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一種提取灰樹花水溶性多糖的工藝的制作方法

文檔序號:393737閱讀:402來源:國知局
專利名稱:一種提取灰樹花水溶性多糖的工藝的制作方法
技術領域
本發(fā)明涉及一種多糖提取工藝,尤其是一種從灰樹花子實體中提取多糖的方法。
背景技術
灰樹花(Fructificatio Polypori Frondosi),別名栗蘑、佛菌、蓮花菌,為擔子菌亞門層菌綱多孔菌目多孔菌科的一種大型真菌。子實體覆瓦狀叢生,菌蓋扇形或匙形,表面灰褐色,較光滑,孔面白色至淡黃色,密生延生的菌管,管口近圓形至多角形。體輕,質脆,斷面類白色,不平坦。氣腥,味微甘。營養(yǎng)價值及其豐富,富含大量蛋白、脂肪、粗纖維、碳水化合物及多種有益礦物質、維生素,被譽為"真菌之王,抗癌奇葩"?;覙浠ǘ嗵蔷哂锌鼓[瘤、增強免疫力、抗病毒、抗脂肪肝和高血脂等,其抗腫瘤抑制率可達86.5%,比國際認證的抗癌新藥"香燕多糖"抑制率高32 % 。 目前,灰樹花提取多糖,一般原料采用灰樹花子實體、菌絲或發(fā)酵液。中國專利CN1110566C采用斜面菌種進行一、二和三級種子培養(yǎng),再進行發(fā)酵培養(yǎng),將發(fā)酵液加熱、攪拌,經(jīng)泵壓將發(fā)酵液放入料槽中經(jīng)板框壓濾得到灰樹花多糖,該方法降低了成本,但蛋白質含量較高,得到的是粗多糖,含量較低。中國專利CN1322141C公開了一種酶解制備灰樹花多糖的方法,向發(fā)酵液中加入纖維素酶、P _葡聚糖酶、果膠酶及中性蛋白酶,酶解后經(jīng)滅酶、過濾、濃縮、醇沉分離等步驟得到灰樹花多糖,但該法專業(yè)要求較高,不宜用于大規(guī)模的工業(yè)應用。史寶軍發(fā)表的"堿提灰樹花多糖的分離純化及其性質研究",采用水提多次后堿提,酸中和離心多次,醇沉,沉淀依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌,&02除色素,Sevag法除蛋白,透析3天再醇沉干燥,提取時間長,有機溶劑用量大,且除蛋白中所用三氯甲烷有致癌毒性,不宜用于食品、藥品和保健品等領域。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是為了提供一種成本低,能源消耗少,純度高,保持原有活性,易于
實現(xiàn)工業(yè)化的多糖提取工藝。 本發(fā)明所提出的制備方法如下 1)超聲水提將灰樹花原料粉碎,加15-20倍量水室溫動態(tài)浸泡2-3小時,超聲提取2-3次,過濾,合并提取液; 2)除蛋白上述提取液加酸調pH,加入木瓜蛋白酶攪拌酶解,酶控反應結束后升溫滅酶5分鐘; 3)脫色上述酶解液加活性炭脫色,收集脫色液; 4)膜濃縮上述脫色液先通過超濾膜系統(tǒng)截留大分子物質,透過液再用納濾膜濃縮得濃縮液; 5)醇沉上述濃縮液加入3_5倍量95%乙醇,沉淀析出后離心,棄去上清液,用無
水乙醇洗滌沉淀2-4次,減壓濃縮至無醇,干燥即得產品。所述的水提條件每次超聲15-45分鐘,超聲功率200-500W。
所述調pH所用酸可選用乙酸、磷酸或鹽酸。 所述的木瓜蛋白酶酶底比為1. 2%,反應溫度6(TC,攪拌速度30-50r/min,酶控反應時間1-3小時;滅酶溫度90-100°C。 所述的活性炭為301或303活性炭,加入量為酶解液量的1_2%,脫色時間1_2小時。 所述的超濾膜為截留分子量為1000-3000的超濾膜;所述的納濾膜為HNF-4040系列納濾膜或ESNA系列納濾膜。納濾膜可截留分子量較大的多糖分子,除去小分子雜質,溶劑分離達到濃縮的目的,同時在一定程度上縮短了生產周期。 綜上所述,本發(fā)明存在以下優(yōu)點超聲提取提率高且用時短,木瓜蛋白酶酶解除蛋白用量小、安全無毒,并能保持多糖活性;膜濃縮處理條件溫和,后處理后可重復利用。
下面將結合具體實施方式
進一步說明本發(fā)明,但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式
下述實施例中灰樹花多糖的檢測采用苯酚-硫酸法(參照宋玉良等"灰樹花中多
糖含量的測定"文獻)。
實施例1 : 將灰樹花子實體粉碎,取100g加1. 5L水,室溫動態(tài)浸泡3小時后超聲提取20分鐘(超聲功率為260W),提取3次,合并得4L提取液,加5%鹽酸調pH至5. 5,加入48g木瓜蛋白酶,55t:下保溫,以50轉/分攪拌酶解2小時,反應結束后升溫到9(TC滅酶5分鐘,加入53g活性炭脫色1小時,將脫色液先通過截留分子量3000的中空纖維超濾膜系統(tǒng)除去大分子雜質,再用截留分子量100的納濾膜系統(tǒng)濃縮,濃縮液加入4倍量95%乙醇,沉淀析出后開始離心,棄去上清液,再用無水乙醇洗滌沉淀3次,揮干乙醇,冷凍干燥,最終得到15. 5g含量為98.6%的多糖。
實施例2: 將灰樹花子實體粉碎,取200g加3. 6L水,室溫動態(tài)浸泡2小時后超聲提取38分鐘(超聲功率360W),提取2次,合并得7L提取液,加乙酸調pH至5,加入84g木瓜蛋白酶,6(TC下保溫,以40轉/分攪拌酶解1. 5小時,反應結束后升溫到IO(TC滅酶5分鐘,加入90g活性炭脫色2小時,將脫色液先通過截留分子量2000的中空纖維超濾膜系統(tǒng)除去大分子雜質,再用截留分子量100的納濾膜系統(tǒng)濃縮,濃縮液加入3倍量95%乙醇,沉淀析出后開始離心,棄去上清液,再用無水乙醇洗滌沉淀2次,揮干乙醇,減壓真空干燥,最終得到32g含量為98%的多糖。
實施例3 : 將灰樹花子實體粉碎,取500g加10L水,室溫動態(tài)浸泡2. 5小時后超聲提取40分鐘(超聲功率450W),提取3次,合并得28L提取液,加1 %鹽酸調pH至6,加入336g木瓜蛋白酶,6(TC下保溫,以35轉/分攪拌酶解3小時,反應結束后升溫到9(TC滅酶5分鐘,加入360g活性炭脫色1. 5小時,將脫色液先通過截留分子量1000的中空纖維超濾膜系統(tǒng)除去大分子雜質,再用截留分子量100的納濾膜系統(tǒng)濃縮,濃縮液加入5倍量95%乙醇,沉淀析出后開始離心,棄去上清液,再用無水乙醇洗滌沉淀3次,揮干乙醇,冷凍干燥,最終得到83g含量為98.3%的多糖。
實施例4 : 將灰樹花子實體粉碎,取lkg加17L水,室溫動態(tài)浸泡2. 5小時后超聲提取25分 鐘(超聲功率230W),提取2次,合并得32L提取液,加0. 5%磷酸調pH至5. 5,加入384g木 瓜蛋白酶,6(TC下保溫,以30轉/分攪拌酶解2小時,反應結束后升溫到95t:滅酶5分鐘, 加入410g活性炭脫色2小時,將脫色液先通過截留分子量3000的中空纖維超濾膜系統(tǒng)除 去大分子雜質,再用截留分子量100的納濾膜系統(tǒng)濃縮,濃縮液加入4倍量95%乙醇,沉淀 析出后開始離心,棄去上清液,再用無水乙醇洗滌沉淀2次,揮干乙醇,減壓干燥,最終得到 169g含量為98.6%的多糖。
權利要求
一種提取灰樹花水溶性多糖的工藝,其特征在于由以下步驟組成(1)超聲水提將灰樹花原料粉碎,加15-20倍量水室溫動態(tài)浸泡2-3小時,超聲提取2-3次,過濾,合并提取液;(2)除蛋白上述提取液加酸調pH,加入木瓜蛋白酶攪拌酶解,酶控反應結束后升溫滅酶5分鐘;(3)脫色上述酶解液加活性炭脫色,收集脫色液;(4)膜濃縮上述脫色液先通過超濾膜系統(tǒng)截留大分子物質,透過液再用納濾膜濃縮得濃縮液;(5)醇沉上述濃縮液加入3-5倍量95%乙醇,沉淀析出后離心,棄去上清液,用無水乙醇洗滌沉淀2-4次,減壓濃縮至無醇,干燥即得產品。
2. 根據(jù)權利要求1所述提取灰樹花水溶性多糖工藝,其特征在于所述的水提條件每次超聲15-45分鐘,超聲功率200-500W。
3. 根據(jù)權利要求l所述提取灰樹花水溶性多糖工藝,其特征是所述調pH所用酸可選用乙酸、磷酸或鹽酸。
4. 根據(jù)權利要求1所述提取灰樹花水溶性多糖工藝,其特征在于所述的木瓜蛋白酶酶底比為1.2X,反應溫度6(TC,攪拌速度30-50r/min,酶控反應時間1_3小時,;滅酶溫度90-100°C。
5. 根據(jù)權利要求1所述提取灰樹花水溶性多糖工藝,其特征在于所述的活性炭為食品工業(yè)類301或303活性炭,加入量為酶解液量的1_2%,脫色時間1-2小時。
6. 根據(jù)權利要求1所述提取灰樹花水溶性多糖工藝,其特征是所述的超濾膜為截留分子量為1000-3000的超濾膜;所述的納濾膜為HNF-4040系列納濾膜或ESNA系列納濾膜。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種提取灰樹花水溶性多糖的工藝,以灰樹花子實體為原料,水浸2-3小時,超聲提取2-4次,調pH,木瓜蛋白酶酶解法除蛋白后加活性炭脫色,脫色液過膜截留濃縮,乙醇沉淀,冷凍干燥即得成品。采用本法生產多糖,成本低,能源消耗少,純度高,保留了灰樹花多糖的活性。
文檔編號C12P19/04GK101736053SQ201010103130
公開日2010年6月16日 申請日期2010年2月1日 優(yōu)先權日2010年2月1日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東, 郭琴 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
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