專利名稱：包含α淀粉酶和蛋白酶的清潔系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明描述了涉及芽孢桿菌屬(Bacillus)的α淀粉酶和蛋白酶的組合物和方法。所述組合物和方法對冷水清潔的應(yīng)用特別有效。背景淀粉是直鏈淀粉(15-30 % w/w)和支鏈淀粉(70-85 % w/w)的混合物。直鏈淀粉由 α -1，4-連接的葡萄糖單位的線性鏈組成，具有從約60，000至約800，000的分子量(MW)。 支鏈淀粉是每24-30個葡萄糖單位就含有α _1，6分支點的分支聚合物。它的MW可高達(dá)一億。形式為濃縮葡萄糖漿的糖類來自淀粉，目前由酶催化過程來生產(chǎn)，所述過程包括 (1)用α淀粉酶液化(或稀化)固體淀粉至具有約7-10的平均聚合度的糊精；和(2)用淀粉葡糖苷酶(也稱為葡糖淀粉酶或GA)將所獲得的液化淀粉(即，淀粉水解物)糖化。所獲得的糖漿具有高葡萄糖含量。商業(yè)生產(chǎn)的大部分葡萄糖漿之后都被酶促異構(gòu)為葡萄糖/ 果糖混合物，稱為異糖漿(isosyrup)。α淀粉酶(α -1，4_葡聚糖_4_葡聚糖水解酶，Ε. C. 3. 2. 1. 1)是一類通過隨機(jī)切割內(nèi)部的α-1，4-糖苷鍵來水解淀粉、糖原和相關(guān)多糖的酶。該類酶在以下領(lǐng)域具有許多重要的商業(yè)應(yīng)用，例如淀粉加工的初始階段(液化)、紡織品脫漿、再生紙脫墨、造紙和紙漿工業(yè)的淀粉修飾、濕釀酒糟(wet corn milling)、醇生產(chǎn)、甜味劑(例如，糖)生產(chǎn)、飲料工業(yè)、釀造業(yè)、油田、動物飼料以及去垢劑基質(zhì)中的清潔劑。例如，此類酶可用于在餐具洗滌和衣物洗滌中去除淀粉性污漬。α淀粉酶是從多種細(xì)菌、真菌、植物和動物來源中分離的。工業(yè)上，許多重要的α 淀粉酶分離自芽孢桿菌。一種表征過的α淀粉酶是嗜堿性芽孢桿菌菌株TS-23的酶，所述菌株生產(chǎn)至少五種表現(xiàn)出淀粉水解活性的酶(Lin等人，Biotechnol Appl Biochem, 28 61-68，1998)。芽孢桿菌TS-23的α淀粉酶具有最優(yōu)為9的ρΗ，雖然它在寬泛的ρΗ范圍內(nèi)都是穩(wěn)定的(即，ΡΗ4. 7至10. 8)。它的溫度最優(yōu)為45°C，雖然該酶在較低溫度下也具有活性，例如15-200C ο對具有改變的生物化學(xué)特征并提供改善的工業(yè)應(yīng)用性能的變體淀粉酶(例如，α 淀粉酶)仍存在需要。概述本發(fā)明描述了涉及清潔組合物的組合物、系統(tǒng)和方法，所述清潔組合物包括芽孢桿菌屬α淀粉酶和淀粉酶，或由芽孢桿菌屬α淀粉酶和淀粉酶組成，或基本由芽孢桿菌屬 α淀粉酶和淀粉酶組成。在一個方面，提供了這樣的清潔組合物，所述清潔組合物包括(a)具有與SEQ IDNO :2所述氨基酸序列至少80%同一的氨基酸序列的α淀粉酶；和(b)蛋白酶；其中，所述組合物提供的清潔水平大于對缺少α淀粉酶或缺少蛋白酶的相應(yīng)組合物所觀察到的水平。在一些實施方案中，所述系統(tǒng)是冷水清潔系統(tǒng)。在一些實施方案中，至少一種其他的酶是枯草桿菌蛋白酶。在一些實施方案中，至少一種其他的酶是枯草桿菌蛋白酶ΒΡΝ’或其變體。在一些實施方案中，至少一種其他的酶是枯草桿菌蛋白酶ΒΡΝ’的Y217L變體。在一些實施方案中，清潔組合物還包括至少一種表面活性劑。在一些實施方案中， 清潔組合物還包括選自脂肪酶、角質(zhì)酶、糖酶、纖維素酶、果膠酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、 半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶、過氧化氫酶(perhydrolase)、果膠酸裂合酶和過氧化物酶的至少一種其他的酶。在一些實施方案中，α淀粉酶源自選自BASE、ACE、ACE-Q和ACE-QK的親本α淀粉酶。在一些實施方案中，α淀粉酶是具有淀粉酶活性的變體α淀粉酶的成熟形式，并且在選自下述的一個或多個位置上包含取代1,2,3,4,5,7,15，16，17，18，19，22，25，26，28，29，30，32，35，36，37，50，51，52，53， 54，55，56，59，60，70，71，72，73，75，78，83，87，90，91，93，94，95，104，105，107，108，110， 112，113，116，118，125，126，128，129，130，131，134，136，138，142，144，147，149，150，152， 154，156，158，160，161，162，165，166，168，169，170，172，174，177，178，182，183，185，189， 192，195，197，201，202，203，207，210，214，217，221，228，234，236，237，246，250，254，255， 257，264，267，269，270，272，275，279，283，284，298，301，303，305，306，310，311，314，318， 319，320，322，323，336，337，338，339，340，344，359，374，375，376，377，379，381，382，393， 394，399，401，407，408，419，433，436，438，444，447，448，451，453，459，465，470，475，476， 483 和 484 ；其中所述位置對應(yīng)于SEQ ID NO 2所述氨基酸序列中的氨基酸殘基；并且其中所述用不同的氨基酸殘基取代在一個或多個位置的天然存在的氨基酸殘基產(chǎn)生了具有穩(wěn)定性測量的性能指數(shù)> 1.0，活性測量的性能指數(shù)> 1.0的α淀粉酶變體。在一些實施方案中，變體α淀粉酶在選自7、29、35、53、60、72、87、108、116、126、 128、129、130、131、134、136、138、142、156、161、165、178、182、185、189、192、195、197、202、 210、214、217、221、234、246、269、303、310、337、340、374、401 和 438 的一個或多個位置包含取代，并且其中所述用不同的氨基酸殘基取代天然存在的氨基酸殘基產(chǎn)生了具有活性測量的性能指數(shù)> 1.5和穩(wěn)定性測量的性能指數(shù)> 1.0的α淀粉酶變體。在一些實施方案中，變體α淀粉酶在選自2、7、22、25、28、30、37、70、75、83、87、 91、93、108、128、160、165、178、182、183、217、269、270、279、283、298、305、306、310、320、 374、375、376、407、419、475和476的一個或多個位置上包含取代，其中所述用不同的氨基酸殘基取代天然存在的氨基酸殘基產(chǎn)生了具有穩(wěn)定性測量的性能指數(shù)> 1. 5和活性測量的性能指數(shù)> 1. 0的α淀粉酶變體。在一些實施方案中，變體α淀粉酶在選自83、125、128、131、160、178、182、183、 185、189、279、305、319、320、379、407、433、453、475、476 和 483 的一個或多個位置上包含取代。
在一些實施方案中，α淀粉酶是成熟形式的變體α淀粉酶，在選自83、125、128、 131、160、178、182、183、185、189、279、305、319、320、379、407、433、453、475、476 和 483 的一
個或多個位置上包含取代，其中所述位置對應(yīng)于SEQ ID NO :2所述氨基酸序列中的氨基酸殘基，并且其中所述取代提供了選自改善的清潔性能、改善的去垢劑穩(wěn)定性、改善的熱穩(wěn)定性和改善的蛋白質(zhì)表達(dá)中的至少一個有益的效果。在一些實施方案中，α淀粉酶是成熟形式的變體α淀粉酶，在選自5、32、83、95、 154、214、221、228、322、401、407、419、444、447、459、470、483 和 484 的一個或多個位置上包含取代；其中所述位置對應(yīng)于SEQ ID NO :2所述氨基酸序列中的氨基酸殘基；并且其中所述用不同的氨基酸殘基取代天然存在的氨基酸殘基產(chǎn)生了這樣的α淀粉酶變體，所述變體在ρΗ8下的活性、pHIO下的活性、16°C下的活性、32°C下的活性的性能指數(shù)值為0. 5或更高，在去垢劑中的穩(wěn)定性或熱穩(wěn)定性的性能指數(shù)值為0. 5或更高。在一些實施方案中，α淀粉酶變體還包含在對應(yīng)于SEQ ID NO 2所述氨基酸序列的243位上的取代。在一些實施方案中，α淀粉酶變體還包含在對應(yīng)于SEQ ID NO :2所述氨基酸序列的180和/或181位上的缺失。在一些實施方案中，α淀粉酶變體源自具有與選自SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :5、 SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :11、 SEQ ID NO 12,SEQ ID Ν0:13禾口 SEQ ID NO 14的氨基酸序列至少75%相同的氨基酸序列的親本α淀粉酶。在一些實施方案中，α淀粉酶變體與SEQ ID NO :2所述氨基酸序列具有至少75%的序列同一性。在一些實施方案中，α淀粉酶變體具有與SEQ ID Ν0:2所述氨基酸序列至少80%的序列同一性。在一些實施方案中，α淀粉酶變體具有與SEQ ID NO 2 所述氨基酸序列至少90%的序列同一性。在一些實施方案中，α淀粉酶變體在選自對應(yīng)于SEQ ID NO 2所述氨基酸序列的 128、178、182、185和189的一個或多個位置上包含取代，其中所述取代提供了改善的清潔性能或改善的去垢劑穩(wěn)定性。在一些實施方案中，α淀粉酶變體包括(a)在125位的丙氨酸，在128位的半胱氨酸，在131位的異亮氨酸，在165位的異亮氨酸，在178位的亮氨酸，在182位的甘氨酸，在202位的酪氨酸，在305位的精氨酸，在319位的蘇氨酸，或在475位的精氨酸；(b)取代 m28C+Kl78L+Tl82G+Y305R+G475K，和選自S125A、T131I、T165I、F202Y和D319T的至少一種其它的取代；或(c)取代N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K,
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K,或S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K ；其中所述變體任選的還包括在243位的取代和/或180位和/或181位的缺失； 并且其中所述位置對應(yīng)于SEQ ID NO 2所述的氨基酸序列。在一些實施方案中，α淀粉酶變體包括475位的取代。在一些實施方案中，α淀粉酶變體包括在243位的取代和/或180位和/或181位的缺失。在一些實施方案中，α 淀粉酶變體包括在243位的取代和/或180位和/或181位的缺失。在一些實施方案中，在低于約25°C的溫度下測量時，清潔組合物提供了大于對缺少α淀粉酶或缺失蛋白酶的相應(yīng)組合物所觀察到的清潔水平。在一些實施方案中，在低于約20°C的溫度下測量時，清潔組合物提供了大于對缺少α淀粉酶或缺失蛋白酶的相應(yīng)組合物所觀察到的清潔水平。在一些實施方案中，α淀粉酶和蛋白酶是共同配制的。在另一個方面，提供了清潔織品或硬表面的方法，包括將織品或硬表面與任意所述的清潔組合物接觸。在一些實施方案中，所述方法是在低于約25°C的溫度下實施的。在一些實施方案中，所述方法是在低于約20°C的溫度下實施的。在相關(guān)的實施方案中，α淀粉酶變體是具有淀粉酶活性的成熟形式，并且在選自 1、2、3、4、5、7、15、16、17、18、19、22、25、26、28、29、30、32、35、36、37、50、51、52、53、54、 55、56、57、59、60、70、71、72、73、75、78、82、83、87、90、91、93、94、95、103、104、105、107、108、 110、112、113、114、115、116、118、121、123、125、126、127、128、129、130、131、132、134、135、 136、138、140、142、144、147、149、150、152、154、156、158、159、160、161、162、164、165、166、 167、168、169、170、171、172、174、175、176、177、178、179、182、183、185、186、188、189、190、 191、192、193、195、197、199、200、201、202、203、207、210、214、217、221、228、234、237、238、 239、240、243、246、250、254、255、257、264、266、267、268、269、270、272、273、275、279、283、 284、298、301、303、305、306、310、311、314、318、319、320、322、323、336、337、338、339、340、 344、359、374、375、376、377、379、381、382、393、394、399、401、407、408、419、433、436、438、 444、447、448、451、453、459、465、479、475、483 和 484 的一個或多個(優(yōu)選 1、2、3、4、5、6、7、 8,9,10個或更多個)位置上包含取代，并且其中所述位置是對應(yīng)SEQ ID NO 2所述的參照 α淀粉酶的氨基酸序列編號的。在一個實施方案中，α淀粉酶變體源自選自BASE、ACE、 ACE-Q和ACE-QK的親本α淀粉酶。在另一個實施方案中，α淀粉酶變體源自這樣的親本 α淀粉酶，所述親本α淀粉酶的氨基酸序列與由SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :11、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO :13 和 SEQ ID NO :14 組成的組的成員至少 75% (優(yōu)選 80%、85%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99% )相同。在優(yōu)選的實施方案中，所述位置選自1、2、3、4、5、7、16、17、18、19、22、25、26、沘、29、30、32、35、36、37、57、60、70、71、72、 73、75、78、82、83、87、90、91、93、94、95、103、104、105、108、112、114、115、116、118、121、123、 125、126、128、129、130、131、132、134、135、136、138、140、142、144、147、149、150、152、154、 156、158、159、160、161、162、164、165、166、167、168、169、171、172、174、175、176、177、178、 179、182、183、185、186、189、190、191、192、193、195、197、199、202、207、214、217、221、228、234、237、238、243、246、250、254、255、257、264、266、267、268、269、270、272、273、275、279、 283、284、298、301、303、305、306、310、311、318、319、320、322、323、336、337、338、339、340、 344、359、374、375、376、377、379、381、382、393、394、399、401、407、408、419、433、436、438、 447、451、453、459、465、479、475和483，并且其中所述位置是對應(yīng)SEQ ID NO 2所述的參照α淀粉酶的氨基酸序列編號的。在另一個實施方案中，所述位置選自1、2、3、4、5、7、16、 17、18、19、22、25、26、28、29、30、32、35、36、37、57、60、70、71、72、73、75、78、82、83、90、91、 93、94、95、103、104、105、108、112、114、115、116、118、121、123、125、126、128、129、130、131、 132、134、135、136、138、140、142、144、147、149、150、152、154、156、158、159、160、161、162、 164、165、166、167、168、169、171、172、174、175、176、177、178、179、185、186、189、190、191、 192、193、195、197、199、202、207、214、217、221、228、234、237、238、246、250、254、255、257、 264、266、267、268、269、270、273、275、279、283、284、298、301、303、305、306、310、311、318、 319、322、323、336、337、338、339、340、344、374、375、376、377、379、381、382、393、394、399、 401、407、408、419、433、436、438、447、451、453、459、465、479、475 和 483，并且其中所述位置是對應(yīng)SEQ ID NO :2所述的參照α淀粉酶的氨基酸序列編號的。在優(yōu)選的實施方案中， α淀粉酶變體包括58位的酪氨酸和236位的丙氨酸，且其中所述位置是對應(yīng)SEQ ID NO 2 所述的參照α淀粉酶的氨基酸序列編號的。在另一個實施方案中，α淀粉酶變體包括對3 位的谷氨酰胺和475位的賴氨酸，且其中所述位置是對應(yīng)SEQ ID NO :2所述的參照α淀粉酶的氨基酸序列編號的。在一些實施方案中，變體是具有淀粉酶活性的成熟形式，并且在選自182、183、 305、320、379、407、419和475的一個至8個(例如1、2、3、4、5、6、7或8個)位置上包含取代；并且其中所述位置是對應(yīng)SEQ ID NO :2所述的參照α淀粉酶的氨基酸序列編號的。在另一個實施方案中，α淀粉酶變體源自選自BASE、ACE、ACE_Q和ACE-QK的親本α淀粉酶。 在另一個實施方案中，α淀粉酶變體源自這樣的親本α淀粉酶，所述親本α淀粉酶的氨基酸序列與由 SEQ ID NO 2,SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :12、SEQ ID NO :13 和 SEQ ID NO :14 組成的組的任一成員至少 75% (優(yōu)選80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98(%或99(%)相同。在優(yōu)選的實施方案中，所述取代包括1至8個的X182N、X183N、 X305Q、X320F、X379A、X407D、X419S和X475T。在這些實施方案的子集中，取代包括1至8 個(例如，1、2、3、4、5、6、7 或 8 個)的 T182N、G183N、Y305Q、Q320F、P379A、Q407D、T419S 和 G475T。在一些實施方案中，變體是具有淀粉酶活性的成熟形式，并且在選自160、182、 183、189、305、379和475的一個至7個(例如1、2、3、4、5、6或7個)位置上包含取代；并且其中所述位置是對應(yīng)SEQ ID NO :2所述的參照α淀粉酶的氨基酸序列編號的。在另一個實施方案中，α淀粉酶變體源自選自BASE、ACE、ACE-Q和ACE-QK的親本α淀粉酶。在優(yōu)選的實施方案中，α淀粉酶變體源自這樣的親本α淀粉酶，所述親本α淀粉酶的氨基酸序列與由 SEQ ID NO 2,SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO :10, SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :12、SEQ ID NO :13 和 SEQ ID NO :14 組成的組的任一成員至少 75% (優(yōu)選 80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、 98%或99% )相同。在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述取代包括1至7個的X160E、X182G、X183N、X189P、X305G、X379E和X475T。在這些實施方案的子集中，取代包括1至7個(例如，1、2、3、4、5、6 或 7 個)的 Y160E、T182G、G183N、E189P、Y305G、P379E 和 G475T。在一些實施方案中，變體是具有淀粉酶活性的成熟形式，并且在選自125、182、 214、279、305、319、320和475的一個至八個(例如1、2、3、4、5、6、7或8個)位置上包含取代；并且其中所述位置是對應(yīng)SEQ ID NO :2所述的參照α淀粉酶的氨基酸序列編號的。在另一個實施方案中，α淀粉酶變體源自選自BASE、ACE、ACE_Q和ACE-QK的親本α淀粉酶。 在優(yōu)選的實施方案中，α淀粉酶變體源自這樣的親本α淀粉酶，所述親本α淀粉酶的氨基酸序列與由 SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :12、SEQ ID NO 13 和 SEQ ID NO 14 組成的組的任一成員至少 75% (優(yōu)選80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%或99%)相同。在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述取代包括1至8個的X125A、 X182A、X214Q、X279N、X305R、X319T、X320N和X475R。在這些實施方案的子集中，取代包括 1 至 8 個(例如，1、2、3、4、5、6、7 或 8 個)的 S125A、T182A、T214Q、T279N、Y305R、D319T、 Q320N 和 G475R。在一些實施方案中，變體是具有淀粉酶活性的成熟形式，并且在選自7、182、298、 376、379、407、419和453的一個至八個(例如1、2、3、4、5、6、7或8個)位置上包含取代；并且其中所述位置是對應(yīng)SEQ ID NO :2所述的參照α淀粉酶的氨基酸序列編號的。在另一個實施方案中，α淀粉酶變體源自選自BASE、ACE、ACE_Q和ACE-QK的親本α淀粉酶。在優(yōu)選的實施方案中，α淀粉酶變體源自這樣的親本α淀粉酶，所述親本α淀粉酶的氨基酸序列與由 SEQ ID N0:2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、 SEQ ID NO 10,SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 12,SEQ ID N0:13 禾口 SEQ ID N0:14 組成的組的任一成員至少 75% ( 80%,85%,90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98% 或99%)相同。在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述取代包括1至8個的X7H、X182W、X298Q、 X376R、X379K、X407W、X419S和X453W。在這些實施方案的子集中，取代包括1至8個(例如，1、2、3、4、5、6、7 或 8 個)的 E7H、T182W、T298Q、Y376R、P379K、Q407W、T419S 和 L453W。在一些實施方案中，變體是具有淀粉酶活性的成熟形式，并且在選自128、178、182 和185的一個至四個(例如1、2、3或4個)位置上包含取代，并且所述α淀粉酶變體包括在243位的絲氨酸或谷氨酰胺，并且其中所述位置是對應(yīng)SEQ ID NO :2所述的參照α淀粉酶的氨基酸序列編號的。在一個實施方案中，α淀粉酶變體源自選自BASE、ACE、ACE-Q和 ACE-QK的親本α淀粉酶。在優(yōu)選的實施方案中，α淀粉酶變體源自這樣的親本α淀粉酶，所述親本α淀粉酶的氨基酸序列與由SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID N0:7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID N0:10、SEQ ID NO :11、SEQ ID N0:12、SEQ ID N0:13和SEQ ID NO :14組成的組的任一成員至少75% (優(yōu)選80%、85%、90%、91 %、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99% )相同。在另一個實施方案中，所述取代包括 1 至4個(例如 1、2、3 或4 個)的 N128C、K178L、T182G 和 A185D。在一些實施方案中，變體是具有淀粉酶活性的成熟形式，并且在選自125、182、 183、189、279、305、319、379 和 475 的一個至九個(例如 1、2、3、4、5、6、7、8 或 9 個)位置上包含取代，并且所述α淀粉酶變體包括在320位的谷氨酰胺、苯丙氨酸或天冬酰胺，并且其中所述位置是對應(yīng)SEQ ID NO :2所述的參照α淀粉酶的氨基酸序列編號的。在一個實施方案中，α淀粉酶變體源自選自BASE、ACE、ACE-Q和ACE-QK的親本α淀粉酶。在優(yōu)選的實施方案中，α淀粉酶變體源自這樣的親本α淀粉酶，所述親本α淀粉酶的氨基酸序列與由 SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :12、SEQ ID NO 13 和 SEQ ID NO 14 組成的組的任一成員至少 75% (優(yōu)選 80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、 98%或99% )相同。在另一個實施方案中，所述α淀粉酶變體包括在125位的絲氨酸或丙氨酸；在182位的蘇氨酸、天冬酰胺、甘氨酸或丙氨酸；在183位的甘氨酸或天冬酰胺；在 189位的谷氨酸或脯氨酸；在279位的蘇氨酸或天冬酰胺；在305位的酪氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸或精氨酸；在319位的天冬氨酸或蘇氨酸；在379位的脯氨酸或丙氨酸；和在475位的甘氨酸、蘇氨酸或精氨酸；并且其中所述位置是對應(yīng)SEQ ID NO :2所述的參照α淀粉酶的氨基酸序列編號的。在一些實施方案中，變體是具有淀粉酶活性的成熟形式，并且在選自125、128、 178、182、183、189、279、305、319、379 和 475 的一個至4^一個(例如 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 或11個)位置上包含取代，并且所述α淀粉酶變體包括在243位的絲氨酸或谷氨酰胺，和 320位的谷氨酰胺、苯丙氨酸或天冬酰胺，并且其中所述位置是對應(yīng)SEQ ID NO :2所述的參照α淀粉酶的氨基酸序列編號的。在一個實施方案中，α淀粉酶變體源自選自BASE、ACE、 ACE-Q和ACE-QK的親本α淀粉酶。在優(yōu)選的實施方案中，α淀粉酶變體源自這樣的親本 α淀粉酶，所述親本α淀粉酶的氨基酸序列與由SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :11、SEQ ID NO 12,SEQ ID NO :13和 SEQ ID NO :14組成的組的任一成員至少 75% (優(yōu)選80%、85%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%)相同。在另一個實施方案中，所述α 淀粉酶變體包括在125位的絲氨酸或丙氨酸；在1 位的天冬酰胺或半胱氨酸；在178位的賴氨酸或亮氨酸；在182位的蘇氨酸、天冬酰胺、甘氨酸或丙氨酸；在183位的甘氨酸或天冬酰胺；在189位的谷氨酸或脯氨酸；在279位的蘇氨酸或天冬酰胺；在305位的酪氨酸、 谷氨酰胺、甘氨酸或精氨酸；在319位的天冬氨酸或蘇氨酸；在379位的脯氨酸或丙氨酸； 和在475位的甘氨酸、蘇氨酸或精氨酸；并且其中所述位置是對應(yīng)SEQ ID NO :2所述的參照α淀粉酶的氨基酸序列編號的。在另一個優(yōu)選的實施方案中，取代選自m^C、T131I、 T134P、Q138E、Y160I、T165I、T165V、K178L、T182A、T182C、T182D、T182M、T182F、T182N、 T182G、T182P、T182Q、A185D、A185E、E189P、S243D、S243E 和 S243Q。使用示例性α淀粉酶作為起點，即“骨架”，制備和測試剛剛描述過的氨基酸突變，然而，可以理解可以在相關(guān)的α淀粉酶中制造等價的氨基酸突變，在所述相關(guān)的α淀粉酶中突變預(yù)期制造相似的效應(yīng)和產(chǎn)生相似的優(yōu)點。其他用作骨架的示例性的α淀粉酶包括但不限于本文中鑒別的那些。本公開內(nèi)容進(jìn)一步提供了編碼任一前述篇幅中的α淀粉酶變體的分離的核酸。 在一個實施方案中，包括了這樣的表達(dá)載體，所述載體包含與啟動子有效組合的分離的核酸。在另一個實施方案中，包括了包含所述表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。另一個實施方案提供了生產(chǎn)α淀粉酶變體的方法，包括用包含編碼α淀粉酶變體的核酸的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞；和在適合生產(chǎn)所述α淀粉酶變體的條件下培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。另一個實施方案還包括收獲所生產(chǎn)的α淀粉酶變體的步驟。另一個實施方案包括芽孢桿菌屬物種作為宿主細(xì)胞，且在另一個實施方案中，所述芽孢桿菌屬物種是枯草芽孢桿菌。在一些實施方案中，清潔組合物包括α淀粉酶、蛋白酶、至少一種可以是其他淀粉酶或其他蛋白酶的其他酶。在一個實施方案中，其他的酶是中性金屬蛋白酶、天冬氨酰蛋白酶、脂肪酶、角質(zhì)酶、糖酶、纖維素酶、果膠酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶、過氧化氫酶、果膠酸裂合酶和/或過氧化物酶。在另一個實施方案中，清潔組合物是洗衣去垢劑，在另一個實施方案中，清潔組合物是餐具洗滌去垢劑。在另一個實施方案中，清潔組合物是含漂白劑的洗衣和/或餐具洗滌去垢劑。在另一個實施方案中，清潔組合物是用于織品的預(yù)處理，例如在洗滌之前應(yīng)用。在另一個實施方案中，清潔組合物是洗衣去垢劑或餐具洗滌去垢劑的添加物。本公開內(nèi)容還提供了清潔的方法，包括將包含織品的表面和/或物體與包含所述α淀粉酶變體的清潔組合物接觸的步驟。在一個實施方案中， 方法是餐具洗滌方法，包括步驟提供i)餐具洗滌組合物，和ii)需要清潔的餐具；和在有效提供餐具清潔的條件下將餐具與餐具洗滌組合物接觸。在另一個實施方案中，方法是織品清潔方法，包括步驟提供i)織品清潔組合物，和ii)需要清潔的衣物；和在有效提供衣物清潔的條件下將衣物與織品清潔組合物接觸。在另一個實施方案中，方法涉及將材料從機(jī)織織物(woven fabrics)中的紗線上去除，如在紡織品脫漿(textile desizing)的情況下。根據(jù)本說明書，組合物和方法的上述各個方面和實施方案是顯而易見的。附圖的簡要說明

圖1提供了 SEQ ID NO :2和5_14分別所述的各種參照淀粉酶的成熟形式的比對。 使用 MUSCLE 3. 7 多重序列比對算法(Edgar，Nucleic Acids Research, 32 1792-1797, 2004)比對序列。圖2提供了含有地衣芽孢桿菌(B. lichenif0rmis)LAT啟動子(Plat)和來自 pUB 110 (McKenzie等人，Plasmid, 15 =93-103,1986)的其他元件的pHPLT載體的圖，所述其他元件包括復(fù)制酶基因(r印pUB)、新霉素/卡那霉素抗性基因(neo)和博來霉素抗性標(biāo)志物(bleo)。圖3提供了 pHPLT-BASE質(zhì)粒的圖。圖4 提供了 pHPLT-ACE-S243Q 質(zhì)粒的圖。圖5提供了顯示多個α淀粉酶在洗衣去垢劑應(yīng)用中的洗滌性能的圖表。所測試的酶如下W9 (BASE-S125A-N128C-K178L-T182G-S243Q-T279N-D319T-Q320N-G475R) ；WlO ( BASE-N128C-K178L-T182G-S243Q-Y305R-D319T-G475R) ；Wll (BASE-S125A-N128C-K178L-T1 82G-S243Q-Y305R-G475R ；和 ACE-S243Q-G475K)。圖6提供了顯示多個α淀粉酶在洗衣去垢劑應(yīng)用中的洗滌性能的圖表。所測試的酶如下BASE-X8C、BASE-W10EK、ACE-QK和對照(基準(zhǔn)的商業(yè)酶)。圖7A提供了顯示在ACE α淀粉酶和BPN' Y217L枯草桿菌蛋白酶在洗衣應(yīng)用中的協(xié)同作用的圖表。圖7Β提供了顯示在ACE-S243Q-G475K(ACE-QK) α淀粉酶和BPN' Y217L 枯草桿菌蛋白酶在洗衣應(yīng)用中的協(xié)同作用的圖表。圖 8 提供了顯示在 BASE-X8C(W11-T131I-T165I) α 淀粉酶和 BPN' Y217L 枯草桿菌蛋白酶在洗衣應(yīng)用中的協(xié)同作用的圖表。圖 9 提供了顯示在 BASE WlOEK(BASE-N128C-K178L-T182G-S243E-Y305R-D319T-G475K) α淀粉酶和BPN' Y217L枯草桿菌蛋白酶在洗衣應(yīng)用中的協(xié)同作用的圖表。圖10提供了顯示在ACE-SM3Q_G47^((ACE-QK) α淀粉酶和BPN' Y217L枯草桿菌蛋白酶在洗衣應(yīng)用中的協(xié)同作用的圖表。詳細(xì)說明描述了涉及芽孢桿菌屬α淀粉酶和蛋白酶的組合物和方法。組合物和方法對于冷水型清潔應(yīng)用特別有效，例如餐具洗滌(包括自動餐具洗滌)和洗衣。在一些情況下，組合物和方法涉及變體α淀粉酶。所述清潔組合物和方法，以及變體的各個特征將詳細(xì)的描述如下。1、α淀粉酶變體的定義和系統(tǒng)命名本文中除非另外定義，則本文中使用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語都具有與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員常規(guī)理解的相同的含義。Singleton等人，DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY，第 2 版，John Wiley 和 Sons，New York(1994)和 Hale&Markham，THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY, Harper Perennial, NY(1991)為本領(lǐng)域技術(shù)人員提供了本文使用的許多術(shù)語的通用字典。所述組合物和方法的一些方面取決于基因工程和分子生物學(xué)領(lǐng)域使用的常規(guī)技術(shù)和方法。下列資源包括了可用于本組合物和方法中的通用方法學(xué)的描述=Sambrook等人，MOLECULAR CLONING A LABORATORY MANUAL (第 2 版，1989) ；Kreigler, GENE TRANSFER AND EXPRESSION ；A LABORATORY MANUAL (1990)和 Ausubel 等人編輯，CURRENT PROTOCOLS IN MOLE⑶LAR BIOLOGY(1994)。這些一般性參考文獻(xiàn)提供了本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的定義和方法。然而，本組合物和方法并非意在限于所描述的任何特定的技術(shù)、規(guī)程和試劑，這是可以改變的。雖然任何與本文所述的相似或等價的方法和材料都可用于實踐或測試本組合物和方法，但優(yōu)選的方法和材料描述如下。當(dāng)描述蛋白質(zhì)及其編碼基因時，基因的名稱一般是斜體且非大寫的，而蛋白質(zhì)的名稱一般是非斜體且首字母大寫。除非文中明確地另外指出，單數(shù)形式“一個”和“這個”包含了復(fù)數(shù)含義。因此，例如，指代“酶”包括了復(fù)數(shù)的此種酶，指代“制劑”包括了指代本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的一個或多個制劑及其等價物，如此類推。本文中提及的所有專利和出版物，包括此類專利和出版物中公開的所有序列，都通過引用清楚地并入到本文中。1.1 定義出于清楚的目的，定義下列術(shù)語。本文所用的術(shù)語“淀粉”指包含植物復(fù)合多糖糖類的任意物質(zhì)，其包含具有化合式 (C6HltlO5)x(其中X可以是任意數(shù)字)的直鏈淀粉和支鏈淀粉。具體而言，該術(shù)語指任意基于植物的物質(zhì)，其包括但不限于谷粒、草、塊莖和根，更具體而言是小麥、大麥、玉米、黑麥、稻、 高粱、麩、木薯、小米、馬鈴薯、甘薯和木薯(tapioca)。如本文所使用，“淀粉酶”指能夠催化淀粉降解的酶。通常，α -淀粉酶(EC3. 2. 1. 1 ； α-D-(1 — 4)-葡聚糖葡聚糖水解酶)是以隨機(jī)方式切割淀粉分子內(nèi)a-D-α —4)0-糖苷鍵的內(nèi)切酶。與此相反，外切淀粉分解酶如β-淀粉酶(EC3. 2. 1.2;a-D-(l —4)-葡聚糖麥芽糖水解酶)和一些產(chǎn)物特異性淀粉酶如產(chǎn)麥芽糖a -淀粉酶(EC3. 2. 1. 133)從底物的非還原端切割淀粉分子。β -淀粉酶、α -葡糖苷酶(EC3. 2. 1. 20 ； α -D-葡糖苷葡糖水解酶)、葡糖淀粉酶(EC3. 2. 1.3 ;a-D-(1 — 4)-葡聚糖葡糖水解酶)，以及產(chǎn)物特異性淀粉酶可以從淀粉產(chǎn)生特定長度的低聚麥芽糖(malto-oligosaccharides)。如本文所使用，淀粉酶包含任意/所有淀粉酶，其包含葡糖淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶和野生型α-淀粉酶，如芽孢桿菌屬物種，例如地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的那些，而α -淀粉酶包含這些酶的前述子集。 如本文中使用的，“芽孢桿菌屬物種菌株TS-23 α -淀粉酶”和類似的詞組，指源自芽孢桿菌屬物種菌株TS-23的α-淀粉酶。編碼所述α-淀粉酶的基因可以是編碼所述 α -淀粉酶的野生型基因或密碼子優(yōu)化的多核苷酸。芽孢桿菌屬物種菌株TS-23的成熟的 α -淀粉酶(按從氨基至羧基的方向)是(SEQ ID NO 1)NTAPINETMMQYFEffDLPNDGTLffTKVKNEAANLSSLGITALffLPPAYKG50
TSQSDVGYGVYDLYDLGEFNQKGTIRTKYGTKTQYIQAIQAAKAAGMQVY100
AD WFNHKAGADGTEFVDAVEVDPSNRNQETSGTYQIQAffTKFDFPGRGN150
TYSSFKffRffYHFDGTDffDESRKLNRIYKFRSTGKAffDffEVDTENGNYDYL200
MFADLDMDHPEVVTELKNWGTffYVNTTNIDGFRLDAVKHIKYSFFPDffLT250
YVRNQTGKNLFAVGEFffSYDVNKLHNYITKTNGSMSLFDAPLHNNFYTAS300
KSSGYFDMRYLLNNTLMKDQPSLAVTLVDNHDTQPGQSLQSffVEPffFKPL350
AYAFILTRQEGYPCVFYGDYYGIPKYNIPGLKSKIDPLLIARRDYAYGTQ400
RDYIDHQDIIGffTREGIDTKPNSGLAALITDGPGGSKWMYVGKKHAGKVF450
YDLTGNRSDTVTINADGffGEFKVNGGSVSIWVAKTSNVTFTVNNATTTSG500
QNVYVVANIPELGNWNTANAIKMNPSSYPTWKATIALPQGKAIEFKFIKK550
DQAGNVIffESTSNRTYTVPFSSTGSYTASffNVP583如本文所使用，“ α _淀粉酶變體”及類似的短語指參照α -淀粉酶的變體/突變體，就該參照α-淀粉酶的親本(野生型；參考)氨基酸序列而言，其包含氨基酸取代、插入和/或缺失。術(shù)語“變體”與術(shù)語“突變體”可互換使用。就親本信號序列而言，變體α-淀粉酶可在信號序列中包含突變。此外，變體α-淀粉酶可以是含有異源α-淀粉酶信號序列(如來自地衣芽孢桿菌(LAT))的融合蛋白質(zhì)的形式。如本文中使用的，詞組“親本芽孢桿菌屬物種菌株TS-23 α-淀粉酶”、“野生型芽孢桿菌屬物種菌株TS-23 α -淀粉酶”、“參照芽孢桿菌屬物種菌株TS-23 α -淀粉酶”和類似的詞組，指芽孢桿菌屬物種菌株TS-23的多肽。出于便利，術(shù)語可以是縮寫的“親本酶”、“野生型酶”、“親本多肽”、“參照多肽”等。親本芽孢桿菌屬物種菌株TS-23 α -淀粉酶可在親本多肽的信號序列中包含突變。此外，親本芽孢桿菌屬物種菌株TS-23 α-淀粉酶可以是包含異源性α-淀粉酶信號序列的融合蛋白的形式，例如來自地衣芽孢桿菌的信號序列(LAT)。如本文中使用的，“親本核酸/多核苷酸”、“野生型核酸/多核苷酸”或“參照核酸 /多核苷酸”指編碼親本多肽的核酸序列及與其互補(bǔ)的核酸。如本文所使用的，“變體核酸/多核苷酸”指編碼變體多肽的核酸序列或與其互補(bǔ)的核酸，或就親本多核苷酸序列或與其互補(bǔ)的核酸而言具有至少一個堿基取代、插入或缺失的多核苷酸序列。指定時，此類核酸可以包含與參考序列具有指定程度的同一性的序列， 或能夠例如在嚴(yán)格條件[例如，50°C禾口 0. 2X SSC(1X SSC = 0. 15M NaCl, 0. 015M檸檬酸三鈉，pH7. 0)]或高度嚴(yán)格條件[例如，65°C 和 0. IX SSC (IX SSC = 0. 15M NaCl，0. 015M 檸檬酸三鈉，pH7. 0)]下與參考序列雜交的序列?？梢詢?yōu)化變體核酸以反映用于指定的宿主生物，如甲基營養(yǎng)酵母(例如畢赤酵母屬(Pichia)、漢遜酵母屬(Hansenula)等)或絲狀真菌(例如木霉屬(Trichoderma)(例如里氏木霉(T.reesei))等)或其他表達(dá)宿主(例如芽孢桿菌屬(Bacillus)、鏈霉菌屬(Sti^ptomyces)等)的優(yōu)選的密碼子選擇。如本文中所使用的，當(dāng)用于提到主題細(xì)胞、核酸、蛋白質(zhì)或載體時，術(shù)語“重組體” 指已通過異源核酸或蛋白質(zhì)的引入或天然核酸或蛋白質(zhì)的改變修飾該主題，或指該細(xì)胞衍生自經(jīng)這樣修飾的細(xì)胞。因此，例如，重組細(xì)胞表達(dá)不見于該細(xì)胞的天然(非重組體)形式內(nèi)的基因或表達(dá)否則將異常表達(dá)、低表達(dá)或完全不表達(dá)的天然基因。如本文中所使用的，術(shù)語“回收的”、“分離的”和“分開的”指從至少一種其天然與之結(jié)合和見于自然界中的成分移出的化合物、蛋白質(zhì)、細(xì)胞、核酸或氨基酸。本文所用的術(shù)語“純化的”指處于相對純的狀態(tài)的，例如至少約90%純的，至少約 95%純的，至少約98%純的，或甚至至少約99%純的物質(zhì)(例如分離的多肽或多核苷酸)。本文所用的術(shù)語“熱穩(wěn)定的”和“熱穩(wěn)定性”指酶暴露于升高的溫度后保持活性的能力。通過其以分鐘、小時或天給出的半衰期(t1/2)測量酶，如α-淀粉酶的熱穩(wěn)定性，在限定的條件下，酶活性在半衰期內(nèi)喪失一半?？梢酝ㄟ^在暴露于(即通過其攻擊)升高的溫度后測量殘留的α-淀粉酶活性來計算半衰期。本文所用的“ρΗ范圍”指酶顯示催化活性的ρΗ值的范圍。本文所用的術(shù)語“ρΗ穩(wěn)定的”和“ρΗ穩(wěn)定性”指酶在大范圍的ρΗ值保持活性預(yù)定的時期(例如15分鐘、30分鐘、1小時等)的能力。本文所用的術(shù)語“氨基酸序列”與術(shù)語“多肽”、“蛋白質(zhì)”和“肽”是同義詞，可互換使用。這種氨基酸序列顯示活性時，可將它們稱為“酶”。本文使用氨基酸殘基的常規(guī)單字母或三字母密碼。本文所用的術(shù)語“核酸”涵蓋能夠編碼多肽的DNA、RNA、異源雙鏈體和合成分子。 核酸可以是單鏈的或雙鏈的，且可以是化學(xué)修飾的。術(shù)語“核酸”和“多核苷酸”可互換使用。因為遺傳密碼是簡并的，所以可用一個以上密碼子編碼特定的氨基酸，本組合物和方法涵蓋編碼特定氨基酸序列的核苷酸序列。除非另作說明，分別以5'至3'的方向從左至右書寫核酸；以氨基至羧基的方向從左至右書寫氨基酸序列。本文所用的術(shù)語“同源物”指與參考氨基酸或核苷酸序列具有某種程度的同一性， 或具有另一指定的共同結(jié)構(gòu)或功能特征的氨基酸或核苷酸序列。同源序列用來包含這樣的氨基酸序列，使用常規(guī)序列比對工具(例如Clustal、BLAST等)，其與主題序列具有至少 75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%或甚至99%同一性。通常，除非另作指定，同源物將包含與主題氨基酸序列相同的活性位點殘基。如本文所使用，“雜交”指一條核酸鏈通過其與互補(bǔ)鏈形成堿基配對的方法，如印跡雜交技術(shù)和PCR技術(shù)過程中所發(fā)生。如本文所使用，通過體外化學(xué)或酶促合成產(chǎn)生而非通過生物產(chǎn)生“合成”分子。如本文所使用，用來談?wù)摷?xì)胞時，術(shù)語“轉(zhuǎn)化的”、“穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的，，和“轉(zhuǎn)基因的，，指該細(xì)胞具有整合入其基因組或作為保持多代的附加型質(zhì)粒攜帶的非天然(例如異源的)核酸序列。在將核酸序列插入細(xì)胞的背景中，術(shù)語“引入”指本領(lǐng)域已知的“轉(zhuǎn)染”、“轉(zhuǎn)化”或
“轉(zhuǎn)導(dǎo)”。本文所用的術(shù)語“宿主菌株”或“宿主細(xì)胞”是指已將包含編碼目的多肽(例如變體α-淀粉酶)的多核苷酸的表達(dá)載體、噬菌體、病毒或其他DNA構(gòu)建體引入其中的生物。 示例性宿主菌株是細(xì)菌細(xì)胞。術(shù)語“宿主細(xì)胞”包含從細(xì)胞，如芽孢桿菌屬物種的細(xì)胞產(chǎn)生的原生質(zhì)體。提到多核苷酸或蛋白質(zhì)時，本文所用的術(shù)語“異源的”指并非天然存在于宿主細(xì)胞中的多核苷酸或蛋白質(zhì)。提到多核苷酸或蛋白質(zhì)時，本文所用的術(shù)語“內(nèi)源的”指天然存在于宿主細(xì)胞中的多核苷酸或蛋白質(zhì)。如本文所使用，術(shù)語“表達(dá)”指通過其來根據(jù)基因的核酸序列產(chǎn)生多肽的方法。該方法包括轉(zhuǎn)錄和翻譯二者。本文所用的“選擇性標(biāo)記”或“選擇標(biāo)記”指能夠在宿主中表達(dá)以便于選擇攜帶該基因的宿主細(xì)胞的基因。選擇標(biāo)記的實例包括但不限于抗微生物劑(例如潮霉素、博來霉素或新霉素)和/或賦予宿主細(xì)胞代謝優(yōu)勢，如營養(yǎng)優(yōu)勢的基因。本文所用的“培養(yǎng)”指在適宜的條件下在液體或固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)微生物細(xì)胞群體。培養(yǎng)包括發(fā)酵性生物轉(zhuǎn)化含有顆粒淀粉的淀粉底物為終產(chǎn)物(通常在容器或反應(yīng)器中)。本文所用的“發(fā)酵”是通過微生物酶促降解有機(jī)物來產(chǎn)生更簡單的有機(jī)化合物。雖然發(fā)酵通常發(fā)生于厭氧條件下，但此術(shù)語并非旨在僅限于嚴(yán)格的厭氧條件，因為在氧氣存在下也發(fā)生發(fā)酵。本文所用的“基因”指涉及產(chǎn)生多肽的DNA片段，并包含編碼區(qū)、編碼區(qū)之前和之后的區(qū)域和單個編碼片段(外顯子)間的間插序列(內(nèi)含子)。本文所用的“載體”指設(shè)計用于將核酸引入一種或多種細(xì)胞類型的多核苷酸序列。 載體包含克隆載體、表達(dá)載體、穿梭載體、質(zhì)粒、噬菌體顆粒、盒等。本文所用的“表達(dá)載體”指包含編碼目的多肽的DNA序列的DNA構(gòu)建體，該DNA序列與能夠影響該DNA在適宜的宿主中表達(dá)的適宜的控制序列有效連接。此類控制序列可以包含影響轉(zhuǎn)錄的啟動子、控制轉(zhuǎn)錄的可選的操縱基因序列、編碼mRNA上適宜的核糖體結(jié)合位點的序列、增強(qiáng)子和控制轉(zhuǎn)錄和翻譯終止的序列。本文所用的“啟動子”是涉及結(jié)合RNA聚合酶以起始基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控序列。啟動子可以是誘導(dǎo)型啟動子或組成型啟動子。示例性啟動子是地衣芽孢桿菌α -淀粉酶(AmyL) 啟動子。本文所用的術(shù)語“有效連接”指指定的成分處于允許它們以預(yù)期的方式發(fā)揮功能的關(guān)系(包括但不限于毗連)中。例如，與編碼序列有效連接的調(diào)控序列將如此連接，使得該編碼序列的表達(dá)處于該調(diào)控序列的控制下。本文所用的術(shù)語“處于轉(zhuǎn)錄控制下”指多核苷酸序列(通常是DNA序列)的轉(zhuǎn)錄依賴于其與促成轉(zhuǎn)錄起始或促進(jìn)轉(zhuǎn)錄的元件有效連接。本文所用的術(shù)語“處于翻譯控制下”指多核苷酸序列(通常是RNA序列)翻譯為多肽依賴于其與促成翻譯起始或促進(jìn)翻譯的元件有效連接。如本文中使用的，“信號序列”是附著在蛋白質(zhì)的N端部分的氨基酸序列，其有利于蛋白質(zhì)分泌到細(xì)胞外。胞外蛋白質(zhì)的成熟形式缺少信號序列，其在分泌過程中被切除。如本文中使用的，“生物學(xué)活性的”指序列具有特定的生物學(xué)活性，例如酶活性。在本發(fā)明的淀粉酶的情況下，所述活性是α -淀粉酶活性。如本文中使用的，“水硬度”是對水中存在的礦物質(zhì)(例如，鈣和鎂)的量度。如本文中使用的，術(shù)語“冷水”指溫度低于約25°C的水。具體而言，冷水指溫度低于約20°C的水。示例性的冷水范圍是從約15°C至約25°C，從約15°C至約20°C。如本文中使用的，術(shù)語“性能指數(shù)(PI) ”指變體性能與親本或參照淀粉酶的比值。 性能(即，特性)的測量包括熱穩(wěn)定性、清潔性能、表達(dá)水平等，根據(jù)上下文是顯而易見的。如本文中使用的，改善性能的突變被稱為“上升突變(up mutation) ”，對于特定的特性具有PI > 1?！爸行酝蛔儭睂τ谔囟ǖ奶匦跃哂蠵I >0.5?！盁o害突變”對于特定的特性具有PI >0.05?！坝泻ν蛔儭睂τ谔囟ǖ奶匦跃哂蠵I <0.05?！敖M合突變”對于至少一種特性具有PI ^ 0. 5，且對于所有特性具有PI > 0. 05。組合突變可以在同一個變體中共存，產(chǎn)生具有至少一種有益特性的酶。如本文中使用的，術(shù)語“活性測量”指測量本文所述的酶活性。此類活性測量包括在PH8下的清潔性能、pHIO下的清潔性能、16°C下的清潔性能、32°C下的清潔性能和使用合成底物的活性。如本文中使用的，術(shù)語“穩(wěn)定性測量”指測量本文所述的酶穩(wěn)定性。此類穩(wěn)定性測量包括在去垢劑中的穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性。如本文中使用的，術(shù)語“共同配制”意指對象成分(例如酶)共存于同一液體、半固體或干燥的組合物中。如本文中使用的，“糖化作用”是指淀粉向葡萄糖的酶促轉(zhuǎn)化。如本文中使用的，“膠凝作用”指通過蒸煮溶解淀粉分子形成粘稠的懸浮液。如本文中使用的，“液化”指淀粉轉(zhuǎn)化中的階段，其中膠凝作用的淀粉水解產(chǎn)生低分子量的可溶性糊精。如本文中使用的，術(shù)語“初級液化”指漿液的溫度升高或接近其膠凝作用溫度時的液化步驟。在溫度升高后，將漿液通過熱交換器或噴射至200-300° F的溫度，例如 220-235° F。在用于熱交換器或噴射溫度后，將漿液在所述溫度下保持3-10分鐘的時間段。保持漿液在200-300° F的這一步驟就是初級液化。如本文中使用的，術(shù)語“次級液化”指在初級液化(加熱至200-300° F)之后的液化步驟，此時允許漿液冷卻至大氣溫度。該冷卻步驟可以是30分鐘至180分鐘(3小時)， 例如90分鐘至120分鐘(2小時)。如本文中使用的，術(shù)語“次級液化的分鐘數(shù)”指從開始次級液化時至測量DE時已流逝的時間。如本文中使用的，術(shù)語“聚合度(DP) ”指給定糖類中的無水呋喃葡萄糖單位的數(shù)目。DPl的實例是單糖，例如葡萄糖和果糖。DP2的實例是二糖，例如麥芽糖和蔗糖。DP > 3表示具有聚合度大于3的聚合物。如本文中涉及淀粉轉(zhuǎn)化時使用的，術(shù)語“終產(chǎn)物”或“理想的終產(chǎn)物”指從淀粉底物酶促轉(zhuǎn)化成的具體的碳源來源的分子。如本文中使用的，術(shù)語“干燥固體含量(ds)”指漿液中的總固體，以％干重表達(dá)。如本文中使用的，術(shù)語“漿液”指含有不可溶的固體的含水混合物。如本文中使用的，術(shù)語“剩余的淀粉”指在發(fā)酵或酶促水解含淀粉的底物后，組合物中剩余的淀粉(可溶的或不可溶的)。如本文所使用，“回收步驟”指醪液成分的回收，其可含有剩余的淀粉、酶和/或發(fā)酵含淀粉底物的微生物。如本文中使用的，術(shù)語“醪液”指含有可發(fā)酵碳源(例如糖類)的水性混合物，其可以用來產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物，如乙醇。術(shù)語“啤酒”和“醪液”可互換使用。如本文中使用的，術(shù)語“釜餾物”指未發(fā)酵的固體和水的混合物，其表示從發(fā)酵醪液去除醇后的殘留物。如本文中使用的，術(shù)語“干酒糟(DDG) ”和“具有可溶物的干酒糟(DDGS) ”指谷粒發(fā)酵的有用副產(chǎn)物。如本文所使用，“產(chǎn)乙醇微生物”指具有將糖或寡糖轉(zhuǎn)化為乙醇的能力的微生物。 產(chǎn)乙醇微生物由于它們表達(dá)單獨或一起將糖轉(zhuǎn)化為乙醇的一種或多種酶的能力而是產(chǎn)乙醇的。如本文所使用，術(shù)語“乙醇產(chǎn)生者”或“產(chǎn)乙醇微生物”指能夠從己糖或戊糖產(chǎn)生乙醇的任意生物或細(xì)胞。通常，產(chǎn)乙醇細(xì)胞包含醇脫氫酶和丙酮酸脫羧酶。產(chǎn)乙醇微生物的實例包含真菌微生物，如酵母。優(yōu)選的酵母包含酵母屬(Saccharomyces)菌株，尤其是釀酒酵母(S. cerevisiae)。如本文中使用的，就淀粉酶和它們的底物而言，術(shù)語“接觸”指將酶置于足夠接近底物，以使酶能夠?qū)⒌孜镛D(zhuǎn)化為終產(chǎn)物。接觸可包括混合。如本文中使用的，術(shù)語“源自”意指“起源自”、“基于”、“獲得自”、“可獲得自”或“分離自”，取決于上下文。如本文中使用的，術(shù)語“酶促轉(zhuǎn)化”一般指通過酶作用(例如，淀粉酶)對底物(例如，淀粉)的修飾。如本文所使用，術(shù)語“分解”指與生物膜中的單個微生物細(xì)胞連接和結(jié)合在一起的生物膜基質(zhì)中的多糖的水解，從而可從生物膜釋放和去除微生物細(xì)胞。如本文中使用的，“樣片(swatch) ”是可以在其上應(yīng)用污漬用于評估組合物清潔效率的一片材料，如織物。如本文中使用的，術(shù)語“比活”指在特定條件下每單位時間通過酶制劑轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的底物摩爾數(shù)。比活表示為單位(U)/mg蛋白質(zhì)。如本文中使用的，術(shù)語“產(chǎn)量”指方法生產(chǎn)的終產(chǎn)物的量，例如以濃度、體積、量或起始材料的百分比來表示。如本文中使用的，“ATCC”指位于Manassas，Va. 20108 (ATCC)的美國典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection)。如本文中使用的，“NRRL，，指 Agricultural Research Service Culture Collection,National Center for Agricultural Utilization Research(之前禾爾為USDA Northern Regional Research Laboratory), Peoria, IL0
數(shù)值范圍包括定義范圍的數(shù)。一般而言，小標(biāo)題是描述性的，并非意在限制。1. 2 侖名在本說明書和權(quán)利要求中，氨基酸殘基使用常規(guī)的單字母和三字母代碼。為了便于參照，通過使用下列命名描述本發(fā)明組合物和方法的α-淀粉酶變體原始氨基酸位置取代的氨基酸。根據(jù)這一命名，例如用丙氨酸取代242位的絲氨酸顯示為Ser242Ala或S242A。刪除30位的丙氨酸顯示為Ala30 *或A30 *或ΔΑ30。插入額外的氨基酸殘基，如賴氨酸， 顯示為Ala30AlaLys 或 A30AK。刪除連續(xù)一段的氨基酸殘基，例如氨基酸殘基30-33，標(biāo)示為(30-33) *或 Δ (Α30-Ν33)或Δ30-33。刪除2個連續(xù)的氨基酸，如氨基酸殘基R180-S181，標(biāo)示為ARS 或 Δ 180-181。當(dāng)相比其他α-淀粉酶，特定的α-淀粉酶含有“刪除”，且在該位置產(chǎn)生插入時， 標(biāo)示為對于36位插入天冬氨酸則標(biāo)示為36Asp或* 36D。通過加號或減號分隔多個突變Ala30Asp+Glu34Ser或A30N+E34S， Ala30ASp-Glu34Ser或A30N-E34S，表示30和34位的突變分別是用天冬酰胺和絲氨酸取代
丙氨酸和谷氨酸。當(dāng)一個或多個可選的氨基酸殘基可以取代給定位置的殘基時，標(biāo)示為A30N、E或 A30N 或 A30E。此外，當(dāng)本文鑒別的適合進(jìn)行修飾的位置沒有提示任何特定的修飾時，理解為可以用任何氨基酸殘基取代所述位置存在的氨基酸殘基。因此，例如當(dāng)提到30位的丙氨酸的修飾但未說明時，理解為所述丙氨酸可以被刪除或被任何其他的氨基酸取代，即，R、N、D、A、 C、Q、E、G、H、I、L、K、Μ、F、P、S、Τ、W、Y、V 中的任一種。此外，“Α30Χ”意指任一種下列取代:A30R、A30N、A30D、A30C、A30Q、A30E、A30G、 A30H、A30I、A30L、A30K、A30M、A30F、A30P、A30S、A30T、A30W、A30Y 或 A30V ；或簡寫為A30R、 N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、Μ、F、P、S、Τ、W、Y、V。使用下列命名來表示非特定的親本淀粉酶的位置上的氨基酸殘基，其中，所述位置根據(jù)SEQ ID NO :2所述的參照α -淀粉酶的氨基酸序列編號例如“Χ30Ν”或“Χ30Ν、V” 的情況下，變體淀粉酶的30位存在N或V之一，而親本淀粉酶(例如，野生型或變體酶)中存在20種標(biāo)準(zhǔn)氨基酸之一。1. 3氨基酸殘基的特征帶電的氨基酸包括ASp、GlU、Arg、LyS和His。帶負(fù)電荷氨基酸(首先是具有最多負(fù)電的殘基)是Asp和Glu。帶正電荷氨基酸(首先是具有最多正電的殘基)是Arg、Lys 和 His。中性氨基酸包括Gly、Ala、Val、Leu、lie、Phe、Tyr、Trp、Met、Cys、Asn、Gin、Ser, Thr 禾口 Pro。疏水性氨基酸殘基(具有最大疏水性的殘基列舉在最后)包括Gly、Ala、Val、 Pro、Met、Leu、lie、Tyr> Phe 禾口 Trp0親水性氨基酸殘基(具有最大親水性的殘基列舉在最后)包括Thr、Ser、CyS、Gln禾口 Asn01. 4同源件(同一件)與另一種序列具有特定百分比(例如，75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、 86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或甚至 99% ) 的序列同一性的多核苷酸或多肽意指比對時，在比較兩條序列中堿基或氨基酸殘基的百分比是相同的?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的任何合適的軟件程序來確定這一比對和百分比同源性或同一'性，例如 CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY(F. Μ. Ausubel 等人， (編輯)1987，Supplement 30，7. 7. 18節(jié))中描述的那些。優(yōu)選的程序包括Vector NTI AdvanceTM 9. 0 (InVitrogen Corp. Carlsbad，CA)、GCG Pileup 程序、FASTA (Pearson 等人， (1988) Proc. Natl, Acad. Sci USA85 2444-2448)和 BLAST (BLAST Manual, Altschul 等人， Natl Cent. Biotechnol. Inf. ,Natl Lib. Med. (NCIB NLM NIH)，Bethesda，Md.，和 Altschul 等人，(1997)NAR25 :3389-3402)。另一個優(yōu)選的比對程序是 ALIGN Plus (Scientific and Educational Software，PA)，優(yōu)選使用默認(rèn)參數(shù)。另一種可使用的序列軟件程序是在 Sequence Software Package Version 6. 0 (Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, WI) ΦTFASTA Data Searching Program。同源性可以確定為兩條序列之間相同的程度，表示第一序列源自第二序列。可以通過本領(lǐng)域已知的計算機(jī)程序適當(dāng)?shù)拇_定同源性，例如GCG程序包(如上所述)中提供的 GAP。因此，GAP GCG v8可使用同一性的默認(rèn)評分矩陣和下列默認(rèn)參數(shù)對于核酸序列比較分別是空位產(chǎn)生罰分為5. 0，空位延伸罰分為0. 3，對于蛋白質(zhì)序列比較分別是空位產(chǎn)生罰分為 3. 0，空位延伸罰分為 0. 1。GAP 使用 Needleman 和 Wunsch, (1970)，J. Mol. Biol. 48 443-453的方法，產(chǎn)生比對和計算同一性?？墒褂肂ASE(SEQ ID NO 2)或BASE變體與例如另一種α -淀粉酶之間的結(jié)構(gòu)性比對，來鑒別具有高度同源性的其他α -淀粉酶中的等價/相應(yīng)的位置，例如與AmyTS23 約 75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、 94%,95%,96%,97%,98%或者甚至99%。一種獲得此類結(jié)構(gòu)性比對的方法是使用GCG包中的Pile Up程序，使用空位罰分的默認(rèn)值，即空位產(chǎn)生罰分為3. 0，空位延伸罰分為0. 1。 其他的結(jié)構(gòu)性比對方法包括疏水聚類分析(Gaboriaud等人，(1987)，F(xiàn)EBS LETTERS 224， 第 149-155 頁)和逆向聯(lián)系(reverse threading) (Huber 和 Torda，PROTEIN SCIENCE，第 7 卷，第 1 期，第 142-149 頁(1998))。圖1提供了各種參照淀粉酶的成熟形式的示例性比對。參照淀粉酶包括本文中稱為AmyTS23t或BASE的截短的芽孢桿菌屬物種TS-23 α -淀粉酶，SEQ ID NO 2 (GENBANK 登錄號:ΑΑΑ63900)；本文中稱為AmyL或LAT的地衣芽孢桿菌(B. Iicheniformis) α -淀粉酶，SEQ ID NO :5 (GENBANK登錄號ΑΑΑ22240)；嗜熱脂肪地芽孢桿菌(Geobacillus stearothermophiIus)(之前的嗜熱月旨肪芽孢桿菌(Bacillus stearothermophilus)) α -淀粉酶AmyS，SEQ ID NO 6 (GENBANK登錄號AAA22241)；解淀粉芽孢桿菌 (B. amyloliquefaciens) α -淀粉酶 BACAM，SEQ ID NO 7 (GENBANK 登錄號ΑΑΑ22191)；本文中稱為AmyG6或Amy#707的芽孢桿菌屬物種#707 α -淀粉酶，SEQ ID NO 8 (GENBANK 登錄號AAA22231)；巨大芽孢桿菌(B. megaterium) α -淀粉酶 AmyG5 或 AmyBm，SEQ ID NO 9 (GENBANK 登錄號AAK00598)；芽孢桿菌屬物種 α -淀粉酶 ALBA，SEQ ID NO 10 (GENBANK 登錄號CAL48155 和 WO 2006/037484) ；B. halmapalus 淀粉酶 AmyBh，SEQ ID NO 11 (GENBANK登錄號AAE00432和美國專利號5，856，164)；芽孢桿菌屬物種淀粉酶 AA560，SEQ ID NO :12 (GENBANK 登錄號CAC16486 和 W02000/060060)；芽孢桿菌屬物種 KSM-AP1378 α -淀粉酶 AmyKSMl378, SEQ ID NO 13 (GENBANK 登錄號CAD35985 和 EP No. 1199356A)；芽孢桿菌屬物種 pHSP_K38 淀粉酶 AmyK38，SEQ ID NO 14 (GENBANK 登錄號 CAJ00040 和 W02005/045045)。使用 MUSCLE 3. 7 多重序列比對算法(Edgar, Nucleic Acids Research, 32 1792-1797, 2004)比對序列。表1提供了顯示圖1的α-淀粉酶序列比對的百分比同一性的矩陣。
權(quán)利要求
1.清潔組合物，其包含(a)α淀粉酶，其具有與SEQ ID NO :2所述氨基酸序列至少80%同一性的氨基酸序列；和(b)蛋白酶；其中，組合物提供的清潔水平大于對缺少α淀粉酶或缺少蛋白酶的相應(yīng)組合物所觀察到的水平。
2.權(quán)利要求1的清潔組合物，其中至少一種其他的酶是枯草桿菌蛋白酶。
3.權(quán)利要求2的清潔組合物，其中至少一種其他的酶是枯草桿菌蛋白酶ΒΡΝ’或其變體。
4.權(quán)利要求3的清潔組合物，其中至少一種其他的酶是枯草桿菌蛋白酶ΒΡΝ’的Y217L變體。
5.前述權(quán)利要求的任一項的清潔組合物，其還包括至少一種表面活性劑。
6.前述權(quán)利要求的任一項的清潔組合物，其還包括選自脂肪酶、角質(zhì)酶、糖酶、纖維素酶、果膠酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶、過氧化氫酶、果膠酸裂合酶和過氧化物酶的至少一種其他的酶。
7.前述權(quán)利要求的任一項的清潔組合物，其中α淀粉酶源自選自BASE、ACE、ACE-Q和 ACE-QK的親本α淀粉酶。
8.前述權(quán)利要求的任一項的清潔組合物，其中α淀粉酶是具有淀粉酶活性的變體α 淀粉酶的成熟形式，并且在選自 1、2、3、4、5、7、15、16、17、18、19、22、25、26、沘、29、30、32、 35、36、37、50、51、52、53、54、55、56、59、60、70、71、72、73、75、78、83、87、90、91、93、94、95、 104、105、107、108、110、112、113、116、118、125、126、128、129、130、131、134、136、138、142、 144、147、149、150、152、154、156、158、160、161、162、165、166、168、169、170、172、174、177、 178、182、183、185、189、192、195、197、201、202、203、207、210、214、217、221、228、234、236、 237、246、250、254、255、257、264、267、269、270、272、275、279、283、284、298、301、303、305、 306、310、311、314、318、319、320、322、323、336、337、338、339、340、344、359、374、375、376、 377、379、381、382、393、394、399、401、407、408、419、433、436、438、444、447、448、451、453、 459、465、470、475、476、483和484的一個或多個位置上包含取代；其中所述位置對應(yīng)于SEQ ID NO :2所述氨基酸序列中的氨基酸殘基；并且其中所述用不同的氨基酸殘基取代在一個或多個位置的天然存在的氨基酸殘基產(chǎn)生了具有穩(wěn)定性測量的性能指數(shù)> 1.0，和活性測量的性能指數(shù)> 1.0的α淀粉酶變體。
9.權(quán)利要求8的清潔組合物，其中變體α淀粉酶在選自7、四、35、53、60、72、87、108、 116、126、128、129、130、131、134、136、138、142、156、161、165、178、182、185、189、192、195、 197、202、210、214、217、221、234、246、269、303、310、337、340、374、401 和 438 的一個或多個位置包含取代，并且其中所述用不同的氨基酸殘基取代天然存在的氨基酸殘基產(chǎn)生了具有活性測量的性能指數(shù)> 1. 5和穩(wěn)定性測量的性能指數(shù)> 1. 0的α淀粉酶變體。
10.權(quán)利要求8的清潔組合物，其中變體α淀粉酶在選自2、7、22、25、觀、30、37、70、 75、83、87、91、93、108、128、160、165、178、182、183、217、269、270、279、283、298、305、306、 310、320、374、375、376、407、419、475和476的一個或多個位置上包含取代，其中所述用不同的氨基酸殘基取代天然存在的氨基酸殘基產(chǎn)生了具有穩(wěn)定性測量的性能指數(shù)> 1. 5和活性測量的性能指數(shù)> 1.0的α淀粉酶變體。
11.權(quán)利要求8的清潔組合物，其中變體α淀粉酶在選自83、125、128、131、160、178、 182、183、185、189、279、305、319、320、379、407、433、453、475、476 和 483 的一個或多個位置上包含取代。
12.權(quán)利要求1-7的任一項的清潔組合物，其中α淀粉酶是變體α淀粉酶的成熟形式，其在選自 83、125、128、131、160、178、182、183、185、189、279、305、319、320、379、407、 433、453、475、476和483的一個或多個位置上包含取代，其中所述位置對應(yīng)于SEQ ID NO 2所述氨基酸序列中的氨基酸殘基，并且其中所述取代提供了選自改善的清潔性能、改善的去垢劑穩(wěn)定性、改善的熱穩(wěn)定性和改善的蛋白質(zhì)表達(dá)中的至少一個有益的效果。
13.權(quán)利要求1-7的任一項的清潔組合物，其中α淀粉酶是變體α淀粉酶的成熟形式，其在選自 5、32、83、95、154、214、221、228、322、401、407、419、444、447、459、470、483 和 484的一個或多個位置上包含取代；其中所述位置對應(yīng)于SEQ ID NO :2所述氨基酸序列中的氨基酸殘基；并且其中所述用不同的氨基酸殘基取代天然存在的氨基酸殘基產(chǎn)生了這樣的α淀粉酶變體，所述變體在ΡΗ8下的活性、pHIO下的活性、16°C下的活性、和32°C下的活性的性能指數(shù)值為0. 5或更高，在去垢劑中的穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性的性能指數(shù)值為0. 5或更高。
14.權(quán)利要求8-13的任一項的清潔組合物，其中α淀粉酶變體還包含在對應(yīng)于SEQID NO 2所述氨基酸序列的243位上的取代。
15.權(quán)利要求8-13的任一項的清潔組合物，其中α淀粉酶變體還包含在對應(yīng)于SEQID NO 2所述氨基酸序列的180和/或181位上的缺失。
16.前述權(quán)利要求的任一項的清潔組合物，其中α淀粉酶變體源自具有與選自SEQID N0:2、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 10,SEQ ID N0:11、SEQ ID NO 12,SEQ ID N0:13 禾口 SEQ ID NO : 14 的氨基酸序列至少 75% 相同的氨基酸序列的親本α淀粉酶。
17.前述權(quán)利要求的任一項的清潔組合物，其中α淀粉酶變體與SEQID Ν0:2所述氨基酸序列具有至少75%的序列同一性。
18.前述權(quán)利要求的任一項的清潔組合物，其中α淀粉酶變體與SEQID Ν0:2所述氨基酸序列具有至少80%的序列同一性。
19.前述權(quán)利要求的任一項的清潔組合物，其中α淀粉酶變體與SEQID Ν0:2所述氨基酸序列具有至少90%的序列同一性。
20.前述權(quán)利要求的任一項的清潔組合物，其中所述變體在選自對應(yīng)于SEQID NO 2 所述氨基酸序列的128、178、182、185和189的一個或多個位置上包含取代，其中所述取代提供了改善的清潔性能或改善的去垢劑穩(wěn)定性。
21.前述權(quán)利要求的任一項的清潔組合物，其中所述α淀粉酶變體包括(a)在125位的丙氨酸，在128位的半胱氨酸，在131位的異亮氨酸，在165位的異亮氨酸，在178位的亮氨酸，在182位的甘氨酸， 在202位的酪氨酸， 在305位的精氨酸， 在319位的蘇氨酸，或在475位的精氨酸；(b)取代m^C+K178L+T182G+Y305R+G475K，和選自 S125A、T131I、T165I、F202Y 和 D319T的至少一種其它的取代；或(c)取代N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K, S125A+N128C+K178L+T182G+TO05R+G475K，或 S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K ；其中所述變體任選的還包括在243位的取代和/或180位和/或181位的缺失；并且其中所述位置對應(yīng)于SEQ ID NO :2所述的氨基酸序列。
22.前述權(quán)利要求的任一項的清潔組合物，其中所述α淀粉酶變體包括475位的取代。
23.前述權(quán)利要求的任一項的清潔組合物，其中所述α淀粉酶變體包括在243位的取代和/或180位和/或181位的缺失。
24.前述權(quán)利要求的任一項的清潔組合物，其中所述α淀粉酶變體包括在243位的取代和/或180位和/或181位的缺失。
25.前述權(quán)利要求的任一項的清潔組合物，其中在低于約25°C的溫度下測量時，組合物提供了比對缺少α淀粉酶或缺少蛋白酶的相應(yīng)組合物所觀察到的清潔水平更大的清潔水平。
26.前述權(quán)利要求的任一項的清潔組合物，其中在低于約20°C的溫度下測量時，組合物提供了比對缺少α淀粉酶或缺少蛋白酶的相應(yīng)組合物所觀察到的清潔水平更大的清潔水平。
27.前述權(quán)利要求的任一項的清潔組合物，其中所述α淀粉酶和蛋白酶是共同配制的。
28.清潔織品或硬表面的方法，其包括將織品或硬表面與前述權(quán)利要求的任一項的清潔組合物接觸。
29.權(quán)利要求觀的方法，其中所述方法在低于約25°C的溫度下實施。
30.權(quán)利要求四的方法，其中所述方法在低于約20°C的溫度下實施。
全文摘要
本發(fā)明描述了涉及芽孢桿菌屬的α淀粉酶和蛋白酶的組合物和方法。所述組合物和方法對冷水清潔的應(yīng)用特別有效。
文檔編號C12N9/54GK102388132SQ201080015140
公開日2012年3月21日 申請日期2010年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月1日
發(fā)明者B·E·瓊斯, C·D·亞當(dāng)斯, D·A·伊斯泰爾, E·M·孔卡, M·科爾克曼 申請人:丹尼斯科美國公司