專利名稱：一種降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種菌種的篩選方法。
背景技術：
煤化工企業(yè)排放的廢水水質(zhì)復雜，C0Dcr為2000 5000mg/L， B0D5/C0Dcr為0. 25 0. 4，總酚濃度為500 1200mg/L，揮發(fā)酚為150 300mg/L，氨氮為150 500mg/L，并含有少量的多環(huán)芳香族化合物、雜環(huán)化合物、石油烴和氰化物、硫化物等。在很多煤化工實際生產(chǎn)中產(chǎn)生的酚類物質(zhì)可以占到總COD的一半以上，因此煤化工廢水處理效果的關鍵就在于酚類物質(zhì)的處理。煤化工廢水中基本的酚類物質(zhì)有苯酚，間苯二酚，鄰苯二酚，對苯二酚，間甲基苯酚，對甲基苯酚，鄰甲基苯酚，2-甲基-1 ， 3-苯二酚，3-甲基-1和2-苯二酚，其中鄰甲基苯酚是最難被降解的物質(zhì)之一。 目前降解鄰甲基苯酚使用的生物強化法，通常采用單一的酚作為碳源直接從菌群中篩選高效降解菌種，由于碳源的單一性，導致此方式獲得的菌株對煤化工廢水中其他化學物質(zhì)的抗性低，在實際的煤化工廢水處理中，菌種的存活率低，無法實現(xiàn)菌種特有的降解性能，導致鄰甲基苯酚的降解率低，僅為30. 5 51. 8%，影響出水效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有生物強化法篩選的菌株對煤化工廢水中其他化學物質(zhì)的抗性低，導致鄰甲基苯酚的降解率低的問題，而提供一種降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法。 降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法按以下步驟實現(xiàn)一、取煤化工好氧段廢水處理系統(tǒng)的污泥廢水混合物，在34 36t:下曝氣48 50h，然后按1 : 5的體積比將曝氣后的污泥廢水混合物接種于混合酚濃度為400mg/L的培養(yǎng)基中，在34 36。C下震蕩培養(yǎng)18 24h后沉降30 40min，取上層菌液，然后向上層菌液中投加藥劑，攪拌均勻后在34 36t:下震蕩培養(yǎng)18 24h，得菌懸液a;二、按l : 20的體積比將菌懸液a接種于鄰甲基苯酚濃度為200mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在34 36。C下震蕩培養(yǎng)18 24h，得培養(yǎng)物I;三、按1 : 20的體積比將培養(yǎng)物I接種于鄰甲基苯酚濃度為400mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在34 36t:下震蕩培養(yǎng)18 24h，得培養(yǎng)物II;四、按l : 20的體積比將培養(yǎng)物II接種于鄰甲基苯酚濃度為600mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在34 36。C下震蕩培養(yǎng)18 24h，得培養(yǎng)物III;五、按l : 20的體積比將培養(yǎng)物III接種于鄰甲基苯酚濃度為800mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在34 36。C下震蕩培養(yǎng)18 24h，得培養(yǎng)物IV ;六、采用平板劃線分離法將培養(yǎng)物IV接種于富集培養(yǎng)基上，在34 36t:下震蕩培養(yǎng)18 24h，即得降解鄰甲基苯酚菌種；其中步驟一中混合酚濃度為400mg/L的培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 2gMgS04 H20、0. lgFeS04 H20、0. lgMnS04 H20、0. 2gCaCl2、0. 5gK2HP04、0. 5gNH2P04、0. 45g(NH4)2S04、0. lgNaCl、400mg混合酚和余量的蒸餾水組成，并調(diào)節(jié)pH至6. 9 7. 1，
混合酚由苯酚、甲基酚、二甲基苯酚和苯二酚按質(zhì)量比30 : io : io : 25混合而成；步驟一中投加藥劑的每升菌懸液a中有0. 1 0. 3g MgS04 H20、0. 05 0. lgFeS04 H20、0. 05 0. lg MnS04 H20、0. 1 0. 3g CaCl2、0. 4 0. 6g K2HP04、0. 4 0. 6gKH2P04、0. 4 0. 5g(NH4)2S04、0.05 0. lg NaCl和1. 5 2. 5g葡萄糖；步驟二中鄰甲基苯酚濃度為200mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 1 0. 3gMgS04 H20、0. 05 0. lgFeS04 H20、0. 05 0. lgMnS04 H20、0. 1 0. 3gCaCl2、0. 4 0. 6gK2HP04、0. 4 0. 6gKH2P04、0. 4 0. 5g(NH4)2S04、0. 05 0. lgNaCl、200mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟三中鄰甲基苯酚濃度為400mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 1 0. 3gMgS04 H20、0. 05 0. lgFeS04 H20、0. 05 0. lgMnS04 H20、0. 1 0. 3gCaCl2、0. 4 0. 6gK2HP04、0. 4 0. 6gKH2P04、0. 4 0. 5g (NH4) 2S04、0. 05 0. lgNaCl、400mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟四中鄰甲基苯酚濃度為600mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 1 0. 3gMgS04 H20、0. 05 0. lgFeS04 H20、0. 05 0. lgMnS04. H20、0. 1 0. 3gCaCl2、0. 4 0. 6gK2HP04、0. 4 0. 6gKH2P04、0. 4 0. 5g (NH4) 2S04、0. 05 0. lgNaCl、600mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟五中鄰甲基苯酚濃度為800mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 1 0. 3gMgS04 H20、0. 05 0. lgFeS04 H20、0. 05 0. lgMnS04 H20、0. 1 0. 3gCaCl2、0. 4 0. 6gK2HP04、0. 4 0. 6gKH2P04、0. 4 0. 5g (NH4) 2S04、0. 05 0. lgNaCl、800mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟六中富集培養(yǎng)基由1000mL蒸餾水、4. 5 5. 5g牛肉膏、9 llg蛋白膝、19 21g瓊脂禾口 4. 5 5. 5gNaCl制成，并調(diào)節(jié)pH至7. 5 8. 0。
本發(fā)明中以多種酚作為碳源，針對鄰甲基苯酚進行特定篩選，所以獲得的菌株對煤化工廢水中其他化學物質(zhì)的抗性更強，具有針對鄰甲基苯酚特定的高降解性能。本發(fā)明中所得降解鄰甲基苯酚菌種是酚降解菌群中的一份子，所以在投加入反應系統(tǒng)后，能迅速適應變化的環(huán)境配合菌群中其他菌株的降解，從而增強了對鄰甲基苯酚的降解率，改善了菌群的結構，提高整體的降解效果。本發(fā)明中所得降解鄰甲基苯酚菌種，在24h內(nèi)對濃度為800mg/L的鄰甲基苯酚的降解率達到了 99. 8% ;在廢水3600C0D mg/L、酚濃度850mg/L、氰化物濃度35mg/L、氨氮濃度150mg/L、 Ph值為7. 5時投加本發(fā)明中所得降解鄰甲基苯酚菌種到反應器中，水力停留時間24h， 35 °C下降解率由原來的COD 35 % 、酚45 % 、氰化物45 % ，增加為C0D45 % 、酚65 % 、氰化物55 % 、氨氮50 % ，說明本發(fā)明中所得降解鄰甲基苯酚的菌種不僅對鄰甲基苯酚一種物質(zhì)起到高效降解的作用，同時對其他酚、氰化物也具有降解的作用，且降解效果明顯提高，不造成菌群的失調(diào)致使某種產(chǎn)物積累，菌種的存活率高，提高了整體的降解效果。本發(fā)明的篩選方法成本低廉，簡單易行。
具體實施例方式
具體實施方式
一 本實施方式降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法按以下步驟實現(xiàn)一、取煤化工好氧段廢水處理系統(tǒng)的污泥廢水混合物，在34 36t:下曝氣48 50h，然后按l : 5的體積比將曝氣后的污泥廢水混合物接種于混合酚濃度為400mg/L的培養(yǎng)基中，在34 36t:下震蕩培養(yǎng)18 24h后沉降30 40min，取上層菌液，然后向上層菌液中投加藥劑，攪拌均勻后在34 36t:下震蕩培養(yǎng)18 24h，得菌懸液a;二、按l : 20的體積比將菌懸液a接種于鄰甲基苯酚濃度為200mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在34 36。C下震蕩培養(yǎng)18 24h，得培養(yǎng)物I ;三、按1 : 20的體積比將培養(yǎng)物I接種于鄰甲基苯酚濃度為400mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在34 36t:下震蕩培養(yǎng)18 24h，得培養(yǎng)物II;四、按l : 20的體積比將培養(yǎng)物II接種于鄰甲基苯酚濃度為600mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在34 36°C下震蕩培養(yǎng)18 24h，得培養(yǎng)物I11 ;五、按1 : 20的體積比將培養(yǎng)物III接種于鄰甲基苯酚濃度為800mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在34 36"C下震蕩培養(yǎng)18 24h，得培養(yǎng)物IV ;六、采用平板劃線分離法將培養(yǎng)物IV接種于富集培養(yǎng)基上，在34 36t:下震蕩培養(yǎng)18 24h，即得降解鄰甲基苯酚菌種；其中步驟一中混合酚濃度為400mg/L的培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 2gMgS04 *H20、0. lgFeS04 *H20、0. lgMnS04 *H20、0. 2gCaCl2、0. 5gK2HP04、0. 5gKH2P04、0. 45g(NH4)2S04、0. lgNaCl、400mg混合酚和余量的蒸餾水組成，并調(diào)節(jié)pH至6. 9 7. 1，
混合酚由苯酚、甲基酚、二甲基苯酚和苯二酚按質(zhì)量比30 : io : io : 25混合而成；步
驟一中投加藥劑的每升菌懸液a中有0. 1 0. 3gMgS04 H20、0. 05 0. lg FeS04 H20、0. 05 0. lg MnS04 *H20、0. 1 0. 3g CaCl2、0. 4 0. 6g K2HP04、0. 4 0. 6g KH2P04、0. 4 0. 5g(NH4)2S04、0.05 0. lg NaCl和1. 5 2. 5g葡萄糖；步驟二中鄰甲基苯酚濃度為200mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 1 0. 3gMgS04 H20、0. 05 0. lgFeS04 H20、0. 05 0. lgMnS04 H20、0. 1 0. 3gCaCl2、0. 4 0. 6gK2HP04、0. 4 0. 6gKH2P04、0. 4 0. 5g(NH4)2S04、0. 05 0. lgNaCl、200mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟三中鄰甲基苯酚濃度為400mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 1 0. 3gMgS04 H20、0. 05 0. lgFeS04 H20、0. 05 0. lgMnS04 H20、0. 1 0. 3gCaCl2、0. 4 0. 6gK2HP04、0. 4 0. 6gKH2P04、0. 4 0. 5g (NH4) 2S04、0. 05 0. lgNaCl、400mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟四中鄰甲基苯酚濃度為600mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 1 0. 3gMgS04 H20、0. 05 0. lgFeS04 H20、0. 05 0. lgMnS04 H20、0. 1 0. 3gCaCl2、0. 4 0. 6gK2HP04、0. 4 0. 6gKH2P04、0. 4 0. 5g (NH4) 2S04、0. 05 0. lgNaCl、600mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟五中鄰甲基苯酚濃度為800mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 1 0. 3gMgS04 H20、0. 05 0. lgFeS04 H20、0. 05 0. lgMnS04 H20、0. 1 0. 3gCaCl2、0. 4 0. 6gK2HP04、0. 4 0. 6gKH2P04、0. 4 0. 5g (NH4) 2S04、0. 05 0. lgNaCl、800mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟六中富集培養(yǎng)基由1000mL蒸餾水、4. 5 5. 5g牛肉膏、9 llg蛋白膝、19 21g瓊脂禾口 4. 5 5. 5gNaCl制成，并調(diào)節(jié)pH至7. 5 8. 0。
本實施方式中取煤化工好氧段廢水處理系統(tǒng)的污泥廢水混合物，采取溫度為35 4(TC;污泥廢水混合物中廢水水質(zhì)通過色質(zhì)聯(lián)機測各種酚的比例為總酚75 90%、苯酚29 36%、二甲基苯酚9. 86%、多元酚25%、甲基酚10 15% (其中間甲基苯酚2 3%、對甲基苯酚2 3%、鄰甲基苯酚6 9% )。 本實施方式中篩選所得降解鄰甲基苯酚菌種，經(jīng)鑒定為腸桿菌屬。 本實施方式中篩選所得降解鄰甲基苯酚菌種的最佳的固定材料為聚乙烯多孔填
料，其具有較高的漆酶產(chǎn)量，固定化后的降解鄰甲基苯酚菌種在5(TC下也不會導致菌體嚴
重受損、漆酶機能變化，也不會經(jīng)歷一段菌體及漆酶受抑制降低再回復的過程，而是穩(wěn)步升高。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟一污泥廢水混合物中廢水水質(zhì)COD為900 1500mg/L、總酚為800 1200mg/L、氨氮為150 200mg/L、油為10mg/L、氰化物為20 40mg/L、pH值為7. 5 8. 5。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟一污泥廢水混合物
6中廢水水質(zhì)C0D為1000 1400mg/L、總酚為900 1100mg/L、氨氮為160 180mg/L、油為10mg/L、氰化物為25 35mg/L、pH值為7. 8 8. 2。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟一污泥廢水混合物中廢水水質(zhì)COD為1200mg/L、總酚為1000mg/L、氨氮為170mg/L、油為10mg/L、氰化物為30mg/L、pH值為8。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一、二、三或四不同的是步驟一中投加藥劑的每升菌懸液a中有0. 2g MgS04 H20、0. 08g FeS04 H20、0. 08gMnS04 H20、0. 2gCaCl2、0. 5g K2HP04、0. 5g KH2P04、0. 45g (NH4) 2S04、0. 08gNaCl和2g葡萄糖。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一、二、三或四相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
五不同的是步驟二中鄰甲基苯酚濃度為200mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 2gMgS04 H20、0. 08gFeS04 H20、0. 08gMnS04 H20、0. 2gCaCl2、0. 5gK2HP04、0. 4 0. 6gKH2P04、0. 45g (NH4) 2S04、0. 08gNaCl、200mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
五相同。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
六不同的是步驟六中富集培養(yǎng)基由lOOOmL蒸餾水、5g牛肉膏、10g蛋白膝、20g瓊脂和5gNaCl制成，并調(diào)節(jié)pH至7. 8。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
六相同。
具體實施方式
八本實施方式與具體實施方式
七不同的是步驟一、二、三、四、五和六中震蕩培養(yǎng)的條件均為150 180r/min。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
七相同。
具體實施方式
九本實施方式與具體實施方式
七不同的是步驟一、二、三、四、五和六中震蕩培養(yǎng)的條件均為170r/min。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
七相同。
具體實施方式
十本實施方式降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法按以下步驟實現(xiàn)一、取煤化工好氧段廢水處理系統(tǒng)的污泥廢水混合物，在34t:下曝氣48h，然后按l : 5的體積比將曝氣后的污泥廢水混合物接種于混合酚濃度為400mg/L的培養(yǎng)基中，在34°CT震蕩培養(yǎng)18h后沉降30min，取上層菌液，然后向上層菌液中投加藥劑，攪拌均勻后在34°C下震蕩培養(yǎng)18h，得菌懸液a;二、按l : 20的體積比將菌懸液a接種于鄰甲基苯酚濃度為200mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在34t:下震蕩培養(yǎng)18h，得培養(yǎng)物I;三、按l : 20的體積比將培養(yǎng)物I接種于鄰甲基苯酚濃度為400mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在34t:下震蕩培養(yǎng)18h，得培養(yǎng)物II;四、按l : 20的體積比將培養(yǎng)物II接種于鄰甲基苯酚濃度為600mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在34t:下震蕩培養(yǎng)18h，得培養(yǎng)物III;五、按l : 20的體積比將培養(yǎng)物III接種于鄰甲基苯酚濃度為800mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在34t:下震蕩培養(yǎng)18h，得培養(yǎng)物IV ;六、采用平板劃線分離法將培養(yǎng)物IV接種于富集培養(yǎng)基上，在34t:下震蕩培養(yǎng)18h，即得降解鄰甲基苯酚菌種；其中步驟一中混合酚濃度為400mg/L的培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由O. 2gMgS04 H20、0. lgFeS04 H20、0. lgMnS04 H20、0. 2gCaCl2、0. 5gK2HP04、0. 5gKH2P04、0. 45g (NH4) 2S04、0. lgNaCl、400mg混合酚和余量的蒸餾水組成，并調(diào)節(jié)pH至6.9，混合酚由苯酚、甲基酚、二甲基苯酚和苯二酚按質(zhì)量比30 : 10 : 10 : 25混合而成；步驟一中投加藥劑的每升菌懸液a中有0. lg MgS04 *H20、0. 05g FeS04 *H20、0. 05gMnS04 H20、0. lg CaCl2、0. 4gK2HP04、0. 4g KH2P04、0. 4g (NH4) 2S04、0. 05g NaCl禾卩1. 5g葡萄糖；步驟二中鄰甲基苯酚濃度為200mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. lgMgS04 *H20、0. 05 0. lgFeS04 *H20、0. 05gMnS04 *H20、0. lgCaCl2、0. 4gK2HP04、0. 4gKH2P04、0. 4g(NH4)2S04、 0. 05gNaCl、200mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟三中鄰甲基苯酚濃度為400mg/ L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. lgMgS04 H20、0. 05gFeS04 H20、0. 05gMnS04 H20、 0. lgCaCl2、0. 4gK2HP04、0. 4gKH2P04、0. 4g (NH4) 2S04、0. 05gNaCl、400mg鄰甲基苯酚和余量 的蒸餾水組成；步驟四中鄰甲基苯酚濃度為600mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由 0. lgMgS04 H20、0. 05gFeS04 H20、0. 05gMnS04 H20、0. lgCaCl2、0. 4gK2HP04、0. 4gKH2P04、 0. 4g (NH4) 2S04、 0. 05gNaCl 、 600mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟五中鄰甲基苯 酚濃度為800mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. lgMgS04 H20、0. 05gFeS04 H20、 0. 05gMnS04 H20、0. lgCaCl2、0. 4gK2HP04、0. 4gKH2P04、0. 4g (NH4) 2S04、0. 05gNaCl、800mg鄰甲 基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟六中富集培養(yǎng)基由lOOOmL蒸餾水、4. 5g牛肉膏、9g蛋白 膝、19g瓊脂和4. 5gNaCl制成，并調(diào)節(jié)pH至7. 5。 本實施方式中的污泥廢水混合物取自中煤龍華哈爾濱煤化工有限公司好氧段廢 水處理系統(tǒng)。 本實施方式中篩選所得降解鄰甲基苯酚菌種，經(jīng)鑒定為腸桿菌屬。 本實施方式中篩選所得降解鄰甲基苯酚菌種，在24h內(nèi)對濃度為800mg/L的鄰甲
基苯酚的降解率達到了 99.8%。
具體實施方式
十一 本實施方式降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法按以下步驟實 現(xiàn)一、取煤化工好氧段廢水處理系統(tǒng)的污泥廢水混合物，在36t:下曝氣50h，然后按l : 5 的體積比將曝氣后的污泥廢水混合物接種于混合酚濃度為400mg/L的培養(yǎng)基中，在36°CT 震蕩培養(yǎng)24h后沉降40min，取上層菌液，然后向上層菌液中投加藥劑，攪拌均勻后在36°C 下震蕩培養(yǎng)24h，得菌懸液a;二、按l : 20的體積比將菌懸液a接種于鄰甲基苯酚濃度為 200mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在36t:下震蕩培養(yǎng)24h，得培養(yǎng)物I;三、按l : 20的體積 比將培養(yǎng)物I接種于鄰甲基苯酚濃度為400mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在36t:下震蕩培養(yǎng) 24h，得培養(yǎng)物I1 ;四、按1 : 20的體積比將培養(yǎng)物II接種于鄰甲基苯酚濃度為600mg/L的 篩選培養(yǎng)基中，然后在36t:下震蕩培養(yǎng)24h，得培養(yǎng)物III;五、按l : 20的體積比將培養(yǎng) 物III接種于鄰甲基苯酚濃度為800mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在36t:下震蕩培養(yǎng)24h，得 培養(yǎng)物IV ;六、采用平板劃線分離法將培養(yǎng)物IV接種于富集培養(yǎng)基上，在36t:下震蕩培養(yǎng) 24h，即得降解鄰甲基苯酚菌種；其中步驟一中混合酚濃度為400mg/L的培養(yǎng)基為每升培養(yǎng) 基中由0. 2gMgS04 *H20、0. lgFeS04 *H20、0. lgMnS04 *H20、0. 2gCaCl2、0. 5gK2HP04、0. 5gKH2P04、 0. 45g(NH4)2S04、0. lgNaCl、400mg混合酚和余量的蒸餾水組成，并調(diào)節(jié)pH至7. 1，混合酚
由苯酚、甲基酚、二甲基苯酚和苯二酚按質(zhì)量比30 : io : io : 25混合而成；步驟一中
投加藥劑的每升菌懸液a中有0. 3g MgS04 H20、0. lg FeS04 H20、0. lg MnS04 H20、0. 3g CaCl2、0. 6gK2HP04、0. 6g KH2P04、0. 5g(NH4)2S04、0. lg NaCl和2. 5g葡萄糖；步驟二中鄰甲 基苯酚濃度為200mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 3gMgS04 H20、0. lgFeS04 H20、 0. lgMnS04 H20、0. 3gCaCl2、0. 6gK2HP04、0. 6gKH2P04、0. 5g (NH4) 2S04、0. lgNaCl、200mg鄰 甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟三中鄰甲基苯酚濃度為400mg/L的篩選培養(yǎng)基為每 升培養(yǎng)基中由0. 3gMgS04 H20、0. lgFeS04 H20、0. lgMnS04 H20、0. 3gCaCl2、0. 6gK2HP04、 0. 6gKH2P04、0. 5g(NH4)2S04、0. lgNaCl、400mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟四中鄰 甲基苯酚濃度為600mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 3gMgS04 *H20、0. lgFeS04 *H20、0. lgMnS04 H20、0. 3gCaCl2、0. 6gK2HP04、0. 6gKH2P04、0. 5g (NH4) 2S04、0. lgNaCl、600mg鄰甲基 苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟五中鄰甲基苯酚濃度為800mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng) 基中由0. 3gMgS04 *H20、0. lgFeS04 *H20、0. lgMnS04 *H20、0. 3gCaCl2、0. 6gK2HP04、0. 6gKH2P04、 0. 5g(NH4)2S04、0. lgNaCl、800mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟六中富集培養(yǎng)基由 lOOOmL蒸餾水、5. 5g牛肉膏、llg蛋白膝、21g瓊脂和5. 5gNaCl制成，并調(diào)節(jié)pH至8. 0。
本實施方式中的污泥廢水混合物取自七臺河寶泰隆煤化工股份有限公司好氧段 廢水處理系統(tǒng)。 本實施方式中篩選所得降解鄰甲基苯酚菌種，經(jīng)鑒定為腸桿菌屬。 本實施方式中篩選所得降解鄰甲基苯酚菌種，在24h內(nèi)對濃度為800mg/L的鄰甲
基苯酚的降解率達到了 99.6%。
具體實施方式
十二 本實施方式降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法按以下步驟實 現(xiàn)一、取煤化工好氧段廢水處理系統(tǒng)的污泥廢水混合物，在35t:下曝氣49h，然后按l : 5 的體積比將曝氣后的污泥廢水混合物接種于混合酚濃度為400mg/L的培養(yǎng)基中，在35°C 下震蕩培養(yǎng)20h后沉降35min，取上層菌液，然后向上層菌液中投加藥劑，攪拌均勻后在 35t:下震蕩培養(yǎng)20h，得菌懸液a;二、按1 : 20的體積比將菌懸液a接種于鄰甲基苯酚 濃度為200mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在35t:下震蕩培養(yǎng)20h，得培養(yǎng)物I;三、按l : 20 的體積比將培養(yǎng)物I接種于鄰甲基苯酚濃度為400mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在35t:下 震蕩培養(yǎng)20h，得培養(yǎng)物II;四、按l : 20的體積比將培養(yǎng)物II接種于鄰甲基苯酚濃度 為600mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在35t:下震蕩培養(yǎng)20h，得培養(yǎng)物I11 ;五、按1 : 20的 體積比將培養(yǎng)物III接種于鄰甲基苯酚濃度為800mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在35t:下 震蕩培養(yǎng)20h，得培養(yǎng)物IV ;六、采用平板劃線分離法將培養(yǎng)物IV接種于富集培養(yǎng)基上， 在35t:下震蕩培養(yǎng)20h，即得降解鄰甲基苯酚菌種；其中步驟一中混合酚濃度為400mg/L 的培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 2gMgS04 H20、0. lgFeS04 H20、0. lgMnS04 H20、0. 2gCaCl2、 0. 5gK2HP04、0. 5gKH2P04、0. 45g (NH4) 2S04、0. lgNaCl、400mg混合酚和余量的蒸餾水組成，并調(diào)
節(jié)pH至7.o，混合酚由苯酚、甲基酚、二甲基苯酚和苯二酚按質(zhì)量比30 : io : io : 25混
合而成；步驟一中投加藥劑的每升菌懸液a中有0. 2g MgS04 ^20、0. 08g FeS04 ^20、0. 08g MnS04 H20、0. 2CaCl2、0. 5gK2HP04、0. 5g KH2P04、0. 45g(NH4)2S04、0. 08g NaCl和2g葡萄糖； 步驟二中鄰甲基苯酚濃度為200mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 2gMgS04 H20、 0. 08gFeS04 H20、0. 08gMnS04 H20、0. 2gCaCl2、0. 5gK2HP04、0. 5gKH2P04、0. 45g (NH4) 2S04、 0. 08gNaCl、200mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟三中鄰甲基苯酚濃度為400mg/ L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 2gMgS04 H20、0. 08gFeS04 H20、0. 08gMnS04 H20、 0. 2gCaCl2、0. 5gK2HP04、0. 5gKH2P04、0. 45g(NH4)2S04、0. 08gNaCl、400mg鄰甲基苯酚和余量 的蒸餾水組成；步驟四中鄰甲基苯酚濃度為600mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由 0. 2gMgS04 H20、0. 08gFeS04 H20、0. 08gMnS04 H20、0. 2gCaCl2、0. 5gK2HP04、0. 5gKH2P04、 0. 45g(NH4)2S04、0. 08gNaCl、600mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟五中鄰甲基苯 酚濃度為800mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 2gMgS04 H20、0. 08gFeS04 H20、 0. 08gMnS04 *H20、0. 2gCaCl2、0. 5gK2HP04、0. 5gKH2P04、0. 45g (NH4) 2S04、0. 08gNaCl、800mg鄰甲 基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟六中富集培養(yǎng)基由1000mL蒸餾水、5. Og牛肉膏、10g蛋白 膝、20g瓊脂和5. OgNaCl制成，并調(diào)節(jié)pH至7. 8。
本實施方式中的污泥廢水混合物取自黑龍江順隆煤化工有限公司好氧段廢水處 理系統(tǒng)。 本實施方式中篩選所得降解鄰甲基苯酚菌種，經(jīng)鑒定為腸桿菌屬。 本實施方式中篩選所得降解鄰甲基苯酚菌種，在24h內(nèi)對濃度為800mg/L的鄰甲
基苯酚的降解率達到了 99. 7%。
權利要求
一種降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法，其特征在于降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法按以下步驟實現(xiàn)一、取煤化工好氧段廢水處理系統(tǒng)的污泥廢水混合物，在34～36℃下曝氣48～50h，然后按1∶5的體積比將曝氣后的污泥廢水混合物接種于混合酚濃度為400mg/L的培養(yǎng)基中，在34～36℃下震蕩培養(yǎng)18～24h后沉降30～40min，取上層菌液，然后向上層菌液中投加藥劑，攪拌均勻后在34～36℃下震蕩培養(yǎng)18～24h，得菌懸液a；二、按1∶20的體積比將菌懸液a接種于鄰甲基苯酚濃度為200mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在34～36℃下震蕩培養(yǎng)18～24h，得培養(yǎng)物I；三、按1∶20的體積比將培養(yǎng)物I接種于鄰甲基苯酚濃度為400mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在34～36℃下震蕩培養(yǎng)18～24h，得培養(yǎng)物II；四、按1∶20的體積比將培養(yǎng)物II接種于鄰甲基苯酚濃度為600mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在34～36℃下震蕩培養(yǎng)18～24h，得培養(yǎng)物III；五、按1∶20的體積比將培養(yǎng)物III接種于鄰甲基苯酚濃度為800mg/L的篩選培養(yǎng)基中，然后在34～36℃下震蕩培養(yǎng)18～24h，得培養(yǎng)物IV；六、采用平板劃線分離法將培養(yǎng)物IV接種于富集培養(yǎng)基上，在34～36℃下震蕩培養(yǎng)18～24h，即得降解鄰甲基苯酚菌種；其中步驟一中混合酚濃度為400mg/L的培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0.2gMgSO4·H2O、0.1gFeSO4·H2O、0.1gMnSO4·H2O、0.2gCaCl2、0.5gK2HPO4、0.5gKH2PO4、0.45g(NH4)2SO4、0.1gNaCl、400mg混合酚和余量的蒸餾水組成，并調(diào)節(jié)pH至6.9～7.1，混合酚由苯酚、甲基酚、二甲基苯酚和苯二酚按質(zhì)量比30∶10∶10∶25混合而成；步驟一中投加藥劑的每升菌懸液a中有0.1～0.3g MgSO4·H2O、0.05～0.1g FeSO4·H2O、0.05～0.1gMnSO4·H2O、0.1～0.3g CaCl2、0.4～0.6g K2HPO4、0.4～0.6g KH2PO4、0.4～0.5g(NH4)2SO4、0.05～0.1g NaCl和1.5～2.5g葡萄糖；步驟二中鄰甲基苯酚濃度為200mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0.1～0.3gMgSO4·H2O、0.05～0.1gFeSO4·H2O、0.05～0.1gMnSO4·H2O、0.1～0.3gCaCl2、0.4～0.6gK2HPO4、0.4～0.6gKH2PO4、0.4～0.5g(NH4)2SO4、0.05～0.1gNaCl、200mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟三中鄰甲基苯酚濃度為400mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0.1～0.3gMgSO4·H2O、0.05～0.1gFeSO4·H2O、0.05～0.1gMnSO4·H2O、0.1～0.3gCaCl2、0.4～0.6gK2HPO4、0.4～0.6gKH2PO4、0.4～0.5g(NH4)2SO4、0.05～0.1gNaCl、400mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟四中鄰甲基苯酚濃度為600mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0.1～0.3gMgSO4·H2O、0.05～0.1gFeSO4·H2O、0.05～0.1gMnSO4·H2O、0.1～0.3gCaCl2、0.4～0.6gK2HPO4、0.4～0.6gKH2PO4、0.4～0.5g(NH4)2SO4、0.05～0.1gNaCl、600mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟五中鄰甲基苯酚濃度為800mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0.1～0.3gMgSO4·H2O、0.05～0.1gFeSO4·H2O、0.05～0.1gMnSO4·H2O、0.1～0.3gCaCl2、0.4～0.6gK2HPO4、0.4～0.6gKH2PO4、0.4～0.5g(NH4)2SO4、0.05～0.1gNaCl、800mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成；步驟六中富集培養(yǎng)基由1000mL蒸餾水、4.5～5.5g牛肉膏、9～11g蛋白膝、19～21g瓊脂和4.5～5.5gNaCl制成，并調(diào)節(jié)pH至7.5～8.0。
2. 根據(jù)權利要求1所述的一種降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法，其特征在于步驟一污泥廢水混合物中廢水水質(zhì)COD為900 1500mg/L、總酚為800 1200mg/L、氨氮為150 200mg/L、油為10mg/L、氰化物為20 40mg/L、pH值為7. 5 8. 5。
3. 根據(jù)權利要求1所述的一種降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法，其特征在于步驟一污泥廢水混合物中廢水水質(zhì)COD為1200mg/L、總酚為1000mg/L、氨氮為170mg/L、油為10mg/L、氰化物為30mg/L、 pH值為8。
4. 根據(jù)權利要求1、2或3所述的一種降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法，其特征在于步驟一中投加藥劑的每升菌懸液a中有0. 2g MgS04 *H20、0. 08gFeS04 *H20、0. 08g MnS04 *H20、0. 2g CaCl2、0. 5g K2HP04、0. 5g KH2P04、0. 45g(NH4)2S04、0. 08g NaCl和2g葡萄糖。
5.根據(jù)權利要求4所述的一種降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法，其特征在于步驟二中鄰甲基苯酚濃度為200mg/L的篩選培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基中由0. 2gMgS04 *H20、0. 08gFeS04 H20、0. 08gMnS04 H20、0. 2gCaCl2、0. 5gK2HP04、0. 4 0. 6gKH2P04、0. 45g(NH4)2S04、0. 08gNaCl、200mg鄰甲基苯酚和余量的蒸餾水組成。
6. 根據(jù)權利要求5所述的一種降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法，其特征在于步驟六中富集培養(yǎng)基由lOOOmL蒸餾水、5g牛肉膏、10g蛋白膝、20g瓊脂和5gNaCl制成，并調(diào)節(jié)pH至7. 8。
7. 根據(jù)權利要求6所述的一種降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法，其特征在于步驟一、二、三、四、五和六中震蕩培養(yǎng)的條件均為150 180r/min。
全文摘要
一種降解鄰甲基苯酚菌種的篩選方法，它涉及一種菌種的篩選方法。它解決了現(xiàn)有生物強化法篩選的菌株對煤化工廢水中其他化學物質(zhì)的抗性低，導致鄰甲基苯酚的降解率低的問題。方法一、取污泥廢水混合物曝氣后接種并培養(yǎng)，沉降后取上層菌液，投加藥劑，培養(yǎng)后得菌懸液a；二、將菌懸液a接種并篩選培養(yǎng)，得培養(yǎng)物I；三、將培養(yǎng)物I接種并篩選培養(yǎng)，得培養(yǎng)物II；四、將培養(yǎng)物II接種于并篩選培養(yǎng)，得培養(yǎng)物III；五、將培養(yǎng)物III接種并篩選培養(yǎng)，得培養(yǎng)物IV；六、將培養(yǎng)物IV接種并富集培養(yǎng)，即得降解鄰甲基苯酚菌種。本發(fā)明獲得的菌株對煤化工廢水中其他化學物質(zhì)的抗性更強，對濃度為800mg/L的鄰甲基苯酚的降解率達到了99.8％。
文檔編號C12Q1/04GK101760504SQ200910073100
公開日2010年6月30日 申請日期2009年10月27日 優(yōu)先權日2009年10月27日
發(fā)明者方芳, 王偉, 韓洪軍 申請人:哈爾濱工業(yè)大學