專利名稱：可用于高效制備誘導性多能干細胞的小分子化合物和方法
技術領域：
本發(fā)明屬于細胞生物學與再生醫(yī)學領域。本發(fā)明涉及一種可用于制備誘導性多能 干細胞的小分子化合物，還提供了一種制備誘導性多能干細胞的方法。
背景技術：
基于干細胞的再生醫(yī)學為生命科學和醫(yī)學的發(fā)展開辟了一個嶄新的、廣闊的領 域。研究者認為干細胞(再生醫(yī)學)研究有潛力通過修復特定的組織或塵長器官，改變?nèi)?類對疾病的應對方法。干細胞再生醫(yī)學在治療神經(jīng)退行性疾病、惡性腫瘤、糖尿病、肝硬化、 腦萎縮、脊髓損傷等目前尚無良好治療方案的疾病方面具有廣泛的應用前景。但是目前的干細胞研究中仍然存在重要的技術障礙，其中最重要的是干細胞的來 源和制備。因為涉及到社會倫理問題，干細胞來源受到關注。干細胞分為胚胎干細胞、成體 干細胞和誘導性多能干細胞。其中，胚胎干細胞和成體干細胞是天然存在的，而誘導性多 能干細胞是由體細胞經(jīng)過人為的基因表達調(diào)控和細胞重編程(cell !^programming)等過 程轉化而來的。胚胎干細胞的功能強大，但來源有限且受到倫理學限制；成體干細胞來源 和功能有限。誘導性多能干細胞是由人體細胞轉化而來，來源廣泛，不受限制，無倫理學問 題，其功能與胚胎干細胞接近，因此是最具發(fā)展前景的干細胞制備技術。誘導性多能干細胞 的出現(xiàn)和制備技術獲得2008年十大科技創(chuàng)新之首。但該技術目前仍然存在致命缺陷。目 前制備誘導性多能干細胞是通過病毒裁體或質(zhì)粒向體細胞轉移外源性干細胞特異性基因 如S0X2、0CT4、KLF4、NANOG、C-MYC等。上述基因在體細胞內(nèi)的表達能夠使體細胞經(jīng)歷細胞 重編程的過程而回到干細胞的狀態(tài)。但是上述基因一旦通過病毒載體或質(zhì)粒導入到體細胞 中，其在體內(nèi)的表達是不受控制的，產(chǎn)生的遠后生物學效應同樣是無法預知且不受控制的， 因此其安全性受到質(zhì)疑。小分子化合物的作用是暫時性的、可控制的、可預期的，因此，發(fā)展 小分子化合物制備誘導性多能干細胞是今后發(fā)展需要重點解決的關鍵問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一類具有特殊結構和功能的小分子化合物以及一種應用 該類小分子化合物高效制備誘導性多能干細胞的方法。具體的說，本發(fā)明提供一類具有特殊結構和功能的小分子化合物，其為針對 干細胞特異性基因的5’非編碼區(qū)，尤其是5’非編碼區(qū)中啟動子序列或轉錄起始位點 (transcriptionstarting site)及其偵Ij翼序歹lj (flanking region)，設計、合成并f帝選出來 的可誘導上述目標基因特異、高效上調(diào)表達的小片段RNA序列。這些可以特異、高效誘導目 標基因上調(diào)表達的小片段RNA分子具有以下結構特征其核心序列是反向互補雙鏈RNA序 列或單鏈RNA序列(正義序列或反義序列)，序列長度在15-30個堿基(對)之間，序列3’ 末端是兩個或多個連續(xù)的胸腺嘧啶脫氧核糖核苷(dT)或其結構類似物。這樣的小片段RNA 分子是通過化學方法或生物學方法合成的小分子化合物，其單獨或組合使用可以用于制備 誘導性多能干細胞(iPScell, induced pluoripotent stem cell)。
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上述小片段RNA分子經(jīng)過公知的核酸化學修飾方法(如甲基化、脫氧化、硫代、鹵 代、LNA、PNA等)修飾后，仍具有誘導干細胞特異性基因上調(diào)表達功能，顯然，該結構類似物 也在本專利保護的范圍內(nèi)。以下為舉例但并不局限于下述結構類似物，如部分或全部序列 中核苷酸單體的甲基化修飾類似物、脫氧類似物(DNA分子)、硫代類似物、鹵代類似物以及 LNA.PNA等修飾形式的類似物等。這樣的小片段RNA分子的結構類似物是通過化學方法或 塵物學方法合成的小分子化合物，其單獨或組合使用可以用于制備誘導性多能干細胞。相應的，本發(fā)明還提供了一種制備誘導性多能干細胞的方法，步驟如下(1)合成可誘導干細胞特異性表達基因特異、高效上調(diào)表達的小分子化合物；(2)將RNA序列轉染進入受試細胞，使受試細胞內(nèi)相應的目標基因表達水平升高；(3)培養(yǎng)受試細胞，鑒定并挑選出誘導性多能干細胞。在具體實施時，可使用普通細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)受試細胞，將該類小分子化合物單獨 或組合使用，加入細胞培養(yǎng)液中，直接作用于受試細胞或經(jīng)公知的細胞轉染的方法或技術 (如脂質(zhì)體轉染、電擊轉染、磷酸鈣沉淀轉染等)作用于受試細胞。在用該類小分子化合物 作用于受試細胞24-48h后，使用干細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)受試細胞。根據(jù)細胞形態(tài)、生長狀態(tài)及 鑒定情況，持續(xù)使用該類小分子化合物作用于受試細胞，直至受試細胞經(jīng)歷細胞重編程的 過程而進入胚胎干細胞樣的狀態(tài)，即受試細胞形成誘導性多能干細胞(iPS cell)。該類小 分子化合物通過細胞膜進入受試細胞后，可以使受試細胞內(nèi)相應的目標基因(干細胞特異 性表達基因)表達水平升高，使受試細胞經(jīng)歷細胞重編程的過程而進入胚胎干細胞樣的狀 態(tài)，即受試細胞形成誘導性多能干細胞(iPS cell)。以上方法可以用來制備誘導性多能干 細胞。上述具有誘導干細胞特異性表達基因上調(diào)表達功能的小片段RNA分子或其結 構類似物與下列物質(zhì)的組合應用能夠進一步提高制備誘導性多能干細胞的效率。這些 物質(zhì)包括組蛋白去乙?；敢种苿┖虳NA甲基化轉移酶抑制劑等。以下為舉例但并 不局限于下列物質(zhì)，組蛋白去乙酰基酶抑制劑，如苯丁酸鈉(sodium phenylbutyrate, SPB)，丙戊酸(valproic acid, VPA),曲古抑菌素 A (trichostatin A TSA)等；DNA 甲 基化轉移酶抑制劑，如5氮雜脫氧胞苷(5-azacytidine，5-aza-C)，5甲硫脫氧腺苷 (5，-deoxy-5，-(methylthio)adenosine, dMTA)等。目前已知的干細胞特異性基因包括S0X2、0CT4、KLF4、NANOG, C-MYC等，如本領域 技術人員所知，根據(jù)本發(fā)明的技術構思和基本原理，可針對這些基因按前述方法設計小分 子化合物，也可針對其他的新的干細胞特異性基因進行小分子化合物的設計。顯然，這些化 合物均應在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。本發(fā)明所提供的一類具有特殊結構和功能的小分子化合物以及一種應用該類小 分子化合物制備誘導性多能干細胞的方法，解決了目前其它方法所制備產(chǎn)塵的誘導性多能 干細胞的安全性問題。目前其它方法制備誘導性多能干細胞是通過使用病毒載體或質(zhì)粒向 體細胞轉移外源性干細胞特異性基因如S0X2、0CT4、KLF4、NANOG, C-MYC等，上述基因一旦 通過病毒載體或質(zhì)粒導入到體細胞中，其在體內(nèi)的表達是不受控制的，產(chǎn)塵的遠后塵物學 效應同樣是無法預知且不受控制的，這樣獲得的誘導性多能干細胞具有癌變的潛在可能。 而本發(fā)明所提供的應用小分子化合物制備誘導性多能干細胞的方法，其對目標基因的調(diào)控 作用是暫時性的、可控制的、可預期的，在向受試細胞施加小分子化合物時產(chǎn)塵基因調(diào)控作用，進而引發(fā)細胞的重編程過程和胚胎干細胞樣轉化；當受試細胞轉化為誘導性多功能干 細胞后，停止向受試細胞施加小分子化合物，基因調(diào)控作用也隨即停止，而不會產(chǎn)生長久、 失控的基因調(diào)控作用，細胞可停留在誘導性多功能干細胞狀態(tài)或進入分化狀態(tài)。因此，采用 本方法產(chǎn)生的誘導性多功能干細胞具有更高的安全性。


圖1以cDNA為模板，用RT-PCR方法檢測陰性對照與轉染小分子RNA后細胞中 GAPDH基因表達情況。GAPDH為看家基因，在上述情況下，基因表達基本一致。圖2以cDNA為模板，用RT-PCR方法檢測陰性對照與轉染小分子RNA后細胞中S0X2 基因表達情況。S0X2基因為胚胎干細胞特異性表達的基因，在陰性對照中基本不表達，在轉 染了某些小分子RNA后細胞中S0X2基因表達顯著增強。圖3以RNA為模板，用RT-PCR方法檢測陰性對照與轉染小分子RNA后細胞中S0X2 基因表達情況。表明提取的RNA樣本中無DNA污染。圖1，2，3中，M 分子量標記，1 有脂質(zhì)體的陰性對照，2 脂質(zhì)體轉染隨機序列的陰 性對照，3 轉染sox2-5小分子RNA序列，4 轉染sox2_8小分子RNA序列，5 轉染sox2_9小 分子RNA序列，6 轉染sox2-10小分子RNA序列，7 轉染sox2_ll小分子RNA序列，8 轉染 sox2-12小分子RNA序列，9 轉染sox2_13小分子RNA序列，10 轉染sox2_14小分子RNA 序列圖4以cDNA為模板，用RT-PCR方法檢測陰性對照與轉染小分子RNA后細胞中 GAPDH基因表達情況。GAPDH為看家基因，在上述情況下，基因表達基本一致。圖5以cDNA為模板，用RT-PCR方法檢測陰性對照與轉染小分子RNA后細胞中0CT4 基因表達情況。0CT4基因為胚胎干細胞特異性表達的基因，在陰性對照中基本不表達，在轉 染了某些小分子RNA后細胞中0CT4基因表達顯著增強。 圖6以RNA為模板，用RT-PCR方法檢測陰性對照與轉染小分子RNA后細胞中0CT4 基因表達情況。表明提取的RNA樣本中無DNA污染。圖4，5，6中，M 分子量標記，1 有脂質(zhì)體的陰性對照，2 脂質(zhì)體轉染隨機序列的陰 性對照，3 轉染0CT4-5小分子RNA序列，4 轉染0CT4-8小分子RNA序列，5 轉染0CT4-9小 分子RNA序列，6 轉染0CT4-10小分子RNA序列，7 轉染0CT4-11小分子RNA序列，8 轉染 0CT4-12小分子RNA序列，9 轉染0CT4-13小分子RNA序列圖7以cDNA為模板，用RT-PCR方法檢測陰性對照與轉染小分子RNA后細胞中 GAPDH基因表達情況。GAPDH為看家基因，在上述情況下，基因表達基本一致。圖8以cDNA為模板，用RT-PCR方法檢測陰性對照與轉染小分子RNA后細胞中KLF4 基因表達情況。KLF4基因為胚胎干細胞特異性表達的基因，在陰性對照中基本不表達，在轉 染了某些小分子RNA后細胞中KLF4基因表達顯著增強。圖9以RNA為模板，用RT-PCR方法檢測陰性對照與轉染小分子RNA后細胞中KLF4 基因表達情況。表明提取的RNA樣本中無DNA污染。圖7，8，9中，M 分子量標記，1 有脂質(zhì)體的陰性對照，2 脂質(zhì)體轉染隨機序列的陰 性對照，3 轉染KLF4-5小分子RNA序列，4 轉染KLF4-8小分子RNA序列，5 轉染KLF4-9小 分子RNA序列，6 轉染KLF4-10小分子RNA序列，7 轉染KLF4-11小分子RNA序列，8 轉染
5KLF4-12小分子RNA序列，9 轉染KLF4-13小分子RNA序列
具體實施例方式為了進一步說明本發(fā)明提供的一種用小分子化合物高效制備誘導性多能干細胞 的方法，參照以下實施例進行說明。實施例是為了解釋而不是以任何方式限制本發(fā)明的 范圍，其他研究人員在權利要求范圍內(nèi)所作出的某些改變和調(diào)整也應認為屬于本發(fā)明的范圍。實施例1.誘導S0X2基因上調(diào)表達的小分子RNA的設計、合成和篩選1誘導S0X2基因上調(diào)表達的小分子RNA的設計、合成根據(jù)S0X2基因5’端非編碼區(qū)中的啟動子序列或轉錄起始位點及其側翼序列，設 計如下雙鏈RNA序列。序列長度在18-25bp之間，序列3’端是兩個連續(xù)的dT。 2細胞培養(yǎng)與加藥處理
所用細胞為BJ細胞，用DMEM+15% FBS, L-谷氨酰胺，青鏈霉素培養(yǎng)于5% C02， 37°C細胞培養(yǎng)箱中。凍存的BJ細胞復蘇后，傳代2次至細胞狀態(tài)穩(wěn)定。將BJ細胞接種于 6孔板(1X105細胞/孔)。培養(yǎng)20-24h至細胞完全貼壁且狀態(tài)穩(wěn)定。雙鏈RNA轉染終濃 度為ΙΟΟηΜ，采用Vega轉染試劑盒并按照操作指南進行。雙鏈RNA與轉染試劑作用于細胞 10h，將培養(yǎng)液換成正常培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞14h。雙鏈RNA轉染3次。收集細胞。3RNA 提取與 RT-PCR提取RNA。用Invitrogen反轉錄試劑盒反轉錄成cDNA。用PCR試劑盒按照說 明書操作，檢測S0X2基因在雙鏈RNA作用后基因表達變化。以看家基因GAPDH基因表達 作為對照。所用 RT-PCR 引物序列如下:Sox2 RTF :CAC AACTCG GAG ATC AGC AAG C, Sox2 RTR=AACTGT CCA TGC GCTGGTTCAC。GAPDH RTF :GCA TCC TGC ACCACCACC TG, GAPDHRTR GCCTGG TTCACG ACG TTC TT。PCR循環(huán)條件為預變性94°C/5min ；30個循環(huán)94°C/30sec， 60°C /30sec,72°C /30sec ；延伸72°C /5min。4瓊脂糖凝膠電泳及圖像半定量分析PCR產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳分析。電泳結果經(jīng)凝膠成像儀成像并用定量分析 軟件進行半定量分析。檢測結果如圖1，圖2，圖3所示。實施例2.誘導0CT4基因上調(diào)表達的小分子RNA的設計、合成和篩選1誘導0CT4基因上調(diào)表達的小分子RNA的設計、合成根據(jù)0CT4基因5’端非編碼區(qū)中的啟動子序列或轉錄起始位點及其側翼序列，設 計如下雙鏈RNA序列。序列長度在18-25bp之間，序列3’端是兩個連續(xù)的dT。
7 2細胞培養(yǎng)與加藥處理所用細胞為BJ細胞，用DMEM+15% FBS, L-谷氨酰胺，青鏈霉素培養(yǎng)于5 % C02， 37°C細胞培養(yǎng)箱中。凍存的BJ細胞復蘇后，傳代2次至細胞狀態(tài)穩(wěn)定。將BJ細胞接種于 6孔板(1X105細胞/孔)。培養(yǎng)20-24h至細胞完全貼壁且狀態(tài)穩(wěn)定。雙鏈RNA轉染終濃 度為ΙΟΟηΜ，采用Vega轉染試劑盒并按照操作指南進行。雙鏈RNA與轉染試劑作用于細胞 10h，將培養(yǎng)液換成正常培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞14h。雙鏈RNA轉染3次。收集細胞。3RNA 提取與 RT-PCR提取RNA。用Invitrogen反轉錄試劑盒反轉錄成cDNA。用PCR試劑盒按照說明 書操作，檢測0CT4基因在雙鏈RNA作用后基因表達變化。以看家基因GAPDH基因表達作為 對照。所用 RT-PCR 引物序列如下:0CT4 RTF :CAG AAG GGC AAG CGA TCA AGC, 0CT4 RTR CCCAGA GTG GTG ACG GAG AC。GAPDH RTF :GCA TCC TGC ACC ACC ACC TG, GAPDHRTR :GCC TGG TTC ACG ACG TTC TT。PCR 循環(huán)條件為預變性94°C /5min ；30 個循環(huán)94°C /30sec, 60°C /30sec,72°C /30sec ；延伸72°C /5min。4瓊脂糖凝膠電泳及圖像半定量分析PCR產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳分析。電泳結果經(jīng)凝膠成像儀成像并用定量分析 軟件進行半定量分析。檢測結果如圖4，圖5，圖6所示。實施例3.誘導KLF4基因上調(diào)表達的小分子RNA的設計、合成和篩選
1誘導KLF4基因上調(diào)表達的小分子RNA的設計、合成根據(jù)KLF4基因5’端非編碼區(qū)中的啟動子序列或轉錄起始位點及其側翼序列，設 計如下雙鏈RNA序列。序列長度在18-25bp之間，序列3’端是兩個連續(xù)的dT。 2細胞培養(yǎng)與加藥處理所用細胞為BJ細胞，用DMEM+15% FBS, L-谷氨酰胺，青鏈霉素培養(yǎng)于5 % C02， 37°C細胞培養(yǎng)箱中。凍存的BJ細胞復蘇后，傳代2次至細胞狀態(tài)穩(wěn)定。將BJ細胞接種于 6孔板(1X105細胞/孔)。培養(yǎng)20-24h至細胞完全貼壁且狀態(tài)穩(wěn)定。雙鏈RNA轉染終濃 度為ΙΟΟηΜ，采用Vega轉染試劑盒并按照操作指南進行。雙鏈RNA與轉染試劑作用于細胞 10h，將培養(yǎng)液換成正常培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞14h。雙鏈RNA轉染3次。收集細胞。3RNA 提取與 RT-PCR提取RNA。用Invitrogen反轉錄試劑盒反轉錄成cDNA。用PCR試劑盒按照說明書 操作，檢測KLF4基因在雙鏈RNA作用后基因表達變化。以看家基因GAPDH基因表達作為對 照。所用 RT-PCR引物序列如下:KLF4 RTF CAT CAG CGT CAG CAA AGG CAG C, KLF4 RTR CTT GGT AAT GGA GCG GCG GGA C。GAPDH RTF :GCA TCC TGC ACC ACC ACC TG, GAPDH RTR :GCCTGG TTC ACG ACG TTC TT。PCR 循環(huán)條件為預變性94°C /5min ；30 個循環(huán)94°C /30sec, 60°C /30sec,72°C /30sec ；延伸72°C /5min。4瓊脂糖凝膠電泳及圖像半定量分析PCR產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳分析。電泳結果經(jīng)凝膠成像儀成像并用定量分析 軟件進行半定量分析。檢測結果如圖7，圖8，圖9所示。實施例4.用小分子RNA制備誘導性多能干細胞1細胞培養(yǎng)人BJ細胞，在成纖維細胞培養(yǎng)液(DMEMW 15% FBS, L-谷氨酰胺，青鏈霉素)中 培養(yǎng)。誘導性多能干細胞(iPS)在人胚胎干細胞(ES)培養(yǎng)液中培養(yǎng)。2誘導性多能干細胞的制備在轉染小分子雙鏈RNA前一天，將BJ細胞用成纖維細胞培養(yǎng)液接種于6孔板 (1-2X105細胞/孔)中。轉染小分子雙鏈RNA，在轉染小分子雙鏈RNA—天后，將細胞培 養(yǎng)液換成人胚胎干細胞培養(yǎng)液。在轉染小分子雙鏈RNA處理細胞一個月后，根據(jù)胚胎干細胞樣集落形態(tài)學特征鑒 定并挑選誘導性多能干細胞。結果表明，BJ細胞經(jīng)小分子雙鏈RNA轉染后，S0X2, 0CT4, KLF4等基因表達顯著增 強，有胚胎干細胞樣集落形成，產(chǎn)生了誘導性多能干細胞。實施例5.用小分子RNA與組蛋白去乙?；敢种苿￢PA共同作用制備誘導性多 能干細胞1細胞培養(yǎng)人BJ細胞，在成纖維細胞培養(yǎng)液(DMEMW 15% FBS, L-谷氨酰胺，青鏈霉素)中 培養(yǎng)。誘導性多能干細胞(iPS)在人胚胎干細胞(ES)培養(yǎng)液中培養(yǎng)。2誘導性多能干細胞的制備在轉染小分子雙鏈RNA前一天，將BJ細胞用成纖維細胞培養(yǎng)液接種于6孔板 (1-2X105細胞/孔)中。轉染小分子雙鏈RNA，在轉染小分子雙鏈RNA—天后，將細胞培 養(yǎng)液換成人胚胎干細胞培養(yǎng)液。在轉染后第一天用0. 5mM VPA處理細胞并持續(xù)2周。在轉染小分子雙鏈RNA處理細胞一個月后，根據(jù)胚胎干細胞樣集落形態(tài)學特征鑒 定并挑選誘導性多能干細胞。結果表明，BJ細胞經(jīng)小分子雙鏈RNA轉染后，S0X2, 0CT4, KLF4等基因表達顯著增 強，有胚胎干細胞樣集落形成，產(chǎn)生了誘導性多能干細胞。實施例6.用甲基化修飾小分子RNA制備誘導性多能干細胞1按照實施例1、實施例2、實施例3中序列合成甲基化修飾的小分子RNA。2細胞培養(yǎng)人BJ細胞，在成纖維細胞培養(yǎng)液(DMEMW 15% FBS, L-谷氨酰胺，青鏈霉素)中培養(yǎng)。誘導性多能干細胞(iPS)在人胚胎干細胞(ES)培養(yǎng)液中培養(yǎng)。3誘導性多能干細胞的制備在轉染小分子雙鏈RNA前一天，將BJ細胞用成纖維細胞培養(yǎng)液接種于6孔板 (1-2X105細胞/孔)中。轉染甲基化修飾的小分子雙鏈RNA。在轉染甲基化修飾的小分
10子雙鏈RNA —天后，將細胞培養(yǎng)液換成人胚胎干細胞培養(yǎng)液。在轉染甲基化修飾的小分子雙鏈RNA處理細胞一個月后，根據(jù)胚胎干細胞樣集落 形態(tài)學特征鑒定并挑選誘導性多能干細胞。結果表明，BJ細胞經(jīng)小分子雙鏈RNA轉染后，S0X2, 0CT4, KLF4等基因表達顯著增 強，有胚胎干細胞樣集落形成，產(chǎn)生了誘導性多能干細胞。
權利要求
一類可用于制備誘導性多能干細胞的小分子化合物，其特征在于，其為針對干細胞特異性表達基因的5’非編碼區(qū)序列設計、合成并篩選出來的可誘導上述目標基因特異、高效上調(diào)表達的小片段RNA序列，其核心序列是反向互補雙鏈RNA序列或單鏈RNA序列，序列長度在15 30個堿基或堿基對之間，序列3’末端是兩個或多個連續(xù)的胸腺嘧啶脫氧核糖核苷或其結構類似物。
2.根據(jù)權利要求1所述的小分子化合物，其特征在于其為根據(jù)堿基互補配對的原則與 干細胞特異性表達基因的5’非編碼區(qū)序列相同或互補的任一 RNA序列。
3.根據(jù)權利要求1所述的小分子化合物，其特征在于所述干細胞特異性表達基因為 S0X2、0CT4、KLF4、NANOG 或 C-MYC 基因。
4.根據(jù)權利要求1所述的小分子化合物，其特征在于，RNA分子經(jīng)過化學修飾。
5.根據(jù)權利要求4所述的小分子化合物，其特征在于，對RNA分子全部序列中核苷酸單 體進行甲基化、脫氧、硫代、鹵代、LNA或PNA等方式的修飾。
6.根據(jù)權利要求4所述的小分子化合物，其特征在于，對RNA分子部分序列中核苷酸單 體進行甲基化、脫氧、硫代、鹵代、LNA或PNA等方式的修飾。
7.權利要求1至6所述任一小分子化合物或其組合在制備誘導性多能干細胞中的應用。
8.根據(jù)權利要求7所述的用途，其特征在于在制備誘導性多能干細胞時，與組蛋白去 乙?；敢种苿┗駾NA甲基化轉移酶抑制劑合用。
9.一種制備誘導性多能干細胞的方法，其特征在于如下步驟(1)合成可誘導干細胞特異性表達基因特異、高效上調(diào)表達的小分子化合物；(2)將小分子化合物轉染進入受試細胞，使受試細胞內(nèi)相應的目標基因表達水平升尚；(3)培養(yǎng)受試細胞，鑒定并挑選出誘導性多能干細胞。
全文摘要
本發(fā)明屬于細胞生物學與再生醫(yī)學領域，涉及一種可用于制備誘導性多能干細胞的小分子化合物，其為針對干細胞特異性表達基因設計的可誘導目標基因特異、高效上調(diào)表達的小片段RNA序列，將其轉染進入受試細胞，使受試細胞內(nèi)相應的目標基因表達水平升高，可使受試細胞經(jīng)歷細胞重編程的過程形成誘導性多能干細胞。
文檔編號C12N15/113GK101906419SQ20101023961
公開日2010年12月8日 申請日期2010年7月29日 優(yōu)先權日2010年7月29日
發(fā)明者文思遠, 王升啟 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所