專利名稱：抗白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體的抗體及其使用方法
抗白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體的抗體及其使用方法相關(guān)申請本申請要求享有申請日為2008年5月13日的美國臨時申請No. 61/127403以及 申請日為2008年9月25日的美國臨時申請No. 61/194156的權(quán)益，上述每一篇文獻中的內(nèi) 容作為一個整體在此被引入作為參考。發(fā)明的領(lǐng)域本發(fā)明大體上涉及單克隆抗體的生成，其中所述的單克隆抗體例如是完全人類單 克隆抗體，所述的單克隆抗體能夠識別所述的白細(xì)胞介素-6(IL-6)/白細(xì)胞介素-6受體 (IL-6R)復(fù)合體，涉及到能夠同時識別所述的白細(xì)胞介素-6(IL-6)/白細(xì)胞介素_6受體 (IL-6R)復(fù)合體以及白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)的單克隆抗體，所述的單克隆抗體例如是 完全人類抗體，并且涉及到使用所述的單克隆抗體作為治療劑的方法。發(fā)明的背景白細(xì)胞介素-6(IL_6)是一種有效的多向性細(xì)胞因子，其能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長以 及分化并且同樣是急性炎性應(yīng)答的一個重要的介質(zhì)。白細(xì)胞介素_6(IL-6)經(jīng)由一種受 體復(fù)合體來表現(xiàn)其活性，其中所述的受體復(fù)合體是由一種特異性的白細(xì)胞介素-6受體 (IL-6R)以及一個信號轉(zhuǎn)導(dǎo)亞單元(糖蛋白130)所構(gòu)成的。在許多疾病的發(fā)病機理中已經(jīng) 牽扯到白細(xì)胞介素_6(IL-6)信號的異常調(diào)節(jié)，其中所述的疾病例如是多發(fā)性骨髓瘤，自體 免疫性疾病以及前列腺癌。因此，存在一種對于治療方法的需求，所述的治療方法用以對所 述的白細(xì)胞介素-6(IL-6)和/或白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)的生物活性進行抑制。發(fā)明概述本發(fā)明提供了單克隆抗體例如完全人類單克隆抗體，所述的單克隆抗體能夠識別 膜結(jié)合的人類白細(xì)胞介素-6( “11^-6”)，其中所述的白細(xì)胞介素-6(11^-6)與所述的人類白 細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)進行了復(fù)合(即，所述的人類白細(xì)胞介素_6(IL-6)/白細(xì)胞介 素-6受體(IL-6R)復(fù)合體(“IL-6Rc”)(S卩，在所述的細(xì)胞表面上或者以可溶的形式表達的 白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體)。本發(fā)明中所述的抗體能夠經(jīng)由所述的Janus 酪氨酸蛋白激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子(JAK/STAT)途徑以及有絲分裂原活化蛋白激 酶(MAPK)級聯(lián)的活化對白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)的細(xì)胞內(nèi)信號進行調(diào)節(jié)，其中所述的 調(diào)節(jié)例如是，阻滯，抑制，減小，拮抗，壓制或者干擾。本發(fā)明中所述的抗體同樣包括能夠與 可溶性白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)進行結(jié)合的抗體。除此之外， 本發(fā)明中所述的抗體包括能夠與白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6RC)進行結(jié)合的抗體，其 中它們同樣能夠單獨的結(jié)合人類白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)(即，所述的受體不與白細(xì)胞 介素-6(IL-6)進行復(fù)合)。本發(fā)明要解決的問題是所述的抗體的生成，其中所述的抗體能夠與由白細(xì)胞介 素-6受體(IL-6R)和白細(xì)胞介素-6(IL-6)形成的所述復(fù)合體進行結(jié)合，從而阻止了所述 的白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(“IL-6Rc”)與所述的跨膜糖蛋白gpl30之間 的結(jié)合以及隨后的信號(順式的以及反式的)，其中所述的信號是由所述的白細(xì)胞介素-6/ 白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)/糖蛋白130的信號復(fù)合物來激活的。
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本發(fā)明中所述的抗體能夠?qū)Πl(fā)生在所述的白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù) 合體(IL-6RC)與糖蛋白(gp) 130之間的相互作用進行調(diào)節(jié)，其中所述的調(diào)節(jié)是例如阻滯， 抑制，減少，拮抗，壓制或者干擾。白細(xì)胞介素_6(IL-6)與白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)的 結(jié)合能夠形成所述的白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)從而允許所述的 白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)與糖蛋白(gp) 130發(fā)生相互作用或者 發(fā)生關(guān)聯(lián)，所述的糖蛋白130是一種跨膜糖蛋白。特別是，白細(xì)胞介素-6(IL-6)與白細(xì)胞 介素-6受體(IL-6R)的結(jié)合能夠?qū)е绿堑鞍?30在一個細(xì)胞中的二硫鍵連接的同型二聚 化作用，所述的同型二聚化作用繼而能夠?qū)е吕野彼峒っ傅幕罨?，作為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的第一 個步驟。在一種優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明中所述的抗體與白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6 受體復(fù)合體(IL-6RC)進行了結(jié)合并且阻滯或者抑制了白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體 復(fù)合體(IL-6Rc)與糖蛋白(gp) 130之間的相互作用，從而在一定程度上或者完全的阻止了 糖蛋白(gp) 130的同型二聚化作用以及隨后的信號(順式的以及反式的)。不同于能夠分別與白細(xì)胞介素-6 (IL-6)或者白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)進行結(jié) 合的抗體，例如，在白細(xì)胞介素-6(IL-6)與白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)進行結(jié)合的最佳狀 態(tài)下，本發(fā)明中所述的抗體不能夠抑制或者干擾發(fā)生在白細(xì)胞介素-6(IL-6)與白細(xì)胞介 素-6受體(IL-6R)之間的形成所述的白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc) 的相互作用。本發(fā)明中所述的抗體因此可以以這樣的濃度來進行使用，所述的濃度顯著的 低于需要使一種抗體對發(fā)生在白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)與白細(xì)胞介素-6(IL-6)之間的 相互作用進行阻滯或者干擾的濃度，例如，為了與白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)進行結(jié)合而 與白細(xì)胞介素-6(IL-6)進行競爭的抗體，或者反之亦然。在一些實施方式中，本發(fā)明中所 述的抗體的濃度低于需要使一種抗體對發(fā)生在白細(xì)胞介素-6 (IL-6)與白細(xì)胞介素-6受體 (IL-6R)之間的相互作用進行阻滯或者干擾的濃度50-100倍。對于用來對發(fā)生在白細(xì)胞 介素-6(IL-6)與白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)之間的相互作用進行阻滯或者干擾的抗體而 言，必須使用大量的濃度，例如用來治療炎癥，其中所述的白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)的水 平增加和/或白細(xì)胞介素-6(IL-6)的表達增強。為了有效的并且在一段延長的時間段內(nèi) 實現(xiàn)與增加的水平的白細(xì)胞介素-6 (IL-6)和/或白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)進行競爭， 這些能夠阻滯或者干擾發(fā)生在白細(xì)胞介素-6(IL-6)與白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)之間的 相互作用的抗體必須以高濃度存在。本發(fā)明中的范例性的單克隆抗體包括，例如，所述的39B9輕鏈可變區(qū)域1 (VLl)抗 體，所述的39B9輕鏈可變區(qū)域5 (VU)抗體，所述的12A抗體以及所述的5C抗體。可供選 擇的，所述的單克隆抗體是一種能夠與下述抗體在相同的表位上進行結(jié)合的抗體所述的 39B9輕鏈可變區(qū)域1 (VLl)抗體，所述的39B9輕鏈可變區(qū)域5 (VL5)抗體，所述的12A抗體 以及所述的5C抗體。這些抗體在本發(fā)明中分別被稱為“人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6 受體復(fù)合體(huIL-6Rc) ”抗體。人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(huIL_6RC) 抗體包括完全人類單克隆抗體，以及人源化的單克隆抗體和嵌合抗體。這些抗體對人類白 細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)以及白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)表現(xiàn)出 特異性，并且它們已經(jīng)表現(xiàn)出對由人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc) 介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(順式信號和/或反式信號)的調(diào)節(jié)，其中所述的調(diào)節(jié)例如是阻滯，抑 制，減少，拮抗，壓制或者干擾。
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在一種優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明中所述的完全人類抗體包括⑴存在于所 述的輕鏈互補決定區(qū)域3 (⑶R3)中的保守氨基酸序列QQSXSYPLT (序列識別號42)， 其中X是N或者Q;(ii)存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域2(CDR2)中的保守氨基酸序 列GnPX1FX2TTKYAQX3FQG (序列識別號43)，其中或者々，)(2是0或者E，并且 )(3是9或者K;(iii)存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域3(⑶R3)中的保守氨基酸序列 DRDILTDYYPXGGMDV (序列識別號44)，其中X是M或者L ；以及(iv)存在于所述的骨架區(qū)域 3(FRW3)中的保守氨基酸序列TAVXYCAR(序列識別號45)，其中X是F或者Y。例如，在一種優(yōu)選的實施方式中，所述的人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體 復(fù)合體(huIL-6Rc)抗體包括存在于所述的輕鏈互補決定區(qū)域3(CDR3)中的氨基酸序列 QQSNSYPLT (序列識別號J6)，存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域2 (⑶R2)中的氨基酸序列 GIIPLFDTTKYAQKFQG (序列識別號33)，存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域3 (⑶R3)中的氨基 酸序列DRDILTDYYPMGGMDV (序列識別號36)，以及存在于所述的骨架區(qū)域3 (FRW3)中的氨 基酸序列TAVYYCAR(序列識別號39)。這種抗體在本發(fā)明中被稱為所述的NI-1201A抗體。在另外一種優(yōu)選的實施方式中，所述的人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體 復(fù)合體(huIL-6Rc)抗體包括存在于所述的輕鏈互補決定區(qū)域3(CDR3)中的氨基酸序列 QQSNSYPLT (序列識別號J6)，存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域2 (⑶R2)中的氨基酸序列 GIIPLFDTTKYAQKFQG (序列識別號33)，存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域3 (⑶R3)中的氨基 酸序列DRDILTDYYPLGGMDV (序列識別號37)，以及存在于所述的骨架區(qū)域3 (FRW3)中的氨 基酸序列TAVYYCAR(序列識別號39)。這種抗體在本發(fā)明中被稱為所述的NI-1201B抗體。在另外一種優(yōu)選的實施方式中，所述的人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體 復(fù)合體(huIL-6Rc)抗體包括存在于所述的輕鏈互補決定區(qū)域3(CDR3)中的氨基酸序列 QQSNSYPLT (序列識別號J6)，存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域2 (⑶R2)中的氨基酸序列 GIIPAFETTKYAQKFQG (序列識別號34)，存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域3 (⑶R3)中的氨基 酸序列DRDILTDYYPLGGMDV (序列識別號37)，以及存在于所述的骨架區(qū)域3 (FRW3)中的氨 基酸序列TAVYYCAR(序列識別號39)。這種抗體在本發(fā)明中被稱為所述的NI-1201C抗體。在另外一種優(yōu)選的實施方式中，所述的人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體 復(fù)合體(huIL-6Rc)抗體包括存在于所述的輕鏈互補決定區(qū)域3(CDR3)中的氨基酸序列 QQSQSYPLT (序列識別號32)，存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域2(CDR2)中的氨基酸序列 GIIPAFETTKYAQKFQG (序列識別號34)，存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域3 (⑶R3)中的氨基 酸序列DRDILTDYYPLGGMDV (序列識別號37)，以及存在于所述的骨架區(qū)域3 (FRW3)中的氨 基酸序列TAVYYCAR(序列識別號39)。這種抗體在本發(fā)明中被稱為所述的NI-1201D抗體。在其他的實施方式中，所述的人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合 體(huIL-6Rc)抗體包括存在于所述的輕鏈互補決定區(qū)域3(CDR3)中的氨基酸序列 QQSNSYPLT (序列識別號J6)，存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域2 (⑶R2)中的氨基酸序列 GIIPLFDTTKYAQQFQG (序列識別號16)，存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域3 (⑶R3)中的氨基 酸序列DRDILTDYYPMGGMDV (序列識別號36)，以及存在于所述的骨架區(qū)域3 (FRW3)中的氨 基酸序列TAVFYCAR(序列識別號38)。這種抗體在本發(fā)明中被稱為所述的NI-1201野生型 (Ni-1201-WT)抗體。本發(fā)明中所述的完全人類抗體中含有一個重鏈可變區(qū)域，所述的重鏈可變區(qū)域內(nèi)含有序列識別號2、8、以及12所示的氨基酸序列。本發(fā)明中所述的完全人類抗體中含 有一個輕鏈可變區(qū)域，所述的輕鏈可變區(qū)域內(nèi)含有序列識別號4、6、10以及14所示的氨 基酸序列。所述的抗體能夠與白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)進行結(jié)合，與復(fù)合了白細(xì)胞介 素-6(IL-6)的白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)(即，IL-6Rc)進行結(jié)合，或者與兩者進行結(jié)合。所述的三個重鏈互補決定區(qū)域(OTR)包括一個可變的重鏈(VH)互補決定區(qū)域 l(CDRl)，其中包括一種氨基酸序列，所述的氨基酸序列與選自由序列識別號15、18以及 21所組成的組中的序列具有至少90 %，92 %，95 %，97 %，98 %，99 %或者更高的同一性； 一個可變的重鏈(VH)互補決定區(qū)域2(CDR2)，其中包括一種氨基酸序列，所述的氨基酸 序列與選自由序列識別號16、19、22、33、34以及35所組成的組中的序列具有至少90%， 92%，95%，97%，98%，99%或者更高的同一性；以及一個可變的重鏈(VH)互補決定區(qū) 域3(CDR3)，其中包括一種氨基酸序列，所述的氨基酸序列與選自由序列識別號17、20、 23,36以及37所組成的組中的序列具有至少90%，92%，95%，97%，98%，99%或者更高 的同一性。所述的抗體能夠與白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)進行結(jié)合，與復(fù)合了白細(xì)胞介 素-6(IL-6)的白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)(即，IL-6Rc)進行結(jié)合，或者與兩者進行結(jié)合。所述的三個輕鏈互補決定區(qū)域(OTR)包括一個可變的輕鏈(VL)互補決定區(qū)域 1 (CDRl)，其中包括一種氨基酸序列，所述的氨基酸序列與選自由序列識別號對、27、觀以 及30所組成的組中的序列具有至少90 %，92 %，95 %，97 %，98 %，99 %或者更高的同一性； 一個可變的輕鏈(VL)互補決定區(qū)域2 (CDR2)，其中包括一種氨基酸序列，所述的氨基酸序 列與序列識別號25中的氨基酸序列具有至少90%，92%，95%，97%，98%，99%或者更高 的同一性；以及一個可變的輕鏈(VL)互補決定區(qū)域3 (CDR3)，其中包括一種氨基酸序列， 所述的氨基酸序列與選自由序列識別號沈、29、31以及32所組成的組中的序列具有至少 90%,92%,95%,97%,98%,99%或者更高的同一性。所述的抗體能夠與白細(xì)胞介素_6受 體(IL-6R)進行結(jié)合，與復(fù)合了白細(xì)胞介素-6 (IL-6)的白細(xì)胞介素_6受體(IL-6R)(即， IL-6Rc)進行結(jié)合，或者與兩者進行結(jié)合。本發(fā)明中所提供的人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(huIL-6Rc)抗 體是完全人類抗體，其能夠與白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6RC)進行結(jié) 合并且阻止白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)與糖蛋白(gp) 130的結(jié)合， 這樣一來在存在這些抗體的情況下糖蛋白(gp) 130介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號級聯(lián)將不會被激活。 優(yōu)選的，所述的抗體對于白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)而言具有至 少1χ10_8的親和性，并且更為優(yōu)選的，所述的抗體對于白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體 復(fù)合體(IL-6Rc)而言具有至少lxlO—9的親和性。本發(fā)明中所述的抗體能夠與白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6RC) 進行免疫特異性結(jié)合，其中所述的抗體能夠與一種表位進行結(jié)合，所述的表位包括一個或 者多個存在于人類白細(xì)胞介素-6(IL-6)和/或人類白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)上的氨 基酸殘基。本發(fā)明中所述的抗體能夠同時與白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體 (IL-6Rc)以及白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)進行結(jié)合，其中所述的抗體能夠與一種表位進行 結(jié)合，所述的表位包括一個或者多個存在于人類白細(xì)胞介素-6 (IL-6)和/或人類白細(xì)胞介 素-6受體(IL-6R)上的氨基酸殘基。優(yōu)選的，在本發(fā)明中所述的人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì) 胞介素-6受體復(fù)合體(huIL-6Rc)抗體能夠與一個存在于白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)的結(jié)構(gòu)域3中的表位進行結(jié)合。更為優(yōu)選的，能夠與所述的人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6 受體復(fù)合體(huIL-6Rc)抗體進行結(jié)合的所述表位包括至少所述的氨基酸序列AERSKT (序 列識別號46)。本發(fā)明中所述的抗體同樣包括能夠特異性的結(jié)合白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6 受體復(fù)合體(IL-6RC)的完全人類抗體，以及能夠特異性的同時結(jié)合白細(xì)胞介素-6/白細(xì) 胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)以及白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)的抗體，其中所述的抗 體能夠表現(xiàn)出對由白細(xì)胞介素-6(IL-6)介導(dǎo)的Janus酪氨酸蛋白激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn) 錄激活子(JAK/STAT)途徑以及有絲分裂原活化蛋白激酶(MAPK)級聯(lián)的活化的超過50% 的抑制作用。例如，本發(fā)明中所述的抗體能夠表現(xiàn)出對由白細(xì)胞介素_6(IL-6)介導(dǎo)的功能 的超過 55 %，60 %，65 %，70 %，75 %，80 %，85 %，90 %，92 %，95 %，97 %，98 %，或者 99 % 的 抑制作用，其中所述的由白細(xì)胞介素-6(IL-6)介導(dǎo)的功能包括信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子 3(STAT3)的活化，急性期蛋白的生成，抗體的生成以及細(xì)胞的分化和/或增殖。本發(fā)明同樣提供了用于治療或者預(yù)防與異常的白細(xì)胞介素-6(IL_6)受體活化和 /或異常的白細(xì)胞介素-6(IL-6)信號(順式的和/或反式的)有關(guān)的病理學(xué)的方法或者 緩解與這種病理學(xué)有關(guān)的癥狀的方法，所述的方法是通過向一位宿主施用本發(fā)明中所述的 一種單克隆抗體(例如，完全人類單克隆抗體)的方式來實現(xiàn)的，其中在所述的宿主中這樣 的治療或者預(yù)防是期望的。需要接受治療的所述宿主是例如人類。所述的單克隆抗體是以 一種足以對與所述的病理學(xué)有關(guān)的癥狀進行治療、預(yù)防或者緩解的劑量來施用的。所述的 足以對存在于所述宿主中的所述病理學(xué)進行治療或者預(yù)防的單克隆抗體的劑量是，例如， 足以減小由白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)介導(dǎo)的Janus酪氨酸蛋 白激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子(JAK/STAT)途徑或者有絲分裂原活化蛋白激酶(MAPK) 級聯(lián)的活化作用的劑量。例如，當(dāng)存在本發(fā)明中所述的單克隆抗體時，與一種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子 和轉(zhuǎn)錄激活子3(STAT3)活化作用的對照水平相比(即，當(dāng)不存在所述的單克隆抗體時所 述的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3(STAT3)的活化作用的水平)，當(dāng)所述的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn) 錄激活子3 (STAT3)的活化作用的水平的減小程度超過了或者等于5 %，10 %，20 %，25 %， 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 % , 75 %, 80 %, 90 %, 95 %, 99 %,或者 100 % 時，所述的由白細(xì)胞 介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)介導(dǎo)的Janus酪氨酸蛋白激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子 和轉(zhuǎn)錄激活子(JAK/STAT)途徑或者有絲分裂原活化蛋白激酶(MAPK)級聯(lián)的活化作用被減 小了。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠認(rèn)識到，所述的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3 (STAB)的活化作 用的水平可以使用各種不同的檢測方法來進行測量，所述的檢測方法包括，例如，可商業(yè)購 買獲得的酶聯(lián)免疫吸附檢測(ELISA)試劑盒。使用本發(fā)明中所述的單克隆抗體(例如，完全人類單克隆抗體)來進行治療和/ 或預(yù)防的病理學(xué)包括，例如，膿血癥，癌癥(例如，多發(fā)性骨髓瘤疾病(MM)，腎細(xì)胞癌(RCC)， 漿細(xì)胞白血病，淋巴瘤，B-淋巴增生異常(BLPD)，以及前列腺癌)，骨再吸收，骨質(zhì)疏松，惡 病質(zhì)，銀屑病，系膜增生性腎小球腎炎，卡普西肉瘤，獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDQ相關(guān)性 淋巴瘤，以及炎性疾病(例如，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，全身型幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎，高丙球蛋白血癥， 克羅恩病，潰瘍性結(jié)腸炎，全身性紅斑狼瘡(SLE)，多發(fā)性硬化癥，Castleman病，免疫球蛋 白M(IgM)丙種球蛋白病，心臟粘液瘤，哮喘，過敏性哮喘以及自身免疫性胰島素依賴性糖 尿病)。
根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以包括一種本發(fā)明中所述的抗體以及一種載體。這些 藥物組合物可以被容納在試劑盒中，其中所述的試劑盒例如是診斷性試劑盒。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠認(rèn)識到，本發(fā)明中所述的抗體具有各種不同的用途。例如， 本發(fā)明中所述的蛋白質(zhì)可以被用來作為治療性試劑，用于對病癥中的白細(xì)胞介素-6(IL-6) 的受體的活化作用進行預(yù)防，其中所述的病癥例如是，膿血癥，癌癥(例如，多發(fā)性骨髓瘤 疾病(MM)，腎細(xì)胞癌(RCC)，漿細(xì)胞白血病，淋巴瘤，B-淋巴增生異常(BLPD)，以及前列腺 癌)，骨再吸收，骨質(zhì)疏松，惡病質(zhì)，銀屑病，系膜增生性腎小球腎炎，卡普西肉瘤，獲得性免 疫缺陷綜合癥(AIDS)相關(guān)性淋巴瘤，以及炎性疾病(例如，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，全身型幼年特發(fā) 性關(guān)節(jié)炎，高丙球蛋白血癥，克羅恩病，潰瘍性結(jié)腸炎，全身性紅斑狼瘡(SLE)，多發(fā)性硬化 癥，Castleman病，免疫球蛋白M(IgM)丙種球蛋白病，心臟粘液瘤，哮喘，過敏性哮喘以及自 身免疫性胰島素依賴性糖尿病)。本發(fā)明中所述的抗體同樣可以被用來作為診斷性試劑盒 中的試劑或者用來作為診斷工具，或者這些抗體可以被用在競爭性檢測中用以生成治療性 試齊LU附圖的簡要說明附

圖1A-1D是一系列的圖表，描述的是本發(fā)明中所述的一種抗體NI-1201所具有 的阻滯白細(xì)胞介素-6(IL-6)反式發(fā)信號的能力。附圖2A以及2B是一系列的圖表，描述的是所述的NI-1201抗體所具有的阻滯白 細(xì)胞介素-6(IL-6)的順式發(fā)信號的能力。附圖3A以及;3B是一系列的圖解，描述的是所述的NI-1201抗體所具有的阻滯信 號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子-3(STAT-3)的磷酸化作用的能力，其中所述的磷酸化作用是由白 細(xì)胞介素-6(IL-6)的順式信號所誘導(dǎo)的。附圖4是一幅圖表，描述的是所述的NI-1201抗體所具有的阻滯白細(xì)胞介 素-6(IL-6)反式發(fā)信號的能力，其中所述的反式信號是通過可溶性的人類白細(xì)胞介素-6/ 白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(“shuIL-6RC”)的融合蛋白來介導(dǎo)的。附圖5是一幅圖表，描述的是所述的NI-1201抗體與膜結(jié)合的白細(xì)胞介素_6受體 (IL-6R)所進行的結(jié)合。附圖6A-6D是一系列的圖解以及圖表，描述的是在白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)上 對所述的NI-1201表位的定位。附圖7A以及7B是一幅圖解以及圖表，描述的是所述的NI-1201抗體所具有的交 叉反應(yīng)以及壓制食蟹猴的白細(xì)胞介素_6(IL-6)信號的能力。詳細(xì)描述本發(fā)明提供了能夠特異性的結(jié)合人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體 (“IL-6RC”)的單克隆抗體，所述的單克隆抗體是可溶形式的，或者是膜結(jié)合的(即，當(dāng)在 一種細(xì)胞表面上進行表達時)。本發(fā)明進一步的提供了能夠特異性的結(jié)合白細(xì)胞介素-6/ 白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)的單克隆抗體，其中所述的抗體同樣能夠在白細(xì)胞介 素-6受體(IL-6R)不與白細(xì)胞介素-6(IL-6)進行復(fù)合的時候與其進行結(jié)合。這些抗體在 本發(fā)明中共同被稱為“人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(huIL-6Rc)”抗體。 所述的抗體是例如一種完全人類抗體。本發(fā)明中所述的抗體能夠特異性的結(jié)合白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)和/或同時與白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)以及白細(xì) 胞介素-6受體(IL-6R)進行結(jié)合，其中所述的抗體與一個表位進行結(jié)合，所述的表位包括 一個或者多個人類白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)或者兩者中的氨基酸殘基。本發(fā)明中所述的抗體能夠以< 1微摩的平衡結(jié)合常數(shù)(Kd)與一種白細(xì)胞介素-6/ 白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)和/或白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體 (IL-6Rc)以及白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)的表位進行結(jié)合，所述的平衡結(jié)合常數(shù)例如是 ^ 100納摩，優(yōu)選的< 10納摩，并且更為優(yōu)選的< 1納摩。例如，在本發(fā)明中提供的所述人 類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(huIL-6Rc)抗體表現(xiàn)出存在于大約< 1納摩 至大約1匹摩的范圍之內(nèi)的平衡結(jié)合常數(shù)(Kd)。白細(xì)胞介素-6(IL_6)同時作為一種促炎性細(xì)胞因子以及一種抗炎性細(xì)胞因子 來發(fā)揮作用。它是由T細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞分泌的用以刺激針對外傷的免疫應(yīng)答，其中所 述的外傷尤其是燒傷或者導(dǎo)致炎癥的其他組織損傷。白細(xì)胞介素_6(IL-6)是發(fā)燒以及 急性期應(yīng)答的最為重要的調(diào)節(jié)劑中的一種。在所述的肌肉組織以及脂肪組織中白細(xì)胞介 素-6(IL-6)能夠刺激能量的調(diào)動，這導(dǎo)致了增加的肌體溫度。白細(xì)胞介素_6(IL-6)可以 由巨噬細(xì)胞在對特異性的微生物分子所產(chǎn)生的應(yīng)答中進行分泌，被稱為病原體相關(guān)性分子 模式(PAMP)。這些病原體相關(guān)性分子模式(PAMP)能夠結(jié)合所述的先天免疫系統(tǒng)中的高度 重要的探測分子，所述的探測分子被稱為Toll樣受體(TLR)，其存在于所述的細(xì)胞表面之 上(或者存在于細(xì)胞內(nèi)間隔之中)，所述的細(xì)胞能夠誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)的信號級聯(lián)從而引發(fā)炎性 細(xì)胞因子的生成。白細(xì)胞介素_6(IL-6)對于雜交瘤的生長同樣是至關(guān)重要的并且已經(jīng)發(fā) 現(xiàn)其存在于許多補充的克隆介質(zhì)例如briclone之中。白細(xì)胞介素-6(IL_6)的信號能夠穿過一種細(xì)胞表面I型細(xì)胞因子受體復(fù)合物，其 中所述的復(fù)合物是由所述的配體結(jié)合白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R) α鏈(同樣也被稱之為 ⑶126)以及所述的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)組分糖蛋白(gp) 130(同樣被稱之為⑶130)所構(gòu)成的。糖蛋白 (gp) 130是幾種細(xì)胞因子的常見的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子，并且?guī)缀跄軌驘o所不在的在絕大部分組織 中進行表達，其中所述的細(xì)胞因子包括白血病抑制因子(LIF)，睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子，抑瘤素 M，白細(xì)胞介素-11 (IL-Il)以及心臟營養(yǎng)素-1。相反的，所述的⑶126的表達被限制在某 些組織中。當(dāng)白細(xì)胞介素_6(IL-6)與其受體之間發(fā)生相互作用時，它觸發(fā)了所述的糖蛋白 (gp) 130與白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)蛋白形成一種復(fù)合物，因此激活了所述的受體。這 些復(fù)合物將所述糖蛋白(gp)130的細(xì)胞內(nèi)區(qū)域聚集在一起從而激發(fā)了一種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)， 其中所述的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)經(jīng)過了某些轉(zhuǎn)錄因子，Jarms激酶(JAK)以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄 激活子(STAT)。因此，對白細(xì)胞介素-6 (IL-6)信號的壓制是一種用于病癥的治療中的可能 的治療策略，其中所述的病癥例如是，膿血癥，癌癥(例如，多發(fā)性骨髓瘤疾病(MM)，腎細(xì)胞 癌(RCC)，漿細(xì)胞白血病，淋巴瘤，B-淋巴增生異常(BLPD)，以及前列腺癌)，骨再吸收，骨質(zhì) 疏松，惡病質(zhì)，銀屑病，系膜增生性腎小球腎炎，卡普西肉瘤，獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS) 相關(guān)性淋巴瘤，以及炎性疾病(例如，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，全身型幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎，高丙球蛋 白血癥，克羅恩病，潰瘍性結(jié)腸炎，全身性紅斑狼瘡(SLE)，多發(fā)性硬化癥，Castleman病，免 疫球蛋白M(IgM)丙種球蛋白病，心臟粘液瘤，哮喘，過敏性哮喘以及自身免疫性胰島素依 賴性糖尿病)。
本發(fā)明中所述的人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(huIL-6Rc)抗體 的作用在于對白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)所具有的功能活性進行 調(diào)節(jié)，阻滯，抑制，減小，拮抗，壓制或者干擾。白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體 (IL-6Rc)所具有的功能活性包括例如，經(jīng)由Janus酪氨酸蛋白激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激 活子(JAK/STAT)途徑的活化作用的細(xì)胞內(nèi)信號以及經(jīng)由有絲分裂原活化蛋白激酶(MAPK) 級聯(lián)的活化作用的細(xì)胞內(nèi)信號，急性期蛋白的制備，抗體的制備以及細(xì)胞的分化和/或增 殖。例如，所述的人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(huIL-6Rc)抗體通過對 所述的白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)與所述的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)受體組分 糖蛋白(gp) 130之間的結(jié)合進行一定程度上的或者完全的調(diào)節(jié)，阻滯，抑制，減小，拮抗，壓 制，或者干擾，從而完全的或者在一定程度上對白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體 (IL-6Rc)所具有的功能活性進行抑制。與不存在與本發(fā)明中所述的人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體 (huIL-6Rc)抗體進行的結(jié)合時所述的白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc) 所具有的功能活性水平相比，當(dāng)存在所述的人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體 (huIL-6Rc)抗體時所述白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)所具有的功 能活性的水平減小了至少95 %，例如，減小了 96 %，97 %，98 %，99 %或者100 %時，認(rèn)為所 述的人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(huIL-6Rc)抗體對白細(xì)胞介素-6/白 細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6RC)所具有的功能活性產(chǎn)生了完全的調(diào)節(jié)，阻滯，抑制，減小， 拮抗，壓制或者干擾。與不存在與本發(fā)明中所述的人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體 復(fù)合體(huIL-6Rc)抗體進行的結(jié)合時所述的白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體 (IL-6Rc)所具有的功能活性水平相比，當(dāng)存在所述的人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受 體復(fù)合體(huIL-6Rc)抗體時所述白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL_6Rc)所 具有的功能活性的水平減小T不超過95%，例如,10%, 20%, 25%, 30%,40%, 50%,60%, 75 %，80 %，85 %或者90 %時，認(rèn)為所述的人類白細(xì)胞介素_6/白細(xì)胞介素_6受體復(fù)合體 (huIL-6Rc)抗體對白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)所具有的功能活性 產(chǎn)生了一定程度的調(diào)節(jié)，阻滯，抑制，減小，拮抗，壓制或者干擾。^JL除非另外定義，在本發(fā)明中所使用的科學(xué)術(shù)語以及技術(shù)術(shù)語將具有本領(lǐng)域普通技 術(shù)人員普遍所理解的含義。進一步的，除非上下文中另有需要，單數(shù)的術(shù)語將包括復(fù)數(shù)形 式并且復(fù)數(shù)的術(shù)語將包括單數(shù)形式。一般而言，在本發(fā)明所描述的細(xì)胞和組織培養(yǎng)，分子 生物學(xué)，以及蛋白質(zhì)和寡核苷酸或者多核苷酸化學(xué)以及雜交中利用的命名學(xué)以及技術(shù)是本 領(lǐng)域中熟知的并且被普遍使用的。標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)被用來進行重組DNA，寡核苷酸的合成，以及 組織的培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化(例如，電穿孔，脂質(zhì)轉(zhuǎn)染法)。根據(jù)制造商的說明書或者根據(jù)本領(lǐng)域普 遍完成的或者根據(jù)本發(fā)明中的描述來實現(xiàn)酶反應(yīng)以及純化技術(shù)。前述的技術(shù)以及操作步驟 一般而言是根據(jù)本領(lǐng)域中熟知的常規(guī)方法以及按照在本說明書中引用和討論到的各種不 同的一般性的以及更具體的參考文獻中的描述來實現(xiàn)的。參見例如Sambrook等人所著的 Molecular Cloning =ALaboratory Manual《分子克隆實驗室手冊》(第2版，冷泉港實驗室 出版社，冷泉港，紐約(1989年))。在本發(fā)明所描述的分析化學(xué)，合成有機化學(xué)，以及藥物和 制藥化學(xué)中利用的命名學(xué)以及實驗室操作步驟和技術(shù)是本領(lǐng)域中熟知的并且被普遍使用
12的。標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)被用來進行化學(xué)合成，化學(xué)分析，藥物的制備，配制，以及遞送，以及對患者 的治療。當(dāng)根據(jù)本發(fā)明公開進行使用時，除非另外指明，下述的術(shù)語將被理解為具有下述 的含義當(dāng)在本發(fā)明中進行使用時，所述的術(shù)語白細(xì)胞介素-6受體，IL-6R，白細(xì)胞介素_6 受體-α，IL-6Ra，集群(cluster)分化因子126，以及⑶1 是同義的并且可以交替互換 使用。除非另外指明，這些術(shù)語中的每一個指的是所述的同型二聚體蛋白質(zhì)。當(dāng)在本發(fā)明中進行使用時，所述的術(shù)語“抗體”指的是免疫球蛋白分子以及免疫球 蛋白(Ig)分子的免疫活性部分，即，含有一個能夠與一種抗原進行特異性的結(jié)合(發(fā)生免 疫反應(yīng))的抗原結(jié)合位點的分子。“特異性的結(jié)合”或者“發(fā)生免疫反應(yīng)”或者“直接作用 于”意味著所述的抗體能夠與所期望的抗原中的一個或者多個抗原決定簇發(fā)生反應(yīng)并且不 會與其他多肽發(fā)生反應(yīng)或者以低得多的親和性(平衡結(jié)合常數(shù)> 10—6)進行結(jié)合。抗體包 括，但不局限于，多克隆抗體，單克隆抗體，嵌合抗體，dAb (結(jié)構(gòu)域抗體)，單鏈抗體，F(xiàn)ab，F(xiàn)ab，， 以及F(ab，)2片段，單鏈Fv (scFc)，以及Fab表達文庫。已知所述的基本抗體結(jié)構(gòu)單元包括一個四聚體。每一個四聚體是由兩個相同的多 肽鏈對組成的，每一個對中含有一條“輕”鏈(大約25千道爾頓)以及一條“重”鏈(大約 50-70千道爾頓)。在每一條鏈的氨基末端部分包括一個具有大約100至110個或者更多 個氨基酸的可變區(qū)域，主要負(fù)責(zé)進行抗原的識別。在每一條鏈的羧基末端部分定義了一個 恒定區(qū)域，主要負(fù)責(zé)效應(yīng)器功能。一般而言，從人類中獲得的抗體分子涉及到下述類型中的 任意一個免疫球蛋白G，免疫球蛋白M，免疫球蛋白A，免疫球蛋白E以及免疫球蛋白D，這 些類型通過存在于所述分子中的所述重鏈所具有的性質(zhì)來形成彼此之間的差異。某些類型 也存在亞類型，例如免疫球蛋白G1，免疫球蛋白G2，以及其他。此外，在人類中，所述的輕鏈 可以是一條κ輕鏈或者是一條λ輕鏈。當(dāng)在本發(fā)明中進行使用時，所述的術(shù)語“單克隆抗體(MAb) ”或者“單克隆抗體組 合物”指的是一種抗體分子的群體，所述的抗體分子僅含有一種分子類型的抗體分子，所述 的抗體分子是由一個唯一的輕鏈基因產(chǎn)物以及一個唯一的重鏈基因產(chǎn)物所構(gòu)成的。特別 是，在所述群體的所有分子中，所述單克隆抗體的互補決定區(qū)域(CDR)是相同的。單克隆抗 體含有一個抗原結(jié)合位點，能夠與所述抗原上的一個特定的表位發(fā)生免疫反應(yīng)，其中所述 抗原的特征在于對其具有唯一的結(jié)合親和性。一般而言，從人類中獲得的抗體分子涉及到下述類型中的任意一個免疫球蛋白 G，免疫球蛋白Μ，免疫球蛋白Α，免疫球蛋白E以及免疫球蛋白D，這些類型通過存在于所述 分子中的所述重鏈所具有的性質(zhì)來形成彼此之間的差異。某些類型也存在亞類型，例如免 疫球蛋白G1，免疫球蛋白G2，以及其他。此外，在人類中，所述的輕鏈可以是一條κ輕鏈或 者是一條λ輕鏈。所述的術(shù)語“抗原結(jié)合位點”或者“結(jié)合部分”指的是參與抗原結(jié)合的所述的免疫 球蛋白分子中的部分。所述的抗原結(jié)合位點是由所述的重鏈(“H”)以及輕鏈(“L”)上的 N-末端可變(“V”)區(qū)域上的氨基酸殘基形成的。三個高度分歧的伸展存在于所述的重鏈以 及輕鏈的可變區(qū)域內(nèi)，被稱之為“超變區(qū)域”，所述的超變區(qū)域介于較為保守的側(cè)向伸展之 間，所述的伸展被稱之為“骨架區(qū)域”或者“FR”。因此，所述的術(shù)語“骨架區(qū)域(FR) ”指的是天然存在于免疫球蛋白的超變區(qū)域之間或者鄰近超變區(qū)域的氨基酸序列。在一個抗體分子 中，一條輕鏈上的三個超變區(qū)域與一條重鏈上的三個超變區(qū)域在三維空間內(nèi)相對于彼此進 行排列從而形成了一個抗原結(jié)合表面。所述的抗原結(jié)合表面與一種結(jié)合抗原的所述三維表 面是互補的，并且所述的重鏈以及輕鏈中的每一條上的所述三個超變區(qū)域被稱之為“互補 ^ ! ，，$#“CDR，，。f^JM$Kabat Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest 《具有免疫學(xué)興趣的蛋白質(zhì)的Kabat序列》中的定義(National Institutes of Health, Bethesda，Md. (1987 年以及 1991 年))，或者 Chothia & Lesk (于 1987 年)在 J. Mol. Biol. 《分子生物學(xué)雜志》196 =901-917中發(fā)表的文章，Chothia等人(于1989年)在Nautre《自 然》342 =878-883中發(fā)表的文章，對每一個結(jié)構(gòu)域內(nèi)的氨基酸進行分配。當(dāng)在本發(fā)明中進行使用時，所述的術(shù)語“表位”包括能夠與一種免疫球蛋白或其片 段或者一種T細(xì)胞受體進行特異性結(jié)合的任何的蛋白質(zhì)決定簇。所述的術(shù)語“表位”包括 能夠與一種免疫球蛋白或者一種T細(xì)胞受體進行特異性結(jié)合的任何的蛋白質(zhì)決定簇。表 位決定簇通常是由分子的化學(xué)活性表面基團(groupings)例如氨基酸或者糖側(cè)鏈構(gòu)成的 并且通常具有特異性的三維結(jié)構(gòu)特征，以及特異性的電荷特征。當(dāng)所述的解離常數(shù)< 1微 摩時，我們說一種抗體與一種抗原發(fā)生了特異性的結(jié)合，其中所述的解離常數(shù)例如是< 100 納摩，優(yōu)選的< 10納摩并且更為優(yōu)選的< 1納摩。當(dāng)在本發(fā)明中進行使用時，所述的術(shù)語“免疫結(jié)合”以及“免疫結(jié)合特性”指的是 發(fā)生在一個免疫球蛋白分子與一種抗原之間的非共價相互作用，其中所述的免疫球蛋白分 子對于所述的抗原而言是具有特異性的。所述的免疫結(jié)合相互作用的強度或者親和性可以 通過所述相互作用的解離常數(shù)(Kd)來表達，其中較小的解離常數(shù)代表了較高的親和性?？?以使用本領(lǐng)域熟知的方法對所選取的多肽的免疫結(jié)合特性進行量化。有一種這樣的方法需 要測量所述的抗原結(jié)合位點/抗原復(fù)合體的形成以及解離的速率，其中那些速率取決于所 述的構(gòu)成復(fù)合體的配偶體的濃度，所述相互作用的親和性，以及能夠在兩個方向上同等的 對所述的速率產(chǎn)生影響的幾何參數(shù)。因此，可以通過對所述的濃度以及所述的實際結(jié)合速 率和實際解離速率進行計算，從而同時確定出所述的“結(jié)合速率常數(shù)(K。n)，，以及“解離速率 常數(shù)(Koff)，，(參見1993年在《自然》(Nature) 361 :186-87中發(fā)表的文章)。所述的解離 速率常數(shù)與結(jié)合速率常數(shù)的比值能夠消除不涉及到親和性的全部參數(shù)，并且等于所述的解 離常數(shù)(Kd)(參見，一般而言，Davies等人于1990年在《生物化學(xué)年度評論》(Annual Rev Biochem)59 :439-473中發(fā)表的文章)。當(dāng)所述的平衡結(jié)合常數(shù)(Kd) ( 1微摩時，優(yōu)選的 ^ 100納摩，更為優(yōu)選的< 10納摩，并且最為優(yōu)選的< 100匹摩至大約1匹摩時，可以說本 發(fā)明所述的抗體能夠與白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6RC)和/或白細(xì)胞 介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)以及白細(xì)胞介素-6(IL-6) —同進行特異性 的結(jié)合，其中所述的平衡結(jié)合常數(shù)是通過例如放射性配體結(jié)合檢測或者本領(lǐng)域技術(shù)人員已 知的類似檢測測量得到的。當(dāng)在本發(fā)明中進行使用時，所述的術(shù)語“分離的多核苷酸”應(yīng)當(dāng)指的是一種基因組 多核苷酸，cDNA多核苷酸，或者合成來源的多核苷酸或者上述多核苷酸的某種組合，憑借所 述的來源，使得所述的“分離的多核苷酸”(1)不與一種多核苷酸的全部或者一部分相互關(guān) 聯(lián)，其中在所述的多核苷酸中所述的“分離的多核苷酸”是天然存在的，(2)與一種多核苷酸 發(fā)生了可操作性的連接，其中所述的多核苷酸是在天然狀態(tài)下不發(fā)生連接的，或者(3)并不天然的作為一個更長的序列中的一部分。依照本發(fā)明所述的多核苷酸包括這樣的核酸分 子，所述的核酸分子編碼出現(xiàn)在序列識別號2，8以及12中的所述重鏈免疫球蛋白分子的核 酸分子，以及編碼出現(xiàn)在序列識別號4，6，10，以及14中的所述輕鏈免疫球蛋白分子的核酸 分子。在本發(fā)明中所提及的所述術(shù)語“分離的蛋白”指的是一種cDNA蛋白，重組RNA蛋 白，或者合成來源的蛋白或者上述蛋白的某種組合，憑借所述的來源、或者衍生的來源，所 述的“分離的蛋白”(1)不與天然存在的蛋白相互關(guān)聯(lián)，( 不含有具有相同來源的其他蛋 白，例如，不含有海洋蛋白，(3)通過一種來自于不同物種的細(xì)胞進行表達，或者(4)不是天 然存在的。當(dāng)在本發(fā)明中進行使用時，所述的術(shù)語“多肽”被作為一個通稱進行使用，指的是 天然蛋白質(zhì)，多肽序列的片段，或者多肽序列的類似物。因此，天然蛋白質(zhì)片段以及類似物 屬于所述的多肽屬的種類。根據(jù)本發(fā)明的多肽包括出現(xiàn)在序列識別號2，8，以及12中的所 述的重鏈免疫球蛋白分子，以及出現(xiàn)在序列識別號4，6，10，以及14中的所述的輕鏈免疫球 蛋白分子，以及由包括所述的重鏈免疫球蛋白分子與輕鏈免疫球蛋白分子的組合所形成抗 體分子，并且反之亦然，也包括其片段以及類似物，其中所述的輕鏈免疫球蛋白分子是例如 κ輕鏈免疫球蛋白分子。當(dāng)在本發(fā)明中進行使用時，所述的術(shù)語“天然存在的”在被應(yīng)用于賓語中時指的是 這樣的事實所述的賓語是可以在自然界中發(fā)現(xiàn)的。例如，一種存在于所述的有機體(包括 病毒)中的多肽或者多核苷酸序列，所述的多肽或者多核苷酸序列可以從一種天然來源中 被分離出來，并且其沒有被實驗室或者其他的人進行有意的修飾，則這樣的多肽或者多核 苷酸序列是天然存在的。這里所使用的所述術(shù)語“可操作性的連接”指的是被進行這種描述的組分所處的 位置關(guān)系允許它們能夠以既定的方式發(fā)揮功能。一個調(diào)控序列與一個編碼序列進行“可操 作性的連接”，指的是所述的調(diào)控序列以這樣的一種方式進行連結(jié)，使得在與所述的調(diào)控序 列相協(xié)調(diào)的條件下，能夠完成所述的編碼序列的表達。當(dāng)在本發(fā)明中進行使用時，所述的術(shù)語“控制序列”指的是這樣的一種多核苷酸序 列，所述的多核苷酸序列對于實現(xiàn)所述編碼序列的表達以及加工而言是必不可少的，其中 所述的編碼序列是與所述的多核苷酸序列進行連結(jié)的。這樣的控制序列所具有的性質(zhì)存 在差異，這取決于存在于原核生物中的宿主有機體，這樣的控制序列一般而言包括存在于 真核細(xì)胞中的啟動子，核糖體結(jié)合位點，以及轉(zhuǎn)錄終止序列，一般而言，這樣的控制序列包 括啟動子以及轉(zhuǎn)錄終止序列。所述的術(shù)語“控制序列”在最低程度上意在包括所有這樣的 組分，所述的組分的存在對于表達以及加工而言是必不可少的，并且還可以包括其他的組 分，其中所述的其他的組分的存在是有利的，例如，前導(dǎo)序列以及融合配偶體序列(fusion partner sequences)。在本發(fā)明中所提及的所述術(shù)語“多核苷酸”指的是具有至少10個堿 基長度的核苷的聚合硼，可以是核糖核苷或者脫氧核糖核苷或者是上述任何類型的核苷的 修飾形式。所述的術(shù)語包括單鏈形式的DNA以及雙鏈形式的DNA。在本發(fā)明中提及的所述術(shù)語“寡核苷酸”包括天然存在的以及經(jīng)過修飾的核苷酸， 其中所述的核苷酸通過天然存在的以及非天然存在的寡核苷酸連接鍵被連接在一起。寡核 苷酸是一種多核苷酸的子集，一般情況下包括200個堿基或者更少堿基的長度。優(yōu)選的寡
15核苷酸具有10至60個堿基的長度并且最為優(yōu)選的具有12，13，14，15，16，17，18，19，或者 20至40個堿基的長度。寡核苷酸通常是單鏈的，例如當(dāng)被用作探針時，盡管寡核苷酸可以 是雙鏈的，例如，當(dāng)被用于進行基因變體的構(gòu)建時。本發(fā)明中所述的寡核苷酸是正義寡核苷 酸或者反義寡核苷酸。在本發(fā)明中提及的所述術(shù)語“天然存在的核苷酸”包括脫氧核糖核苷酸以及核糖 核苷酸。在本發(fā)明中提及的所述術(shù)語“經(jīng)過修飾的核苷酸”包括具有經(jīng)過修飾的或者經(jīng)過 取代的糖基團的核苷酸以及類似的核苷酸。在本發(fā)明中提及的所述術(shù)語“寡核苷酸連接鍵” 包括例如這樣的寡核苷酸連接鍵硫代磷酸酯，二硫代磷酸酯，硒代磷酸酯，二硒代磷酸酯， phosphoroanilothioate, phoshoraniladate, phosphoronmidate,(以的參 見，例如，LaPlanche等人于1986年在《核酸研究》(Nuc 1. Acids Res.) 14 9081中發(fā)表的 文章Jtec等人于1984年在《美國化學(xué)學(xué)會雜志》(J. Am. Chem. Soc.) 106 :6077中發(fā)表的 文章，Stein等人于1988年在《核酸研究》(Nuc 1. Acids Res.) 16 :3209中發(fā)表的文章，Zon 等人于1991年在《抗癌癥藥物的設(shè)計》(Anti CancerDrug Design)6 :539中發(fā)表的文章； Zon 等人發(fā)表的文章 Oligonucleotides and Analogues :A Practical Approach《寡核苷 酸以及類似物一種實踐方法》第87-108頁(F. Eckstein編輯，牛津大學(xué)出版社，英國牛津 (于 1991 年))Jtec 等人的美國專利 No. 5151510 ；(于 1990 年)在 Uhlmann and Peyman ChemicalReviews ((Uhlmann以及Peyman化學(xué)回顧》90 :543中發(fā)表的文章。如果期望的話， 一種寡核苷酸可以包括一個用于進行探測的標(biāo)記物。在本發(fā)明中所提及的所述術(shù)語“選擇性的雜交”指的是可探測性的以及特異性的 結(jié)合。依照本發(fā)明所述的多核苷酸，寡核苷酸以及它們的片段能夠選擇性的與核酸鏈進行 雜交，其中所述的雜交是在雜交以及洗滌的條件下進行的，從而使與非特異性核酸發(fā)生可 探測性結(jié)合的可感知劑量最小化。可以利用高度嚴(yán)格的條件來獲得本領(lǐng)域已知的以及本 發(fā)明中所討論的選擇性的雜交條件。一般而言，在本發(fā)明所述的多核苷酸，寡核苷酸，以及 片段與一種目標(biāo)核酸序列之間的核酸序列同源性將為至少80%，并且更加典型的具有優(yōu) 選的至少85 %，90 %，95 %，99 %，以及100 %的增加的同源性。如果兩個氨基酸序列在它 們的序列之間具有部分同一性或者完全同一性，那么這兩個氨基酸序列是同源的。例如， 85%的同源性意味著當(dāng)將所述的兩個序列以最大程度的匹配進行比對時，有85%的氨基酸 是相同的。在最大程度的匹配中允許存在空位(存在于所述進行匹配的兩個序列中的任 意一個之上)，所述的空位長度為5或者更小是優(yōu)選的，空位長度為2或者更小是更加優(yōu)選 的?？梢赃x擇的并且是優(yōu)選的，兩個蛋白質(zhì)序列(或者是來源于它們的多肽序列，其具有 至少30個氨基酸的長度)是同源的，這一術(shù)語用在本發(fā)明中指的是，當(dāng)使用帶有突變數(shù)據(jù) 矩陣(mutation data matrix)以及空位罰分為6或者更高的ALIGN程序時，所述的蛋白質(zhì) 序列得到高于5 (標(biāo)準(zhǔn)偏差單位)的比對得分。參見Dayhoff，M.O.于Atlas of Protein Sequenceand Structure《蛋白序列以及結(jié)構(gòu)圖集》第101-110頁(第5卷，National Biomedical Research inundation美國國家生物醫(yī)學(xué)研究基金會，(于1972年))以及該 卷的增刊2，第1-10頁中發(fā)表的文章。當(dāng)使用所述的ALIGN程序進行最優(yōu)化的比對時，所述 的兩個序列或其部分中的氨基酸具有大于或者等于50%的同一性，那么所述的兩個序列或
其部分是更加優(yōu)選的同源的。在本發(fā)明中所使用的所述術(shù)語“與......相對應(yīng)”指的是多
核苷酸序列與一個參考的多核苷酸序列的整體或者一部分是同源的(即，是相同的，非嚴(yán)格性進化相關(guān))，或者一個多肽序列與一個參考的多肽序列是相同的。與之相對照區(qū)別的，
在本發(fā)明中所使用的所述術(shù)語“與......相互補”指的是所述的互補序列與一個參考的多
核苷酸序列的整體或者一部分是同源的。作為例子，所述的核苷酸序列“TATAC”與參考序 列“TATAC”相符合而與參考序列“GTATA”相互補。下述的術(shù)語被用來描述存在于兩個或者多個多核苷酸序列或者氨基酸序列之間 的序列關(guān)系“參考序列”，“比較窗口(comparison window) ”，“序列同一性”，“序列同一性 百分?jǐn)?shù)”，以及“本質(zhì)上的同一性”?！皡⒖夹蛄小笔且粋€被定義的序列，用來作為序列比較的 基準(zhǔn)，一個參考序列可能是一個更大的序列的子集，例如，作為一個完全長度的cDNA或者 基因序列的片段，其中所述的cDNA或者基因序列在序列列表中給出，或者可以包括一個完 整的cDNA或者基因序列。一般而言，一個參考序列具有至少18個核苷酸或者6個氨基酸的 長度，常常具有至少M個核苷酸或者8個氨基酸的長度，并且通常具有至少48個核苷酸或 者16個氨基酸的長度。由于兩個多核苷酸序列或者氨基酸序列可能均(1)在所述的兩個 分子中包括一個相似的序列(即，所述的完整的多核苷酸序列或者氨基酸序列的一部分)， 以及( 在所述的兩個多核苷酸序列或者氨基酸序列中可能進一步的包括一個存在分歧 的序列，通常通過在一個“比較窗口 ”中對所述的兩個分子的序列進行比較的方式來完成兩 個(或者多個)分子間的序列比較，用以對局部區(qū)域的序列相似性進行識別以及比較。在本 發(fā)明中所使用的“比較窗口”指的是一種具有至少18個連續(xù)的核苷酸位置或者6個氨基酸 的一種概念片段，其中可以將一種多核苷酸序列或者氨基酸序列與一種具有至少18個連 續(xù)的核苷酸或者6個氨基酸序列的參考序列進行比較，并且與所述的參考序列(其中不包 括添加或者缺失)相比較而言，其中位于所述的比較窗口之內(nèi)的所述的多核苷酸序列部分 可以包括20%或者更低程度的添加，缺失，取代，以及類似的情況(即，空位)，用以使所述 的兩個序列進行最佳的比對。用于校準(zhǔn)比較窗口從而進行的序列的最佳比對可以利用下述 方式來操作利用Smith以及Waterman (于1981年)在Adv. Appl. Math.《應(yīng)用數(shù)學(xué)的研究 進展》2 482中發(fā)表的文章中描述的局部同源性運算法則，利用Needleman以及^msch (于 1970年)在J. Mol. Biol.《分子生物學(xué)雜志》48 :443中發(fā)表的文章中描述的同源性比對運 算法則，利用 Pearson 以及 Lipman (于 1988 年)在 Proc. Natl. Acad. Sci. (U. S. A.)《美國科 學(xué)院院刊》85 2444中發(fā)表的文章中描述的對相似性方法的尋找，利用這些運算法則的計算 機執(zhí)行(在 Wisconsin Genetics 軟件包版本 7. O (Genetics Computer Group, 575 Science Dr. Madison, Wis.)中的 GAP，BESTFIT, FASTA,以及 TFASTA，Geneworks,或者 MacVector 軟 件包)，或者通過檢查，并且對于由上述各種方法所產(chǎn)生的最佳比對(即，在所述的比較窗 口中產(chǎn)生最高百分比的同源性)進行選擇。所述的術(shù)語“序列同一性”指的是在所述的比較窗口內(nèi)兩個多核苷酸序列或者氨 基酸序列是相同的(即，基于一個一個核苷酸或者一個一個殘基而言)。所述的術(shù)語“序列 同一性的百分?jǐn)?shù)”是通過下述方式進行計算的在所述的比較窗口內(nèi)對兩個最佳比對的序 列進行比較，確定在兩個序列中出現(xiàn)同樣的核酸堿基(例如，A，T，C，G，U或者I)或者殘基 的位置的個數(shù)，從而獲得所述的匹配位置的個數(shù)，用所述的匹配位置的個數(shù)除以在所述的 比較窗口中的位置的總個數(shù)(即，窗口尺寸)，并且將得到的結(jié)果乘以100，從而得出所述的 序列同一性的百分?jǐn)?shù)。當(dāng)在本發(fā)明中進行使用時，所述的術(shù)語“本質(zhì)上的同一性”代表的是 一種多核苷酸序列或者氨基酸序列所具有的特征，其中所述的多核苷酸或者氨基酸包括一
17個具有至少85%的序列同一性的序列，優(yōu)選具有至少90%至95%的序列同一性，更加常見 的具有至少99%的序列同一性，其中所述的序列同一性是在比較窗口內(nèi)與一個參考序列進 行比較而得到的，其中所述的比較窗口具有至少18個核苷酸(6個氨基酸)的位置，通常情 況下所述的窗口具有至少M-48個核苷酸(8-16個氨基酸)的位置，其中所述的序列同一 性百分?jǐn)?shù)是通過下述方式來計算的將所述的參考序列與一種可能包括缺失或者添加的序 列進行比較，其中所述的參考序列的共計20%或者更少是位于所述的比較窗口之中的。所 述的參考序列可以是一個更大的序列的子集。當(dāng)在本發(fā)明中進行使用時，所述的二十個常規(guī)氨基酸以及它們的縮略語是依照常 規(guī)的用法來使用的。參見Immunology-ASynthesis《免疫學(xué)合成方法》(第二版，Ε. S. Golub 以及 D. R. Gren 編輯，Sinauer Associates, Sunderland7 Mass. (1991 年))。所述的二十個 常規(guī)氨基酸的立體異構(gòu)體(例如，D-氨基酸)，非天然氨基酸例如α-，α-二取代氨基酸， N-烷基氨基酸，乳酸，以及其他非常規(guī)的氨基酸同樣可能成為本發(fā)明所述的多肽中的適合 的組分。非常規(guī)氨基酸的例子包括4-羥基脯氨酸，Y-羧基谷氨酸鹽，ε-N，N，N-三甲基 賴氨酸，ε -N-乙酰基賴氨酸，0-磷酸化絲氨酸，N-乙?；z氨酸，N-甲?；琢虬彼幔?-甲 基組氨酸，5-羥基賴氨酸，σ -N-甲基精氨酸，以及其他類似的氨基酸以及亞氨基酸(例如， 4-羥基脯氨酸)。依照標(biāo)準(zhǔn)的用法以及慣例，在本發(fā)明中所使用的所述多肽標(biāo)記中，左側(cè)的 方向是所述的氨基末端方向而右側(cè)的方向是所述的羧基末端方向。相類似的，除非具體指明，所述的單鏈多核苷酸序列的左側(cè)端是所述的5’端，所述 的雙鏈多核苷酸序列的左側(cè)端指的是所述的5’方向。初生RNA轉(zhuǎn)錄體的5’至3’方向上 的加成指的是在所述的DNA鏈上的轉(zhuǎn)錄方向序列區(qū)域與所述的RNA具有同樣的序列并且是 從5’到所述RNA轉(zhuǎn)錄體的5’端，這樣的序列被稱為“上游序列”，DNA鏈上的序列區(qū)域與所 述的RNA具有同樣的序列并且是從3’到所述RNA轉(zhuǎn)錄體的3’端，這樣的序列被稱為“下游 序列”。當(dāng)應(yīng)用于多肽時，所述的術(shù)語“本質(zhì)上的同一性”指的是當(dāng)進行最佳比對時，例如 通過使用默認(rèn)間隙重量的GAP程序或者BESTFIT程序進行比對時，兩個肽序列享有至少 80 %的序列同一性，優(yōu)選為至少90 %的序列同一性，更加優(yōu)選為至少95 %的序列同一性， 并且最優(yōu)選為至少99%的序列同一性。優(yōu)選的，不相同的殘基位置上進行了不同的保守性的氨基酸取代。保守性的氨基酸取代指的是具有類似側(cè)鏈的殘基之間的相互替換能力。例如，具 有脂肪族側(cè)鏈的一組氨基酸是甘氨酸，丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，以及異亮氨酸；具有脂肪 族-羥基側(cè)鏈的一組氨基酸是絲氨酸以及蘇氨酸；具有含有酰胺的側(cè)鏈的一組氨基酸是天 冬酰胺以及谷氨酰胺；具有芳香族側(cè)鏈的一組氨基酸是苯丙氨酸，酪氨酸以及色氨酸；具 有堿性側(cè)鏈的一組氨基酸是賴氨酸，精氨酸，以及組氨酸；并且具有含有硫的側(cè)鏈的一組氨 基酸是半胱氨酸以及甲硫氨酸。優(yōu)選的保守性氨基酸取代的基團是纈氨酸-亮氨酸-異 亮氨酸，苯丙氨酸-酪氨酸，賴氨酸-精氨酸，丙氨酸-纈氨酸，谷氨酸-天冬氨酸，以及天 冬酰胺-谷氨酰胺。正如本發(fā)明中所討論的，可以預(yù)期，在抗體或者免疫球蛋白分子的氨基酸序列中 發(fā)生的次級變化被包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)，只要所述的氨基酸序列中的變化保留了至少 75 %，更加優(yōu)選為至少80 %，90 %，95 %，并且最優(yōu)選為99 %。特別的，保守性的氨基酸取代是可以預(yù)期的。保守性的取代是指那些在一個氨基酸家族之內(nèi)發(fā)生的取代，其中所述的一 個氨基酸家族之內(nèi)的氨基酸指的是它們的側(cè)鏈?zhǔn)窍嚓P(guān)的。遺傳編碼的氨基酸一般被劃分為 下述家族(1)酸性氨基酸，為天冬氨酸，谷氨酸；(2)堿性氨基酸，為賴氨酸，精氨酸，組氨 酸；(3)非極性氨基酸，為丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，脯氨酸，苯丙氨酸，甲硫氨酸， 色氨酸；以及(4)不帶電荷的極性氨基酸，為甘氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，半胱氨酸，絲氨 酸，蘇氨酸，酪氨酸。所述的親水性的氨基酸包括精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，谷氨酰胺，谷 氨酸，組氨酸，賴氨酸，絲氨酸，以及蘇氨酸。所述的疏水性的氨基酸包括丙氨酸，半胱氨酸， 異亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，色氨酸，酪氨酸以及纈氨酸。其他的氨基酸 家族包括(i)絲氨酸以及蘇氨酸，它們屬于所述的脂肪族-羥基家族；(ii)天冬酰胺以及 谷氨酰胺，它們屬于所述的含有酰胺的家族；(iii)丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸以及異亮氨酸， 它們屬于所述的脂肪族家族；以及(iv)苯丙氨酸，色氨酸，以及酪氨酸，它們屬于所述的芳 香家族。例如，可以合理的預(yù)料到，利用異亮氨酸或者纈氨酸對亮氨酸進行單獨的取代，利 用谷氨酸對天冬氨酸進行單獨的取代，利用絲氨酸對蘇氨酸進行單獨的取代，或者利用一 種結(jié)構(gòu)相關(guān)的氨基酸對另一種氨基酸進行類似的取代，這樣的取代將不會對所得到的分子 的結(jié)合或者性質(zhì)產(chǎn)生重要的影響，特別是當(dāng)所述的取代不涉及到存在于一個骨架位點內(nèi)的 氨基酸的時候?？梢酝ㄟ^對所述的多肽衍生物所具有的特異性活性進行檢測的方式，來容 易的確定一種氨基酸的變化是否產(chǎn)生了一種功能性的肽。檢測方法在本發(fā)明中進行了詳細(xì) 的描述。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠容易的制備出抗體或者免疫球蛋白分子的片段或者類似 物。優(yōu)選的片段或者類似物的氨基末端以及羧基末端出現(xiàn)在臨近功能性結(jié)構(gòu)域的邊界處。 可以通過將所述的核苷酸序列和/或氨基酸序列的數(shù)據(jù)與公共序列數(shù)據(jù)庫或者私人序列 數(shù)據(jù)庫進行比較的方式，從而對結(jié)構(gòu)性結(jié)構(gòu)域以及功能性結(jié)構(gòu)域進行識別。優(yōu)選的，使用計 算機化的比較方法來識別序列基序或者預(yù)測的蛋白質(zhì)的構(gòu)象結(jié)構(gòu)域，其中所述的序列基序 或者預(yù)測的蛋白質(zhì)的構(gòu)象結(jié)構(gòu)域是存在于具有已知的結(jié)構(gòu)和/或功能的其他蛋白質(zhì)中的。 用來對折疊成一種已知的三維結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)序列進行識別的方法是已知的。參見Bowie等 人(于1991年)在義化?。、恰犊茖W(xué)》253 :164中發(fā)表的文章。因此，前述的例子證明了，本 領(lǐng)域技術(shù)人員能夠?qū)@樣的序列基序以及結(jié)構(gòu)構(gòu)象進行識別，所述的序列基序以及結(jié)構(gòu)構(gòu) 象可以被用來定義本發(fā)明所述的結(jié)構(gòu)性結(jié)構(gòu)域以及功能性結(jié)構(gòu)域。
優(yōu)選的氨基酸取代是具有下述性質(zhì)的那些(1)降低了對于蛋白質(zhì)水解的易感 性，⑵降低了對于氧化的易感性，⑶改變了用于形成蛋白質(zhì)復(fù)合體的結(jié)合親和性，⑷改 變了結(jié)合親和性，以及(5)賦予這樣的類似物以其他的物理化學(xué)性質(zhì)或者功能性質(zhì)，或者 對上述性質(zhì)進行了修飾。除了所述的天然存在的肽序列之外，類似物可以包括序列的各種 突變蛋白。例如，可以在所述的天然存在的序列中(優(yōu)選的在形成分子間接觸的結(jié)構(gòu)域之 外的多肽部分中)進行一個或者多個氨基酸的取代(優(yōu)選的是保守性的氨基酸取代)。一種 保守性的氨基酸取代不應(yīng)當(dāng)在本質(zhì)上改變所述的母本序列所具有的結(jié)構(gòu)性質(zhì)(例如，一個 發(fā)生取代的氨基酸不應(yīng)當(dāng)趨向于破壞存在于所述的母本序列中的螺旋，或者破壞能夠定義 所述的母本序列的其他類型的二級結(jié)構(gòu))。本領(lǐng)域認(rèn)可的多肽的二級結(jié)構(gòu)以及三級結(jié)構(gòu)的 例子在下述文獻中有所描述Proteins, Structure and Molecular Principles〈〈蛋白質(zhì)， 結(jié)構(gòu)以及分子的基本原理》(Creighton編輯，W. H. Freeman andCompany,紐約(1984年))； Introdution to Protein Structure《蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的介紹》(C. Branden 以及 J. Tooze 編輯，Garland出版社，紐約N. Y.(于1991年))；以及Thornton等人(于1991年)在Nature 《自然》354 :105中發(fā)表的文章。當(dāng)在本發(fā)明中進行使用時，所述的術(shù)語“多肽片段”指的是在其氨基末端和/或羧 基末端上具有缺失的多肽，但是所述多肽上的其余的氨基酸序列與天然存在的序列的相應(yīng) 位置是相同的，其中所述的天然存在的序列例如是從一個完全長度的cDNA序列中推導(dǎo)出 來的。片段通常具有至少5，6，8或者10個氨基酸的長度，優(yōu)選為至少14個氨基酸的長度， 更加優(yōu)選為至少20個氨基酸的長度，通常為至少50個氨基酸的長度，并且甚至更加優(yōu)選為 至少70個氨基酸的長度。當(dāng)在本發(fā)明中進行使用時，所述的術(shù)語“類似物”指的是由一個 具有至少25個氨基酸的片段所構(gòu)成的多肽，其與一種推導(dǎo)(deduced)的氨基酸序列的一部 分具有本質(zhì)上的同一性，并且其能夠在適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合條件下與白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6 受體復(fù)合體(IL-6Rc)和/或同時與白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc) 以及白細(xì)胞介素-6(IL-6)發(fā)生特異性的結(jié)合。通常情況下，多肽類似物包括一個涉及所述 的天然存在的序列的保守性氨基酸的取代(或者添加或者缺失)。類似物通常情況下具有 至少20個氨基酸的長度，優(yōu)選為至少50個氨基酸的長度或者更長，并且通常可以與完全長 度的天然存在的多肽具有相同的長度。肽的類似物被普遍應(yīng)用于制藥工業(yè)中，作為與所述的模板肽具有類似性質(zhì)的非肽 類藥物。這些類型的非肽類化合物被稱為“肽的模擬物”或者“模擬肽”。參見Fauchere (于 1986年)在J. Adv. Drug Res.《藥物的研究進展雜志》15 29中發(fā)表的文章，Veber以及 Freidinger (于1985年)在TINS第392頁中發(fā)表的文章；以及Evans等人(于1987年) 在J. Med. Chem.《藥物化學(xué)雜志》30 :1229中發(fā)表的文章。這類化合物通常要借助于計算 機化的分子模型的幫助來進行研究。肽的模擬物可以被用來制造一種等價的治療效應(yīng)或 者預(yù)防效應(yīng)，其中所述的模擬物在結(jié)構(gòu)上與治療有效性的肽的結(jié)構(gòu)相類似。一般而言，模擬 肽在結(jié)構(gòu)上類似于一種模板多肽(即，具有生物化學(xué)特性或者藥理學(xué)活性的多肽)，例如人 類抗體，但其具有的一個或者多個肽連接鍵任選的被選自由下述連接鍵所組成的組中的連 接鍵進行了取代-α 2ΝΗ-，-CH2S-, -CH2-CH2-, -CH = CH-(順式的以及反式的)，-COCH2-, CH(OH)CH2-,以及-CH2SO-,所述的取代是通過本領(lǐng)域中熟知的方法來完成的。利用同樣類 型的D-氨基酸(例如，利用D-賴氨酸取代L-賴氨酸)對共有序列中的一個或者多個氨基 酸進行系統(tǒng)性的取代，可以用以生成更加穩(wěn)定的肽。除此之外，可以通過本領(lǐng)域已知的方法 (參見Rizo以及Gierasch (于1"2年)在Ann. Rev. Biochem.《生物化學(xué)年鑒》6I 387中 發(fā)表的文章)生成一種限制性肽，所述的限制性肽包括一個共有序列或者一個本質(zhì)上相同 的共有序列變體；例如，通過加入內(nèi)部半胱氨酸殘基的方法，其中所述的半胱氨酸殘基能夠 形成存在于分子內(nèi)的二硫鍵，所述的二硫鍵能夠使所述的肽發(fā)生環(huán)化。當(dāng)在本發(fā)明中進行使用時，所述的術(shù)語“試劑”代表的是一種化學(xué)化合物，化學(xué)化 合物的混合物，生物大分子，或者是從生物材料中制備得到的提取物。當(dāng)在本發(fā)明中進行使用時，所述的術(shù)語“標(biāo)記”或者“標(biāo)記的”指的是一種可探測 性的標(biāo)記的導(dǎo)入，例如，通過向一種生物素化的半族多肽中導(dǎo)入一個放射性標(biāo)記的氨基酸 或者連接物的方式，其中能夠利用標(biāo)記的親和素(例如，含有熒光標(biāo)記或者酶活性的鏈霉 親和素，所述的鏈霉親和素可以通過光學(xué)方法或者量熱方法進行探測)對所述的放射性氨 基酸或者連接物進行探測。在某些情形中，所述的標(biāo)記或者標(biāo)記物同樣可以是治療性的。對多肽以及糖蛋白進行標(biāo)記的各種不同的方法是本領(lǐng)域已知的并且可以對其進行使用。用 于多肽的標(biāo)記物的例子包括，但不局限于，下述放射性同位素或者放射性核(例如，3氫，14 碳，15氮，35硫，90釔，“锝，m銦，125碘，131碘)，熒光標(biāo)記物(例如，異硫氰酸熒光素(FITC)， 若丹明，鑭系元素的磷化物)，酶標(biāo)記物(例如，辣根過氧化物酶，P-半乳糖苷酶，熒光素酶， 堿性磷酸酶)，化學(xué)發(fā)光試劑，生物素化的基團，由二級受體識別出的預(yù)先確定的多肽表位 (例如，亮氨酸拉鏈對序列，二級抗體的結(jié)合位點，金屬結(jié)合結(jié)構(gòu)域，表位標(biāo)簽)。在一些實 施方式中，標(biāo)記物是通過各種不同長度的間隔臂進行連接的，從而降低了潛在的位阻現(xiàn)象。 當(dāng)在本發(fā)明中進行使用時，所述的術(shù)語“藥物試劑或者藥物”指的是這樣的一種化學(xué)化合物 或者組合物，當(dāng)將其恰當(dāng)?shù)慕o患者施用時，所述的化學(xué)化合物或者組合物能夠誘發(fā)一種期 望的治療效應(yīng)。本發(fā)明中的其他的化學(xué)術(shù)語是依照本領(lǐng)域常規(guī)的用法進行使用的，所述的常規(guī)用 法是例如在 The McGraw-Hill Dictionary ofChemical Terms《McGraw-Hill 化學(xué)術(shù)語詞 典》(Parker S.編輯，McGraw-Hill，圣弗朗西斯科(1985年))中所例證的。本發(fā)明中所使用的所述術(shù)語“抗腫瘤試劑”指的是具有下述的功能性性質(zhì)的試劑 能夠抑制人類腫瘤的發(fā)展或者惡化，特別是一種惡性(癌性)的損傷，例如惡性上皮腫瘤， 肉瘤，淋巴瘤，或者白血病。對新陳代謝所產(chǎn)生的抑制作用通常是一種抗腫瘤試劑所具有的 性質(zhì)。本發(fā)明中所使用的所述術(shù)語“本質(zhì)上純的”指的是一個目標(biāo)種類是以占主要地位 的種類而存在的(即，以摩爾計，其比存在于所述的組合物之中的任何的各個其他種類都 更加充足)，并且優(yōu)選的當(dāng)一種本質(zhì)上純化的部分是一個組合物時，在所述的組合物中所述 的目標(biāo)種類包含了占全部存在的大分子種類的至少大約50% (以摩爾計)。一般而言，一種本質(zhì)上純的組合物將包括占存在于所述的組合物中的全部大分子 種類的至少大約80 %，更加優(yōu)選為至少大約85 %，90 %，95 %，以及99 %。最優(yōu)選的，所述的 目標(biāo)種類被純化為具有實質(zhì)上的均一性(利用常規(guī)的探測方法不能在所述的組合物中探 測出污染物種)，其中所述的組合物在實質(zhì)上是由單一的大分子種類組成的。自身免疫性疾病包括，例如，獲得性免疫缺乏綜合癥(AIDS，這是一種自身免疫性 成分的病毒疾病)，斑禿，強直性脊柱炎，抗磷脂綜合癥，自身免疫性阿狄森病，自身免疫性 溶血性貧血，自身免疫性肝炎，自身免疫性內(nèi)耳疾病(AIED)，自身免疫性淋巴細(xì)胞增殖綜合 癥(ALPS)，自身免疫性血小板減少性紫癜(ATP)，白塞氏病，心肌病，乳糜瀉，皰疹樣皮炎， 慢性疲勞免疫功能紊亂綜合癥(CFIDS)，慢性炎性脫髓鞘多發(fā)性神經(jīng)炎(CIPD)，瘢痕性類 天皰瘡，冷凝集素病，肢端硬皮綜合癥，克羅恩氏病，過敏性紫癜，青少年皮肌炎，盤狀紅斑 狼疫，原發(fā)性冷球蛋白血癥，纖維性肌痛-纖維性肌炎，格氏眼病，格林-巴利綜合癥，橋本 氏病，特發(fā)性肺部纖維化，特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)，免疫球蛋白A腎病，胰島素依賴 型糖尿病，青少年慢性關(guān)節(jié)炎(史迪爾氏病)，青少年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，美尼爾氏病，混合結(jié) 締組織病，多發(fā)性硬化癥，重癥肌無力，惡心貧血，結(jié)節(jié)性多動脈炎，多軟骨炎，多腺體綜合 癥，風(fēng)濕性多肌痛，多發(fā)性肌炎以及皮肌炎，原發(fā)性無丙種球蛋白血癥，原發(fā)性膽汁性肝硬 化，銀屑病，銀屑病關(guān)節(jié)炎，雷諾氏病，賴特綜合癥，風(fēng)濕熱，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，結(jié)節(jié)病，硬皮 病(進行性系統(tǒng)性硬化癥(PPQ )，也被稱為系統(tǒng)性硬化癥(SQ )，干燥綜合癥，僵人綜合癥， 系統(tǒng)性紅斑狼瘡，大動脈炎，顳動脈炎/巨細(xì)胞動脈炎，潰瘍性結(jié)腸炎，葡萄膜炎，白癜風(fēng)以及韋格納肉芽腫。炎性障礙包括，例如，慢性炎性障礙以及急性炎性障礙。炎性障礙的例子包括阿爾 茨海默氏癥，哮喘，慢性阻塞性肺部疾病，特異性過敏癥，過敏癥，動脈硬化癥，支氣管哮喘， 濕疹，血管球性腎炎，移植物抗宿主疾病，溶血性貧血，骨關(guān)節(jié)炎，膿血癥，腦卒中，組織以及 器官移植，脈管炎，糖尿病性視網(wǎng)膜病變以及呼吸機引發(fā)的肺部損傷。癌癥包括，例如，多發(fā)性骨髓瘤疾病(MM)，腎細(xì)胞癌(RCC)，漿細(xì)胞白血病，淋巴 瘤，B-淋巴增生異常(BLPD)，以及前列腺癌。Km^mm^m-e/ ^mm^m-e 等體復(fù)合體(hun-6Rc)杭體本發(fā)明中所述的單克隆抗體(例如，完全人類單克隆抗體)具有抑制由白細(xì)胞介 素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6RC)介導(dǎo)的細(xì)胞信號的能力。可以使用例如在實施 例1以及2中描述細(xì)胞檢測來確定所述的抑制作用。本發(fā)明中所述的范例性的抗體包括，例如，所述的39B9輕鏈可變區(qū)域1 (VLl)抗 體，所述的39B9輕鏈可變區(qū)域5 (VU)抗體，所述的12A抗體以及所述的5C抗體。這些抗 體表現(xiàn)出對人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)的特異性和/或同時 對白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)與白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)的 特異性并且它們已經(jīng)表現(xiàn)出在體外對白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc) 所具有的功能活性(即，與糖蛋白130進行結(jié)合從而誘導(dǎo)所述的信號級聯(lián))的抑制。正如在下面所列出的所述氨基酸序列以及相應(yīng)的核酸序列中所表示出的，在本發(fā) 明中所述的每一個人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(huIL-6Rc)單克隆抗體 包括一個重鏈可變區(qū)域(VH)以及一個輕鏈可變區(qū)域(VL)。所述的39B9輕鏈可變區(qū)域1 (VLl)抗體與所述的39B9輕鏈可變區(qū)域5 (VL5)抗體 享有一個共同的重鏈可變區(qū)域(序列識別號2)，所述的重鏈可變區(qū)域是由序列識別號1 中所示的核酸序列進行編碼的。> 39B9輕鏈可變區(qū)域1 (VLl)-重鏈可變(VH)的核酸序列(序列識別號1)5 ‘ CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTG CAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGA TGGGAGGGATCATCCCTCTCTTTGATACAACAAAGTACGCACAGCAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGAC GAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTATTTTACTGTGCGAGAGA TCGGGATATTTTGACTGATTATTATCCCATGGGCGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCT CA 3'> 39B9輕鏈可變區(qū)域1 (VLl)-重鏈可變(VH)的氨基酸序列(序列識別號2)QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPLFDTTKYAQQFQGRVT ITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVFYCARDRDILTDYYPMGGMDVffGQGTTVTVSS所述的39B9輕鏈可變區(qū)域1 (VLl)抗體包括了一個輕鏈可變區(qū)域(序列識別號 4)，所述的輕鏈可變區(qū)域是由序列識別號3中所示的核酸序列進行編碼的。> 39B9輕鏈可變區(qū)域1 (VLl)-輕鏈可變(VL)的核酸序列(序列識別號3)5 ‘ GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAC TTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCAGTGTTTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTG ATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTC
22TCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTCTAATAGTTACCCGCTCACTT TCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGT 3‘> 39B9輕鏈可變區(qū)域1 (VLl)-輕鏈可變(VL)的氨基酸序列(序列識別號4)AIQLTQSPSSLSASV⑶RVTITCRASQGISSVLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNSYPLTFGGGTKVEIKR所述的39B9輕鏈可變區(qū)域5 (VL5)抗體包括了一個輕鏈可變區(qū)域(序列識別號 6)，所述的輕鏈可變區(qū)域是由序列識別號5中所示的核酸序列進行編碼的。> 39B9輕鏈可變區(qū)域5 (VL5)-輕鏈可變(VL)的核酸序列(序列識別號5)5 ‘ GACATCCTGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAC TTGTCGGGCGAGTCAGGATATTAGCAGCTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTG ATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTC TCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTCTAATAGTTACCCGCTCACTT TCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGA 3‘> 39B9輕鏈可變區(qū)域5 (VL5)-輕鏈可變(VL)的氨基酸序列(序列識別號6)DILMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNSYPLTFGGGTKVEIKR所述的12A抗體包括一個重鏈可變區(qū)域(序列識別號8)，所述的重鏈可變區(qū)域是 由序列識別號-J中所示的核酸序列進行編碼的。> 12A重鏈可變(VH)的核酸序列(序列識別號7)5' CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTT GGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAACTATGAC ATGTACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATTAGATGATGGAAATAATAATTA CTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAAAAAGGTGTATCTGCAAATGAATA GCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGTGAGAGCGTCCCCTAACTGGGGTCTTCTTGACTTCTGGGGC CAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT 3‘> 12A重鏈可變(VH)的氨基酸序列(序列識別號8)QVQLVESWGGVVQPGRSLRLSCA ASGFTFSNYDMYWVRQAPGKGLEWVAVILDDGNNNYYADSVKGRFTISRDNSKKKVYLQMNSLRAEDTAVYYCVRAS PNWGLLDFffGQGTLVTVSS所述的12A抗體包括一個輕鏈可變區(qū)域(序列識別號10)，所述的重鏈可變區(qū)域 是由序列識別號9中所示的核酸序列進行編碼的。> 12A輕鏈可變(VL)的核酸序列(序列識別號9)5' GAAATTGTGTTGACACAGTCTC CATCCTCACTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTA GCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCC ATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAA CTTATTACTGTCAACAGTTTAATAGTTACCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGT 3'> 12A輕鏈可變(VL)的氨基酸序列(序列識別號10)EIVLTQSPSSLSASVGDRVTIT CRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPITFG QGTRLEIKR所述的5C抗體包括一個重鏈可變區(qū)域(序列識別號12)，所述的重鏈可變區(qū)域是 由序列識別號11中所示的核酸序列進行編碼的。torn] > 5c重鏈可變(vh)的核酸序列(序列識別號iDcaggtgcagctggtgcagtctgggg GAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCATCTTCAGTAGCTATGACATG TACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATTATATGATGGAAATAATAAATACTA CGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCC TGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGTGAGAGCGTCCCCTAACTGGGGTCTTTTTGACTTCTGGGGCCAG GGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT 3‘> 5C重鏈可變(VH)的氨基酸序列(序列識別號U)QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCA ASGFIFSSYDMYWVRQAPGKGLEWVAVILYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCVRAS PNWGLFDFffGQGTLVTVSS所述的5C抗體包括一個輕鏈可變區(qū)域(序列識別號14)，所述的重鏈可變區(qū)域是 由序列識別號13中所示的核酸序列進行編碼的。>5C 輕鏈可變(VL)的核酸序列(序列識別號1；3)5' GACATCCAGATGACCCAGTCTC CATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCAGTGATTTA GCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATGTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCC ATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAA CTTATTACTGTCAACAGTTTAATAGTTACCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGT 3'> 5C輕鏈可變(VL)的氨基酸序列(序列識別號14)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGISSDLAWYQQKPGKAPKLLMYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPITFGQ GTRLEIKR本發(fā)明中所述的人類白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(huIL-6Rc)抗體 包括，例如，在下述的表格1中所示的重鏈互補決定區(qū)域(VH CDR)，在表格2中所示的輕鏈 互補決定區(qū)域(VL⑶R)，以及它們的組合。表格1.來自于抗體克隆的重鏈互補決定區(qū)域(VH CDR)，其中所述的抗體克隆能 夠與白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)發(fā)生結(jié)合并且壓制其生物活性
克隆 名稱重鏈互補決定區(qū)域1重鏈互補決定區(qū)域2重鏈互補決定區(qū)域339B9SYAIS (序列識別號15)GIIPLFDTTKYAQQFQG (序列識別號16)CAR DRDILTD YYPMGGMDV (序列識別號17)12ANYDMY (序列識別號18)VILDDGNNNYYADSVKG (序列識別號19)CVRASPNWGLLDF (序列識別號20)5CSYDMY (序列識別號21)VILYDGNNKYYADSVKG (序列識別號22)CVRASPNWGLFDF (序列識別號23) 表格2.來自于抗體克隆的輕鏈互補決定區(qū)域(VL CDR)，其中所述的抗體克隆能 夠與白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)發(fā)生結(jié)合并且對其進行壓制
權(quán)利要求
1.一種分離的完全人類抗體，所述的抗體能夠與白細(xì)胞介素-6 (IL-6)/白細(xì)胞介素-6 受體(IL-6R)復(fù)合體(IL-6Rc)發(fā)生結(jié)合并且阻止白細(xì)胞介素_6 (IL_6) /白細(xì)胞介素_6受 體(IL-6R)復(fù)合體(IL-6RC)與糖蛋白130之間的結(jié)合，這樣一來在存在所述抗體的條件下 由糖蛋白130介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)的信號級聯(lián)不能夠被活化。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的抗體，其中所述的抗體能夠交叉阻滯選自由下述所組成的 組中的抗體(i) 一種抗體，包括(a)存在于所述的輕鏈互補決定區(qū)域3(CDR3)中的保守氨基酸序列QQSXSYPLT，其中X 是N或者Q ；(b)存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域2(CDR2)中的保守氨基酸序列 GIIPX1FX2TTKYAQX3FQG，其中Xl是L或者A，X2是D或者E，并且X3是Q或者K ；(c)存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域3(CDR3)中的保守氨基酸序列 DRDILTDYYPXGGMDV，其中 X 是 M 或者 L ；以及(d)存在于所述的骨架區(qū)域3(FRW3)中的保守氨基酸序列TAVXYCAR，其中X是F或者Y ；( ) 一種抗體，包括可變的重鏈區(qū)域，其中包括序列識別號2中所示的氨基酸序列， 以及可變的輕鏈區(qū)域，其中包括序列識別號4中所示的氨基酸序列；(i i i) 一種抗體，包括存在于所述的輕鏈互補決定區(qū)域3 (CDR3)中的氨基 酸序列QQSNSYPLT，存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域2 (CDR2)中的氨基酸序列 GIIPLFDTTKYAQKFQG，存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域3 (⑶R3)中的氨基酸序列 DRDILTDYYPMGGMDV，以及存在于所述的骨架區(qū)域3 (FRW3)中的氨基酸序列TAVYYCAR ；(iv) 一種抗體，包括存在于所述的輕鏈互補決定區(qū)域3(CDR3)中的氨基 酸序列QQSNSYPLT，存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域2 (CDR2)中的氨基酸序列 GIIPLFDTTKYAQKFQG,存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域3 (⑶R3)中的氨基酸序列 DRDILTDYYPLGGMDV，以及存在于所述的骨架區(qū)域3 (FRW3)中的氨基酸序列TAVYYCAR ；(ν) 一種抗體，包括存在于所述的輕鏈互補決定區(qū)域3(CDR3)中的氨基 酸序列QQSNSYPLT，存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域2(CDR2)中的氨基酸序列 GIIPAFETTKYAQKFQG，存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域3 (⑶R3)中的氨基酸序列 DRDILTDYYPLGGMDV,以及存在于所述的骨架區(qū)域3 (FRW3)中的氨基酸序列TAVYYCAR ；(vi) 一種抗體，包括存在于所述的輕鏈互補決定區(qū)域3(CDR3)中的氨基 酸序列QQSQSYPLT，存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域2(CDR2)中的氨基酸序列 GIIPAFETTKYAQKFQG,存在于所述的重鏈互補決定區(qū)域3 (⑶R3)中的氨基酸序列 DRDILTDYYPLGGMDV,以及存在于所述的骨架區(qū)域3 (FRW3)中的氨基酸序列TAVYYCAR。
3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的抗體，其中所述的抗體對白細(xì)胞介素-6(IL-6)/白細(xì)胞介 素"6受體(IL-6R)復(fù)合體(IL-6Rc)具有至少為lxlO-8的親和性。
4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的抗體，其中所述的抗體對白細(xì)胞介素-6(IL-6)/白細(xì)胞介 素"6受體(IL-6R)復(fù)合體(IL-6Rc)具有至少為lxlO-9的親和性。
5.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的抗體，其中所述的抗體能夠與白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)的結(jié)構(gòu)域3中的表位進行結(jié)合，其中所述的表位包括至少所述的氨基酸序列AERSKT。
6.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的抗體，其中所述的抗體不能夠?qū)Πl(fā)生在白細(xì)胞介 素-6(IL-6)與白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)之間的相互作用進行調(diào)節(jié)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的抗體，其中所述的抗體同樣能夠與所述的白細(xì)胞介素-6受 體(IL-6R)進行結(jié)合。
8.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的抗體，其中所述的抗體包括重鏈可變的互補決定區(qū)域1區(qū) 域，其中包括序列識別號15中所示的氨基酸序列，重鏈可變的互補決定區(qū)域2區(qū)域，其中 包括序列識別號16中所示的氨基酸序列，重鏈可變的互補決定區(qū)域3區(qū)域，其中包括序列 識別號17中所示的氨基酸序列，輕鏈可變的互補決定區(qū)域1區(qū)域，其中包括序列識別號 M中所示的氨基酸序列，輕鏈可變的互補決定區(qū)域2區(qū)域，其中包括序列識別號25中所示 的氨基酸序列，以及輕鏈可變的互補決定區(qū)域3區(qū)域，其中包括序列識別號J6中所示的氨 基酸序列。
9.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的分離的抗體，其中所述的抗體包括(a)重鏈可變的互補決定區(qū)域1區(qū)域，其中包括序列識別號15、18或者21中所示的氨 基酸序列；(b)重鏈可變的互補決定區(qū)域2區(qū)域，其中包括序列識別號16、19、22、33、34或者35 中所示的氨基酸序列；(c)重鏈可變的互補決定區(qū)域3區(qū)域，其中包括序列識別號17、20、23、36或者37中所 示的氨基酸序列；(d)輕鏈可變的互補決定區(qū)域1區(qū)域，其中包括序列識別號對、27、觀或者30中所示 的氨基酸序列；(e)輕鏈可變的互補決定區(qū)域2區(qū)域，其中包括序列識別號25中所示的氨基酸序列；以及(f)輕鏈可變的互補決定區(qū)域3區(qū)域，其中包括序列識別號J6、29、31或者32中所示 的氨基酸序列。
10.根據(jù)權(quán)利要求9中所述的抗體，其中所述的抗體是一種免疫球蛋白G同型體。
11.根據(jù)權(quán)利要求9中所述的抗體，其中所述的抗體是一種免疫球蛋白Gl同型體。
12.根據(jù)權(quán)利要求9中所述的抗體，其中所述的抗體包括重鏈可變序列，其中包括一種 選自序列識別號2、8、或者12中所示的氨基酸序列，以及輕鏈可變序列，其中包括一種選 自序列識別號4、6、10或者14中所示的氨基酸序列。
13.一種分離的完全人類單克隆抗白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體 (IL-6Rc)抗體或其片段，其中所述的抗體包括(a)重鏈可變的互補決定區(qū)域1區(qū)域，其中包括序列識別號15、18或者21中所示的氨 基酸序列；(b)重鏈可變的互補決定區(qū)域2區(qū)域，其中包括序列識別號16、19、22、33、34或者35 中所示的氨基酸序列；(c)重鏈可變的互補決定區(qū)域3區(qū)域，其中包括序列識別號17、20、23、36或者37中所 示的氨基酸序列；(d)輕鏈可變的互補決定區(qū)域1區(qū)域，其中包括序列識別號對、27、觀或者30中所示的氨基酸序列；(e)輕鏈可變的互補決定區(qū)域2區(qū)域，其中包括序列識別號25中所示的氨基酸序列；以及(f)輕鏈可變的互補決定區(qū)域3區(qū)域，其中包括序列識別號J6、29、31或者32中所示 的氨基酸序列，其中所述的抗體能夠與白細(xì)胞介素-6(IL-6)/白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)復(fù)合體發(fā)生結(jié)合。
14.根據(jù)權(quán)利要求13中所述的抗體，其中所述的抗體同樣能夠與所述的白細(xì)胞介素-6 受體(IL-6R)發(fā)生結(jié)合。
15.根據(jù)權(quán)利要求13中所述的抗體，其中所述的抗體是一種免疫球蛋白G同型體。
16.根據(jù)權(quán)利要求13中所述的抗體，其中所述的抗體是一種免疫球蛋白Gl同型體。
17.根據(jù)權(quán)利要求13中所述的抗體，其中所述的抗體包括重鏈可變序列，其中包括一 種選自序列識別號2、8、或者12中所示的氨基酸序列，以及輕鏈可變序列，其中包括一種 選自序列識別號4、6、10或者14中所示的氨基酸序列。一種選自序列識別號4、6、10或者14中所示的氨基酸序列。
18.—種藥物組合物，其中包括前述任意一項權(quán)利要求中所述的抗體以及載體。
19.一種用以緩解宿主體內(nèi)的一種臨床跡象的癥狀的方法，所述的臨床跡象與風(fēng)濕性 關(guān)節(jié)炎、克羅恩氏病、銀屑病、多發(fā)性硬化癥或者哮喘有關(guān)，所述的方法包括向有此需要的 宿主施用一種一定劑量的白細(xì)胞介素-6/白細(xì)胞介素-6受體復(fù)合體(IL-6Rc)的拮抗劑， 所述的劑量足以能夠?qū)λ龅呐c風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、克羅恩氏病、銀屑病、多發(fā)性硬化癥或者哮 喘有關(guān)的臨床跡象的癥狀進行緩解。
20.根據(jù)權(quán)利要求19中所述的方法，其中所述的宿主是人類。
21.根據(jù)權(quán)利要求19中所述的方法，其中所述的拮抗劑是一種單克隆抗體或者是其片段。
22.根據(jù)權(quán)利要求21中所述的方法，其中所述的單克隆抗體是一種依據(jù)權(quán)利要求1至 17中任意一項中所述的抗體或者是其片段。
23.一種用以緩解癌癥、自身免疫性疾病或者炎性障礙的癥狀的方法，所述的方法包括 向有此需要的宿主施用一定劑量的根據(jù)權(quán)利要求1至16中任意一項所述的抗體，所述的劑 量足以能夠?qū)λ鏊拗黧w內(nèi)的癌癥、自身免疫性疾病或者炎性障礙的癥狀進行緩解。
24.根據(jù)權(quán)利要求23中所述的方法，其中所述的宿主是人類。
全文摘要
本發(fā)明提供了完全人類單克隆抗體，所述的單克隆抗體能夠識別所述的白細(xì)胞介素-6(IL-6)/白細(xì)胞介素-6受體(IL-6R)復(fù)合體。所述的發(fā)明進一步的提供了使用這樣的單克隆抗體作為一種治療劑、診斷劑、以及預(yù)防劑的方法。
文檔編號C12P21/08GK102089326SQ200980127494
公開日2011年6月8日 申請日期2009年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月13日
發(fā)明者F·圭爾霍特, G·艾爾森, M·科斯庫-維爾博斯, O·萊格, W·弗林 申請人:諾維莫尼公司