專(zhuān)利名稱(chēng)：抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種復(fù)方制劑，特別涉及一種抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑，還涉及該 復(fù)方制劑的制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
我國(guó)是肝炎大國(guó)，約有1.3億乙肝病毒攜帶者、近3000萬(wàn)慢性乙型肝炎患者以 及相近數(shù)量的其他各類(lèi)肝炎患者。為這些患者提供更好的治療藥物和方法，對(duì)保護(hù)人民 健康、維護(hù)社會(huì)穩(wěn)定意義重大。目前，慢性病毒性肝炎的主流治療方案包括病因治療和 護(hù)肝治療，其中護(hù)肝藥物占我國(guó)肝病藥物消費(fèi)的1/3以上，但被公認(rèn)效果顯著和穩(wěn)定的 一線藥物極少，市場(chǎng)上對(duì)效果突出的抗病毒性肝炎新藥有著迫切需求。甘草在中國(guó)、印度和希臘的古代醫(yī)藥典籍中多有記載，至今已有幾千年的使用 歷史，臨床用于治療呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等多種疾病。由于甘草對(duì)多種疾病 表現(xiàn)了良好的預(yù)防和治療作用且毒副作用較小，近年來(lái)，對(duì)甘草潛在的多種藥理活性的 研究和挖掘一直是國(guó)內(nèi)外藥理界的研究熱點(diǎn)。目前，多個(gè)試驗(yàn)結(jié)果表明甘草及其提取物 具有抗炎、抗病毒、抗菌、保肝、抗癌、抗氧化、鎮(zhèn)咳、免疫調(diào)解、降糖和抗血小板凝 集等多種活性，證實(shí)甘草在肝病治療、糖尿病治療、缺血再灌注損傷、阿爾茨海默癥、 帕金森氏癥、癲癇、抑郁、癌癥治療方面有更好的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用前景。但現(xiàn)有甘草藥學(xué) 活性物質(zhì)的提取方法多涉及強(qiáng)酸、強(qiáng)堿和各種有機(jī)溶劑的應(yīng)用，存在以下諸多弊端① 不能有效解除甘草中富含的木質(zhì)素和纖維素對(duì)活性物質(zhì)溶出的結(jié)構(gòu)阻隔作用，致使活性 物質(zhì)得率偏低，原料用量增大，廢棄藥渣增多，嚴(yán)重浪費(fèi)資源和污染環(huán)境；②強(qiáng)酸、強(qiáng) 堿或其它有機(jī)溶劑的劇烈化學(xué)反應(yīng)，易造成活性物質(zhì)的消旋化、異構(gòu)化和結(jié)構(gòu)重排等問(wèn) 題，影響活性物質(zhì)的穩(wěn)定性、純度和藥效；③部分有機(jī)溶劑具有毒性和腐蝕性，易燃易 爆，對(duì)工作環(huán)境和人體健康存在安全威脅。螺旋藻為天然藥物，蛋白質(zhì)含量高達(dá)60-70%且組成合理，富含人體必需而又不 能自行合成的八種氨基酸，在降血脂、抗癌、抗衰老、抗輻射、護(hù)肝、提高機(jī)體免疫力 與造血功能、調(diào)節(jié)代謝機(jī)能等方面均具有功效。大量研究表明，螺旋藻能夠顯著提高免 疫功能，促進(jìn)肝細(xì)胞再生，抗自由基損傷，阻止肝細(xì)胞壞死，并對(duì)腸道雙歧桿菌有明顯 促增殖作用。近期報(bào)道螺旋藻具有明確的抗病毒作用，其抗人免疫缺陷病毒(HIV)和人 乳頭狀瘤病毒(HPV)的效果令人關(guān)注。目前，市售的螺旋藻制劑主要是螺旋藻粉或?qū)⒙?旋藻粉按常規(guī)制劑方法制成的片劑或膠囊劑，其制備方法存在以下問(wèn)題①螺旋藻所含 蛋白質(zhì)主要存在于螺旋藻細(xì)胞內(nèi)，而螺旋藻細(xì)胞壁較厚，內(nèi)壁含有肽聚糖、外壁含有脂 蛋白和脂多糖以及膠質(zhì)鞘，簡(jiǎn)單粉碎方法不能破壞螺旋藻的細(xì)胞壁，難以釋放出胞內(nèi)蛋 白質(zhì)；②螺旋藻所含蛋白質(zhì)大多數(shù)為分子量在5萬(wàn)以上的高蛋白，其只有被消化成寡肽 后才能被人體吸收利用，而人體自身的消化率很低；③某些生物活性肽是以非活性狀態(tài) 存在于蛋白質(zhì)的多肽鏈中，只有當(dāng)其通過(guò)蛋白酶的作用被釋放出來(lái)，才可能發(fā)揮生物活 性。
迄今為止，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)甘草和螺旋藻復(fù)方制劑的相關(guān)研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供一種抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑；目的之 二在于提供一種所述抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑的制備方法；目的之三在于提供所述抗肝 炎天然藥物復(fù)方制劑的應(yīng)用。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案1、抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑，由甘草和螺旋藻按質(zhì)量比為1 6 1 6制成。進(jìn)一步，所述抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑優(yōu)選由甘草和螺旋藻按質(zhì)量比為4 1制 成。方解甘草味甘，性平；能解百毒、補(bǔ)臟腑、瀉諸火，兼補(bǔ)脾益氣，緩急止 痛；現(xiàn)代藥學(xué)研究表明，甘草中的甘草酸(glycyrrhizin，GL)及其次生代謝物單葡萄糖醛 酸基甘草酸(mono- β -glucuronide-glycyrrhizin, GAMG)禾口甘草次酸(glycyrrhetic acid,
GA)能有效保護(hù)肝細(xì)胞膜，抑制炎癥，并有一定的抗乙肝病毒效應(yīng)。螺旋藻能夠促進(jìn)肝 細(xì)胞再生，抗自由基損傷，阻止肝細(xì)胞壞死，并對(duì)腸道雙歧桿菌有明顯促增殖作用。二 者組方，除綜合兩藥的上述功能外，還可降低內(nèi)毒素、糾正免疫調(diào)節(jié)異常，從而共奏疏 肝理脾、解毒護(hù)肝、阻止肝細(xì)胞損害、改善肝功能之功效。處方配比依據(jù)本發(fā)明研究了甘草螺旋藻=6 1、5 1、4 1、3 1、
2 1、1 1、1 2、1 3、1 4、1 5、1 6 (w/w)共 11 組處方，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這
11組處方的復(fù)方制劑均具有抗肝炎作用。但由于甘草為富含木質(zhì)素-纖維素的植物藥， 有效成分釋出的結(jié)構(gòu)阻隔作用明顯，有效部位占全重的比例不超過(guò)30% ；而螺旋藻為 單細(xì)胞生物，多層細(xì)胞膜均由肽聚糖構(gòu)成，沒(méi)有纖維素和木質(zhì)素構(gòu)成的細(xì)胞壁，對(duì)胞內(nèi) 生理活性物質(zhì)的釋放幾乎沒(méi)有結(jié)構(gòu)阻隔作用，且全株均可作為營(yíng)養(yǎng)成分和活性成分的來(lái) 源，故本發(fā)明處方中以甘草用量大于螺旋藻用量為宜，特別優(yōu)選處方為甘草螺旋藻= 4 1 (w/w) ο2、所述抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑的制備方法，包括以下步驟A、甘草發(fā)酵液的制備Al、將甘草進(jìn)行細(xì)粉化處理，制得甘草細(xì)粉體；A2、將步驟Al所得的甘草細(xì)粉體進(jìn)行高壓蒸氣爆碎處理，制得甘草氣爆細(xì)粉 體；A3、將步驟A2所得的甘草氣爆細(xì)粉體與來(lái)自微生物的木質(zhì)素降解酶系粗酶液和 纖維素降解酶系粗酶液進(jìn)行共酶解反應(yīng)，制得甘草酶解細(xì)粉體；A4、將步驟A3所得的甘草酶解細(xì)粉體進(jìn)行超微粉化處理，制得甘草超微粉 體；A5、將步驟A4所得的甘草超微粉體加水提取，提取液濾過(guò)，濾液濃縮，加入發(fā) 酵輔助營(yíng)養(yǎng)成分和水，制得甘草發(fā)酵原液；A6、將步驟A5所得的甘草發(fā)酵原液接種嗜甘草乳桿菌進(jìn)行厭氧液體深層發(fā)酵， 制得甘草發(fā)酵液；B、螺旋藻發(fā)酵液的制備
Bi、將螺旋藻進(jìn)行細(xì)粉化處理，制得螺旋藻細(xì)粉體；B2、將步驟Bl所得的螺旋藻細(xì)粉體進(jìn)行超微粉化處理，制得螺旋藻超微粉 體；B3、在步驟B2所得的螺旋藻超微粉體中加入發(fā)酵輔助營(yíng)養(yǎng)成分和水，制得螺旋 藻發(fā)酵原液；B4、將步驟B3所得的螺旋藻發(fā)酵原液接種嗜螺旋藻雙歧桿菌進(jìn)行厭氧液體深層 發(fā)酵，制得螺旋藻發(fā)酵液；C、抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑的制備將步驟A所得的甘草發(fā)酵液和步驟B所得的螺旋藻發(fā)酵液混合，離心去除菌 體，超聲去除上清液殘留菌體，合并上清液和藥泥，高溫滅酶，干燥，即得抗肝炎天然 藥物復(fù)方制劑。進(jìn)一步，所述木質(zhì)素降解酶系粗酶液來(lái)自保藏號(hào)為CCTCC NO.M207024的云 芝(Polystictus versicolor) ODK-CY1,所述纖維素降解酶系粗酶液來(lái)自保藏號(hào)為CCTCC NO.M207025的綠色木霉(Trichoderma viride) ODK-TL1 ；所述嗜甘草乳桿菌為保藏號(hào) 為 CCTCC NO.M207026 的植物乳桿菌(Lactobacillus plantaram) ODK-LR1 ；所述嗜螺 旋藻雙歧桿菌為保藏號(hào)為CCTCC NO.M207027的長(zhǎng)雙歧桿菌(Bifidobacterium longum) ODK-BS1 ；進(jìn)一步，所述步驟A甘草發(fā)酵液的制備方法為Al、將甘草機(jī)械粉碎過(guò)100目篩，制得平均粒徑為100 150μιη的甘草細(xì)粉 體；Α2、將步驟Al所得的甘草細(xì)粉體進(jìn)行高壓蒸氣爆碎處理氣爆溫度為115 131°C,氣爆時(shí)間為5 15分鐘，制得甘草氣爆細(xì)粉體；A3、將步驟A2所得的甘草氣爆細(xì)粉體與來(lái)自微生物的木質(zhì)素降解酶系粗酶液和 纖維素降解酶系粗酶液進(jìn)行共酶解反應(yīng)木質(zhì)素降解酶系粗酶液與纖維素降解酶系粗酶 液的體積比為1 2 1 2，酶解溫度為25 31°C，酶解時(shí)間為24 72小時(shí)，制得 甘草酶解細(xì)粉體；A4、將步驟A3所得的甘草酶解細(xì)粉體深低溫冷凍至玻璃點(diǎn)后進(jìn)行氣流粉碎，制 得平均粒徑為5 25 μ m的甘草超微粉體；A5、將步驟A4所得的甘草超微粉體加水煎煮1 3次，每次加6 10倍量水煎 煮20 60分鐘，首次煎煮前加水浸泡20 40分鐘，合并提取液，分級(jí)過(guò)濾至300目， 濾液濃縮至原體積的1/2，再加入發(fā)酵輔助營(yíng)養(yǎng)成分多價(jià)蛋白胨和水，調(diào)節(jié)甘草煎濾液濃 度為100 300mL/L、多價(jià)蛋白胨濃度為5 20g/L，制得甘草發(fā)酵原液；A6、將步驟A5所得的甘草發(fā)酵原液接種嗜甘草乳桿菌進(jìn)行厭氧液體深層發(fā)酵 發(fā)酵菌種種齡為24 48小時(shí)，接種量為5 15mL/L，發(fā)酵溫度為28 40°C，初始pH 值為5.0 7.0，發(fā)酵時(shí)間為48 96小時(shí)，制得甘草發(fā)酵液。進(jìn)一步，所述步驟A2中氣爆溫度為131°C，氣爆時(shí)間為10分鐘；所述步驟A3 中木質(zhì)素降解酶系粗酶液與纖維素降解酶系粗酶液的體積比為1 1，酶解溫度為31°c, 酶解時(shí)間為48小時(shí)；所述步驟A5中加水煎煮3次，每次加10倍量水煎煮20分鐘，首次 煎煮前加水浸泡40分鐘，最后調(diào)節(jié)甘草煎濾液濃度為200mL/L、多價(jià)蛋白胨濃度為IOg/L；所述步驟A6中發(fā)酵菌種種齡為24小時(shí)，接種量為lOmL/L，發(fā)酵溫度為35°C，初始 pH值為6.0，發(fā)酵時(shí)間為72小時(shí)；進(jìn)一步，所述步驟B螺旋藻發(fā)酵液的制備方法為Bi、將螺旋藻粉碎過(guò)60目篩，制得平均粒徑為150 250μιη的螺旋藻細(xì)粉 體；Β2、將步驟Bl所得的螺旋藻細(xì)粉體深低溫冷凍至玻璃點(diǎn)后進(jìn)行氣流粉碎，制得 平均粒徑為60 80 μ m的螺旋藻超微粉體；B3、在步驟B2所得的螺旋藻超微粉體中加入發(fā)酵輔助營(yíng)養(yǎng)成分水蘇糖和質(zhì)量百 分濃度為5%的豬肝浸液以及水，制得螺旋藻發(fā)酵原液；其中各組分按質(zhì)量百分濃度計(jì) 的配比為螺旋藻超微粉體5 15%、水蘇糖3 7%、質(zhì)量百分濃度為5%的豬肝浸液 4 8%，余量為水；B4、將步驟B3所得的螺旋藻發(fā)酵原液接種嗜螺旋藻雙歧桿菌進(jìn)行厭氧液體深層 發(fā)酵發(fā)酵菌種種齡為34 48小時(shí)，接種量為5 30mL/L，發(fā)酵溫度為28 40°C， 初始pH值為6.0 7.0，發(fā)酵時(shí)間為48 96小時(shí)，制得螺旋藻發(fā)酵液。進(jìn)一步，所述步驟B3中各組分按質(zhì)量百分濃度計(jì)的配比為螺旋藻超微粉體 10%,水蘇糖5%、質(zhì)量百分濃度為5%的豬肝浸液4%，余量為水；所述步驟B4中發(fā)酵 菌種種齡為34小時(shí)，接種量為20mL/L，發(fā)酵溫度為35°C，初始pH值為6.5，發(fā)酵時(shí)間 為72小時(shí)。工藝路線確立依據(jù)甘草抗肝炎作用的主要藥學(xué)成分為甘草酸，其水溶性和 熱穩(wěn)定性較好，但口服時(shí)生物利用率極低，必需經(jīng)腸道正常菌群生物轉(zhuǎn)化為其次生代謝 產(chǎn)物單葡萄糖醛酸基甘草酸和甘草次酸后，再由腸內(nèi)吸收至肝臟發(fā)揮作用，故甘草酸的 濃度及單葡萄糖醛酸基甘草酸和甘草次酸的轉(zhuǎn)化量，是甘草抗肝炎療效的決定因素。螺 旋藻為單細(xì)胞藻類(lèi)，蛋白質(zhì)含量高，但其細(xì)胞壁較厚，難以釋放出胞內(nèi)蛋白質(zhì)，且所含 蛋白質(zhì)大多數(shù)為高蛋白，只有被分解轉(zhuǎn)化成有生理功能的寡肽后，才能被人體順利吸收 并發(fā)揮作用，故寡肽含量是考察螺旋藻抗肝炎療效的決定因素。本工藝路線的核心價(jià)值 是對(duì)甘草和螺旋藻這兩種原料進(jìn)行以益生菌為媒介的體外生物轉(zhuǎn)化，以提高產(chǎn)品中抗肝 炎有效成分的含量和口服生物利用度。3、所述抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑在制備抗肝炎藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明以臨床經(jīng)驗(yàn)、中醫(yī)和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論、藥學(xué)研究 和文獻(xiàn)資料為依據(jù)，將天然藥物甘草和螺旋藻合理組方，得到一種新的抗肝炎天然藥物 復(fù)方制劑。其制備技術(shù)路線以高壓蒸氣爆碎、微生物酶酶解、超微粉碎、發(fā)酵為核心工 藝，大幅提高了產(chǎn)品中抗肝炎有效成分的含量和口服生物利用度。藥效學(xué)研究結(jié)果顯 示，本發(fā)明復(fù)方制劑對(duì)重度和急、慢性肝損傷均有顯著護(hù)肝效果，且療效優(yōu)于目前的一 線護(hù)肝藥甘立欣。因此，本發(fā)明復(fù)方制劑有望開(kāi)發(fā)成為高效、無(wú)毒的抗肝炎新藥，具有 良好的應(yīng)用前景。生物材料樣品保藏云芝(Polystictus versicolor) ODK-CY1 保藏單位為中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心 (簡(jiǎn)稱(chēng)CCTCC)，地址為武漢市武漢大學(xué)，保藏日期為2007年3月23日，保藏編號(hào)為 CCTCC NO.M207024 ；
綠色木霉(Trichoderma viride) ODK-TL1 保藏單位為中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心 (CCTCC),地址為武漢市武漢大學(xué)，保藏日期為2007年3月23日，保藏編號(hào)為CCTCC NO.M207025 ；植物乳桿菌(Lactobacillus phntaram) ODK-LR1 保藏單位為中國(guó)典型培養(yǎng)物保 藏中心(CCTCC)，地址為武漢市武漢大學(xué)，保藏日期為2007年3月23日，保藏編號(hào)為 CCTCC NO.M207026 ；長(zhǎng)雙歧桿菌(Bifidobacteriumlongum)ODK-BS1 保藏單位為中國(guó)典型培養(yǎng)物保 藏中心(CCTCC)，地址為武漢市武漢大學(xué)，保藏日期為2007年3月23日，保藏編號(hào)為 CCTCC NO.M207027。


為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作 進(jìn)一步的詳細(xì)描述，其中圖1為抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑的制備方法流程圖；圖2為植物乳桿菌ODK-LR1的生長(zhǎng)曲線圖；圖3為甘草酸含量與活菌生物量的關(guān)聯(lián)度分析圖；圖4為長(zhǎng)雙歧桿菌ODK-BS1的生長(zhǎng)曲線圖；圖5為螺旋藻寡肽含量與活菌生物量的關(guān)聯(lián)度分析圖。
具體實(shí)施例方式以下將參照附圖，對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。優(yōu)選實(shí)施例所用甘草為內(nèi)蒙古杭錦旗野生梁外甘草，所用螺旋藻為山東無(wú)棣富 斯特生物工程公司生產(chǎn)的食品級(jí)螺旋藻粉(平均粒徑150-250 μ m)。一、本發(fā)明復(fù)方制劑的制備工藝研究及工藝條件優(yōu)化1、物理粉碎處理對(duì)甘草酸得率的影響考慮到現(xiàn)有提取方法中甘草酸得率不佳的主要原因是甘草中富含的木質(zhì)素和纖 維素對(duì)甘草酸溶出的結(jié)構(gòu)阻隔作用，本發(fā)明先后采用機(jī)械粉碎、高壓蒸氣爆碎、氣流粉 碎方法對(duì)甘草進(jìn)行處理。取甘草飲片、甘草細(xì)粉體、甘草氣爆細(xì)粉體和甘草超微粉體(此處的甘草超微 粉體是將甘草氣爆細(xì)粉體直接進(jìn)行氣流粉碎而得到)，分別加水煎煮3次，每次45分鐘， 合并提取液，濾過(guò)，用高效液相色譜法測(cè)定甘草酸含量。結(jié)果見(jiàn)表1，甘草細(xì)粉體、甘草 氣爆細(xì)粉體和甘草超微粉體中甘草酸的溶出量較甘草飲片有較大幅度的漸次增加，表明 物理粉碎處理有助于解除甘草組織結(jié)構(gòu)對(duì)甘草酸溶出的阻隔作用，可提高甘草酸得率。表1、物理粉碎處理對(duì)甘草酸得率的影響
權(quán)利要求
1.抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑，其特征在于由甘草和螺旋藻按質(zhì)量比為1 6 1 6制成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑，其特征在于由甘草和螺旋藻按 質(zhì)量比為4 1制成。
3.權(quán)利要求1或2所述抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑的制備方法，其特征在于包括以下 步驟A、甘草發(fā)酵液的制備Al、將甘草進(jìn)行細(xì)粉化處理，制得甘草細(xì)粉體；A2、將步驟Al所得的甘草細(xì)粉體進(jìn)行高壓蒸氣爆碎處理，制得甘草氣爆細(xì)粉體； A3、將步驟A2所得的甘草氣爆細(xì)粉體與來(lái)自微生物的木質(zhì)素降解酶系粗酶液和纖維 素降解酶系粗酶液進(jìn)行共酶解反應(yīng)，制得甘草酶解細(xì)粉體；A4、將步驟A3所得的甘草酶解細(xì)粉體進(jìn)行超微粉化處理，制得甘草超微粉體； A5、將步驟A4所得的甘草超微粉體加水提取，提取液濾過(guò)，濾液濃縮，加入發(fā)酵輔 助營(yíng)養(yǎng)成分和水，制得甘草發(fā)酵原液；A6、將步驟A5所得的甘草發(fā)酵原液接種嗜甘草乳桿菌進(jìn)行厭氧液體深層發(fā)酵，制得 甘草發(fā)酵液；B、螺旋藻發(fā)酵液的制備Bi、將螺旋藻進(jìn)行細(xì)粉化處理，制得螺旋藻細(xì)粉體；B2、將步驟Bl所得的螺旋藻細(xì)粉體進(jìn)行超微粉化處理，制得螺旋藻超微粉體； B3、在步驟B2所得的螺旋藻超微粉體中加入發(fā)酵輔助營(yíng)養(yǎng)成分和水，制得螺旋藻發(fā) 酵原液；B4、將步驟B3所得的螺旋藻發(fā)酵原液接種嗜螺旋藻雙歧桿菌進(jìn)行厭氧液體深層發(fā) 酵，制得螺旋藻發(fā)酵液；C、抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑的制備將步驟A所得的甘草發(fā)酵液和步驟B所得的螺旋藻發(fā)酵液混合，離心去除菌體，超 聲去除上清液殘留菌體，合并上清液和藥泥，高溫滅酶，干燥，即得抗肝炎天然藥物復(fù) 方制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑的制備方法，其特征在于所述木 質(zhì)素降解酶系粗酶液來(lái)自保藏號(hào)為CCTCC NO.M207024的云芝(Polystictus versicolor) ODK-CY1,所述纖維素降解酶系粗酶液來(lái)自保藏號(hào)為CCTCC NO.M207025的綠色木霉 (Trichoderma viride) ODK-TL1 ；所述嗜甘草乳桿菌為保藏號(hào)為CCTCC No.M207026的植 物乳桿菌(Lactobacillusplantaram)ODK-LR1 ；所述嗜螺旋藻雙歧桿菌為保藏號(hào)為CCTCC NO.M207027 的長(zhǎng)雙歧桿菌(Bifidobacteriumlongum)ODK-BSp
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑的制備方法，其特征在于所述步 驟A甘草發(fā)酵液的制備方法為Al、將甘草機(jī)械粉碎過(guò)100目篩，制得平均粒徑為100 150 μ m的甘草細(xì)粉體； A2、將步驟Al所得的甘草細(xì)粉體進(jìn)行高壓蒸氣爆碎處理氣爆溫度為115 131°C,氣爆時(shí)間為5 15分鐘，制得甘草氣爆細(xì)粉體；A3、將步驟A2所得的甘草氣爆細(xì)粉體與來(lái)自微生物的木質(zhì)素降解酶系粗酶液和纖維素降解酶系粗酶液進(jìn)行共酶解反應(yīng)木質(zhì)素降解酶系粗酶液與纖維素降解酶系粗酶液的 體積比為1 2 1 2，酶解溫度為25 31°C，酶解時(shí)間為24 72小時(shí)，制得甘草 酶解細(xì)粉體；A4、將步驟A3所得的甘草酶解細(xì)粉體深低溫冷凍至玻璃點(diǎn)后進(jìn)行氣流粉碎，制得平 均粒徑為5 25 μ m的甘草超微粉體；A5、將步驟A4所得的甘草超微粉體加水煎煮1 3次，每次加6 10倍量水煎煮 20 60分鐘，首次煎煮前加水浸泡20 40分鐘，合并提取液，分級(jí)過(guò)濾至300目，濾 液濃縮至原體積的1/2，再加入多價(jià)蛋白胨和水，調(diào)節(jié)甘草煎濾液濃度為100 300mL/ L、多價(jià)蛋白胨濃度為5 20g/L，制得甘草發(fā)酵原液；A6、將步驟A5所得的甘草發(fā)酵原液接種嗜甘草乳桿菌進(jìn)行厭氧液體深層發(fā)酵發(fā) 酵菌種種齡為24 48小時(shí)，接種量為5 15mL/L，發(fā)酵溫度為28 40°C，初始pH值 為5.0 7.0，發(fā)酵時(shí)間為48 96小時(shí)，制得甘草發(fā)酵液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑的制備方法，其特征在于所述步 驟A2中氣爆溫度為131°C，氣爆時(shí)間為10分鐘；所述步驟A3中木質(zhì)素降解酶系粗酶液 與纖維素降解酶系粗酶液的體積比為1 1，酶解溫度為31°C，酶解時(shí)間為48小時(shí)；所 述步驟A5中加水煎煮3次，每次加10倍量水煎煮20分鐘，首次煎煮前加水浸泡40分 鐘，最后調(diào)節(jié)甘草煎濾液濃度為200mL/L、多價(jià)蛋白胨濃度為10g/L;所述步驟A6中發(fā) 酵菌種種齡為24小時(shí)，接種量為lOmL/L，發(fā)酵溫度為35°C，初始pH值為6.0，發(fā)酵時(shí) 間為72小時(shí)。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑的制備方法，其特征在于所述步 驟B螺旋藻發(fā)酵液的制備方法為Bi、將螺旋藻粉碎過(guò)60目篩，制得平均粒徑為150 250 μ m的螺旋藻細(xì)粉體；B2、將步驟Bl所得的螺旋藻細(xì)粉體深低溫冷凍至玻璃點(diǎn)后進(jìn)行氣流粉碎，制得平均 粒徑為60 80 μ m的螺旋藻超微粉體；B3、在步驟B2所得的螺旋藻超微粉體中加入水蘇糖、質(zhì)量百分濃度為5%的豬肝浸 液和水，制得螺旋藻發(fā)酵原液；其中各組分按質(zhì)量百分濃度計(jì)的配比為螺旋藻超微粉 體5 15%、水蘇糖3 7%、質(zhì)量百分濃度為5%的豬肝浸液4 8%，余量為水；B4、將步驟B3所得的螺旋藻發(fā)酵原液接種嗜螺旋藻雙歧桿菌進(jìn)行厭氧液體深層發(fā) 酵發(fā)酵菌種種齡為34 48小時(shí)，接種量為5 30mL/L，發(fā)酵溫度為28 40°C，初 始pH值為6.0 7.0，發(fā)酵時(shí)間為48 96小時(shí)，制得螺旋藻發(fā)酵液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑的制備方法，其特征在于所述步 驟B3中各組分按質(zhì)量百分濃度計(jì)的配比為螺旋藻超微粉體10%、水蘇糖5%、質(zhì)量百 分濃度為5%的豬肝浸液4%，余量為水；所述步驟B4中發(fā)酵菌種種齡為34小時(shí)，接種 量為20mL/L，發(fā)酵溫度為35°C，初始pH值為6.5，發(fā)酵時(shí)間為72小時(shí)。
9.權(quán)利要求1或2所述抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑在制備抗肝炎藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了抗肝炎天然藥物復(fù)方制劑及其制備方法和應(yīng)用，該復(fù)方制劑由甘草和螺旋藻按質(zhì)量比為1～6∶1～6制成；其制備方法包括以下步驟將甘草經(jīng)粉碎、高壓蒸氣爆碎、酶解、超微粉碎、水提、發(fā)酵處理制得甘草發(fā)酵液；將螺旋藻經(jīng)粉碎、超微粉碎、發(fā)酵處理制得螺旋藻發(fā)酵液；再將甘草發(fā)酵液和螺旋藻發(fā)酵液混合，離心去除菌體，超聲去除上清液殘留菌體，合并上清液和藥泥，高溫滅酶，干燥，即得；本發(fā)明復(fù)方制劑配方新穎，制備工藝獨(dú)特，抗肝炎有效成分含量高，口服生物利用度好，在抑制病毒性肝炎的復(fù)發(fā)、促進(jìn)炎癥恢復(fù)和穩(wěn)定肝功能方面有顯著功效，可作為中間體用于制備抗肝炎藥物。
文檔編號(hào)C12R1/01GK102018751SQ20101018015
公開(kāi)日2011年4月20日 申請(qǐng)日期2010年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月21日
發(fā)明者吳力克, 張娟, 明智強(qiáng) 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院