專利名稱：：一種生產甘露聚糖酶的方法及其專用固定化生物膜的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種生產甘露聚糖酶的方法及其專用固定化生物膜。
背景技術：
：甘露聚糖酶作為一種半纖維素酶，是水解甘露聚糖最主要也是最關鍵的酶，可廣泛應用于食品、造紙、飼料、紡織、印染等行業(yè)，具有巨大的應用前景和生產價值。目前甘露聚糖酶的生產方式主要是游離細胞的液體發(fā)酵和固態(tài)發(fā)酵，國內有關甘露聚糖酶產量的報道是:32'C下液體培養(yǎng)芽孢桿菌M-21，其產酶水平為1487U/mL(周芳等，食品與發(fā)酵工業(yè)，2007Vol.33No.2);在適宜條件下發(fā)酵罐培養(yǎng)歐文氏桿菌變異菌株CXJZll-Ol，產酶水平為3050U/mL(成莉風等，中國麻業(yè)科學，2007Vol.29No.5);固態(tài)發(fā)酵黑曲霉LW-1，產酶水平為24879U/g(李劍芳等，食品與生物技術學報，2007Vol.26No.4)。嗜熱枯草芽孢桿菌WY45和WY34是甘露聚糖酶的高產菌株，在5(TC條件下液體發(fā)酵培養(yǎng)，其產甘露聚糖酶的能力分別為2800U/mL(柴萍萍等，中國農業(yè)大學學報，2005Vol.10No.3)和1105U/mL(Jiangetal.，CarbohydratePolymers,2006Vol.66No.1)。上述發(fā)酵方法的缺點是產酶水平低、提取方式復雜及生產成本高。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是提供一種固定化生物膜。本發(fā)明所提供的固定化生物膜是將產甘露聚糖酶的枯草芽孢桿菌固定在微孔濾膜上得到的。所述產甘露聚糖酶的枯草芽孢桿菌可為枯草芽孢桿菌WY34或WY45。所述微孔濾膜可為聚醚砜膜、尼龍6膜、醋酸纖維素膜或聚丙烯膜。本發(fā)明中所使用的微孔濾膜的孔徑可為0.2—0.4um，厚度為100-160um。所述微孔濾膜在固定所述產甘露聚糖酶的枯草芽孢桿菌前，進行如下活化將所述微孔濾膜在8_12%(體積百分含量)的甲醛溶液中，在35—50X:浸泡3—5h。本發(fā)明的另一個目的是提供一種生產甘露聚糖酶的方法。本發(fā)明所提供的生產甘露聚糖酶的方法是培養(yǎng)固定在所述固定化生物膜上的產甘露聚糖酶的枯草芽孢桿菌，得到甘露聚糖酶。所述微孔濾膜的單面表面積與所述培養(yǎng)的培養(yǎng)基的體積的比例為lcm2:lml-lcm2:8mL，具體為lcm2:4mL。所述培養(yǎng)的培養(yǎng)基可按照如下方法配制魔芋粉10—30g、酵母提取物3—7g、胰蛋白胨6—12g、KH2P043—7g、MgS04.7H200.4—0.8g，加水到1000ml，自然pH值。所述培養(yǎng)具體可為在40—5(TC進行旋轉半徑為12mm、轉速為150—220rpm的振蕩培養(yǎng)。本發(fā)明中的固定在濾膜上的固定化細胞可進行批次培養(yǎng)，單批次培養(yǎng)后的固定化生物膜經無菌水清洗后，可進行4一8次連續(xù)使用，且產酶水平保持在游離細胞產酶水平之上，批次培養(yǎng)固定化枯草芽孢桿菌WY34細胞平均產酶水平為1800—3500U/mL，是游離細胞產酶水平的1.1一2.0倍；批次培養(yǎng)固定化枯草芽孢桿菌WY45細胞平均產酶水平為3025—3990U/mL，是游離細胞產酶水平的1.l一l.4倍。本發(fā)明利用膜固定化細胞生產甘露聚糖酶的方法具有操作簡單、條件溫和、固定效果良好的優(yōu)點，且產物易分離，并能顯著提高細胞的產酶水平，降低生產成本。圖1為聚醚砜膜固定化細胞培養(yǎng)18h后7000倍下的電鏡圖圖2為聚醚砜膜固定化細胞與游離細胞的產酶情況圖3為尼龍6膜固定化細胞培養(yǎng)18h后7000倍下的電鏡圖圖4為尼龍6膜固定化細胞與游離細胞的產酶情況圖5為醋酸纖維素膜固定化細胞與游離細胞的產酶情況圖6為聚丙烯膜固定化細胞與游離細胞的產酶情況具體實施例方式實施例1、聚醚砜膜固定化枯草芽孢桿菌產甘露聚糖酶下述步驟中所用的發(fā)酵培養(yǎng)基按照如下方法配制魔芋粉(武漢市清江魔芋制品有限公司，型號1A級魔芋精粉)30g、酵母提取物(英國0xoid公司，貨號OXOIDCM0019B)7g、月夷蛋白胨(英國0xoid公司，貨號OXOIDLP0042B)12g、KH2P047g、MgS04.7H200.8g，加水到1000mL，自然pH。發(fā)酵培養(yǎng)溫度為50°C、轉速為220rpm(旋轉半徑12mm)。1、膜的活化將孔徑為0.4um，厚度為100um的聚醚砜膜(北京北化黎明膜分離技術有限4公司，PES)在45'C條件下浸泡于濃度為12%(體積百分含量)的甲醛溶液中，浸泡時間為3h。2、固定化細胞以枯草芽孢桿菌WY34(ZhengqiangJiang，YunWei,DaoyiLi,PingpingChai，LiteLi,IsaoKusakabe.High-levelproduction,purificationandcharacterizationofathermostableb-mannanasefromthenewlyisolatedBacillussubtilisWY34.CarbohydratePolymers,2006,66(1):88-96.)作為酶源，將枯草芽孢桿菌WY34活化后接入裝有20mL新鮮發(fā)酵培養(yǎng)基的IOOmL三角瓶中，于50。C條件下220rpm連續(xù)培養(yǎng)16-24h，加入活化后的聚醚砜膜，使膜單面的表面積與發(fā)酵液的體積比例為1cm2:lmL，于50。C條件下220rpm培養(yǎng)16-24h，直至膜吸附細胞的量為0.l—O.3mg/cra2(以菌體干重計)。得到固定了枯草芽孢桿菌WY34的聚醚砜膜。聚醚砜膜固定枯草芽孢桿菌WY34的效果如圖1所示。3、利用膜固定化細胞生產甘露聚糖酶將固定了枯草芽孢桿菌WY34的聚醚砜膜取出，用無菌水反復沖洗以去除膜表面吸附不牢的菌體及其他雜質，將清洗后的膜轉入新鮮的上述發(fā)酵培養(yǎng)基中(100mL三角瓶，裝液量為20mL)，于50。C條件下220rpm(旋轉半徑12mm)連續(xù)培養(yǎng)4d，完成第一批次固定化細胞培養(yǎng)。第一批次培養(yǎng)完成后，將聚醚砜膜取出用無菌水清洗，再將膜轉移到新鮮的上述發(fā)酵培養(yǎng)基中(100raL三角瓶，裝液量為20mU，于50'C條件下220rpm(旋轉半徑12mm)連續(xù)培養(yǎng)4d，完成第二批次固定化細胞培養(yǎng)。依次類推，在相同條件下重復培養(yǎng)，完成第三、四、五、六、七、八批次固定化細胞培養(yǎng)。同時設置以下游離細胞對照將枯草芽孢桿菌WY34活化后接入裝有20mL新鮮發(fā)酵培養(yǎng)基的100mL三角瓶中，于50。C條件下220rpm連續(xù)培養(yǎng)16-24h，準確吸取0.2mL發(fā)酵液加入到新鮮的上述液體培養(yǎng)基中(100mL三角瓶，裝液量為20mL)，于50。C條件下220rpm(旋轉半徑12mm)連續(xù)培養(yǎng)4d，完成第一批次游離細胞培養(yǎng)。第一批次游離細胞培養(yǎng)完成后，吸取0.2mL第一批次游離細胞的發(fā)酵液加入到新鮮的上述液體培養(yǎng)基中(100mL三角瓶，裝液量為20mL)，于50T條件下220rpm(旋轉半徑12mm)連續(xù)培養(yǎng)4d，完成第二批次游離細胞培養(yǎng)。依次類推，在相同條件下重復培養(yǎng)，完成第三、四、五、六、七、八批次游離細胞培養(yǎng)。5將發(fā)酵液10000rpm離心10min，取上清即得到粗酶液，采用DNS法測定上清液中甘露聚糖酶的活力，具體測定方法如下以0.5%(質量百分含量)的槐豆膠溶液為底物(將槐豆膠溶于0.05mol/LpH6.0的檸檬酸鈉緩沖液中)，0.9raL0.5%(質量百分含量)的槐豆膠溶液中加入O.lmL上述得到的經適當稀釋的酶液，60'C條件下反應IOmin，DNS法測定反應液中的還原糖量；同時以D-甘露糖(美國Amresco公司，貨號AmrescoJ443)為標準。在上述條件下，反應1min產生1umol甘露糖所需的酶量為一個酶活單位(U)。實驗設三次重復，聚醚砜膜固定化細胞與游離細胞的產酶情況如圖2所示，圖2中數(shù)值為三次重復的平均值土標準差。結果表明，聚醚砜膜固定化細胞經七批次半連續(xù)培養(yǎng)，單批次平均產酶水平為2000—3500U/mL(圖2中的縱坐標是相對酶活性，以第一批次游離細胞的酶活性為100°%，第一批次游離細胞的酶活性為1758U/mL)，是游離細胞產酶水平的1.2—2.0倍。實施例2、尼龍6膜固定化枯草芽孢桿菌產甘露聚糖酶下述步驟中所用的發(fā)酵培養(yǎng)基按照如下方法配制魔芋粉(武漢市清江魔芋制品有限公司，型號1A級魔芋精粉)10g、酵母提取物(英國Oxoid公司，貨號OXOIDCM0019B)3g、胰蛋白胨(英國Oxoid公司，貨號OXOIDLP0042B)6g、KH2P043g、MgS04.7H200.4g，加水到1000ml，自然pH。發(fā)酵培養(yǎng)溫度為40°C、轉速為150rpm(旋轉半徑12mm)。1、膜的活化將孔徑為0.2um，厚度為160um的尼龍6膜(北京北化黎明膜分離技術有限公司，JN6)在35匸條件下浸泡于濃度為8%(體積百分含量)的甲醛溶液中，浸泡時間為5h。2、固定化細胞以枯草芽孢桿菌WY34(ZhengqiangJiang,YunWei,DaoyiLi，PingpingChai，LiteLi，IsaoKusakabe.High-levelproduction,purificationandcharacterizationofathermostableb-mannanasefromthenewlyisolatedBacillussubtilisWY34.CarbohydratePolymers,2006,66(l):88-96.)作為酶源，將枯草芽孢桿菌WY34活化后接入裝有20mL新鮮發(fā)酵培養(yǎng)基的IOOmL三角瓶中，于4(TC條件下150rpm連續(xù)培養(yǎng)16-24h，加入活化后的尼龍6膜，使膜單面的表面積與發(fā)酵液的體積比例為1cm2:8raL，于4(TC條件下150rpm培養(yǎng)16-24h，直至膜吸附細胞的量為0.1—0.3mg/cm2(以菌體干重計)。得到固定了枯草芽孢桿菌WY34的尼龍6膜。尼龍6膜固定枯草芽孢桿菌WY34的效果如圖3所示。3、利用膜固定化細胞生產甘露聚糖酶將固定了枯草芽孢桿菌WY34的尼龍6膜取出，用無菌水反復沖洗以去除膜表面吸附不牢的菌體及其他雜質，將清洗后的膜轉入新鮮的上述發(fā)酵培養(yǎng)基中(100mL三角瓶，裝液量為20mL)，于40。C條件下150rpm(旋轉半徑12mm)連續(xù)培養(yǎng)5d，完成第一批次固定化細胞培養(yǎng)。第一批次培養(yǎng)完成后，將尼龍6膜取出用無菌水清洗，再將膜轉移到新鮮的上述發(fā)酵培養(yǎng)基中(100mL三角瓶，裝液量為20mL)，于40'C條件下150rpm(旋轉半徑12mm)連續(xù)培養(yǎng)5d，完成第二批次固定化細胞培養(yǎng)。依次類推，在相同條件下重復培養(yǎng)，完成第三、四、五、六、七批次固定化細胞培養(yǎng)。同時設置以下游離細胞對照將枯草芽孢桿菌WY34活化后接入裝有20mL新鮮發(fā)酵培養(yǎng)基的IOOmL三角瓶中，于40。C條件下150rpm連續(xù)培養(yǎng)16-24h，準確吸取0.2mL發(fā)酵液加入到新鮮的上述液體培養(yǎng)基中(100mL三角瓶，裝液量為20mL)，于40。C條件下150rpm(旋轉半徑12mm)連續(xù)培養(yǎng)5d，完成第一批次游離細胞培養(yǎng)。第一批次游離細胞培養(yǎng)完成后，吸取0.2mL第一批次游離細胞的發(fā)酵液加入到新鮮的上述液體培養(yǎng)基中(100mL三角瓶，裝液量為20mL)，于40"C條件下150rpm(旋轉半徑12mm)連續(xù)培養(yǎng)5d，完成第二批次游離細胞培養(yǎng)。依次類推，在相同條件下重復培養(yǎng)，完成第三、四、五、六、七批次游離細胞培養(yǎng)。將發(fā)酵液10000rpm離心10min，取上清即得到粗酶液，采用DNS法測定上清液中甘露聚糖酶的活力，具體測定方法如下以0.5%(質量百分含量)的槐豆膠溶液為底物(將槐豆膠溶于0.05raol/LpH6.0的檸檬酸鈉緩沖液中)，0.9mL0.5%(質量百分含量)的槐豆膠溶液中加入0.lmL上述得到的經適當稀釋的酶液，60°〇條件下反應10min，DNS法測定反應液中的還原糖量；同時以D-甘露糖(美國Amresco公司，貨號AmrescoJ443)為標準。在上述條件下，反應1min產生1Pmol甘露糖所需的酶量為一個酶活單位(U)。實驗設三次重復，尼龍6膜固定化細胞與游離細胞的產酶情況如圖4所示，圖4中數(shù)值為三次重復的平均值士標準差。結果表明，尼龍6膜固定化細胞經六批次半連續(xù)培養(yǎng)，單批次平均產酶水平為2000—3000U/mL(圖4中的縱坐標是相對酶活性，以第一批次游離細胞的酶活性為100%，第一批次游離細胞的酶活性為1766U/mL)，是游離細胞產酶水平的1.2—1.7倍。實施例3、醋酸纖維素膜固定化枯草芽孢桿菌產甘露聚糖酶下述步驟中所用的發(fā)酵培養(yǎng)基按照如下方法配制魔芋粉(武漢市清江魔芋制品有限公司，型號1A級魔芋精粉)20g、酵母提取物(英國0xoid公司，貨號OX。IDCM0019B)5g、胰蛋白胨(英國0xoid公司，貨號0X0IDLP0042B)9g、KH2P045g、MgS04.7H200.6g，加水到1000ml,自然pH。發(fā)酵培養(yǎng)溫度為50°C、轉速為200rpm(旋轉半徑12ram)。1、膜的活化將孔徑為0.3nm，厚度為120um的醋酸纖維素膜(北京北化黎明膜分離技術有限公司，CA)在4(TC條件下浸泡于濃度為10%(體積百分含量)的甲醛溶液中，浸泡時間為4h。2、固定化細胞以枯草芽孢桿菌WY45(柴萍萍，韋贊，江正強，李里特，日下部功.芽孢桿菌(Bacillussubtilis)WY45產0-甘露聚糖酶發(fā)酵條件的優(yōu)化.中國農業(yè)大學學報，2005,10(3):77-80.)作為酶源，將枯草芽孢桿菌WY45活化后接入裝有20mL新鮮發(fā)酵培養(yǎng)基的100mL三角瓶中，于50。C條件下200rpm連續(xù)培養(yǎng)16-24h，加入活化后的醋酸纖維素膜，使膜單面的表面積與發(fā)酵液的體積比例為lcm2:2mL，于50""C條件下200rpm培養(yǎng)16-24h，直至膜吸附細胞的量為0.l—O.3mg/cm2(以菌體干重計)。得到固定了枯草芽孢桿菌WY45的醋酸纖維素膜。3、利用膜固定化細胞生產甘露聚糖酶將固定了枯草芽孢桿菌WY45的醋酸纖維素膜取出，用無菌水反復沖洗以去除膜表面吸附不牢的菌體及其他雜質，將清洗后的膜轉入新鮮的上述發(fā)酵培養(yǎng)基中(100mL三角瓶，裝液量為20mL)，于50。C條件下200rpm(旋轉半徑12mm)連續(xù)培養(yǎng)4d，完成第一批次固定化細胞培養(yǎng)。第一批次培養(yǎng)完成后，將醋酸纖維素膜取出用無菌水清洗，再將膜轉移到新鮮的上述發(fā)酵培養(yǎng)基中(100mL三角瓶，裝液量為20mL)，于50。C條件下200rpm(旋轉半徑12mm)連續(xù)培養(yǎng)4d，完成第二批次固定化細胞培養(yǎng)。依次類推，在相同條件下重復培養(yǎng)，完成第三、四、五、六批次固定化細胞培養(yǎng)。同時設置以下游離細胞對照將枯草芽孢桿菌WY45活化后接入裝有20mL新鮮發(fā)酵培養(yǎng)基的IOOmL三角瓶中，于50。C條件下200rpm連續(xù)培養(yǎng)16-24h，準確吸取0.2mL發(fā)酵液加入到新鮮的上述液體培養(yǎng)基中(100mL三角瓶，裝液量為20mL)，于50。C條件下200rpm(旋轉半徑12mm)連續(xù)培養(yǎng)4d，完成第一批次游離細胞培養(yǎng)。第一批次游離細胞培養(yǎng)完成后，吸取0.2mL第一批次游離細胞的發(fā)酵液加入到新鮮的上述液體培養(yǎng)基中(100mL三角瓶，裝液量為20mL)，于50°C條件下200rpm(旋轉半徑12mm)連續(xù)培養(yǎng)4d，完成第二批次游離細胞培養(yǎng)。依次類推，在相同條件下重復培養(yǎng)，完成第三、四、五、六批次游離細胞培養(yǎng)。將發(fā)酵液10000rpm離心10min，取上清即得到粗酶液，采用DNS法測定上清液中甘露聚糖酶的活力，具體測定方法如下以0.5%(質量百分含量)的槐豆膠溶液為底物(將槐豆膠溶于0.05mol/LpH6.0的檸檬酸鈉緩沖液中)，0.9mL0.5%(質量百分含量)的槐豆膠溶液中加入O.lraL上述得到的經適當稀釋的酶液，60'C條件下反應10min，DNS法測定反應液中的還原糖量；同時以D-甘露糖(美國Amresco公司，貨號AmrescoJ443)為標準。在上述條件下，反應1min產生1yraol甘露糖所需的酶量為一個酶活單位(U)。實驗設三次重復，醋酸纖維素膜固定化細胞與游離細胞的產酶情況如圖5所示，圖5中數(shù)值為三次重復的平均值土標準差。結果表明，醋酸纖維素膜固定化細胞經五批次半連續(xù)培養(yǎng)，單批次平均產酶水平為3025—3850U/mL(圖5中的縱坐標是相對酶活性，以第一批次游離細胞的酶活性為100%，第一批次游離細胞的酶活性為2750U/mL)，是游離細胞產酶水平的1.l一l.4倍。實施例4、聚丙烯膜固定化枯草芽孢桿菌產甘露聚糖酶下述步驟中所用的發(fā)酵培養(yǎng)基按照如下方法配制魔芋粉(武漢市清江魔芋制品有限公司，型號1A級魔芋精粉)30g、酵母提取物(英國Oxoid公司，貨號OXOIDCM0019B)7g、胰蛋白胨(英國0xoid公司，貨號OXOIDLP0042B)12g、歸047g、MgS04.7H200.8g，加水到1000mL，自然pH。發(fā)酵培養(yǎng)溫度為45。C、轉速為220rpm(旋轉半徑12mm)。1、膜的活化將孔徑為0.4ym，厚度為140um的聚丙烯膜(北京北化黎明膜分離技術有限公司，PP)在5(TC條件下浸泡于濃度為12%(體積百分含量)的甲醛溶液中，浸泡時間為3h。2、固定化細胞以枯草芽孢桿菌WY45(柴萍萍，韋贊，江正強，李里特，日下部功.芽孢桿菌(Bacillussubtilis)WY45產e-甘露聚糖酶發(fā)酵條件的優(yōu)化.中國農業(yè)大學學報，2005，10(3):77-80.)作為酶源，將枯草芽孢桿菌WY45活化后接入裝有20mL新鮮發(fā)酵培養(yǎng)基的100mL三角瓶中，于45。C條件下220rpm連續(xù)培養(yǎng)16-24h，加入活化后的聚丙烯膜，使膜單面的表面積與發(fā)酵液的體積比例為1Cm2:4mL，于45'C條件下220rpm培養(yǎng)16-24h，直至膜吸附細胞的量為0.l—O.3mg/cm2(以菌體干重計)。得到固定了枯草芽孢桿菌WY45的聚丙烯膜。3、利用膜固定化細胞生產甘露聚糖酶將固定了枯草芽孢桿菌WY45的聚丙烯膜取出，用無菌水反復沖洗以去除膜表面吸附不牢的菌體及其他雜質，將清洗后的膜轉入新鮮的上述發(fā)酵培養(yǎng)基中(100mL三角瓶，裝液量為20mL)，于45。C條件下220rpm(旋轉半徑12mm)連續(xù)培養(yǎng)5d，完成第一批次固定化細胞培養(yǎng)。第一批次培養(yǎng)完成后，將聚丙烯膜取出用無菌水清洗，再將膜轉移到新鮮的上述發(fā)酵培養(yǎng)基中(100mL三角瓶，裝液量為20mL)，于45'C條件下220rpm(旋轉半徑12mm)連續(xù)培養(yǎng)5d，完成第二批次固定化細胞培養(yǎng)。依次類推，在相同條件下重復培養(yǎng)，完成第三、四、五批次固定化細胞培養(yǎng)。同時設置以下游離細胞對照將枯草芽孢桿菌WY45活化后接入裝有20raL新鮮發(fā)酵培養(yǎng)基的100mL三角瓶中，于45。C條件下220rpm連續(xù)培養(yǎng)16-24h，準確吸取0.2mL發(fā)酵液加入到新鮮的上述液體培養(yǎng)基中(100rnL三角瓶，裝液量為20mL)，于45。C條件下220rpm(旋轉半徑12mm)連續(xù)培養(yǎng)5d，完成第一批次游離細胞培養(yǎng)。第一批次游離細胞培養(yǎng)完成后，吸取0.2mL第一批次游離細胞的發(fā)酵液加入到新鮮的上述液體培養(yǎng)基中(lOOmL三角瓶，裝液量為20mL)，于45'C條件下220rpm(旋轉半徑12ram)連續(xù)培養(yǎng)5d，完成第二批次游離細胞培養(yǎng)。依次類推，在相同條件下重復培養(yǎng)，完成第三、四、五批次游離細胞培養(yǎng)。將發(fā)酵液10000rpm離心10min，取上清即得到粗酶液，釆用DNS法測定上清液中甘露聚糖酶的活力，具體測定方法如下以0.5%(質量百分含量)的槐豆膠溶液為底物(將槐豆膠溶于0.05mol/LpH6.0的檸檬酸鈉緩沖液中)，0.9mL0.5%(質量百分含量)的槐豆膠溶液中加入0.1mL上述得到的經適當稀釋的酶液，60r條件下反應10min，DNS法測定反應液中的還原糖量；同時以D-甘露糖(美國Amresco公司，貨號AmrescoJ443)為標準。在上述條件下，反應1min產生1umol甘露糖所需的酶量為一個酶活單位(U)。10實驗設三次重復，聚丙烯膜固定化細胞與游離細胞的產酶情況如圖6所示，圖6中數(shù)值為三次重復的平均值士標準差。結果表明，聚丙烯膜固定化細胞經四批次半連續(xù)培養(yǎng)，單批次平均產酶水平為2970—3510U/mL(圖6中的縱坐標是相對酶活性，以第一批次游離細胞的酶活性為100%,第一批次游離細胞的酶活性為2700U/mL)，是游離細胞產酶水平的1.1一1.3倍。權利要求1、一種固定化生物膜，是將產甘露聚糖酶的枯草芽孢桿菌固定在微孔濾膜上得到的。2、根據(jù)權利要求l所述的固定化生物膜，其特征在于所述產甘露聚糖酶的枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌WY34或WY45。3、根據(jù)權利要求l所述的固定化生物膜，其特征在于所述微孔濾膜為聚醚砜膜、尼龍6膜、醋酸纖維素膜或聚丙烯膜。4、根據(jù)權利要求3所述的固定化生物膜，其特征在于所述微孔濾膜的孔徑為O.2—0.4um，厚度為100-160ym。5、根據(jù)權利要求1至4中任一所述的固定化生物膜，其特征在于所述微孔濾膜在固定所述產甘露聚糖酶的枯草芽孢桿菌前，進行如下活化將所述微孔濾膜在體積百分含量為8_12%的甲醛溶液中，在35—50。C浸泡3—5h。6、一種生產甘露聚糖酶的方法，是培養(yǎng)固定在所述固定化生物膜上的產甘露聚糖酶的枯草芽孢桿菌，得到甘露聚糖酶。7、根據(jù)權利要求6所述的方法，其特征在于所述固定化生物膜的單面表面積與所述培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基的體積的比例為1cm2:lmL—lcm2:8mL，優(yōu)選為1cm2:4raL。8、根據(jù)權利要求7所述的方法，其特征在于所述培養(yǎng)的培養(yǎng)基按照如下方法配制魔芋粉10—30g、酵母提取物3—7g、胰蛋白胨6—12g、K戰(zhàn)3—7g、MgSO.,.7H200.4—0.8g，加水到1000mL，自然pH。9、根據(jù)權利要求8所述的方法，其特征在于所述培養(yǎng)為在40—50t:進行、旋轉半徑為12腿、轉速為150—220rpm的振蕩培養(yǎng)。全文摘要本發(fā)明公開了一種生產甘露聚糖酶的方法。本發(fā)明所提供的生產甘露聚糖酶的方法是將產甘露聚糖酶的微生物固定在微孔濾膜上，加入培養(yǎng)基，進行培養(yǎng)，得到甘露聚糖酶。本發(fā)明的固定化細胞可進行批次培養(yǎng)，單批次培養(yǎng)后的濾膜經無菌水清洗后，可進行4-8次連續(xù)使用，且產酶水平保持在游離細胞產酶水平之上。批次培養(yǎng)固定化WY34細胞平均產酶水平為1800-3500U/mL，是游離細胞產酶水平的1.1-2.0倍；批次培養(yǎng)固定化WY45細胞平均產酶水平為3025-3990U/mL，是游離細胞產酶水平的1.1-1.4倍。本發(fā)明方法具有操作簡單、條件溫和、固定效果良好的優(yōu)點，且產物易分離，并能顯著提高細胞的產酶水平，降低生產成本。文檔編號C12N11/08GK101492667SQ20081005652公開日2009年7月29日申請日期2008年1月21日優(yōu)先權日2008年1月21日發(fā)明者叢倩千,武愛民,江正強,閆巧娟,赟韋申請人:中國農業(yè)大學