專利名稱：人組織激肽釋放酶6原核表達載體的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于醫(yī)學研究領域，特別涉及一種人組織激肽釋放酶6原核表達載體。
背景技術：
人組織型激肽釋放酶基因家族(kallkrein，KLK)是近來發(fā)現(xiàn)的一類頗具潛力的 腫瘤標志家族，包括15個成員，KLK6是該家族成員之一，編碼人組織型激肽釋放酶6 (human kallikrein 6，hK6)。hK6由肝臟、胰腺、腦神經等合成，廣泛存在于人體組織和體液中，它 是單鏈分泌型的絲氨酸蛋白酶，以酶原前體的形式合成，去除前肽后酶原被激活，產生胰蛋 白酶樣活性。研究發(fā)現(xiàn)，hK6參與了人類多種惡性腫瘤的形成過程，且與腫瘤的發(fā)生、侵襲 浸潤和轉移等生物學行為密切相關，hK6將作為潛在的分子標志物，用于腫瘤的診斷、預后 判斷以及腫瘤監(jiān)測。

發(fā)明內容
本發(fā)明為了彌補現(xiàn)有技術的不足，提供了一種人組織激肽釋放酶6原核表達載 體。本發(fā)明是通過如下技術方案實現(xiàn)的一種人組織激肽釋放酶6原核表達載體，其特征在于所述載體通過設計引物 擴增出組織中的KLK6基因片段用分子克隆的方法將KLK6基因片段克隆至原核表達載體 pET28b中進行構建。所述原核表達載體pET28b帶有高嚴緊性T71ac啟動子，通過IPTG誘導，在宿主菌 BL21中表達帶有His標簽的融合蛋白。擴增組織中的KLK6基因使用的上游引物為5，-GAGCTCAGGAGCAGAATAAGTTGGTGC-3 ，(SacI)，下游引物為 5，CTCGAG CTTGGCCTGAATGGTTTTTTG-3，(XhoI)。該原核表達載體中KLK6的基因序列為a ggagcagaataagttggtgc atggcggacc
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本發(fā)明的表達系統(tǒng)遺傳圖譜明確，費用低廉，對許多外源蛋白耐受能力強，能高水 平的表達蛋白。


下面結合附圖對本發(fā)明作進一步的說明。附圖為本發(fā)明中pET28b_KLK6載體的示意圖。
具體實施例方式實施例根據(jù)6enBank公布的核苷酸序列(D78203)設計引物上游引物5’GAGCTCAGGAGCA GAATAAGTTGGTGC-3，(SacI)和下游引物 5，-CTCGAG CTTGGCCTGAATGGTTTTTTG-3，(XhoI)J/" 增出人乳腺癌組織中的KLK6，該目的基因片段大小為683bp左右，編碼約228個氨基酸的肽 段(17-244aa KLK6)。KLK6片段克隆入pET28b原核表達載體，誘導表達hK6蛋白，分子量 大小為25KD左右。
權利要求
一種人組織激肽釋放酶6原核表達載體，其特征在于所述載體通過設計引物擴增出組織中的KLK6基因片段，用分子克隆的方法將KLK6基因片段克隆至原核表達載體pET28b中進行構建。
2.根據(jù)權利要求1所述的人組織激肽釋放酶6原核表達載體，其特征在于所述原核 表達載體pET28b帶有高嚴緊性T71ac啟動子，通過IPTG誘導，在宿主菌BL21中表達帶有 His標簽的融合蛋白。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的人組織激肽釋放酶6原核表達載體，其特征在于所述設 計引物的上游引物為 5，-GAGCTCAGGAGCAGAATAAGTTGGTGC-3，(Sac I)，下游引物為 5，-CTCGAG CTTGGCCTGAATGGTTTTTTG-3， (XhoI)。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)學研究領域，特別公開了一種人組織激肽釋放酶6原核表達載體。該人組織激肽釋放酶6原核表達載體，其特征在于所述載體通過設計引物擴增出組織中的KLK6基因片段用分子克隆的方法將KLK6基因片段克隆至原核表達載體pET28b中進行構建。本發(fā)明的表達系統(tǒng)遺傳圖譜明確，費用低廉，對許多外源蛋白耐受能力強，能高水平的表達蛋白。
文檔編號C12N15/70GK101988072SQ201010255050
公開日2011年3月23日 申請日期2010年8月17日 優(yōu)先權日2010年8月17日
發(fā)明者張華 , 胡成進 申請人:胡成進