包含或組成為Χ46域的多肽選自下組i)多肽，其包含或組成為SEQ ID N0:2、4、6-81、85、87和89中任一中所示的氨基酸序列；或ii)氨基酸序列，其與SEQ ID N0:2、4、6-81、85、87和89中任一具有至少60%同一性；或iii)多肽，其由使用SEQ ID NO:7-81，85，87和89的隱蔽馬爾科夫模型(HMM)確定，具有至少150的HMM得分；iv)它們的(即 i)，ii)或 iii)的)變體，其在 SEQ ID NO:2、4、6_81、85、87 和 89中任一中的一個(gè)或多個(gè)(幾個(gè))位置包含改變。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及從含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物特別是乙醇的工藝，其包括下述步驟在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及從含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的工藝，其包括下述步驟(a)在本發(fā)明的組合物和任選地在α _淀粉酶的存在下液化含淀粉材料；(b)使用糖源生成酶糖化步驟(a)中獲得的液化材料；(C)使用發(fā)酵生物發(fā)酵。本發(fā)明還涉及組成為X46域的多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組成為X46域的多肽不具有淀粉降解活性。本發(fā)明還涉及編碼本發(fā)明的X46域的分離的多核苷酸，以及包含可操作地連接的本發(fā)明的多核苷酸和一個(gè)或多個(gè)(幾個(gè))調(diào)控序列的核酸構(gòu)建體，所述調(diào)控序列指導(dǎo)所述多肽在表達(dá)宿主中的產(chǎn)生。本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明的核酸構(gòu)建體的重組表達(dá)載體,和包含本發(fā)明的核酸構(gòu)建體或本發(fā)明的載體的重組宿主細(xì)胞。本發(fā)明進(jìn)一步涉及用于產(chǎn)生組成為X46域的多肽的方法，其包括(a)在有助于產(chǎn)生X46域的條件下培養(yǎng)本發(fā)明的重組宿主細(xì)胞；和(b)回收所述X46域。最終，本發(fā)明涉及本發(fā)明的組合物在從淀粉產(chǎn)生增甜劑的工藝中的用途或在從糊化(gelatinized)產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物如乙醇的工藝中的用途。


圖I顯示了附錄A，其列出了通過(guò)隱蔽馬爾科夫模型(HMM)鑒定的X46域。圖2顯示了附錄C，其顯示了 X46域的多重比對(duì)。舉例而言，SffISSPROT:C1QSR8:898.. 1122/1-225 表示序列來(lái)自 Swissprot 數(shù)據(jù)庫(kù)，具有標(biāo)識(shí)號(hào)“C1QSR8”，所述X46域位于氨基酸898至1122，且為225個(gè)氨基酸長(zhǎng)。圖3顯示了附錄D，其顯示在當(dāng)前Pfam發(fā)布(版本24. 0，2009年十月)中DUF2223域的組成為16個(gè)種子序列。附錄D展示DUF2223域(或X46域)序列的多重比對(duì)。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及包含增強(qiáng)淀粉降解酶的酶活性的多肽的組合物。本發(fā)明還涉及將含淀粉材料轉(zhuǎn)化為糖和/或發(fā)酵產(chǎn)物，如特別是乙醇的工藝。本發(fā)明人鑒定了位于來(lái)自嗜熱網(wǎng)球菌(Dictyoglomus thermophilum)DSM3960的淀粉普魯蘭酶基因Apu (Uniprot :Q9Y8I8)上游的未表征的多肽。SEQID NO: I的翻譯產(chǎn)物為SEQ ID勵(lì):2出11丨？1'0185￥0￥6)，并鑒定為具有域0現(xiàn)2223(根據(jù)？€&111命名)。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)包含含有X46域的多肽的組合物增強(qiáng)了淀粉降解酶的淀粉水解活性。舉例而言，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)當(dāng)溫育包含來(lái)自SEQ ID N0:6中所示的嗜熱網(wǎng)球菌(Dictyoglomus thermophilum)普魯蘭酶的X46域(SEQ ID NO:89)的多肽時(shí)，盡管X46域自身不具有普魯蘭酶活性，普魯
5蘭酶活性仍得到增強(qiáng)。已顯不Thermococcus Iitoralis/Thermococcushydrothermalis X4嵌合普魯蘭酶(SEQ ID N0:83)在 pH 5. O 使用 LIQUEZYME SC DS(即來(lái)自 Novozymes 的商業(yè)性嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillus stearothermophilus) α -淀粉酶變體)產(chǎn)生+0. 6g/L (相對(duì)于對(duì)照)的乙醇產(chǎn)量的增加。僅經(jīng)含X46域多肽處理的醪與對(duì)照相比產(chǎn)生+0.9g/L更多的乙醇。當(dāng)與含X46域多肽(SEQ ID NO:89)組合測(cè)試時(shí)，其相對(duì)于對(duì)照增強(qiáng)了 +1. 2g/L的乙醇產(chǎn)量。本發(fā)明人亦發(fā)現(xiàn)對(duì)α-淀粉酶起增強(qiáng)作用的活性。具體而言，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)WO 2009/140504中公開(kāi)的Subulispora sp. (AM3162-P8GR) α -淀粉酶增強(qiáng)乙醇產(chǎn)量，如亦可見(jiàn)于實(shí)施例。本發(fā)明的組合物在第一個(gè)方面，本發(fā)明涉及包含多肽和進(jìn)一步包含淀粉降解酶的組合物，所述多肽包含或組成為Χ46域。本發(fā)明的組合物導(dǎo)致相對(duì)于不含所述包含或組成為Χ46域的多肽的相應(yīng)組合物增加的(即增強(qiáng)的)淀粉降解活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述包含或組成為Χ46域的多肽增加(即增強(qiáng))普魯蘭酶，優(yōu)選家族GH13的類型I的普魯蘭酶和/或家族GH57的類型II的淀粉普魯蘭酶的活性。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述家族GH13的類型I的普魯蘭酶(EC. 3. 2. 1.41)是來(lái)源于芽孢桿菌屬(Bacillus)的菌株，如菌種Bacillusderamificans的菌株的普魯蘭酶，特別是WO 00/01796中SEQ IDNO:2中所示的普魯蘭酶，或菌種Bacillus acidopulIulyticus的菌株的普魯蘭酶，特別是WO 00/01796中的SEQ ID NO: I中所示的普魯蘭酶(通過(guò)提述將上述公開(kāi)并入本文)。所述X46域亦可來(lái)源于細(xì)菌，優(yōu)選網(wǎng)球菌屬(Dictyoglomus)的菌株，特別是菌種嗜熱網(wǎng)球菌(Dictiglomus thermophilum)的菌株，或閃爍桿菌屬(Fervido bacterium)的菌株，特別是菌種多節(jié)閃爍桿菌(F. nodosum)的菌株；火球菌屬(Pyrococcus)的菌株，特別是沃氏火球菌(Pyrococcus woesi)的菌株，或熱球菌屬(Thermococcus)包括Thermococcus litoralis、Thermococcushydrothermalis 的菌株。應(yīng)理角軍的是，X46 域亦可來(lái)自其他微生物，如來(lái)自由HMM發(fā)現(xiàn)的X46域的屬，特別是種(如下文進(jìn)一步所述)。這些包括激烈火球菌(Pyrococcus furiosus)，海葡萄嗜熱菌(Staphylothermusmarinus)， Pyrobaculum aerophilum, Pyrobaculum aerophilum， 嗜酸熱原體(Thermoplasmaacidophilum)， Pyrococcus abyssi， Staphylothermus hellenicus， 海葡萄嗜熱菌(Staphylothermus marinus)，沃氏火球菌(Pyrococcus woesei)，球形節(jié)桿菌(Artheobacter globiformis)， Scardovia inopinata， Parascardovia denticolens，Thermosphaera aggregans，Thermosphaera aggregans，Thermincola potens，Staphylothermus hellenicus,Ktedonobacter racemifer，Pyrobaculum calidifontis，阿拉伯糖醋鹽桿菌(Acetohalobium arabaticum)，Pyrobaculum calidifontis,Pyrobaculumarsenaticum，Pyrobaculum arsenaticum，多節(jié)閃爍桿菌(Fervidobacterium nodosum),Anaeromyxobacter dehalogenans，冰島熱棒菌(Pyrobaculum islandicum)，冰島熱棒菌(Pyrobaculum islandicum)，Psychroflexustorques，奧氏鹽熱發(fā)菌(Halothermothrixorenii)， Anaeromyxobacter sp.，球形節(jié)桿菌(Arthrobacter globiformis),嗜熱棲熱菌(Thermus thermophilus)，球形節(jié)桿菌(Arthrobacter globiformis)，禮色標(biāo)粧菌(Stigmatella aurantiaca)，球形節(jié)桿菌(Arthrobacter globiformis),Anaeromyxobacter dehalogenans，嗜中性熱變形菌(Thermoproteus neutrophilus)，激烈火球菌(Pyrococcus furiosus),水生棲熱菌(Thermus aquaticus), Thermococcusbarophilus,解蛋白幾熱桿菌(Coprothermobacter proteolyticus),嗜熱網(wǎng)球菌(Dictyoglomus thermophilum),Thermococcus hydrothermalis,Dictyoglomus turgidum,Thermococcus sp. , Kosmotoga olearia, Thermococcus onnurineus, Desulfurococcuskamchatkensis, Thermococcus litoralis, Thermosipho melanesiensis, Catenulisporaacidiphila, Thermococcus gammatolerans, Thermococcus gammatoIerans,嗜熱棲熱菌(Thermus thermophilus), Thermococcus kodakaraensis 和 Catenulisporaacidiphila。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述包含或組成為X46域的多肽增加(即增強(qiáng))α-淀粉酶的活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述包含Χ46域的多肽具有普魯蘭酶、淀粉普魯蘭酶和/或淀粉酶活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，在本發(fā)明的組合物中包含或組成為Χ46域的多肽和淀粉降解酶的比例為10:1至I : 10，特別是5:1至1:5，特別是2:1至1:2，如約1:1。包含或組成為Χ46域的多肽本發(fā)明的組合物包含多肽并進(jìn)一步包含淀粉降解酶，所述多肽包含或組成為Χ46域。所述包含或組成為Χ46域的多肽可選自下組i)多肽，其包含或組成為SEQ ID NO:2、4、6_81、85、87和89中任一中所示的氨基酸序列；ii)氨基酸序列，其與SEQ ID NO: 2、4、6_81、85、87和89中任一具有至少60%同一性；或iii)多肽，其由使用SEQ ID NO: 7_81，85，87和89和/或圖I (附錄A)中鑒定的序列的隱蔽馬爾科夫模型(HMM)確定，具有至少150的HMM得分；iv)它們的(即 i)，ii)或 iii)的)變體，其在 SEQ ID NO:2、4、6_81、85、87 和 89中任一中的一個(gè)或多個(gè)(幾個(gè))位置包含改變。包含或組成為X46域的多肽可通過(guò)下文“通過(guò)Hidden Markov Model鑒定X46域”部分描述的方法發(fā)現(xiàn)。根據(jù)本發(fā)明，此種(類)多肽增加淀粉降解酶的淀粉水解活性。當(dāng)使用HMM以鑒定含有X46域的多肽時(shí)，HMM得分可優(yōu)選為至少200，如150-400或200-400的范圍，如230-350或170-350的范圍。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述含X46域的多肽可包含或組成為a. SEQ ID N0:2、4和6中任一中所示的氨基酸序列；或b.與SEQ ID N0:2、4和6中任一具有至少60%同一性的氨基酸序列；或c.它們的(即a或b的)變體，其在SEQ ID N0:2、4和6中任一中在一個(gè)或多個(gè)(幾個(gè))位置包含改變。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述包含X46域的多肽具有氨基酸序列，所述氨基酸序列與SEQ ID N0:2、4、6-81、85、87和89中所示的多肽具有至少70%，優(yōu)選至少80%，更優(yōu)選至少90%，甚至更優(yōu)選至少95%，如至少96%，如至少97%，如至少98%，如至少99%的同一性。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述包含X46域的多肽的變體與SEQ ID N0:2、4和6中任一中所示的親本多肽具有至少60%同一性，至少70%，優(yōu)選至少80%，更優(yōu)選至少90%，甚至更優(yōu)選至少95%，如至少96%，如至少97%，如至少98%，如至少99%同一性，但少于100%同一性。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組成為X46域的多肽具有氨基酸序列，所述氨基酸序列與SEQ ID NO: 7-81、85、87和89中任一中所示的親本多肽具有至少70%,優(yōu)選至少80%，更優(yōu)選至少90%，甚至更優(yōu)選至少95%，如至少96%，如至少97%如至少98%，如至少99%同一性，但少于100%同一性。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組成為X46域的多肽的組成可為a. SEQ ID NO:7-81、85、87或89中任一中所示的氨基酸序列；或b.與SEQ ID NO:7-81、85、87或89中任一具有至少60%同一性的氨基酸序列；c.SEQ ID NO:7-81、85、87 或 89 中任一的變體；其任選地進(jìn)一步具有N和/或C端氨基酸序列，其中所述N和/或C端氨基酸序列組成為I至50個(gè)氨基酸，優(yōu)選1-25個(gè)氨基酸，特別是I至10個(gè)氨基酸。淀粉降解酶如上所提及，本發(fā)明的組合物包含多肽并進(jìn)一步包含淀粉降解酶，所述多肽包含或組成為X46域。所述淀粉降解酶可優(yōu)選為家族GH13或家族GH57的淀粉降解酶。所述淀粉降解酶可選自下組普魯蘭酶、淀粉普魯蘭酶和α-淀粉酶，異淀粉酶，淀粉酶，葡糖淀粉酶和CGT酶。根據(jù)本發(fā)明，在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述淀粉降解酶可選自下組普魯蘭酶、淀粉普魯蘭酶和α-淀粉酶。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述淀粉降解酶當(dāng)與本發(fā)明的包含或組成為Χ46域的多肽組合時(shí)，具有增加的水解活性(即增強(qiáng)的酶活性)。家族GHl3 酶家族GH13由CAZy團(tuán)隊(duì)所定義，且更新的列表可見(jiàn)于CAZy服務(wù)器(參見(jiàn)“www.cazy. org”)。家族GH13酶包括α -淀粉酶(EC 3. 2. I. I);普魯蘭酶(EC3. 2. I. 41);環(huán)麥芽糊精葡聚糖轉(zhuǎn)移酶(EC 2. 4. I. 19);環(huán)麥芽糊精酶(EC 3. 2. I. 54);海藻糖_6_磷酸水解酶(EC 3. 2. I. 93);寡聚-α -葡糖苷酶(EC 3. 2. I. 10);產(chǎn)麥芽糖淀粉酶(EC 3. 2. I. 133)；新普魯蘭酶(EC 3. 2. I. 135) ； α -葡糖苷酶(EC 3. 2. I. 20);麥芽四糖形成α -淀粉酶(EC3. 2. I. 60);異淀粉酶(EC 3. 2. I. 68);葡糖葡聚糖酶(EC 3. 2. I. 70);麥芽六糖形成α -淀粉酶(EC 3. 2. I. 98);麥芽三糖形成α -淀粉酶(EC 3. 2. I. 116);支化酶(EC 2. 4. I. 18)；海藻糖合酶(EC 5. 4. 99. 16) ;4_α -葡聚糖轉(zhuǎn)移酶(EC 2. 4. I. 25);麥芽五糖形成α -淀粉酶(EC 3. 2. I.-);淀粉蔗糖酶(EC2. 4. I. 4);蔗糖磷酸化酶(EC 2. 4. I. 7);麥芽寡糖基海藻糖海藻糖水解酶(malto-o Iigosy I trehalose trehalohydrolase) (EC 3. 2. I. 141);異麥芽酮糖合酶(isomaltulose synthase) (EC 5. 4. 99. 11);氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明涵蓋的家族13酶是淀粉降解酶，特別是歸類為EC 3.2. 1.41(普魯蘭酶)和EC 3. 2. I. 1(α-淀粉酶)的。家族GH57 酶家族GH57由CAZy團(tuán)隊(duì)所定義，且更新的列表可見(jiàn)于CAZy服務(wù)器(參見(jiàn)“www.cazy.org”)。家族GH57酶包括α -淀粉酶(EC 3. 2. I. I) ;4_ α -葡聚糖轉(zhuǎn)移酶(EC2.4. 1.25) ;α-半乳糖苷酶(EC 3. 2. I. 22);淀粉普魯蘭酶(EC 3. 2. I. 41);支化酶(EC
2.4. I. 18)。優(yōu)選的是家族GH57的普魯蘭酶，其包括歸類于EC 3. 2. I. 41的普魯蘭酶，并常常稱作類型II的普魯蘭酶，或有時(shí)稱作“淀粉普魯蘭酶”。與類型I普魯蘭酶(其特異性攻擊α-1，6連接)相對(duì)，類型II普魯蘭酶亦水解α-1,4連接。家族GH57普魯蘭酶的集合描述于Zone等(2004) Eur. J. Biochem. 271，2863-2872 (通過(guò)提述并入本文)。在本發(fā)明的上下文中，家族GH57普魯蘭酶并不限于本文中描述的那些。優(yōu)選的類型II的家族GH57普魯蘭酶包括UNIPROT:Q9Y8I8和UNIPROT:Q8NKS8，其分別來(lái)源于超嗜熱細(xì)菌 Thermococcus hydrothermalis (SEQ ID NO: 2)和 Thermococcuslitoralis的菌株。其雜合物，優(yōu)選為截短的GH57普魯蘭酶亦涵蓋于本發(fā)明。優(yōu)選的實(shí)例為 SEQ ID NO: 83 中所不的 Thermococcus litoralis/Thermococcus hydrothermalisX4 嵌
合普魯蘭酶。家族GH57普魯蘭酶可從任何來(lái)源，如微生物，優(yōu)選細(xì)菌或真菌生物如酵母和絲狀真菌獲得。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述家族GH57普魯蘭酶是野生型酶。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述普魯蘭酶來(lái)源于細(xì)菌，優(yōu)選熱球菌屬(Thermococcus)或火球菌屬(Pyrococcus)的細(xì)菌，包括下表中的那些
權(quán)利要求
1.一種組合物，其包含多肽并進(jìn)一步包含淀粉降解酶，所述多肽包含或組成為X46域。
2.權(quán)利要求I的組合物，其中所述包含或組成為X46域的多肽選自下組 i)多肽，其包含或組成為SEQID N0:2、4、6-81、85、87和89中任一中所示的氨基酸序列； ii)氨基酸序列，其與SEQID N0:2、4、6-81、85、87和89中任一具有至少60%同一性； iii)多肽，其由使用SEQID NO: 7_81，85，87和89和/或圖I (附錄A)中鑒定出的序列的隱蔽馬爾科夫模型(HMM)確定，具有至少150的HMM得分； iv)它們的(即i)，ii)或 iii)的)變體，其在 SEQ ID NO:2、4、6_81、85、87 和 89 中任一中的一個(gè)或多個(gè)(幾個(gè))位置包含改變。
3.權(quán)利要求1-2的組合物，其中所述淀粉降解酶選自下組普魯蘭酶、淀粉普魯蘭酶，α -淀粉酶，異淀粉酶，β -淀粉酶，葡糖淀粉酶和CGT酶。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的組合物，其中所述含Χ46域的多肽不具有任何淀粉降解活性，特別是不具有普魯蘭酶活性，α-淀粉酶活性，異淀粉酶活性，β_淀粉酶活性，葡糖淀粉酶活性或CGT酶活性。
5.一種組成為Χ46域的多肽，其選自下組 i)SEQID NO:7-81、85、87和89中任一中所示的氨基酸序列；或 ii)與SEQID NO:7-81、85、87和89中任一具有至少60%同一性的氨基酸序列；或 iii)它們?cè)赟EQID NO: 7_81、85、87和89中任一中一個(gè)或多個(gè)(幾個(gè))位置包含改變的變體。
6.—種分離的多核苷酸,其編碼權(quán)利要求5的X46域,所述分離的多核苷酸選自下組 i)多核苷酸，其與SEQID勵(lì):84、86或88中所示的乂46域編碼部分或其互補(bǔ)鏈具有至少60%，優(yōu)選至少70%，更優(yōu)選至少80%，更優(yōu)選至少90%，更優(yōu)選至少95%，至少96%，優(yōu)選至少97%，優(yōu)選至少98%，優(yōu)選至少99%同一性；和 ii)多核苷酸，其在低嚴(yán)格條件下，優(yōu)選中等，特別是高嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:84、86或88的X46域編碼部分或其互補(bǔ)鏈雜交。
7.—種核酸構(gòu)建體,其包含可操作地連接的權(quán)利要求6的多核苷酸和一個(gè)或多個(gè)(幾個(gè))調(diào)控序列，所述調(diào)控序列指導(dǎo)所述多肽在表達(dá)宿主中的產(chǎn)生。
8.—種重組表達(dá)載體，其包含權(quán)利要求7的核酸構(gòu)建體。
9.一種重組宿主細(xì)胞,其包含權(quán)利要求7的核酸構(gòu)建體或權(quán)利要求8的載體。
10.一種用于產(chǎn)生權(quán)利要求5的X46域的方法,其包括(a)在有助于產(chǎn)生X46域的條件下培養(yǎng)權(quán)利要求9的重組宿主細(xì)胞；和(b)回收所述X46域。
11.一種用于從含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的工藝，其包括下述步驟 (a)在權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)中定義的組合物和任選地α-淀粉酶的存在下液化含淀粉材料； (b)使用糖源生成酶糖化步驟(a)中獲得的液化材料； (C)使用發(fā)酵生物發(fā)酵。
12.權(quán)利要求11的工藝，進(jìn)一步其中在步驟(a)、步驟(b)或步驟(C)過(guò)程中存在包含或組成為X46域的多肽，優(yōu)選SEQ ID NO:2、4、6-81、85、87和89的多肽。
13.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所定義的組合物在從淀粉產(chǎn)生增甜劑的工藝中的用途。
14.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所定義的組合物在從糊化產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物如乙醇的工藝中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供一種組合物，所述組合物包含多肽并進(jìn)一步包含淀粉降解酶，所述多肽包含或組成為X46域，及此類組合物的用途。所述包含或組成為X46域的多肽能夠增強(qiáng)淀粉降解酶的活性。
文檔編號(hào)C12P7/06GK102933227SQ201080064479
公開(kāi)日2013年2月13日 申請(qǐng)日期2010年12月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月22日
發(fā)明者M.博徹特, P.F.哈林, 李明 申請(qǐng)人:諾維信公司