專利名稱：快速生物發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)的制作方法
快速生物發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)本發(fā)明涉及快速生物發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)領(lǐng)域，特別是用于檢測(cè)報(bào)道激酶活性的快速且非常靈敏的生物發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)。還提供用于檢測(cè)報(bào)道激酶活性的生物發(fā)光測(cè)定、裝置、和試劑盒。本領(lǐng)域中已經(jīng)記述了激酶作為報(bào)道酶的應(yīng)用。例如，本發(fā)明人已經(jīng)描述了報(bào)道激酶在用于檢測(cè)分析物在樣品中的存在的診斷系統(tǒng)中的應(yīng)用(參見W000/46357)，以及在用于驗(yàn)證凈化過(guò)程的效力的系統(tǒng)中的應(yīng)用(參見102005/09308 。這些報(bào)道激酶的活性典型地使用產(chǎn)生光輸出信號(hào)的ATP生物發(fā)光系統(tǒng)(例如，螢光素-螢光素酶)進(jìn)行檢測(cè)。所產(chǎn)生的光輸出使用發(fā)光計(jì)測(cè)量，并且然后將這些測(cè)量與激酶活性的量相關(guān)。與報(bào)道激酶系統(tǒng)相關(guān)的潛在的問(wèn)題是獲得輸出信號(hào)所需要的時(shí)間長(zhǎng)度。迄今為止，獲得輸出信號(hào)所需要的典型的時(shí)間在30分鐘到數(shù)小時(shí)的范圍內(nèi)。因此，在本領(lǐng)域中存在對(duì)更快速和/或簡(jiǎn)化的報(bào)道系統(tǒng)的需求。通過(guò)本發(fā)明解決一個(gè)或多個(gè)上述問(wèn)題，在第一方面中，本發(fā)明提供用于檢測(cè)報(bào)道激酶活性的測(cè)定法，其包括(i)將所述報(bào)道激酶添加到測(cè)定混合物中，其中所述報(bào)道激酶與ADP接觸，并且在與ADP接觸后不超過(guò)5分鐘，所述報(bào)道激酶與生物發(fā)光試劑接觸，其中，在報(bào)道激酶與ADP 接觸之前，所述測(cè)定混合物基本上不含非報(bào)道激酶(即，除報(bào)道激酶之外的激酶)；和(ii)檢測(cè)來(lái)自所述測(cè)定混合物的光輸出。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括在適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)載體上記錄在步驟
(11)中獲得的光輸出數(shù)據(jù)的步驟。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述報(bào)道激酶在與ADP接觸后不超過(guò)2分鐘、不超過(guò)1分鐘、不超過(guò)30秒、或不超過(guò)10秒與生物發(fā)光試劑接觸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述報(bào)道激酶同時(shí)與ADP和生物發(fā)光試劑接觸。因此，在所述報(bào)道激酶與ADP接觸和與生物發(fā)光試劑接觸之間沒有顯著的溫育時(shí)間(或僅有非常短的溫育時(shí)間)。因此，可以認(rèn)為本發(fā)明利用“一步”生物發(fā)光檢測(cè)方法。與上述快速檢測(cè)系統(tǒng)相反，常規(guī)的報(bào)道系統(tǒng)典型地利用“兩步”檢測(cè)方法
由激酶催化 二Α Ρ ^....................................· Λι P ‘' AMP
由螢光素酶催化 ATP + D-螢光素 + O2 ^- AMP + PPi + 氧化螢光素 + CO2 在第一步中，將報(bào)道激酶暴露于ADP底物來(lái)源，并且溫育充足的時(shí)間以足以允許產(chǎn)生ATP [1]。然后，在第二分開的步驟中，加入螢光素/螢光素酶試劑以通過(guò)報(bào)道激酶將所產(chǎn)生的ATP轉(zhuǎn)化為光[2]。已經(jīng)表明該“兩步”生物發(fā)光測(cè)定提供準(zhǔn)確的激酶檢測(cè)。然而， 其“兩步”性質(zhì)(即，加入ADP，溫育，然后分開加入生物發(fā)光試劑)已經(jīng)證明當(dāng)在“實(shí)地”而不是在實(shí)驗(yàn)室設(shè)置中進(jìn)行檢測(cè)時(shí)是麻煩和緩慢的。
迄今為止，已經(jīng)認(rèn)為這兩個(gè)反應(yīng)步驟(上文所示)是不相容的，因?yàn)樵诓襟E[2]中產(chǎn)生的AMP推動(dòng)步驟[1]的平衡偏向左側(cè)，由此有利于在步驟[1]中產(chǎn)生的ATP重新轉(zhuǎn)化成ADP。由于該系統(tǒng)的光信號(hào)輸出依賴于ATP的存在，這使得激酶活性的檢測(cè)更加困難。因此，迄今為止，步驟[1]和[2]已經(jīng)在時(shí)間上(即，通過(guò)包括上述溫育步驟)、或空間上(即， 反應(yīng)在分開的隔間中進(jìn)行)分開。與這種觀點(diǎn)相反，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)反應(yīng)步驟[1]和[2]實(shí)際上可以同時(shí)進(jìn)行，而對(duì)報(bào)道激酶檢測(cè)的靈敏性沒有任何顯著的不利影響。所產(chǎn)生的“一步”生物發(fā)光測(cè)定在速度和便利性方面提供顯著的優(yōu)點(diǎn)，并且在重點(diǎn)照護(hù)診斷檢測(cè)中特別有利，并且快速處理釋放指示劑，即，用于在實(shí)地而不是在實(shí)驗(yàn)室中的激酶活性檢測(cè)。另外，為了確保檢測(cè)的高靈敏性和準(zhǔn)確性，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)確保在加入任何ADP 之前，包含報(bào)道激酶的樣品基本上不含任何非報(bào)道(即，污染)激酶活性，和/或任何內(nèi)源性ATP是有利的。從上述反應(yīng)方案將清楚，存在這些污染物中的任一種可以顯著不利地影響激酶活性檢測(cè)的靈敏性/準(zhǔn)確性。例如，非報(bào)道激酶可以將ADP轉(zhuǎn)化為ATP，并且因此產(chǎn)生假的(或增加的)光輸出信號(hào)。因此，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)處理包含報(bào)道激酶的樣品以去除或滅活任何非報(bào)道激酶和/或任何內(nèi)源性ATP是有利的。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，使用下述一個(gè)或多個(gè)處理步驟去除和/或滅活非報(bào)道激酶。在這一點(diǎn)上，按照本發(fā)明被滅活或去除的首選的非報(bào)道激酶是哺乳動(dòng)物、真菌和/ 或植物激酶(例如，哺乳動(dòng)物、真菌或植物腺苷酸激酶)。這些處理可以以任何數(shù)目(優(yōu)選一個(gè)或多個(gè)，或至少兩個(gè)，或至少三個(gè))和/或以任何組合使用。然而，在所有情形中，所述處理使所述報(bào)道激酶基本上完好無(wú)損(例如，在激酶活性方面是活性的)?？梢詫⑷我庖粋€(gè)或多個(gè)下述處理步驟應(yīng)用于本發(fā)明的任一方面。在一個(gè)實(shí)施方案中，非報(bào)道激酶通過(guò)暴露于50-120°C 1-30分鐘之間的時(shí)間而滅活，例如暴露于90°C 10分鐘，暴露于90°C 3分鐘，暴露于90°C 1分鐘，暴露于120°C 3分鐘，或暴露于120°C 1分鐘。滅活步驟的溫度和持續(xù)時(shí)間使非報(bào)道激酶變性，而保留報(bào)道激酶的活性基本上完好無(wú)損。在另一個(gè)實(shí)施方案中，利用化學(xué)變性處理去除/滅活非報(bào)道激酶。適當(dāng)?shù)奶幚淼膶?shí)例包括暴露于離液劑(chaotrope)，如尿素(例如，濃度大于2M的尿素)或胍(例如，濃度大于IM的胍)，暴露于去污劑(例如，大于0. 5%的SDS，肌氨?；騮riton X-100)，暴露于自由基產(chǎn)生劑(例如，> IOOOppm的來(lái)源于次氯酸鈉或等價(jià)試劑的活性氯)或暴露于氧化處理。在另一個(gè)實(shí)施方案中，利用酶變性處理去除/滅活非報(bào)道激酶。適當(dāng)?shù)拿傅膶?shí)例包括高度加工蛋白酶，諸如例如，Prionzyme , Properase ,蛋白酶-K，和嗜熱菌蛋白酶 (thermolysin) 0在另一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)暴露于所選的pH(例如，低于pH 4，或大于pH 11，使用諸如50mM CAPS pH 11的緩沖液)、所選的鹽濃度(例如，> 2M硫酸銨)、EDTA或其組合而去除/滅活非報(bào)道激酶。在另一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)加入選擇性或特異性抑制非報(bào)道激酶的抑制劑(即， 所述抑制劑滅活所述非報(bào)道激酶，而保留報(bào)道激酶的活性基本上完好無(wú)損)而去除/ 滅活非報(bào)道激酶。適當(dāng)?shù)囊种苿┑膶?shí)例包括星形孢菌素(staurosporine)；釩酸鹽(vanadate)(例如，原釩酸鹽(orthovanadate)或十釩酸鹽(decavanadate))；甘油磷酸酯 (glycerophosphate) ；二腺苷磷酸(Diadenosine phosphates)，諸如 Ap6A ( 二腺苷六磷酸 (Diadenosine hexaphosphate))，Ap5A (二腺苷五憐酸(Diadenosine pentaphosphate))， Ap4A( 二腺苷四磷酸(Diadenosine tetraphosphate))，和 / 或 Ap3A( 二腺苷三磷酸(Diadenosine triphosphate))；維生素 C ;AMP_PCP ;AMP_PNP ;AMP_S ;ΑΤΡ-γ S ；和 Ara-ATP0優(yōu)選非報(bào)道激酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑(例如，非報(bào)道腺苷酸激酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑)(例如，二腺苷磷酸抑制劑，諸如Αρ4Α和/或Αρ5Α)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抑制劑選擇性或特異性抑制哺乳動(dòng)物和真菌(例如，酵母)和植物非報(bào)道激酶。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抑制劑(例如，Αρ5Α)選擇性或特異性抑制哺乳動(dòng)物和真菌(例如，酵母)非報(bào)道激酶。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抑制劑(例如，Αρ4Α和/或Αρ6Α)選擇性或特異性抑制哺乳動(dòng)物非報(bào)道激酶。抑制劑可以憑經(jīng)驗(yàn)確定，例如，用于不同的樣品或基質(zhì)。例如，實(shí)驗(yàn)上已經(jīng)表明一定范圍的不同的抑制劑提供對(duì)報(bào)道激酶(例如，來(lái)自嗜酸熱硫化葉菌 (S. acidocaldarius),海棲熱袍菌(T. maritima),或月市炎衣原體(Chlamydia pneumonae) 的激酶)和非報(bào)道激酶(諸如以兔肌肉腺苷酸激酶為代表的哺乳動(dòng)物組織-來(lái)源的激酶) 之間的區(qū)分(圖4和圖7)。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，使用一種或多種抑制劑，諸如Ap4A， Ap5A和/或Ap6A，基本上減少非報(bào)道激酶(例如，內(nèi)源性組織_來(lái)源的激酶，諸如腺苷酸激酶)的活性——所用的抑制劑濃度典型地在低的微摩爾范圍內(nèi)，并且對(duì)報(bào)道激酶沒有顯著影響。進(jìn)一步舉例來(lái)說(shuō)，Ap5A區(qū)分報(bào)道激酶與此處由來(lái)自釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的酶代表的非報(bào)道激酶(例如，真菌腺苷酸激酶)。在這一基礎(chǔ)上，抑制劑選擇可以基于報(bào)道激酶的性質(zhì)和樣品的背景(即，非報(bào)道激酶)。本發(fā)明的適當(dāng)?shù)膱?bào)道激酶的應(yīng)用的實(shí)例在表1 (見下)中示例還顯示在所述應(yīng)用中典型地遇到污染性非報(bào)道激酶的實(shí)例。表1還僅通過(guò)舉例的方式列出在本發(fā)明的情形中可以使用的抑制劑的選擇(例如，通過(guò)加入到樣品制備緩沖液中)。表 權(quán)利要求
1.用于檢測(cè)報(bào)道激酶活性的測(cè)定法，其包括(i)將所述報(bào)道激酶添加到測(cè)定混合物中，其中所述報(bào)道激酶與ADP接觸，并且在與 ADP接觸后不超過(guò)5分鐘，所述報(bào)道激酶與生物發(fā)光試劑接觸，其中，在所述報(bào)道激酶與ADP接觸之前，所述測(cè)定混合物基本上不含非報(bào)道激酶(即， 除報(bào)道激酶之外的激酶)；和( )檢測(cè)來(lái)自所述測(cè)定混合物的光輸出。
2.按照權(quán)利要求1所述的測(cè)定法，其中所述報(bào)道激酶在與ADP接觸后不超過(guò)2分鐘與生物發(fā)光試劑接觸。
3.按照權(quán)利要求1或2所述的測(cè)定法，其中所述報(bào)道激酶同時(shí)與ADP和生物發(fā)光試劑接觸。
4.按照任一前述權(quán)利要求所述的測(cè)定法，其中，在所述報(bào)道激酶與ADP接觸之前，所述測(cè)定混合物基本上不含ATP。
5.按照任一前述權(quán)利要求所述的測(cè)定法，其中，在所述報(bào)道激酶與ADP接觸之前，非報(bào)道激酶基本上被去除或滅活。
6.按照任一前述權(quán)利要求所述的測(cè)定法，其中，在所述報(bào)道激酶與ADP接觸之前，ATP 基本上被去除。
7.按照任一前述權(quán)利要求所述的測(cè)定法，其中所述報(bào)道激酶是腺苷酸激酶，優(yōu)選三聚體或單體腺苷酸激酶。
8.按照任一前述權(quán)利要求所述的測(cè)定法，其中所述報(bào)道激酶是熱穩(wěn)定激酶。
9.按照任一前述權(quán)利要求所述的測(cè)定法，其中所述測(cè)定在小于15分鐘、小于10分鐘、 小于5分鐘、小于2分鐘、小于1分鐘、或小于30秒內(nèi)完成。
10.用于確定樣品中分析物的存在的方法，所述方法包括(i)將所述樣品暴露于報(bào)道激酶，所述報(bào)道激酶偶聯(lián)到對(duì)所述分析物特異性的結(jié)合劑， 從而當(dāng)在樣品中存在所述分析物時(shí)，在所述報(bào)道激酶和所述分析物之間形成復(fù)合物； ( )將復(fù)合的報(bào)道激酶與未復(fù)合的報(bào)道激酶分離；和(iii)使用按照權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的測(cè)定法，測(cè)量所述復(fù)合的報(bào)道激酶的活性。
11.用于確定樣品中分析物的存在的方法，所述方法包括(i)提供包含報(bào)道激酶的固體支持物，其中所述報(bào)道激酶通過(guò)接頭附著到所述固體支持物上，所述接頭包括對(duì)所述分析物特異性的結(jié)合劑；( )將所述樣品施加到所述固體支持物上，由此當(dāng)在所述樣品中存在所述分析物時(shí)， 所述分析物將報(bào)道激酶從所述固體支持物上置換下來(lái)；和(iii)使用按照權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的測(cè)定法，測(cè)量所述被置換下來(lái)的報(bào)道激酶的活性。
12.用于檢測(cè)樣品中分析物的存在的方法，所述方法包括(i)提供固體支持物，其上附著對(duì)所述分析物特異性的第一結(jié)合劑； ( )將所述固體支持物暴露于所述樣品，從而當(dāng)在所述樣品中存在所述分析物時(shí)，所述分析物通過(guò)所述第一結(jié)合劑附著到所述固體支持物上；(iii)將所述固體支持物暴露于報(bào)道激酶，所述報(bào)道激酶偶聯(lián)到對(duì)所述分析物特異性的第二結(jié)合劑，從而所述報(bào)道激酶通過(guò)所述第二結(jié)合劑和已經(jīng)結(jié)合的分析物之間的相互作用附著到所述固體支持物上；(iv)將在步驟(iii)中獲得的混合物施加到濾膜上，其中所述固體支持物保留在所述濾膜上；和(ν)使用按照權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的測(cè)定法，測(cè)量所保留的報(bào)道激酶的活性。
13.用于檢測(cè)樣品中分析物的存在的方法，所述方法包括(i)提供磁性固體支持物，在其上附著對(duì)所述分析物特異性的第一結(jié)合劑；( )將所述固體支持物暴露于所述樣品，從而當(dāng)在所述樣品中存在所述分析物時(shí)，所述分析物通過(guò)所述第一結(jié)合劑附著到所述固體支持物上；(iii)將所述固體支持物暴露于報(bào)道激酶，所述報(bào)道激酶偶聯(lián)到對(duì)所述分析物特異性的第二結(jié)合劑，從而所述報(bào)道激酶通過(guò)所述第二結(jié)合劑和已經(jīng)結(jié)合的分析物之間的相互作用附著到所述固體支持物上；(iv)將在步驟(iii)中獲得的混合物暴露于磁體，其中所述固體支持物保留在所述磁體上；和(ν)使用按照權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的測(cè)定法，測(cè)量所保留的報(bào)道激酶的活性。
14.按照權(quán)利要求12或13所述的方法，其中所述固體支持物選自由膠乳珠和磁珠組成的組。
15.驗(yàn)證用于減少樣品中污染性生物制劑的量或活性的處理過(guò)程的方法，所述方法包括下述步驟(i)提供包含或懷疑包含污染性生物制劑的樣品；( )將所述樣品在存在確定量的報(bào)道激酶時(shí)進(jìn)行處理過(guò)程，其中所述報(bào)道激酶和所述污染性生物制劑二者均暴露于所述處理過(guò)程；(iii)使用按照權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的測(cè)定法，測(cè)量所述報(bào)道激酶的殘余活性；和(iv)將所述殘余活性與預(yù)先確定的激酶活性進(jìn)行比較，其中所述預(yù)先確定的激酶活性對(duì)應(yīng)于相同條件下所述污染性生物制劑的量或活性的確定減少。
16.按照權(quán)利要求10-15中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述方法在小于15分鐘、小于10 分鐘、小于5分鐘、或小于2分鐘內(nèi)完成。
17.按照權(quán)利要求10-16中任一項(xiàng)所述的方法，其中，在測(cè)量報(bào)道激酶活性之前，處理所述樣品以基本上去除ATP和/或基本上去除或抑制非報(bào)道激酶。
18.用于檢測(cè)樣品中的報(bào)道激酶活性的裝置，所述裝置包括長(zhǎng)形的流動(dòng)基質(zhì)，其中所述流動(dòng)基質(zhì)包括⑴樣品接收區(qū)；和( )檢測(cè)區(qū)，其位于所述樣品接收區(qū)的下游，其包含ADP和生物發(fā)光試劑的混合物；和(III)背景減少區(qū)，其位于所述樣品接收區(qū)和檢測(cè)區(qū)之間，去除或抑制所述樣品中存在的非報(bào)道激酶；其中，在使用時(shí)，樣品被施加到所述樣品接收區(qū)并且沿著所述流動(dòng)基質(zhì)移動(dòng)通過(guò)所述背景減少區(qū)，在所述背景減少區(qū)中，非報(bào)道激酶基本上被去除或抑制，然后移動(dòng)至所述檢測(cè)區(qū)中，在所述檢測(cè)區(qū)檢測(cè)ATP產(chǎn)生。
19.在用于檢測(cè)樣品中分析物存在的測(cè)定法中使用的側(cè)向流動(dòng)裝置，所述裝置包括墊板，其上放置長(zhǎng)形的流動(dòng)基質(zhì)，其中所述流動(dòng)基質(zhì)包括(i)樣品接收區(qū)，其包含通過(guò)接頭附著到所述流動(dòng)基質(zhì)的報(bào)道激酶，所述接頭包括對(duì)所述分析物特異性的結(jié)合劑；(ii)檢測(cè)區(qū)，其位于所述樣品接收區(qū)的下游，并且包含ADP和生物發(fā)光試劑的混合物；和(III)背景減少區(qū)，其位于所述樣品接收區(qū)和檢測(cè)區(qū)之間，去除或抑制在所述樣品中存在的非報(bào)道激酶；其中，在使用時(shí)，將樣品施加到所述樣品接收區(qū)，并且在樣品中存在的分析物將所述報(bào)道激酶從所述流動(dòng)基質(zhì)上置換下來(lái)，所述被置換下來(lái)的報(bào)道激酶移動(dòng)通過(guò)所述背景減少區(qū)，在所述背景減少區(qū)中，非報(bào)道激酶基本上被去除或抑制，然后移動(dòng)至所述檢測(cè)區(qū)中，在所述檢測(cè)區(qū)檢測(cè)ATP產(chǎn)生。
20.按照權(quán)利要求18或權(quán)利要求19所述的裝置，其還包括位于所述樣品接收區(qū)和檢測(cè)區(qū)之間的背景減少區(qū)，其中任何存在的ATP基本上被去除。
21.按照權(quán)利要求18-20中任一項(xiàng)所述的裝置，其中所述背景減少區(qū)包括一種或多種基本上抑制或去除非報(bào)道激酶和/或ATP的物質(zhì)，諸如固定的ATP酶，陰離子或陽(yáng)離子交換基質(zhì)，和/或大小排阻基質(zhì)。
22.按照權(quán)利要求18-21中任一項(xiàng)所述的裝置，其中所述裝置是便攜式的。
23.用于檢測(cè)樣品中的報(bào)道激酶活性的方法，其中所述方法使用按照權(quán)利要求18或 20-22中任一項(xiàng)所述的裝置進(jìn)行，所述方法包括(i)將所述樣品施加到樣品接收區(qū)； ( )允許所述樣品移動(dòng)到檢測(cè)區(qū)；和(iii)檢測(cè)來(lái)自所述檢測(cè)區(qū)的光輸出。
24.用于檢測(cè)樣品中分析物的存在的方法，其中所述方法使用按照權(quán)利要求19-22中任一項(xiàng)所述的裝置進(jìn)行，所述方法包括(i)將所述樣品施加到樣品接收區(qū)；( )允許從所述樣品接收區(qū)置換下來(lái)的任何報(bào)道激酶移動(dòng)到檢測(cè)區(qū)；和 (iii)檢測(cè)來(lái)自所述檢測(cè)區(qū)的光輸出。
25.按照權(quán)利要求23或權(quán)利要求M所述的方法，其中步驟(iii)通過(guò)將所述裝置的檢測(cè)區(qū)折下并且將其置于發(fā)光計(jì)中進(jìn)行。
26.按照權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的測(cè)定法，或按照權(quán)利要求10-17或23-M中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括將在步驟(ii)中獲得的光輸出數(shù)據(jù)記錄在適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)載體上的步驟。
全文摘要
提供用于檢測(cè)報(bào)道激酶活性的測(cè)定法，其包括(i)將所述報(bào)道激酶添加到測(cè)定混合物中，其中所述報(bào)道激酶在與ADP接觸之后不超過(guò)數(shù)分鐘與生物發(fā)光試劑接觸，并且其中，在報(bào)道激酶與ADP接觸之前，所述測(cè)定混合物基本上不含除報(bào)道激酶之外的激酶；和(ii)檢測(cè)來(lái)自所述測(cè)定混合物的光輸出。還提供了利用上述測(cè)定檢測(cè)分析物在樣品中的存在的方法和驗(yàn)證治療過(guò)程的方法。還提供了用于進(jìn)行這些測(cè)定和方法的裝置。
文檔編號(hào)C12Q1/48GK102325897SQ201080008250
公開日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2010年1月7日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月7日
發(fā)明者特林·波爾曼, 理查德·J·赫斯普, 馬克·J·薩頓 申請(qǐng)人:健康保護(hù)局