專利名稱：一種黃麻鏈霉菌nf0919菌株、用途及其活性發(fā)酵液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微生物及用途，更具體地說涉及一種黃麻鏈霉菌NF0919菌株、 用途及其活性發(fā)酵液的制備方法，屬于生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，
背景技術(shù)：
由植物病原真菌立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)引起的水稻紋枯病(Rice sheath blight)、禾谷絲核菌(Rhizoctoniacerealis)引起的小麥紋枯病(Wheatsheathblight)和水稻 綠核菌(Ustilaginoideaoryzae)引起的水稻稻曲病(Ricefalsesmut)是當(dāng)前為害水稻的主要 病害。上述三類病害常年可造成10% 30%的產(chǎn)量損失，高發(fā)年份減產(chǎn)80%，甚至絕 收。目前，該類病害的防治主要依賴化學(xué)藥劑，但隨著環(huán)保以及病菌抗藥性問題的日益 突出，化學(xué)防治受到嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。當(dāng)前隨著高產(chǎn)、矮稈、多蘗水稻和小麥良種以及拋秧 和直播稻等水稻輕型栽培技術(shù)的推廣，使水稻和小麥紋枯病和水稻稻曲病的為害逐年加 重。近年來(lái)，隨著人們對(duì)食品安全的要求越來(lái)越高，生物防治在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中也越來(lái)越被 重視。利用頡頏微生物防治該類病害呈現(xiàn)良好的發(fā)展前景，目前已發(fā)現(xiàn)了大量對(duì)該類病 害有頡頏作用的微生物。研制與開發(fā)防治水稻、小麥紋枯病和稻曲病的微生物及其代謝 產(chǎn)物，主要是從細(xì)菌、真菌和植物中獲得。目前報(bào)道用于防治該類病害的細(xì)菌屬(種)主 要有(1)吸水鏈霉菌井岡變種(Streptomyceshygroscopicus var.Jingganggensis Yen) ； (2)鏈 霉菌 702 (Streptomyces sp.702) ； (3)金色鏈霉菌(Streptomyces aureochromogenes) ； (4)鏈 霉菌(Streptomyces kitasazwaensis) ； (5)吸水鏈霉菌北京變禾中(Streptomyces hygrospinosus var.beijingensis) ； (6)賭質(zhì)芽孢桿菌(Bacillus cerens) ； (7)芽孢桿菌 B—916 (Bacillus subtilis B-916) ； (8)金色假單胞菌(Pseudomonasaureofaciens) ； (9)熒光假單胞細(xì)菌 (Pseudomonasfluorescens) ； (10)多粘芽孢桿菌(Bacillus polymyxaVLB 16) ； (11)鏈霉菌 (Streptomyces sp.PM5) ； (I2)銅綠假單胞 ZJl999 (Pseudomonasaeraginosa ZJl"9) ； (13) 黃單胞菌屬(Xanthomonas sp.) ； (14)海洋細(xì)菌 PY-sw-1。另外目前用于該類病害的生防真菌主要有以下種類(1)綠色木霉TvMN7菌 株(Trichoderma viride TvMN7) ； (2)長(zhǎng)枝木霉 T8 (Trichoderma longibrachiatum T8) ； (3) 哈茨木霉 TC3 (Trichoderma harzianum TC3) ； (4)哈茨木霉 NF9 (Trichoderma harzianum NF9) ； (5)青霉屬(Penicillium sp) ； (6)禾長(zhǎng)蠕孢菌 HGE 菌株(Helminthosporium gramineumRabenhf.sp.echinochloaeHGE)。用于該類病害的生物制劑主要有(1)井岡霉 素(有效霉素)；(2)三木脂素；(3)芽孢桿菌泡騰劑；(4)抗菌肽(Purothionin) ； (5)多 抗(氧)霉素；(6)抗霉素A ； (7)抗霉素120 (農(nóng)抗120)。大多數(shù)菌株或制劑只能防冶 一種病害，而利用頡頏放線細(xì)菌同時(shí)防治水稻稻曲病和水稻、小麥紋枯病和其它多種病 害的在現(xiàn)有技術(shù)中沒有提及和公開。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一株新分離的鏈霉菌菌株黃麻鏈霉菌 NF0919菌株(Streptomyces corchorasii)，該菌株可用于防治小麥紋枯病、水稻稻曲病和水
稻紋枯病和其它多種植物病害。同時(shí)本發(fā)明還提供用該黃麻鏈霉菌菌株NF0919制備的活性發(fā)酵液的方法，工藝簡(jiǎn)單。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明的黃麻鏈霉菌菌株NF0919 (拉丁文學(xué)名為Streptomyces corchorasii)，已 于2010年7月8日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為 CGMCC No.3968。本發(fā)明的菌種具有如下特征(1)NF0919菌株的形態(tài)及生理生化特征(見表1)表1、NF0919菌株形態(tài)及理化特征
權(quán)利要求
1.一種黃麻鏈霉菌菌株NF0919 (Streptomyces corchorasii)，該菌種已在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCCNo.3968。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃麻鏈霉菌菌株NF0919，其特征在于該菌株的16SrRNA基 因序列為TCGACAGCTCCCTCCCACAAGGGGTTGGGCCACCGGCTTCGGGTGTTACCAACT TTCGTGACGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGCAATG CTGATCTGCGATTACTAGCAACTCCGACTTCATGGGGTCGAGTTGCAGACCCCAATCC GAACTGAGACCGGCTTTTTGAGATTCGCTCCACCTCACGGTATCGCAGCTCATTGTAC CGGCCATTGTAGCACGTGTGCAGCCCAAGACATAAGGGGCATGATGACTTGACGTCG TCCCCACCTTCCTCCGAGTTGACCCCGGCGGTCTCCTGTGAGTCCCCATCACCCCGAA GGGCATGCTGGCAACACAGGACAAGGGTGGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACAT CTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCACCACCTGTACACCGACCACAAGGGGGA CCCTGTCTCCAGGGTTTTCCGGTGTATGTCAAGCCTTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCG TCGAATTAAGCCACATGCTCCGCTGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTT TAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGGAACTTAATGCGTTAGCTGCGGCACCGA CGACGTGGAATGTCGCCAACACCTAGTTCCCACCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGG TATCTAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTAATGGCCCAGAG ATCCGCCTTCGCCACCGGTGTTCCTCCTGATATCTGCGCATTTCACCGCTACACCAGG AATTCCGATCTCCCCTACCACACTCTAGCTAGCCCGTATCGAATGCAGACCCGGGGTT AAGCCCCGGGCTTTCACACCCGACGTGACAAGCCGCCTACGAGCTCTTTACGCCCAA TAATTCCGGACAACGCTTGCGCCCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGC CGGCGCTTCTTCTGCAGGTACCGTCACTTTCGCTTCTTCCCTGCTGAAAGAGGTTTAC AACCCGAAGGCCGTCATCCCTCACGCGGCGTCGCTGCATCAGGCTTTCGCCCATTGT GCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGT GGCCGGTCGCCCTCTCAGGCCGGCTACCCGTCGTCGCCTTGGTGAGCCGTTACCTCA CCAACAAGCTGATAGGCCGCGGGCTCATCCTTCACCGCCGGAGCTTTCAACCCTCAC AGATGCCTGCGAGAGTGGTATCCGGTATTAGACCCCGTTTCCAGGGCTTGTCCCAGAG TGAAGGGCAGATTGCCCACGTGTTACTCACCCGTTCGCCACTAATCCCCACCGAAGTG GTTCATCGTTCGACTGCA。
3.權(quán)利要求1所述的黃麻鏈霉菌菌株NF0919在防治水稻稻曲病和防治水稻、小麥紋 枯病方面的應(yīng)用。
4.一種用權(quán)利要求1所述的黃麻鏈霉菌菌株NF0919制備的活性發(fā)酵液。
5.一種制備權(quán)利要求4所述的活性發(fā)酵液的方法，其特征在于包括以下步驟(A)菌株的活化與一級(jí)種子培養(yǎng)液的培養(yǎng)將保存的NF0919菌株的斜面在高氏一號(hào)培養(yǎng)基上活化，30°C培養(yǎng)10d，挑取Icm2大 小的菌塊接種于50mL —級(jí)種子培養(yǎng)液中，置于170rpm搖床上30°C振蕩培養(yǎng)44 48h， 其中所述的50mL—級(jí)種子培養(yǎng)液的成分為可溶性淀粉3%，葡萄糖2%，酵母粉1%， 蛋白胨1%，NaCl 0.5%, K2HPO4 0.2%,可溶性淀粉、葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、NaCl 和K2HPO4含量的單位比例為W/V ；(B)二級(jí)種子培養(yǎng)液的培養(yǎng)將步驟(A)所得一級(jí)種子培養(yǎng)液按5%的接種量接入50mL 二級(jí)種子培養(yǎng)液中， 170rpm、30°C搖床上培養(yǎng)48_52h，其中所述的5%的單位比例為V/V ；所述的50mL二級(jí) 種子培養(yǎng)液的成分馬鈴薯淀粉8.5%，棉籽蛋白2.2%，CaCO3 0.1%, K2HPO4 0.05%, MgSO4 0.05%,淀粉酶0.01%，馬鈴薯淀粉、棉籽蛋白、CaC03、K2HPO4^ MgSO4和淀粉酶含量的單位比例為w/ν ；(C)發(fā)酵培養(yǎng)液的培養(yǎng)將步驟(B)所得二級(jí)種子培養(yǎng)液按5%的接種量接種于裝有160L發(fā)酵培養(yǎng)液的 容積為200L的發(fā)酵罐中，其中所述的5%的單位比例為V/V，設(shè)置發(fā)酵參數(shù)為溶 氧100%，消泡劑1.6L，攪拌速度為360rpm，發(fā)酵溫度為36°C，發(fā)酵時(shí)間為72h，pH 6.8 7.2，所述的發(fā)酵培養(yǎng)液的成分為馬鈴薯淀粉8.5%，棉籽蛋白2.6%，K2HPO4 0.05%, NaCl 0.2%, MgS040.05%, CaCO3 0.1%, pH7.2-7.4,馬鈴薯淀粉、棉籽蛋白、 K2HPO4^ NaCL MgSO4和CaCO3含量的單位比例為W/V ；(D)NF0919活性發(fā)酵液的制備把步驟(C)所得發(fā)酵液在IOOOOrpm離心5min得上清液，上清液中添加潤(rùn)濕劑和 防腐劑即得菌株NF0919的活性發(fā)酵液，其中潤(rùn)濕劑和防腐劑含量的單位比例均為W/V。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備活性發(fā)酵液的方法，其特征在于步驟(C)中所述的消泡 劑為XP-100F系列發(fā)酵用有機(jī)硅消泡劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備活性發(fā)酵液的方法，其特征在于步驟(D)中所述的潤(rùn)濕 劑為木質(zhì)素磺酸鈉；所述的防腐劑為苯鉀酸鈉。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種黃麻鏈霉菌菌株NF0919(Streptomyces corchorusii)，該菌種已在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC No.3968。該菌株可用于防治小麥紋枯病、水稻稻曲病和水稻紋枯病和其它多種植物病害。
文檔編號(hào)C12R1/465GK102010835SQ20101023688
公開日2011年4月13日 申請(qǐng)日期2010年7月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月27日
發(fā)明者莊義慶, 楊敬輝, 陳宏州 申請(qǐng)人:江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所