專利名稱：：一種檢測(cè)胰腺癌血清標(biāo)志物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
，是一種檢測(cè)胰腺癌血清標(biāo)志物的方法，該胰腺癌血清標(biāo)志物具體為microRNA-196a。
背景技術(shù)：
：microRNA最早發(fā)現(xiàn)于1993年，是一種小的、非編碼蛋白質(zhì)的單鏈RNA，由1825個(gè)核苷酸組成。microRNA通過(guò)與mRNA3'非翻譯區(qū)(3，UTR)結(jié)合，使得靶mRNA降解或抑制其翻譯，實(shí)現(xiàn)其生物學(xué)功能。經(jīng)過(guò)20多年艱苦卓絕的努力，科學(xué)家對(duì)microRNA研究取得了突破性進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)其在動(dòng)物、植物和病毒中普遍存在，且在許多生命活動(dòng)中起著非常重要的作用。根據(jù)最新的microRNA數(shù)據(jù)庫(kù)統(tǒng)計(jì)(miRBaseRegistry13.0)，人體已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了706種microRNA。microRNA具有高度的保守性、時(shí)序性和組織特異性。近來(lái)研究表明，某些microRNA在細(xì)胞的分化發(fā)育中起著重要的作用，提示其與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。通過(guò)特定的分子生物學(xué)技術(shù)(包括Northern印記雜交、實(shí)時(shí)定量PCR，上調(diào)或下調(diào)特定microRNA的表達(dá)等)，人們發(fā)現(xiàn)microRNA表達(dá)量的變化與很多腫瘤密切相關(guān)，如肺癌、乳腺癌、肝癌、結(jié)腸癌、白血病等。功能學(xué)研究顯示microRNA可能與癌基因或抑癌基因起著同樣的作用。超過(guò)50e/。的microRNA基因位于腫瘤相關(guān)的基因組區(qū)域或者不穩(wěn)定區(qū)域，這種現(xiàn)象提示，microRNA在部分腫瘤的發(fā)生過(guò)程中起著重要的作用。盡管科學(xué)家們對(duì)于血液中DNA的研究己經(jīng)有很長(zhǎng)的歷史，但對(duì)血液中RNA的研究仍處在初始階段。由于循環(huán)血中RNA酶含量豐富，因此在其中檢測(cè)到的RNA片段常被當(dāng)做大片段RNA的降解片段。進(jìn)來(lái)，多篇相關(guān)文獻(xiàn)驗(yàn)證了循環(huán)血中miRNA的穩(wěn)定存在，并探討了循環(huán)血中microRNA對(duì)于疾病診斷及預(yù)后研究的巨大意義。(ChenX，BaY,MaL，CaiX，etal.CellRes.2008Oct;18(10):997-1006.MitchellPS，ParkinRK,KrohEM,etal.ProcNatlAcadSciUSA.2008Jul29;105(30):10513-8.GiladS，MeiriE,YogevY,etal.PLoSONE.2008Sep5;3(9):e3148.)microRNA-196a(miRNA-196a)是一種進(jìn)化上非常保守的microRNA(LaDeanaW.Hillier,WebbMiller,EwanBirney，etal.Nature.2004Dec9;432(7018):695-716.),在很多物種中廣泛的存在(人類、小鼠、大鼠、蟾蜍、斑馬魚等)。有研究表明，miR-196a在細(xì)胞的分化發(fā)育中起著重要的作用，(QiuR,LiuY,WuJY,etal.BrainResBull.2009Apr6;79(1):26-31.MansfieldJH,HarfeBD，NissenR,etal.NatGenet.2004Oct;36(10):1079-83.)已有研究證實(shí)microRNA196a表達(dá)異常與許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，例如miR-196a可以抑制ANXA1(—種腫瘤抑制蛋白，可以誘導(dǎo)凋亡，抑制細(xì)胞的增殖和遷移)的表達(dá)，從而促進(jìn)食道癌，乳腺癌等的發(fā)生。(LuthraR，SinghRR，LuthraMQetal.Oncogene.2008Nov6;27(52):6667-78.)SNP研究也表明hsa-mir-196a與非小細(xì)胞肺癌的生存期密切相關(guān)。(TianT,ShuY,ChenJ,etal.CancerEpidemiolBiomarkersPrev.2009Apr;18(4):1183-7.HuZ,ChenJ，TianT，etal.JClinInvest.2008M;118(7):2600-8.)2008年，Charles等首先在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)患者的血清中檢測(cè)到microRNA-196a(miR-196a)，并證實(shí)其在DLBCL中的表達(dá)水平顯著高T正常人，且與患者無(wú)復(fù)發(fā)生存期的長(zhǎng)短密切相關(guān)。胰腺癌惡性程度高，早期診斷困難，缺乏確實(shí)有效的方法，預(yù)后極差。手術(shù)切除是唯一可以延長(zhǎng)生存期的治療手段。不幸的是，絕大多數(shù)胰腺癌患者診斷時(shí)己屬晚期(TNM分期III、IV期)，失去了手術(shù)機(jī)會(huì)。如果能尋找到胰腺癌特異的血清標(biāo)志物，對(duì)胰腺癌的早期診斷和治療方案的確定將具有極大的臨床應(yīng)用價(jià)值。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是提供一種檢測(cè)胰腺癌血清標(biāo)志物的方法。本發(fā)明人在長(zhǎng)期研究中，首先發(fā)現(xiàn)血清中miR-196a的表達(dá)水平與胰腺癌的術(shù)后生存期密切相關(guān)，之后發(fā)現(xiàn)miR-196a的相對(duì)表達(dá)豐度可以很好的將可切除胰腺癌(TNM分期I、II期)及進(jìn)展期胰腺癌(TNM分期III、IV期)很好地鑒別開來(lái)，從而為胰腺癌的早期診斷和開腹手術(shù)指征的判斷提供了新的標(biāo)志物。本發(fā)明的具體研究如下一、取適當(dāng)數(shù)量的手術(shù)切除胰腺癌(病理證實(shí)為胰腺導(dǎo)管腺癌)病例，制作microRNA-196a表達(dá)量的標(biāo)準(zhǔn)圖譜1)制備總RNA:取外科手術(shù)證實(shí)胰腺導(dǎo)管腺癌患者的血液樣本若干例，將各血液樣本進(jìn)行室溫下靜置，離心，取血清，在加入去酶劑后，將人工合成的microRNA(Cel-miR-39)分別加入各血清中作為標(biāo)化物，使用美國(guó)MolecularResearchCenter公司的TRIREAGENTBD(catno.TB126)試劑常規(guī)抽提總RNA，用去酶水將其配成40ul的溶液，-80°0冰箱保存。2)對(duì)各血清樣本中microRNA-196a的表達(dá)豐度進(jìn)行測(cè)定使用AppliedBiosystems公司的microRNA檢測(cè)試劑盒(TaqManMicroRNAAssay),以及熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)，測(cè)得所得胰腺癌血清樣本中microRNA-196a的表達(dá)豐度(Ct值)，用Ctl96a表示。并用同樣的方法測(cè)得加入的標(biāo)化物Cel-miR-39的Ct值Ct39。3)制作胰腺導(dǎo)管腺癌患者血清中MicroRNA-196a表達(dá)量的標(biāo)準(zhǔn)圖譜使用(60-Ctl96a)作為血清樣本中microRNA-196a的初步表達(dá)度量，并使用各樣木中測(cè)得的Ct39對(duì)其(60-Ctl96a)進(jìn)行標(biāo)化，得到各樣本的相對(duì)表達(dá)豐度(60-Ct)。二、對(duì)各血清樣本microRNA-196a的相對(duì)表達(dá)豐度進(jìn)行研究，探討其與胰腺導(dǎo)管腺癌TNM分期間的關(guān)系對(duì)所有的入組胰腺導(dǎo)管腺癌患者進(jìn)行隨訪，記錄術(shù)后存活時(shí)間及生存情況。根據(jù)所得(60-Ct)選定適當(dāng)?shù)慕缰?，將所有胰腺癌病例分為高表達(dá)microRNA-196a組和低表達(dá)microRNA-196a組，使用Kaplan-Meier生存曲線和log-rank統(tǒng)計(jì)學(xué)方法驗(yàn)證血清中microRNA-196a含量對(duì)胰腺導(dǎo)管腺癌患者預(yù)后的影響。根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)第六版TNM分級(jí)系統(tǒng)(KatzMH,HwangR,FlemingJB，EvansDB.CACancerJClin.2008Mar-Apr;58(2):l11-25.)，對(duì)所得胰腺導(dǎo)管腺癌病例進(jìn)行臨床分期，制作可切除胰腺癌患者及進(jìn)展期胰腺癌患者血清中microRNA-196a的表達(dá)圖譜，并使用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)兩組間表達(dá)量的差別進(jìn)行比較，驗(yàn)證其在判斷胰腺導(dǎo)管腺癌手術(shù)適應(yīng)證方面的價(jià)值，并確定適當(dāng)?shù)脑\斷界值。該診斷界值為17.80(60-Ct)，其鑒別進(jìn)展期胰腺癌的敏感性為100%，特異性為73.9%。三、早期檢測(cè)和判斷胰腺導(dǎo)管腺癌手術(shù)適應(yīng)證的方法按以上方法檢測(cè)未知血漿標(biāo)本中的microRNA-196a表達(dá)豐度值(60-Ct)，對(duì)照上述胰腺導(dǎo)管腺癌可切除組和進(jìn)展期組microRNA-196a表達(dá)量的標(biāo)準(zhǔn)圖譜，如果落入可切除組(TNM分期I、II期)血清microRNA-196a的表達(dá)豐度范圍內(nèi)，則將其歸為可切除組，否則歸為不可切除組。本發(fā)明提供一種檢測(cè)胰腺癌血清標(biāo)志物的方法，該胰腺癌血清標(biāo)志物是microRNA-196a，該方法包括以下步驟A)待檢血液樣本，離心，取血清；B)在經(jīng)去酶劑處理的血清中加入Cel-miR-39作為標(biāo)化物，抽提總RNA;C)用TaqmanmicroRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒對(duì)抽提的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)；D)測(cè)定血清中microRNA-196a的標(biāo)準(zhǔn)化相對(duì)表達(dá)豐度(60-Ct):用熒光實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)技術(shù)，測(cè)得所得血清中microRNA-196a的表達(dá)豐度(Ct值)，用Ctl96a表示；并用同樣的方法測(cè)得加入的標(biāo)化物Cel-miR-39的Ct值，用Ct39表示；計(jì)算各血清樣本中microRNA-196a的初步定量值(60-Ctl96a)，然后比較得出各樣本中最小的Ct39值(Ct39min)，計(jì)算出血清中microRNA-196a的標(biāo)準(zhǔn)化相對(duì)表達(dá)豐度(60-Ct)，(60-Ct)=(60-Ctl96a)-(Ct39-本發(fā)明的檢測(cè)方法不僅可以定量檢測(cè)出胰腺癌的特異性血清標(biāo)志物一一microRNA-196a，而且具有檢測(cè)方便、敏感性好、準(zhǔn)確率高等特點(diǎn)，對(duì)胰腺癌的早期診斷和確定治療方案中將具有極大的臨床應(yīng)用價(jià)值。圖1為胰腺癌可切除組與進(jìn)展組血清中microRNA-196a表達(dá)豐度的比較(箱圖)圖2為陰性對(duì)照組(6種胰腺癌相關(guān)性microRNA)在胰腺癌可切除組與進(jìn)展組表達(dá)豐度的比較(散點(diǎn)圖)圖3為胰腺癌患者術(shù)后Kaplan-Meier生存曲線圖4為根據(jù)散點(diǎn)圖及ROC曲線確定microRNA-196a作為剖腹手術(shù)適應(yīng)證判斷的表達(dá)豐度界值判定(A為散點(diǎn)圖，B為RQC曲線圖)具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述，但本發(fā)明的實(shí)施不僅限于此。實(shí)施例1:1.血清采集取長(zhǎng)海醫(yī)院外科手術(shù)證實(shí)胰腺導(dǎo)管腺癌患者的血液樣本31份，將各全血樣本進(jìn)行室溫下靜置(30分鐘至2小時(shí))，4"C下1200xg離心20分鐘，每份樣本取上層血清500ul，轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中，-80"冰箱內(nèi)保存。2.血清中RNA抽提每份血清樣本取50)al，加入750(ilTRIREAGENTBD(MolecularResearchCenter公司)和20|al5N醋酸，混勻后加入5pl濃度為50pmol/L的Cel-miR-39(人工合成的microRNA，由Qiagen公司提供，以去除人為操作造成的檢測(cè)差異)，震蕩混勻，室溫下靜置5分鐘，加入20(^1氯仿，震蕩混勻，室溫下靜置5分鐘，4°C，12000xg離心15min，提取上清液，加入4plDNAmate(TAKARA公司)，后加入與上清液等體積的異丙醇混勻，-2(TC靜置30min，4'C，12000xg離心15min，去上清，向沉淀中加入lml75。/。乙醇清洗沉淀，4°C，7500xg離心洗滌沉淀5min。去上清，將沉淀室溫晾干后加入去酶水充分溶解，測(cè)定所得RNA的濃度。3.RT-PCR反應(yīng)使用AppliedBiosystems公司的TaqmanmicroRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒對(duì)提取的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。15^1反應(yīng)體系中包含2^1所提取RNA的溶液，0.15^1的dNTPs(100mM)，lpi的反轉(zhuǎn)錄酶(50U/ial),0.19^il的RNase抑制劑，1.5^110xRTbuffer,7.16(il去酶水，3(^1stem—loop5xRTprimer(cel-miR畫39，4373455;has曙miR-196a，43730卯；has-miR-155,4395459;has-miR-196a，4373104;has-miR-181a,4373117;has-miR-181b,4373116;has-miR-2196a,4373077;has-miR-222,4395387;has-miR-16,43731196a;AppliedBiosystems)。使用AppliedBiosystems公司9700熱循環(huán)儀進(jìn)行16°C30分鐘，42°C30分鐘，85°C5分鐘的反轉(zhuǎn)錄。對(duì)反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行1:5稀釋后，取5^1作為實(shí)時(shí)定量PCR的模板，使用AppliedBiosystems公司的TaqManUniversalPCRMasterMix試劑盒進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR鑒定。PCR反應(yīng)在AppliedBiosystems7900HT序列檢測(cè)系統(tǒng)中進(jìn)行。PCR反應(yīng)體系為20^1，包含5^1稀釋后的RT產(chǎn)物，10ul2><TaqManUniversalPCRMasterMix,1.OOulTaqManMicroRNAAssays20xTaqManAssay，4|il去酶水。將所有的反應(yīng)體系首先進(jìn)行95'C10分鐘的預(yù)熱，然后進(jìn)行每循環(huán)95°C15秒，6CTC1分鐘，共60循環(huán)的PCR反應(yīng)。所有的反應(yīng)重復(fù)三次，使用7500軟件系統(tǒng)(版本2.0丄AppliedBiosystems)進(jìn)行分析，每次取固定的閾值，測(cè)定各樣本中microRNA對(duì)應(yīng)的Ct值，三次測(cè)定中的最小值作為該樣本最終的Ct值。4.實(shí)時(shí)定量PCR數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)化處理用上述方法先檢測(cè)各例樣本的MicroRNA-196a的Ct值(Ctl96a)及標(biāo)化物Cel-miR-39的Ct值(Ct39)，計(jì)算各血清樣本中microRNA-196a的初步定量值(60-Ctl96a)，然后比較得出各樣本中最小的Ct39值(Ct39min)，即可計(jì)算出所有樣本中microRNA-196a的標(biāo)準(zhǔn)化相對(duì)定量值(60-Ct)。注(60-Ct)=(60-Ctl96a)-(Ct39-Ct39min)5、胰腺導(dǎo)管腺癌患者血清中microRNA-196a含量在判斷剖腹手術(shù)適應(yīng)證中的應(yīng)用價(jià)值驗(yàn)證及診斷界值的確定5.1通過(guò)RT-PCR及數(shù)據(jù)分析對(duì)所有胰腺導(dǎo)管腺癌血清樣本中microRNA-196a進(jìn)行相對(duì)定量測(cè)定。為更好地說(shuō)明問(wèn)題，另取6個(gè)胰腺癌組織中高表達(dá)的microRNA(miR-21、155、181a、181b、221、222)作為陰性對(duì)照，測(cè)定所有microRNA的標(biāo)準(zhǔn)化相對(duì)定量值(60-Ct)，詳見表l。根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)第六版TNM分級(jí)系統(tǒng)對(duì)胰腺癌患者進(jìn)行臨床分期(具體數(shù)值及臨床數(shù)據(jù)見表2)，結(jié)合分期情況，將所有胰腺導(dǎo)管腺癌患者分為兩組——可切除組(TNM分期I、II期)及進(jìn)展期組(TNM分期III、IV期)，然后進(jìn)行兩組間所有7種microRNA的含量比較。microRNA-196a結(jié)果如圖1，陰性對(duì)照結(jié)果如圖2。結(jié)果表明進(jìn)展期組血清中microRNA-196a的表達(dá)水平顯著高于可切除組(P=0.002)，達(dá)60.96倍(圖1)，而作為陰性對(duì)照的6個(gè)microRNA在兩組間沒(méi)有差別(圖2)5.2由于TNM分期與胰腺導(dǎo)管腺癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，因此，我們對(duì)研究的31例患者的術(shù)后生存時(shí)間及存活情況進(jìn)行了隨訪，記錄術(shù)后存活時(shí)間及生存情況(表3)。根據(jù)所得病例統(tǒng)計(jì)情況及患者血清中microRNA-196a的表達(dá)水平，我們嘗試選定16.7作為(60-Ct)的界值，將所有胰腺癌病例分為高表達(dá)microRNA-196a組和低表達(dá)microRNA-196a組，使用Kaplan-Meier生存曲線和log-rank統(tǒng)計(jì)學(xué)方法驗(yàn)證血清中microRNA-196a含量對(duì)胰腺導(dǎo)管腺癌患者預(yù)后的影響。結(jié)果表明高表達(dá)量組平均生存期為7.00個(gè)月(95%可信區(qū)間5.66-8.34個(gè)月)，低表達(dá)量組平均生存期為12.00個(gè)月(95。/?？尚艆^(qū)間7.06-16.94個(gè)月)，二者之間差異顯著(P=0.014)。高表達(dá)量組一年生存率為0.0%，而低表達(dá)量組一年生存率為31.2%。這與我們TNM分期的結(jié)果一致，進(jìn)一步證實(shí)了胰腺導(dǎo)管腺癌患者血清中microRNA-196a在判斷剖腹手術(shù)適應(yīng)證方面的應(yīng)用價(jià)值。5.3在成功判定血清中microRNA-196a在確定胰腺導(dǎo)管腺癌手術(shù)適應(yīng)證潛在價(jià)值的基礎(chǔ)上，對(duì)其進(jìn)行ROC分析，AUC下面積為0.859，診斷準(zhǔn)確度為中等，取診斷界值為17.80(60-Ct)，其鑒別進(jìn)展期胰腺癌的敏感性為100%,特異性為73.9%，見圖4。表1:7種胰腺導(dǎo)管腺癌相關(guān)性microRNA的標(biāo)準(zhǔn)化相對(duì)定量值患者胰腺癌相關(guān)性microRNA標(biāo)準(zhǔn)化相對(duì)定量值(60-Ct)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>2516.8031.5831.1226.6924.7121.9523.152622.4534.3728.4627.5429.3631.2428.832715.1733.6228.0326.3526.4830.6527.552813.5234.5230.8429.2328.6330.2926.99299.0831.0626.3624.6125.8126.1524.863025.1030.5129.1224.8828.9522.5718.163116.3334.7829.2023.0929.1121.0727.06表2:31例胰腺導(dǎo)管腺癌患者的臨床數(shù)據(jù)及臨床分期序號(hào)性別年齡TNM分期臨床分期1女45T3N1M1IV2男56T2N0M0IB3男72T3N1M1IV4男54T3N0M0IIA男50T3N0M0IIA6女58T3N1M1IV女68T4N1M0III8男66T3N0M0IIA9女61T3N1M1IV10女50T2N1M0IIB11男50T2N0M0IB12女72T3N1M1IV13男67T2N0M0IB14男68T3N1M0IIB15男56T2N0M0IB16男55T3兩M0IIA17女67T3N腦IIB18女55T3N0M0IIA19男73T2N0M0IB20男54T2N1M0IIB21女43T2N0M0IB22女51T3N0M0IIA23男69T2N0M0IB24男62T4N1M1IV25女62T2N1M0IIB26男60T3N1M0IIB27女76T2N0M0IB28女61T2N腦IIB29女72T3N0M0IIA30男56T4N畫m31男54T2兩M0IB表3:31例胰腺導(dǎo)管腺癌患者術(shù)后隨訪情況(截止至2009年6月)'患名.編號(hào)診斷日期死亡日期隨訪時(shí)間(月)110/18/200702.20084209/05/2007失訪08/30/200711.20073410/10/200703.200916.5509馬/200705.20088.7612/04/200707.200811/28/200705.20086.1811/08/200711.200812911/01/200702.20081004/16/2008失訪1104/22/200801.20098.51205/19/200811.20085.91308/05/2008存活10.61410/07/2008存活8.51511/05/2008存活7.61611/11/2008存活7.41701/13/2009失訪1808/28/200806.2009101909/04/200805.20098.62009/30/2008存活9.82111/12/2008存活7.42211/13/200806.200972311/25/2008存活72411/25/200803.20093.52512/04/200804.20094.62612/23/2008存活62712/24/200802.20092.72811/18/2008存活7.22912/01/200802.20092.13011/12/2008存活7.43108/26/2008存活10權(quán)利要求1、一種檢測(cè)胰腺癌血清標(biāo)志物的方法，其特征在于該胰腺癌血清標(biāo)志物是microRNA-196a，該方法包括以下步驟A)待檢血液樣本，離心，取血清；B)在經(jīng)去酶劑處理的血清中加入Cel-miR-39作為標(biāo)化物，抽提總RNA；C)用TaqmanmicroRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒對(duì)抽提的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)；D)測(cè)定血清中microRNA-196a的標(biāo)準(zhǔn)化相對(duì)表達(dá)豐度(60-Ct)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)技術(shù)，測(cè)得所得血清中microRNA-196a的表達(dá)豐度(Ct值)，用Ct196a表示；并用同樣的方法測(cè)得加入的標(biāo)化物Cel-miR-39的Ct值，用Ct39表示；計(jì)算各血清樣本中microRNA-196a的初步定量值(60-Ct196a)，然后比較得出各樣本中最小的Ct39值(Ct39min)，計(jì)算出血清中microRNA-196a的標(biāo)準(zhǔn)化相對(duì)表達(dá)豐度(60-Ct)，(60-Ct)＝(60-Ct196a)-(Ct39-Ct39min)。全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
，是一種檢測(cè)胰腺癌血清標(biāo)志物的方法。胰腺癌惡性程度高，早期診斷困難，缺乏確實(shí)有效的方法，預(yù)后極差。手術(shù)切除是唯一可以延長(zhǎng)生存期的治療手段。不幸的是，絕大多數(shù)胰腺癌患者診斷時(shí)已屬晚期(TNM分期III、IV期)，失去了手術(shù)機(jī)會(huì)。本發(fā)明目的是提供一種檢測(cè)胰腺癌血清標(biāo)志物的方法，并將該方法用于胰腺癌的早期診斷和開腹手術(shù)指征的臨床判斷中。本發(fā)明經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)血清中miR-196a的表達(dá)水平與胰腺癌的術(shù)后生存期密切相關(guān)，之后發(fā)現(xiàn)miR-196a的相對(duì)表達(dá)豐度可以很好的將可切除胰腺癌(TNM分期I、II期)及進(jìn)展期胰腺癌(TNM分期III、IV期)很好地鑒別開來(lái)，因此利用本發(fā)明的方法可以定量檢測(cè)胰腺癌血清標(biāo)志物microRNA-196a，而且檢測(cè)方便、敏感性好、準(zhǔn)確率高。文檔編號(hào)C12Q1/68GK101613748SQ20091005269公開日2009年12月30日申請(qǐng)日期2009年6月9日優(yōu)先權(quán)日2009年6月9日發(fā)明者孔祥毓,李兆申,杜奕奇,寒林,王國(guó)坤,清荊,軍高申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)