專利名稱：抗生鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)噴司他丁的發(fā)酵培養(yǎng)基以及發(fā)酵方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于工業(yè)微生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種新的抗生鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)噴司他丁的發(fā)酵培養(yǎng)基以及相應(yīng)的發(fā)酵方法。
背景技術(shù)：
1974 ^ warner lambert ^W] ^ Woo ^hk Streptomyces antiboticus 發(fā)現(xiàn)一種腺苷脫氨酶抑制劑-噴司他丁。1992年噴司他丁被FDA批準(zhǔn)用于干細(xì)胞白血病 (hairy cell leukemia, HCL)的治療。隨著對其臨床應(yīng)用的增加，市場需求量加大。但目前對噴司他丁生產(chǎn)研究的報道很少，唯一報道的發(fā)酵工藝見于US3923785，在該專利中，以抗生鏈霉菌NRRL3238為生產(chǎn)菌種，主要報道了一種較簡單的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方式，其目的是為了從發(fā)酵液分離到噴司他丁，以進行結(jié)構(gòu)鑒定和生物活性檢測。由于該專利的培養(yǎng)工藝過于簡單，產(chǎn)物的發(fā)酵單位較低，不適用于規(guī)模化噴司他丁的生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題就是針對現(xiàn)有的利用抗生鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)噴司他丁發(fā)酵單位低的不足，提供一種新的抗生鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)噴司他丁的發(fā)酵培養(yǎng)基以及相應(yīng)的發(fā)酵方法，其可以大大提高噴司他丁的發(fā)酵單位，提高生產(chǎn)效率。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案之一是一種用于抗生鏈霉菌 (Streptomyces antibioticus)發(fā)酵生產(chǎn)噴司他丁的發(fā)酵培養(yǎng)基，包括碳源和氮源，其中按培養(yǎng)基的總重量計，所述的碳源的含量是0. 5 14%，所述的氮源的含量是0. 5 10%，所述的碳源選自葡萄糖、糊精和小麥淀粉中的一種或多種，所述的氮源選自細(xì)豆粕粉、大豆蛋白、黃豆餅粉、酵母浸粉和棉子餅粉中的一種或多種。本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基中，所述的碳源的含量為0.5 14%，較優(yōu)的范圍為1 6%。本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基中，所述的氮源選自細(xì)豆粕粉、大豆蛋白、黃豆餅粉、酵母浸粉和棉子餅粉中的一種或多種。更佳的是選自細(xì)豆粕粉、大豆蛋白、黃豆餅粉和棉子餅粉中的一種或多種和酵母浸粉的混合物。最佳的是細(xì)豆粕粉和酵母浸粉的混合物。所述的氮源的含量為0.5 10%，較優(yōu)的范圍為1 6%。本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基中，如常規(guī)的抗生鏈霉菌的發(fā)酵培養(yǎng)基一樣，還含有礦物質(zhì)。 礦物質(zhì)的含量較佳的是0. 1%。所述的礦物鹽可以是常規(guī)的抗生鏈霉菌的發(fā)酵培養(yǎng)基中所使用的各種礦物鹽，一般作為滲透壓調(diào)節(jié)劑，較佳的是NaCl。本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基如常規(guī)的抗生鏈霉菌的發(fā)酵培養(yǎng)基一樣，較佳的還可以進一步的含有痕量生長因子。本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基如常規(guī)的抗生鏈霉菌的發(fā)酵培養(yǎng)基一樣，較佳的還可以含有消泡劑。本發(fā)明的一較佳的實施例是，本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基包含
0. 5 14%碳源，所述的碳源選自葡萄糖、糊精和小麥淀粉中的一種或多種；0. 5 10%細(xì)豆粕粉、大豆蛋白、黃豆餅粉和/或棉子餅粉；0.1 酵母浸粉；和0.1 礦物鹽。本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值較佳的是pH5. 0-8. 0，更佳的是pH5. 5-7. 5。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案之二是一種噴司他丁的發(fā)酵生產(chǎn)方法，包括步驟(a)將抗生鏈霉菌(Sti^ptomyces antibioticus)的種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中進行液體發(fā)酵培養(yǎng)，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基是權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基；(b)從發(fā)酵液中分離出噴司他丁。在步驟(a)中，所述的抗生鏈霉菌的種子液是將抗生鏈霉菌是按常規(guī)的方法將抗生鏈霉菌在種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)而得到的。所述的種子培養(yǎng)基可以是現(xiàn)有的抗生鏈霉菌的種子培養(yǎng)基，較佳的包括2%葡萄糖、2%黃豆餅粉0. 5% NaCUO. 25% CaCO30種子培養(yǎng)的溫度較佳的是25 30°C。本發(fā)明中，所述的抗生鏈霉菌可以是現(xiàn)有的各種抗生鏈霉菌菌株，較佳的是抗生鏈霉菌NRRL3238。在步驟(a)中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)的溫度是20 40°C，較優(yōu)的為25 37°C;優(yōu)選的 pH5 8，較優(yōu)的為ρΗ5· 5 7. 5。在步驟(b)中，從發(fā)酵液中分離出噴司他丁中的方法是常規(guī)的方法，一般是將發(fā)酵液離心取上清，經(jīng)過疏水柱的洗脫，濃縮脫色然后結(jié)晶，從而得到噴司他丁。本發(fā)明中，上述優(yōu)選條件在符合本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實例。本發(fā)明除特別說明之外，所用的百分比都是重量百分比(Wt)。本發(fā)明所用的原料或試劑除特別說明之外，均市售可得。相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果如下本發(fā)明提供了一種有利于抗生鏈霉菌高效發(fā)酵生產(chǎn)噴司他丁的發(fā)酵培養(yǎng)基以及相應(yīng)的發(fā)酵方法。通過優(yōu)選發(fā)酵培養(yǎng)基的碳氮源成分及配比，優(yōu)化培養(yǎng)溫度、PH等發(fā)酵參數(shù)，從而大大提高噴司他丁的產(chǎn)量。本發(fā)明提供的發(fā)酵生產(chǎn)方法大幅提高了噴司他丁的發(fā)酵單位，適用于噴司他丁的規(guī)模化生產(chǎn)。
具體實施例方式下面用實施例來進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。發(fā)酵液中噴司他丁含量測定發(fā)酵結(jié)束時取適量發(fā)酵液，經(jīng)12000rpm離心lOmin， 取上清液經(jīng)0. 45 μ m微孔濾膜過濾后用于高壓液相色譜檢測。色譜條件色譜柱=Hypersil 0DS2 柱(5ym，4. 6mmX250mm)；流動相甲醇-乙腈-10mmol/L 乙酸銨(2. 5 2.5 95) (PH = 7. 6)；流速1. OmL/min ；波長:280nm ；柱溫40°C;進樣量10 μ L，噴司他丁在7分鐘左右出峰。實施例1取一株抗生鏈霉菌(Sti^ptomycesantibioticus) NRRL3238 (購自美國農(nóng)業(yè)部菌種保藏中心)劃線于種子斜面培養(yǎng)基二8°C培養(yǎng)7d后接種于種子培養(yǎng)基，裝量為 20ml/250ml，于30°C，250rpm的旋轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)36h。將制得的發(fā)酵種子以(ν/ν)接種量接種于含有2L培養(yǎng)基的5L發(fā)酵罐中，自動控制發(fā)酵溫度30°C，pH6. 5，轉(zhuǎn)速與溶氧關(guān)聯(lián)， 維持溶氧為40%，通氣量0. 5VVM。24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h，發(fā)酵周期72h。噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)50mg/L。其中所用的斜面培養(yǎng)基組成葡萄糖4.0g/L，酵母浸粉4.0g/L，麥芽浸粉10. Og/ L，瓊脂粉、20. Og/L, pH自然。所用的種子培養(yǎng)基組成2%葡萄糖、2%黃豆餅粉0. 5% NaCUO. 25% CaCO3,pH自然。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40. Og/L,細(xì)豆柏30. Og/L,大豆蛋白20g/L，酵母浸粉 5. Og/L, NaCl 5. Og/L。實施例2按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖10. 0g/L，細(xì)豆柏30. 0g/L，酵母浸粉5. 0g/L, NaCl 5. 0g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C, ρΗ6· 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。 發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)20mg/L。實施例3按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖60. 0g/L，細(xì)豆柏30. 0g/L，酵母浸粉5. 0g/L, NaCl 5. 0g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C, ρΗ6· 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。 發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)30mg/L。實施例4按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成糊精60. 0g/L，細(xì)豆柏30. 0g/L，酵母浸粉5. 0g/L, NaCl 5. 0g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C，pH6. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)35mg/L。實施例5按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成糊精20. 0g/L，細(xì)豆柏30. 0g/L，酵母浸粉5. 0g/L, NaCl 5. 0g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C，pH6. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)25mg/L。實施例6按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成糊精40. 0g/L，細(xì)豆柏30. 0g/L，酵母浸粉5. 0g/L, NaCl 5. 0g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C，pH6. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)30mg/L。實施例7按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40. 0g/L，細(xì)豆柏10. 0g/L，酵母浸粉5. 0g/L, NaCl 5. 0g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C, ρΗ7· 0，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。 發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)20mg/L。實施例8按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40. Og/L，細(xì)豆柏60. Og/L，酵母浸粉5. Og/L, NaCl 5. Og/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C, ρΗ6· 0，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。 發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)35mg/L。實施例9按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40. Og/L，細(xì)豆柏30. 0g/L，大豆蛋白20g/L，酵母浸粉5. 0g/L, NaCl 5. 0g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C，pH6. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)30mg/L。實施例10按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40. 0g/L，大豆蛋白60. 0g/L，酵母浸粉5. 0g/L, NaCl 5. 0g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C, ρΗ6· 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。 發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)35mg/L。實施例11按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40. 0g/L，細(xì)豆柏30. 0g/L，大豆蛋白20g/L,NaCl 5. 0g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C，pH5. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)25mg/L。實施例12按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40. 0g/L，細(xì)豆柏30. 0g/L，大豆蛋白20g/L，酵母浸粉5. 0g/L, NaCl 5. 0g/L。自動控制發(fā)酵溫度37°C，pH6. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖 1 10%。L/h。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)45mg/L。實施例13按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40. 0g/L，細(xì)豆柏30. 0g/L，大豆蛋白20g/L，酵母浸粉5. 0g/L, NaCl 5. 0g/L。自動控制發(fā)酵溫度25°C，pH6. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖 1 10%。L/h。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)30mg/L。實施例14按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40. 0g/L，細(xì)豆柏30. 0g/L，大豆蛋白20g/L，酵母浸粉5. 0g/L, NaCl 5. 0g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C，pH5. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖 1 10%。L/h。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)40mg/L。實施例15按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40. Og/L，細(xì)豆柏30. Og/L，大豆蛋白20g/L，酵母浸粉5. Og/L, NaCl 5. Og/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C，pH7. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖 1 10%。L/h。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)45mg/L。實施例16按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于50L生物反應(yīng)器中。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40. Og/L，細(xì)豆柏30. 0g/L，大豆蛋白20g/L，酵母浸粉5. 0g/L, NaCl 5. 0g/L, 泡敵0. 05g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C，pH6. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)55mg/L。實施例17按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成小麥淀粉40. 0g/L，細(xì)豆柏30. 0g/L，酵母浸粉5. 0g/L, NaCl 5. 0g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C, ρΗ6· 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。 發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)25mg/L。實施例18按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成小麥淀粉10. 0g/L,棉籽餅粉60. 0g/L,酵母浸粉5. 0g/L, NaCl 5. 0g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C，pH6. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/ h。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)20mg/L。實施例19按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成小麥淀粉60. 0g/L,黃豆餅粉20. 0g/L,酵母浸粉5. 0g/L, NaCl 5. 0g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C，pH6. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/ h。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)20mg/L。實施例20按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖5g/L，細(xì)豆柏30g/L，酵母浸粉5g/L，NaC15g/L。自動控制發(fā)酵溫度 30°C, pH6. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。發(fā)酵周期 72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)5mg/L。實施例21按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40g/L，細(xì)豆柏5g/L，NaCl 5g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C，pH6. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)5mg/L。實施例22按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40g/L，細(xì)豆柏5g/L，酵母浸粉5g/L，NaC15g/L。自動控制發(fā)酵溫度 30°C, pH6. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。發(fā)酵周期 72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)10mg/L。實施例23
按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40g/L，糊精60g/L，細(xì)豆柏30g/L，大豆蛋白60g/L，酵母浸粉5g/L， NaCl 5g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C，pH6. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)35mg/L。實施例24按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40g/L，小麥淀粉40g/L，棉籽餅粉60g/L，大豆蛋白20g/L，酵母浸粉 5g/L,NaCl 5g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C，pH6. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)30mg/L。實施例25按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40g/L，小麥淀粉40g/L，糊精60g/L，細(xì)豆柏35g/L，大豆蛋白60g/L， 酵母浸粉5g/L，NaCl 5g/L。自動控制發(fā)酵溫度30°C，pH6. 5，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM， 24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)40mg/L。實施例沈按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40g/L，細(xì)豆柏30g/L，大豆蛋白20g/L，酵母浸粉10g/L，NaCl lg/L。自動控制發(fā)酵溫度20°C，pH5. 0，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/ h。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)45mg/L。實施例27按實施例中1制得的種子(ν/ν)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖40g/L，細(xì)豆柏30g/L，大豆蛋白20g/L，酵母浸粉lg/L，NaCl 10g/L。自動控制發(fā)酵溫度40°C，pH8. 0，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/ h。發(fā)酵周期72h，噴司他丁的產(chǎn)量達(dá)35mg/L。對比實施例1取實施例1的抗生鏈霉菌(Sti^ptomyces antibioticus)NRRL3238，使用實施例 1的種子，按專利US3923785所述發(fā)酵培養(yǎng)方法，具體發(fā)酵培養(yǎng)基為2%葡萄糖、2%黃豆餅粉、0. 5% NaCUO. 25% CaCO3，消毒前用NaOH調(diào)PH至7. 5。發(fā)酵溫度37°C，溶氧為40%，通氣量0. 5VVM，24h開始流加葡萄糖1 10%。L/h。發(fā)酵周期120h，噴司他丁的產(chǎn)量為^iig/ L0
權(quán)利要求
1.一種用于抗生鏈霉菌(Sti^ptomyces antibioticus)發(fā)酵生產(chǎn)噴司他丁的發(fā)酵培養(yǎng)基，包括碳源和氮源，其特征在于，按培養(yǎng)基的總重量計，所述的碳源的含量是0. 5 14%，所述的氮源的含量是0. 5 10%，所述的碳源選自葡萄糖、糊精和小麥淀粉中的一種或多種，所述的氮源選自細(xì)豆粕粉、大豆蛋白、黃豆餅粉、酵母浸粉和棉子餅粉中的一種或多種。
2.如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基中還含有礦物質(zhì)， 礦物質(zhì)的含量按培養(yǎng)基的總重量計是0. 1%。
3.如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基還進一步的含有痕量生長因子。
4.如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基還含有消泡劑。
5.如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基按培養(yǎng)基的總重量計包含0. 5 14%碳源，所述的碳源選自葡萄糖、糊精和小麥淀粉中的一種或多種；0. 5 10%細(xì)豆粕粉、大豆蛋白、黃豆餅粉和/或棉子餅粉；0. 1 酵母浸粉；和0. 1 礦物鹽。
6.一種噴司他丁的發(fā)酵生產(chǎn)方法，其特征在于，包括步驟(a)將抗生鏈霉菌(Sti^ptomycesantibioticus)的種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中進行液體發(fā)酵培養(yǎng)，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基是權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基；(b)從發(fā)酵液中分離出噴司他丁。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟(a)中，所述的抗生鏈霉菌的種子液是將抗生鏈霉菌是按常規(guī)的方法將抗生鏈霉菌在種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)而得到的。
8.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟(a)中，所述的抗生鏈霉菌是抗生鏈霉菌 NRRL3238。
9.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟(a)中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)的溫度是 20 40"C。
10.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟(a)中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)的pH值是 5 8。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種有利于抗生鏈霉菌高效發(fā)酵生產(chǎn)噴司他丁的發(fā)酵培養(yǎng)基以及相應(yīng)的發(fā)酵方法。該發(fā)酵培養(yǎng)基包括碳源和氮源，其中按培養(yǎng)基的總重量計，所述的碳源的含量是0.5～14％，所述的氮源的含量是0.5～10％，所述的碳源選自葡萄糖、糊精和小麥淀粉中的一種或多種，所述的氮源選自細(xì)豆粕粉、大豆蛋白、黃豆餅粉、酵母浸粉和棉子餅粉中的一種或多種。本發(fā)明通過優(yōu)選發(fā)酵培養(yǎng)基的碳氮源成分及配比，優(yōu)化培養(yǎng)溫度、pH等發(fā)酵參數(shù)，從而大大提高噴司他丁的產(chǎn)量。提供的噴司他丁的發(fā)酵生產(chǎn)方法，大幅提高了噴司他丁的發(fā)酵單位，適用于噴司他丁的規(guī)?；a(chǎn)。
文檔編號C12R1/48GK102234673SQ20101016462
公開日2011年11月9日 申請日期2010年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月29日
發(fā)明者楊鵬, 王巖, 陳少欣 申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院