專利名稱：一種可產生β-甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種地衣芽孢桿菌。
背景技術：
β -甘露聚糖酶是水解1，4_β -D-吡喃甘露糖主鏈的內切水解酶，屬于半纖維素 酶類，作用底物主要是半乳甘露聚糖、葡萄甘露聚糖、半乳葡萄甘露聚糖以及甘露聚糖。在 食品、醫(yī)藥、造紙、紡織印染、石油開采及生物研究技術等多方面得到廣泛應用，是一種非常 重要的工具酶類。目前的工業(yè)生產所使用的菌株多為真菌，且酶活僅為2300U/mL。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)在利用真菌產生β “甘露聚糖酶存在酶活低的問題，而提 供一種可產生β-甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌。本發(fā)明可產生β-甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis) HDGLJT-01經鑒定屬于地衣芽孢桿菌(Bacillus)新種，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中 心，保藏地址是武漢市武漢大學，保藏日期為2009年11月29日，保藏編號為CGTCC NO.M209288;可產生β -甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌為革蘭氏陽性兼性厭氧桿菌，寬為 0. 5 0. 8 μ m，長為1. 5 2. 0 μ m，無鞭毛、中生橢圓形芽孢，耐鹽10 %，生長溫度范圍為 30°C 55°C，菌體單個排列或呈鏈狀；可產生甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌在固體培養(yǎng) 基上生長菌落為乳白色，圓形，邊緣不整齊，表面粗糙不透明，菌落直徑為0. 5 1. 5mm。本發(fā)明可產生β -甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌接觸酶試驗為陽性、淀粉水解試驗 為陽性、明膠水解試驗為陽性、伏普試驗為陽性、D-葡萄糖產酸試驗為陽性、硝酸鹽還原試 驗為陽性，L-阿拉伯糖產酸、D-木糖產酸、D-甘露醇產酸、檸檬酸鹽利用、丙酸鹽利用、葡萄 糖產氣試驗為陰性、酪氨酸水解試驗為陰性、吲哚試驗為陰性。本發(fā)明可產生β -甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌的16S rDNA序列長度 為1605bp ；BLAST比對分析可知，與其最相近的種屬是地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis (DQ020262)，相似性為 99. 8% 0本發(fā)明可產生β-甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌，所產的β-甘露聚糖酶為酸性甘 露聚糖酶，分子量約為38kD，適合反應溫度為50°C 60°C，最適溫度為55°C，保溫30min 后，酶半失活的溫度T1/2為70°C;適合反應的pH值為4. 5 6. 0，pH值為酸性時穩(wěn)定性好， 中性和偏堿性時穩(wěn)定性差，該酶表現(xiàn)出較好的耐高溫活性，最高酶活性達5168U/mL。Bacillus licheniformis屬于地衣芽孢桿菌(Bacillus)，保藏于中國典型培養(yǎng)物 保藏中心，保藏地址是武漢市武漢大學，保藏日期為2009年11月29日，保藏編號為CGTCC No. M209288。
具體實施例方式具體實施方式
一本實施方式可產生β -甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)HDGLJT-01經鑒定屬于地衣芽孢桿菌(Bacillus)新種，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址是武漢市武漢大學，保藏日期為2009年11月29日，保藏編號為 CGTCC NO.M209288 ；可產生β -甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌為革蘭氏陽性兼性厭氧桿菌， 寬為0. 5 0. 8 μ m，長為1. 5 2. 0 μ m，無鞭毛、中生橢圓形芽孢，耐鹽10%，生長溫度范圍 為30°C 55°C，菌體單個排列或呈鏈狀；可產生β -甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌在固體培 養(yǎng)基上生長菌落為乳白色，圓形，邊緣不整齊，表面粗糙不透明，菌落直徑為0. 5 1. 5mm。本實施方式可產生β -甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌的16S rDNA序 列長度為1605bp ；BLAST比對分析可知，與其最相近的種屬是地衣芽孢桿菌 Bacilluslicheniformis (DQ020262)，相似性為 99. 8% 0參照《伯杰細菌鑒定手冊》第八版和《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》對可產生β _甘 露聚糖酶的地衣芽孢桿菌進行生理生化鑒定可產生β“甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌接觸 酶試驗為陽性、淀粉水解試驗為陽性、明膠水解試驗為陽性、伏普試驗為陽性、D-葡萄糖產 酸試驗為陽性、硝酸鹽還原試驗為陽性，L-阿拉伯糖產酸、D-木糖產酸、D-甘露醇產酸、檸 檬酸鹽利用、丙酸鹽利用、葡萄糖產氣試驗為陰性、酪氨酸水解試驗為陰性、吲哚試驗為陰 性。本實施方式可產生β-甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌，所產的β-甘露聚糖酶為 酸性甘露聚糖酶，分子量約為38kD，適合反應溫度為50°C 60°C，最適溫度為55°C，保溫 30min后，酶半失活的溫度T1/2為70°C ；適合反應的pH值為4. 5 6. 0，pH值為酸性時穩(wěn)定 性好，中性和偏堿性時穩(wěn)定性差，該酶表現(xiàn)出較好的耐高溫活性，最高酶活性達5168U/mL。
具體實施方式
二 本實施方式可產生β -甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)HDGLJT-01從主生物階段慪麻液中篩選得到的。篩選按以下步驟進行取 主生物階段慪麻液2mL置于IOOmL富集培養(yǎng)基培養(yǎng)中，在37°C、160r/min的環(huán)境中富集培 養(yǎng)2天；然后接種于魔芋粉分離培養(yǎng)基上，在37°C條件下培養(yǎng)2天，獲得單菌落，即為地衣 芽孢桿菌。本實施方式中富集培養(yǎng)基由5g魔芋粉、Ig K2HPO4 ·3Η20和IOOOmL蒸餾水組成，并 調節(jié)PH值7. 2，在121°C下滅菌15min。本實施方式中魔芋粉分離培養(yǎng)基由5g魔芋粉、IOg蛋白胨、2g酵母膏、0.2g MgCl2 MH2OUg K2HPO4 ·3Η20、2(^ 瓊脂粉禾口 IOOOmL 蒸餾水組成，并調節(jié) pH 值 7. 2，在 121°C 下滅菌15min。本實施方式中所得地衣芽孢桿菌，所產的β -甘露聚糖酶經測試為酸性甘露聚糖 酶，分子量約為38kD，適合反應溫度為50°C 60°C，最適溫度為55°C，保溫30min后，酶半 失活的溫度T1/2為70°C ；適合反應的pH值為4. 5 6. 0，pH值為酸性時穩(wěn)定性好，中性和 偏堿性時穩(wěn)定性差，該酶表現(xiàn)出較好的耐高溫活性，最高酶活性達5168U/mL。序列表<110>黑龍江大學<120> 一種可產生β -甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌<160>1
<210>1<211>1605<212>DNA
〈213〉可產生β-甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)HDGLJT-O1〈220〉〈223〉可產生β-甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis) HDGLJT-01 16SrDNA 基因序列〈400〉1gctcccggccgccatggcgg ccgcgggaat tcgattagag tttgatcctg gctcaggacg 60aacgctggcg gcgtgcctaa tacatgcaag tcgagcggac agatgggagc ttgctccctg 120atgttagcgg tggacgggtg agtaacacgt gggtaacctg cctgtaagac tgggataact 180ccgggaaaccggggctaata ccggatggtt gtttgaaccg catggttcaa acataaaagg 240tggcttcggctaccacttac agatggaccc gcggcgcatt agctagttgg tgaggtaacg 300gctcaccaag gcaacgatgc gtagccgacc tgagagggtg atcggccaca ctgggactga 360gacacggcccagactcctac gggaggcagc agtagggaat cttccgcaat ggacgaaagt 420ctgacggagcaacgccgcgt gagtgatgaa ggttttcgga tcgtaaagct ctgttgttag 480ggaagaacaa gtaccgttcg aatagggcgg taccttgacg gtacctaacc agaaagccac 540ggctaactacgtgccagcag ccgcggtaat acgtaggtgg caagcgttgt ccggaattat 600tgggcgtaaa gggctcgcag gcggtttctt aagtctgatg tgaaagcccc cggctcaacc 660ggggagggtcattggaaact ggggaacttg agtgcagaag aggagagtgg aattccacgt 720gtagcggtga aatgcgtaga gatgtggagg aacaccagtg gcgaaggcga ctctctggtc 780tgtaactgacgctgaggagc gaaagcgtgg ggagcgaaca ggattagata ccctggtagt 841ccacgccgta aacgatgagt gctaagtgtt agggggtttc cgccccttag tgctgcagct 900aacgcattaagcactccgcc tggggagtac ggtcgcaaga ctgaaactca aaggaattga 6902cgggggcccgcacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg aagcaacgcg aagaacctta 1020ccaggtcttgacatcctctg acaatcctag agataggacg tccccttcgg gggcagagtg 1080acaggtggtgcatggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac 1140gagcgcaacccttgatctta gttgccagca ttcagttggg cactctaagg tgactgccgg 1200tgacaaaccggaggaaggtg gggatgacgt caaatcatca tgccccttat gacctgggct 1260acacacgtgctacaatggac agaacaaagg gcagcgaaac cgcgaggtta agccaatccc 1320acaaatctgttctcagttcg gatcgcagtc tgcaactcga ctgcgtgaag ctggaatcgc 1380tagtaatcgcggatcagcat gccgcggtga atacgttccc gggccttgta cacaccgccc 1440gtcacaccacgagagtttgt aacacccgaa gtcggtgagg taacctttta ggagccagcc 1500gccgaaggtgggacagatga ttggggtgaa gtcgtaacaa ggtagccgta atcactagtg 1560aattcgcggccgcctgcagg tcgaccatat gggagagctc ccaac160權利要求
1. 一種可產生β-甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌，其特征在于可產生β-甘露聚糖 酶的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)HDGLJT-01經鑒定屬于地衣芽孢桿菌 (Bacillus)新種，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址是武漢市武漢大學，保藏日期 為2009年11月四日，保藏編號為CGTCC No. M209288 ；可產生β -甘露聚糖酶的地衣芽孢 桿菌為革蘭氏陽性兼性厭氧桿菌，寬為0. 5 0. 8 μ m，長為1. 5 2. 0 μ m，無鞭毛、中生橢 圓形芽孢，耐鹽10%，生長溫度范圍為30°C 55°C，菌體單個排列或呈鏈狀；可產生β -甘 露聚糖酶的地衣芽孢桿菌在固體培養(yǎng)基上生長菌落為乳白色，圓形，邊緣不整齊，表面粗糙 不透明，菌落直徑為0. 5 1. 5mm。
全文摘要
一種可產生β-甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌，它涉及一種地衣芽孢桿菌。解決了現(xiàn)在利用真菌產生β-甘露聚糖酶存在酶活低的問題?？僧a生β-甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌屬于地衣芽孢桿菌新種，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址是武漢市武漢大學，保藏日期為2009年11月29日，保藏編號為CGTCC No.M209288；可產生β-甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌為革蘭氏陽性兼性厭氧桿菌，寬為0.5～0.8μm，長為1.5～2.0μm，無鞭毛、中生橢圓形芽孢。本發(fā)明中地衣芽孢桿菌所產的β-甘露聚糖酶經測試為酸性甘露聚糖酶，分子量約為38kD，該酶表現(xiàn)出較好的耐高溫活性，最高酶活性達5168U/mL。
文檔編號C12N1/20GK102071156SQ20091007347
公開日2011年5月25日 申請日期2009年12月22日 優(yōu)先權日2009年12月22日
發(fā)明者凌宏志, 宋剛, 平文祥, 葛菁萍, 趙丹, 高冬妮 申請人:黑龍江大學