專利名稱：一種從食用菌中提取的核苷酸混合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品加工領(lǐng)域，涉及一種從食用菌中提取的核苷酸混合物及其制備方 法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
核苷酸類物質(zhì)對甜味有增效作用，對咸、酸、苦味及腥味、焦味有掩蓋和消除作用， 對肉味則有增效作用，特別是核苷酸對氨基酸類鮮味物質(zhì)有強(qiáng)烈的助鮮作用，氨基酸類鮮 味物質(zhì)含量在閾值以下時其鮮味是潛在性的，只要添加少量5’ -核苷酸，就能使其提到閾 值以上，發(fā)揮其增鮮效果。核苷酸對谷氨酸(MSG，味精)的鮮味有強(qiáng)大助鮮作用，12%鳥苷 酸(GMP) 88% MSG，相當(dāng)于MSG9. 9倍的鮮度；食用菌營養(yǎng)豐富，味道鮮美，具有獨特的風(fēng)味(包括香味和滋味)。食用菌中核酸 含量豐富，水解核酸可得到核苷酸。已有的研究表明雙孢蘑菇核酸總量為2. 66%;鮑魚菇 為2. 93% ；鳳尾菇4. 06% ；草菇為3. 88% ；核苷酸在姬松茸菌絲體中達(dá)到5. 51mg/g。香菇 中四種核苷酸的含量分別為 5，-IMP2. 82mg/g、5，-GMP7. 05mg/g、5，-UMP 4. 25mg/g、5，-AMP 6. 51mg/g，平菇子實體中可提取得到了 2%以上的核酸。目前調(diào)味品行業(yè)生產(chǎn)的調(diào)味核苷酸主要為5’-肌苷酸(IMP)和5’-鳥苷酸(GMP)， 一般通過二種方法生產(chǎn)一是發(fā)酵-轉(zhuǎn)化法，利用一些生產(chǎn)菌株發(fā)酵生產(chǎn)肌苷、鳥苷后經(jīng)磷 酸化來生成5’ -肌苷酸、5’ -鳥苷酸；二是通過酵母發(fā)酵培養(yǎng)，對酵母破壁提取核酸，然后 再通過核酸酶水解處理，經(jīng)過濾澄清、除蛋白、分離等步驟獲得。我國食用菌栽培產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，已經(jīng)成為糧、棉、油、果、菜外的第六大農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)， 食用菌產(chǎn)量巨大，而大量的食用菌下腳料沒有利用，食用菌中核酸含量高，是制備核苷酸重 要的原料來源，利用食用菌及其下腳料開發(fā)核苷酸類天然調(diào)味料是食用菌深加工的重要方 向。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是利用食用菌及其下腳料制備應(yīng)用于調(diào)味品的天然核苷酸，解決食 用菌加工制備核苷酸的工藝、特別是利用食用菌下腳料制備核苷酸的技術(shù)問題，擴(kuò)展了食 用菌及其下腳料的利用途徑，提高了食用菌下腳料的利用價值。本發(fā)明的目的是通過下列技術(shù)方案實現(xiàn)的1、一種從食用菌中提取的核苷酸混合物，其特征在于該核苷酸混合物是通過下列 方法制備得到的a.提取核酸食用菌或食用菌下腳料加水磨成勻漿，調(diào)節(jié)PH9-12，微波提取，過 濾，調(diào)節(jié)PH7，得提取液；b.濃縮純化核酸提取液經(jīng)離心分離、中空纖維超濾膜富集分離、濃縮，濃縮液調(diào) 節(jié)PH，在蛋白等電點靜置過夜，離心，上清液調(diào)節(jié)pH，在核酸等電點靜置過夜，離心，取沉淀 物，洗滌，干燥，得核酸；
5
c.酶解核酸加水溶解，加入5’ -磷酸二酯酶進(jìn)行酶解成5’ “核苷酸；d.收集核苷酸利用陰離子交換樹脂分離富集核苷酸，得到食用菌核苷酸混合 物。所述的核苷酸混合物，該核苷酸混合物是通過下列方法制備得到的(1)食用菌或食用菌下腳料制漿食用菌或食用菌下腳料加水，料水重量比為 1 3 6，磨成勻漿狀物，備用；(2)核酸提取a.上述勻漿狀物以lmol/L NaOH調(diào)節(jié)pH 11，加入NaCl使其濃度達(dá)4%，用微波提 取，提取功率為300W，時間為30min.，提取1 2次，所得提取液300目過濾，離心(4000r/ pm) 15min,再用lmol/LHCl調(diào)節(jié)pH為7，得到提取液；b.提取液經(jīng)濾膜孔徑為5000道爾頓的中空纖維超濾膜分離，控制壓力為0.2mPa， 溫度為25°C，膜通量為60 140ml/min.，核酸被截留；c.所得核酸截留液用6mol/L HCl調(diào)pH 4. 2，4°C靜置過夜，離心，得上清液；d.所得上清液再用6mol/L HCl調(diào)pH 2. 0，4°C靜置過夜，離心，得到初步純化的核 酸沉淀物；e.所得沉淀用50%乙醇沖洗，離心，60°C，0.09Mpa，真空干燥時2h，得到核酸干
P
m ；(3)核酸酶解稱取上述制得的核酸干品，加蒸餾水，超聲波輔助溶解，制成濃度為0. 2wt%的核 酸溶液，加入一定量5’ -磷酸二酯酶酶液，酶解條件為酶解時間3h、溫度40°C、pH 5. 8、酶 底比為1300U/g ；酶解結(jié)束，100°C滅酶lOmin，離心即得核苷酸混合物溶液；(4)核苷酸富集分離a.核酸經(jīng)酶解成混合核苷酸后，調(diào)樣液濃度為0. 75mg/mL的核苷酸混合酶解液， 用lmol/L NaOH調(diào)節(jié)核苷酸混合酶解液使其為最適ρΗΙΟ. 0 ；b.步驟a所得樣液上陰離子交換樹脂柱，控制上樣速度lmL/min，上樣液體積為樹 脂體積的8倍；c.對上樣后的陰離子交換樹脂柱依次用3倍體積去離子水，1倍體積0. Imol/ LHCl，1 倍體積 0. 2mol/LHCl 1 倍體積 0. 3mol/LHCl 進(jìn)行洗柱，然后用 0. 4mol/LHCl+2 % NaCl 洗脫，收集 0. 4mol/LHCl+2% NaCl 洗脫液；d.步驟c所得0. 4mol/LHCl+2 % NaCl洗脫液經(jīng)透析袋透析，0. 09mPa, 60°C，真空 濃縮干燥得核苷酸混合物制品。所述的核苷酸混合物，其中食用菌為雙孢蘑菇Agaricus bisporus、金針菇 Flammulinavelutipes、香恭 Lentinus velutinus、杏鮑 Pleurotus eryngii、平恭 Pleurotus ostreatus 中的一種或多種。所述的核苷酸混合物，其中陰離子交換樹脂為大孔強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂，優(yōu)選 型號為D201GF。所述的核苷酸混合物，其中核苷酸混合物含有5’ -胞苷酸、5’ -腺苷酸、5’ -鳥苷 酸、5’ -尿苷酸。所述核苷酸混合物的制備方法，該方法包括以下步驟
6
a.提取核酸食用菌或食用菌下腳料加水磨成勻漿，調(diào)節(jié)PH9-12，微波提取，濾布 過濾，調(diào)節(jié)PH7，得提取液；b.濃縮純化核酸提取液經(jīng)離心分離、中空纖維超濾膜富集分離、濃縮，濃縮液調(diào) 節(jié)pH，在蛋白等電點靜置過夜，離心，上清液調(diào)節(jié)pH，在核酸等電點靜置過夜，離心，取沉淀 物，洗滌，干燥，得核酸；c.定向酶解核酸加水溶解，加入5’ -磷酸二酯酶定向酶解成5’ -核苷酸；d.收集核苷酸利用陰離子交換樹脂分離富集核苷酸，得到食用菌核苷酸混合 物。所述核苷酸混合物的制備方法，該方法包括以下步驟(1)食用菌或食用菌下腳料制漿食用菌或食用菌下腳料加水，料水重量比為 1 3 6，磨成勻漿狀物，備用；(2)核酸提取a.上述勻漿狀物以lmol/L NaOH調(diào)節(jié)pH 11，加入NaCl使其濃度達(dá)4%，用微波提 取，提取功率為300W，時間為30min.，提取1 2次，所得提取液300目過濾，離心(4000r/ pm) 15min,再用lmol/L HCl調(diào)節(jié)pH為7，得到提取液；b.提取液經(jīng)濾膜孔徑為5000道爾頓的中空纖維超濾膜分離，控制壓力為0. 2mPa, 溫度為25°C，膜通量為60 140ml/min.，核酸被截留；c.所得核酸截留液用6mol/L HCl調(diào)pH 4. 2，4°C靜置過夜，離心，得上清液；d.所得上清液再用6mol/L HCl調(diào)pH 2. 0，4°C靜置過夜，離心，得到初步純化的核 酸沉淀物；e.所得沉淀用50%乙醇沖洗，離心，60°C，0.09Mpa，真空干燥時2h，得到核酸干
P
m ；(3)核酸酶解稱取上述制得的核酸干品，加蒸餾水，超聲波輔助溶解，制成濃度為0. 2wt%的核 酸溶液，加入一定量5’ -磷酸二酯酶酶液，酶解條件為酶解時間3h、溫度40°C、pH 5. 8、酶 底比為1300U/g ；酶解結(jié)束，100°C滅酶lOmin，離心即得核苷酸混合物溶液；(4)核苷酸富集分離a.核酸經(jīng)酶解成混合核苷酸后，調(diào)樣液濃度為0. 75mg/mL的核苷酸混合酶解液， 用lmol/L NaOH調(diào)節(jié)核苷酸混合酶解液使其為最適ρΗΙΟ. 0 ；b.步驟a所得樣液上陰離子交換樹脂柱，控制上樣速度lmL/min，上樣液體積為樹 脂體積的8倍；c.對上樣后的陰離子交換樹脂柱依次用3倍體積去離子水，1倍體積0. Imol/ LHCl, 1 倍體積 0. 2mol/LHCl, 1 倍體積 0. 3mol/LHCl 進(jìn)行洗柱，然后用 0. 4mol/LHCl+2 % NaCl 洗脫，收集 0. 4mol/LHCl+2% NaCl 洗脫液；d.步驟c所得0. 4mol/LHCl+2 % NaCl洗脫液經(jīng)透析袋透析，0. 09mPa, 60°C，真空 濃縮干燥得核苷酸混合物制品。所述核苷酸混合物在制備調(diào)味品中的應(yīng)用。下腳料是指食用菌采收或加工過程中整理處理所產(chǎn)生的不完整的子實體或碎料 等外品及菌柄、菇腳等邊角料。
食用菌或食用菌下腳料制漿前最好能進(jìn)行選摘，剔除腐爛霉變部分，清洗后浙干。本發(fā)明的優(yōu)點本發(fā)明提供的制備方法簡單可行，用中空纖維超濾膜濃縮富集核酸避免了由于加 熱導(dǎo)致的核酸非定向降解而造成的核苷酸的損失，同時由于濃縮后的體積減小，便于后續(xù) 等電點沉淀。中空纖維超濾膜濃縮富集核酸其核酸損失率為10.9%，較真空濃縮核酸損失 率18. 8%低。本發(fā)明采用大孔強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂富集四種核苷酸，所得到的是四種核苷酸 的混合制劑，經(jīng)過真空濃縮干燥后即得食用菌核苷酸，具有總核苷酸含量高，可直接用于食 品添加劑的配制原料，操作中所用試劑均食品安全之列，且工藝操作簡單等特點。本發(fā)明擴(kuò)展了食用菌及其下腳料的利用途徑，提高了食用菌下腳料的利用價值。


圖1是金針菇4中核苷酸液相色譜圖。其中各物質(zhì)峰依次為1胞苷酸；2腺苷酸； 3鳥苷酸；4尿苷酸。圖2是雙孢蘑菇核苷酸色譜圖。其中各物質(zhì)峰依次為1胞苷酸；2腺苷酸；3鳥苷 酸；4尿苷酸。圖3是四種核苷酸標(biāo)準(zhǔn)樣液相色譜圖。
具體實施例方式以下通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。實施例1 一種食用菌核苷酸的制備_金針菇(1)稱取金針菇Flammulina velutipes下腳料2500g，加入15000ml水，用高速組 織搗碎機(jī)磨成勻漿。勻漿狀物以Imol/LNaOH調(diào)節(jié)pH 11，并加入NaCl液，使其濃度達(dá)4%， 微波回流提取30min，提取功率為300W，提取一次，用300目濾布過濾得濾過液，濾液離心 (4000r/pm) 15min，再用lmol/LHCl調(diào)節(jié)pH為7，得到澄清透明的核酸提取液。(2)步驟(1)提取液進(jìn)行管式離心機(jī)離心(lOOOOr/min)，得澄清透明核酸提取液， 棄去沉淀(主要為食用菌下腳料的殘渣)，離心后可溶性固形物含量未變，為4. 2wt%,但透 光率明顯上升，由T65tl = 12. 3上升到T65tl = 73。(3)步驟⑵清液15L經(jīng)中空纖維超濾膜(濾膜孔徑為5000D)分離，控制壓力為 0. 2mPa,溫度為25°C，膜通量為60 140ml/min.，操作中如膜通量下降到原來的30%時，適 當(dāng)加入清水，經(jīng)過不斷的循環(huán)過濾，分子量相對較大的核酸被截留，達(dá)到了濃縮和去除小分 子雜質(zhì)的目的，得到1. 7L截留液，使體積濃縮倍數(shù)達(dá)8. 7，濃縮液的核酸截留率為89. 1%。(4)步驟(3)所得截留液1.7L逐滴加入6mol/L HC1，邊攪拌，使pH 4. 2 (蛋白等 電點)，低溫(4°C)靜置過夜。(5)步驟(4)放置過夜的截留液1. 7L離心(4000r/min) 15min,得上清液(富含核 酸)，沉淀經(jīng)測定不含核酸，用6mol/L HCl繼續(xù)調(diào)pH為2.0 (核酸等電點)，低溫(4°C )靜 置過夜。(6)步驟(5)過夜的提取液進(jìn)行離心(4000r/min)15min，得到初步純化的核酸沉
淀物，而上清液仍含有少量核酸，繼續(xù)低溫(4°C )靜置過夜，再離心。
(7)步驟(5)，(6)得核酸沉淀進(jìn)行真空干燥，溫度為60°C，真空度為0. 09Mpa，干 燥時間為2hr，得到核酸干品5. 45g，得率為0. 218%,(即IOOg鮮金針菇可得到0. 218g核 酸干品)，核酸含量67. 1%。(8)取步驟(7)核酸干品lg，，加蒸餾水500ml，超聲波輔助溶解，制成0.2襯％的 核酸溶液，加入適量5，-磷酸二酯酶酶液(酶活力13000u/g)，酶底比為1300U/g核酸干品 (核酸含量為67. 1% )酶解條件為酶解時間3h、溫度40°C、pH 5.8。酶解結(jié)束，100°C滅酶 IOmin,離心即得混合核苷酸溶液。(9)步驟(8)得到核苷酸混合酶解液，調(diào)樣液濃度為0. 75mg/mL的核苷酸混合酶解 液，并同時用lmol/L NaOH調(diào)節(jié)核苷酸混合酶解液使其ρΗΙΟ. 0。(10)將經(jīng)處理的濕樹脂D201GF裝入玻璃柱(DXH=L 5cmX 15cm)中，步驟(9) 所得核苷酸混合酶解液上樣，控制流速為lmL/min，上樣液體積為樹脂體積的8倍。(11)對步驟(10)陰離子交換樹脂D201GF進(jìn)行洗脫，先用去離子水3倍體積(樹 脂體積，下同)洗至流出液中不含有核苷酸，然后依次用0. lmol/LHCl 1倍體積，0. 2mol/ LHCll倍體積，0. 3mol/LHCl 1倍體積進(jìn)行洗柱，然后用0. 4mol/L HCl+2% NaCl洗脫，收集 0. 4mol/L HCl+2% NaCl洗脫部分，直至0.4mol/L HCl+2% NaCl洗脫液中沒有核苷酸檢出。(12)D201GF離子交換柱層析后，所得洗脫液為富集了核苷酸的混合核苷酸制品， 總核苷酸濃度達(dá)到4. 5mg/ml,比上樣前0. 75mg/ml增加6倍，總核苷酸回收率達(dá)86. 2%。將 洗脫液真空減壓濃縮(0. 09mPa，6(TC)，得金針菇混合核苷酸制品。此混合核苷酸制品可用 于調(diào)配核苷酸調(diào)味品。(13)步驟(12)獲得的混合核苷酸制品經(jīng)高效液相色譜檢測，色譜條件為色譜柱EclipseXDB-C18 色譜柱(5 μ m，150 X 4. 6mm)；流動相超純水甲醇冰乙酸四丁基氫氧化銨=894. 5 100 5 0. 5； (體積比)檢測波長:260nm；進(jìn)樣量:15 μ L ；柱溫:25°C ；流速1. OmL/min。檢測色譜圖如圖1。核苷酸分析檢測根據(jù)上述方法制備的核苷酸混合物，應(yīng)用高效液相色譜法進(jìn)行 檢測分析，主要是由5’ -胞苷酸、5’ -腺苷酸、5’ -鳥苷酸、5’ -尿苷酸四種核苷酸組成；檢 測獲得的高效液相色譜圖中具有由圖1中標(biāo)注的1、2、3、4號吸收峰，1-4號吸收峰分別是 1.5’-胞苷酸；2. 5’ -腺苷酸；3. 5’ -鳥苷酸；4. 5’ -尿苷酸。實施例2 —種食用菌核苷酸制備-雙孢蘑菇食用菌核苷酸的組成成分與實例1相同，制備方法包括的步驟與實例1相同。高效液相色譜檢測的色譜圖如圖2，可見核苷酸混合物中包含有5’ _胞苷酸、 5’ -腺苷酸、5，-鳥苷酸、5，-尿苷酸四種核苷酸。
權(quán)利要求
一種從食用菌中提取的核苷酸混合物，其特征在于該核苷酸混合物是通過下列方法制備得到的a.提取核酸食用菌或食用菌下腳料加水磨成勻漿，調(diào)節(jié)pH9 12，微波提取，過濾，調(diào)節(jié)pH7，得提取液；b.濃縮純化核酸提取液經(jīng)離心分離、中空纖維超濾膜富集分離、濃縮，濃縮液調(diào)節(jié)pH，在蛋白等電點靜置過夜，離心，上清液調(diào)節(jié)pH，在核酸等電點靜置過夜，離心，取沉淀物，洗滌，干燥，得核酸；c.酶解核酸加水溶解，加入5’ 磷酸二酯酶進(jìn)行酶解成5’ 核苷酸；d.收集核苷酸利用陰離子交換樹脂分離富集核苷酸，得到食用菌核苷酸混合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核苷酸混合物，其特征在于該核苷酸混合物是通過下列方法 制備得到的(1)食用菌或食用菌下腳料制漿食用菌或食用菌下腳料加水，料水重量比為 1 3 6，磨成勻漿狀物，備用；(2)核酸提取a.上述勻漿狀物以lmol/LNaOH調(diào)節(jié)pH 11，加入NaCl使其濃度達(dá)4%，用微波提取， 提取功率為300W，時間為30min.，提取1 2次，所得提取液300目過濾，離心15min，再用 lmol/LHCl調(diào)節(jié)pH為7，得到提取液；b.提取液經(jīng)濾膜孔徑為5000道爾頓的中空纖維超濾膜分離，控制壓力為0.2mPa，溫度 為25°C，膜通量為60 140ml/min.，核酸被截留；c.所得核酸截留液用6mol/LHCl調(diào)pH 4. 2，4°C靜置過夜，離心，得上清液；d.所得上清液再用6mol/LHCHfpH 2. 0，4°C靜置過夜，離心，得到初步純化的核酸沉 淀物；e.所得沉淀用50%乙醇沖洗，離心，60°C，0.09Mpa，真空干燥時2h，得到核酸干品；(3)核酸酶解稱取上述制得的核酸干品，加蒸餾水，超聲波輔助溶解，制成濃度為0. 2襯％的核酸溶 液，加入一定量5’-磷酸二酯酶酶液，酶解條件為酶解時間3h、溫度40°C、pH 5. 8、酶底比 為1300U/g ；酶解結(jié)束，100°C滅酶lOmin，離心即得核苷酸混合物溶液；(4)核苷酸富集分離a.核酸經(jīng)酶解成混合核苷酸后，調(diào)樣液濃度為0.75mg/mL的核苷酸混合酶解液，用 lmol/L NaOH調(diào)節(jié)核苷酸混合酶解液使其為最適ρΗΙΟ. 0 ；b.步驟a所得樣液上陰離子交換樹脂柱，控制上樣速度lmL/min，上樣液體積為樹脂體 積的8倍；c.對上樣后的陰離子交換樹脂柱依次用3倍體積去離子水，1倍體積0.lmol/LHCl, 1 倍體積0. 2mol/LHCl 1倍體積0. 3mol/LHCl進(jìn)行洗柱，然后用0. 4mol/LHCl+2% NaCl洗脫， 收集 0. 4mol/LHCl+2% NaCl 洗脫液；d.步驟c所得0.4mol/LHCl+2% NaCl洗脫液經(jīng)透析袋透析，0. 09mPa, 60°C，真空濃縮 干燥得核苷酸混合物制品。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的核苷酸混合物，其特征在于食用菌為雙孢蘑菇 Agaricusbisporusλ 金針 Flammulina velutipes、香燕 Lentinus velutinus、杏鮑 Pleurotuseryngii、平 Pleurotus ostreatus 中的一禾中或多禾中。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的核苷酸混合物，其特征在于陰離子交換樹脂為大孔強(qiáng)堿 性陰離子交換樹脂，優(yōu)選型號為D201GF。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的核苷酸混合物，其特征在于核苷酸混合物含有5’-胞苷 酸、5’ -腺苷酸、5’ -鳥苷酸、5’ -尿苷酸。
6.權(quán)利要求1所述核苷酸混合物的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟a.提取核酸食用菌或食用菌下腳料加水磨成勻漿，調(diào)節(jié)PH9-12，微波提取，濾布過 濾，調(diào)節(jié)PH7，得提取液；b.濃縮純化核酸提取液經(jīng)離心分離、中空纖維超濾膜富集分離、濃縮，濃縮液調(diào)節(jié) PH，在蛋白等電點靜置過夜，離心，上清液調(diào)節(jié)pH，在核酸等電點靜置過夜，離心，取沉淀物， 洗滌，干燥，得核酸；c.定向酶解核酸加水溶解，加入5’-磷酸二酯酶定向酶解成5’ -核苷酸；d.收集核苷酸利用陰離子交換樹脂分離富集核苷酸，得到食用菌核苷酸混合物。
7.權(quán)利要求1或2所述核苷酸混合物的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟(1)食用菌或食用菌下腳料制漿食用菌或食用菌下腳料加水，料水重量比為 1 3 6，磨成勻漿狀物，備用；(2)核酸提取a.上述勻漿狀物以lmol/LNaOH調(diào)節(jié)pH 11，加入NaCl使其濃度達(dá)4%，用微波提取， 提取功率為300W，時間為30min.，提取1 2次，所得提取液300目過濾，離心15min，再用 lmol/LHCl調(diào)節(jié)pH為7，得到提取液；b.提取液經(jīng)濾膜孔徑為5000道爾頓的中空纖維超濾膜分離，控制壓力為0.2mPa，溫度 為25°C，膜通量為60 140ml/min.，核酸被截留；c.所得核酸截留液用6mol/LHCl調(diào)pH 4. 2，4°C靜置過夜，離心，得上清液；d.所得上清液再用6mol/LHCHfpH 2. 0，4°C靜置過夜，離心，得到初步純化的核酸沉 淀物；e.所得沉淀用50%乙醇沖洗，離心，60°C，0.09Mpa,真空干燥時2h，得到核酸干品；(3)核酸酶解稱取上述制得的核酸干品，加蒸餾水，超聲波輔助溶解，制成濃度為0. 2襯％的核酸溶 液，加入一定量5’-磷酸二酯酶酶液，酶解條件為酶解時間3h、溫度40°C、pH 5. 8、酶底比 為1300U/g ；酶解結(jié)束，100°C滅酶lOmin，離心即得核苷酸混合物溶液；(4)核苷酸富集分離a.核酸經(jīng)酶解成混合核苷酸后，調(diào)樣液濃度為0.75mg/mL的核苷酸混合酶解液，用 lmol/L NaOH調(diào)節(jié)核苷酸混合酶解液使其為最適pH10. 0 ；b.步驟a所得樣液上陰離子交換樹脂D201GF柱，控制上樣速度lmL/min，上樣液體積 為樹脂體積的8倍；c.對上樣后的陰離子交換樹脂D201GF柱依次用3倍體積去離子水，1倍體積0.Imol/ LHCl, 1 倍體積 0. 2mol/LHCl 1 倍體積 0. 3mol/LHCl 進(jìn)行洗柱，然后用 0. 4mol/LHCl+2 % NaCl 洗脫，收集 0. 4mol/LHCl+2% NaCl 洗脫液；d.步驟c所得0.4mol/LHCl+2 % NaCl洗脫液經(jīng)透析袋透析，0. 09mPa, 60°C，真空濃縮干燥得核苷酸混合物制品。
8.權(quán)利要求1或2所述核苷酸混合物在制備調(diào)味品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于食品加工領(lǐng)域，公開了一種從食用菌中提取的核苷酸混合物及其制備方法和應(yīng)用。該核苷酸混合物是通過將食用菌或食用菌下腳料加水磨成勻漿，調(diào)節(jié)pH，微波提取，過濾，提取液經(jīng)離心分離、中空纖維超濾膜富集分離、濃縮，濃縮液調(diào)節(jié)pH，在蛋白等電點靜置過夜，離心，上清液調(diào)節(jié)pH，在核酸等電點靜置過夜，離心，取沉淀物，洗滌，干燥，得核酸；核酸加水溶解，加入5’-磷酸二酯酶進(jìn)行酶解成5’-核苷酸；利用陰離子交換樹脂分離富集核苷酸，得核苷酸混合物。該核苷酸混合物可用于制備調(diào)味品。本發(fā)明擴(kuò)展了食用菌及其下腳料的利用途徑，提高了食用菌下腳料的利用價值。
文檔編號C12P19/30GK101914599SQ201010236720
公開日2010年12月15日 申請日期2010年7月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月26日
發(fā)明者張衛(wèi)明, 趙伯濤, 錢驊, 黃曉德 申請人:中華全國供銷合作總社南京野生植物綜合利用研究院