專利名稱：：高粱抗蚜基因緊密連鎖的scar標(biāo)記及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及高粱抗蚜基因緊密連鎖的SCAR標(biāo)記及其應(yīng)用，特別是高粱抗蚜基因的RAPD標(biāo)記以及由該標(biāo)記轉(zhuǎn)化的SCAR標(biāo)記，以及該標(biāo)記在抗岈品種鑒定中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：高粱(Sorghumbicolor(L.)Moench)是世界上重要的禾谷類作物之一，主要分布在熱帶干旱和半干旱地區(qū)，溫帶和寒帶地區(qū)也有種植。從世界范圍看，它僅次于小麥、水稻、玉米、大麥，居第五位。高粱岈蟲[Melanaphissacchari(Guen6e)]是我國高粱生產(chǎn)區(qū)經(jīng)常發(fā)生的主要蟲害之一，一般造成減產(chǎn)15%左右，嚴(yán)重發(fā)生時減產(chǎn)達(dá)30%以上。過去采用化學(xué)藥劑防治既費時、費工又產(chǎn)生抗藥性，污染環(huán)境，因此選用抗性品種是最為有效的途徑。引進(jìn)新的抗性基因、培育抗性品種既可提高作物對蚜蟲的抵抗能力，又有利于環(huán)境保護(hù)。植物病蟲害抗性的分子標(biāo)記研究和利用非?；钴S并富有成效，許多學(xué)者對水稻、小麥、玉米等作物主要農(nóng)藝性狀基因進(jìn)行識別、定位和分離研究，構(gòu)建它們的基因圖譜，取得了較大的進(jìn)展(王京兆1995;李立家1998;李松濤1995;黎裕2004;儀治本2007;楊新泉2007)。在高粱方面，2000年Bhattramakki等將高粱的RFLP標(biāo)記和SSR標(biāo)記整和在一起，建立了一個含有232個SSR標(biāo)記的基因圖譜，并將這些標(biāo)記定位于高粱的十條染色體上，含蓋1406.3cM的染色體基因組。CatherineS等(1999)利用RFLP方法分析美國高粱對于麥二叉蚜的抗性，得出抗蚜基因至少分布于9個位點，8個連鎖群，其中多數(shù)是不完全顯性的。2006年，常金華等用已定位到連鎖群上的微衛(wèi)星標(biāo)記和分離群體分析法，對抗蚜基因進(jìn)行了連鎖分析，發(fā)現(xiàn)1個與抗蚜基因連鎖的微衛(wèi)星標(biāo)記(SSR標(biāo)記)，與抗蚜基因的遺傳距離為8.7cM。長期以來，作物育種的選擇都是依靠表現(xiàn)型進(jìn)行的，而分子標(biāo)記輔助選擇MMAS(MolecularrMarker-AssistedSelection),將給傳統(tǒng)的育種研究帶來重要的變革。本發(fā)明將RAPD和SCAR兩種標(biāo)記技術(shù)結(jié)合起來，以抗高粱岈的國外高粱品種BTAM428為試材，篩選和高粱抗蚜基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，并將該標(biāo)記應(yīng)用于高粱抗蚜品種的早期選擇，淘汰感蚜基因型，加快育種進(jìn)程，節(jié)省選育所需的試驗用地和成本，具有較大的實用價值，同時填補高粱抗蚜基因分子標(biāo)記輔助選擇研究的國、內(nèi)外空白。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，而通過最為有效的途徑選用抗蚜品種來解決采用化學(xué)藥劑防治高粱蚜蟲費工、費時、費錢，又產(chǎn)生抗藥性，污染環(huán)境的技術(shù)難題。本發(fā)明的目的一應(yīng)用PCR擴(kuò)增技術(shù)獲得了兩個與高粱抗蚜基因緊密連鎖的OPN-07m和OPN-07^標(biāo)記，核苷酸序列為圖所示，并通過分子作圖構(gòu)建了抗蚜基因的連鎖圖。本發(fā)明的目的二將RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定性、重復(fù)性強(qiáng)的SCAR標(biāo)記，并用此標(biāo)記對&代及部分高粱抗感品種進(jìn)行了檢測，建立抗感品種篩選的快速鑒定標(biāo)準(zhǔn)，為實踐了分子標(biāo)記輔助育種、縮短育種周期提供了技術(shù)保障。本發(fā)明的目的三應(yīng)用該方法選育抗蚜優(yōu)良品系，已應(yīng)用該方法選育抗蚜優(yōu)良品系，并已應(yīng)用生產(chǎn)。本發(fā)明的目的是通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)的(1).對高粱后代的抗蚜性進(jìn)行田間及室內(nèi)的生理生化鑒定，從而建立起F2代的抗感群體。(2).確定提取高粱葉片總DNA的最佳方法。即CTAB-II法。(3).應(yīng)用PCR擴(kuò)增儀，建立并優(yōu)化了高粱RAPD反應(yīng)體系，獲得了穩(wěn)定高效的RAPD擴(kuò)增結(jié)果。(4).獲得了與高粱抗蚜基因緊密連鎖的RAPD標(biāo)記。應(yīng)用RAPD技術(shù)篩選500個隨機(jī)引物，共擴(kuò)增出1614條DNA譜帶，其中引物OPN-08^和PN-07m與抗蚜基因緊密連鎖。(5).對抗蚜基因的RAPD標(biāo)記進(jìn)行克隆測序。將特異的DNA片段OPN-07^和OPN-08373回收純化之后，克隆于pMD18-TVector中，測序結(jié)果表明，兩片段長分別為727bp和373bp。故將這兩個標(biāo)記命名為OPN-07727、OPN-08373。(6).將抗蚜基因的RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記。對F3代及部分抗感品種進(jìn)行SCAR檢測?？剐云贩N中也得到了OPN-07727，OPN-08373二條特異譜帶，而感性品種中則未見，從而為分子標(biāo)記輔助育種提供了可靠的依據(jù)。(7).構(gòu)建了抗蚜基因的連鎖群，為克隆該基因奠定了堅實的基礎(chǔ)，這2個標(biāo)記一方面可作為染色體步移的起點。另一方面，可在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步篩選更近的分子標(biāo)記。豐富抗蚜基因的連鎖群，并進(jìn)而利用染色體登陸法對該基因進(jìn)行克隆。(8).對&代及部分抗感品種進(jìn)行SCAR檢測。將&代抗感群體留種，種于田間，取在孕穗期F3植株葉片提取總DNA進(jìn)行SCAR分析，得到了F3抗感個體的特異性譜帶，同時在部分抗性品種中也得到了OPN-07m，OPN-08^二條特異譜帶，而感性品種中則未見，從而為分子標(biāo)記輔助育種提供了可靠的依據(jù)。本發(fā)明首次對高粱優(yōu)異抗蚜種質(zhì)BTAM428的抗蚜性進(jìn)行了分子標(biāo)記，發(fā)現(xiàn)了兩條高抗蚜蟲的DNA特異譜帶，并構(gòu)建了抗蚜基因圖譜，為分離和克隆抗蚜基因，實現(xiàn)抗蚜轉(zhuǎn)基因育種奠定了基礎(chǔ)。與此同時本發(fā)明將這兩個標(biāo)記應(yīng)用于抗蚜種質(zhì)鑒定，作為高粱抗蚜鑒定的輔助手段，節(jié)省了大量人力、物力資源。經(jīng)計算節(jié)省80%的田間育種工作量和70%的試驗用地。具有廣闊的推廣應(yīng)用前景。圖1為本發(fā)明的RAPD引物OPN-07727標(biāo)記擴(kuò)增抗蟲感蟲基因組DNA的電泳圖譜。圖2為本發(fā)明的RAPD引物OPN-07373標(biāo)記擴(kuò)增抗蟲感蟲基因組DNA的電泳圖4圖3為本發(fā)明的RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記OPN-07727標(biāo)記擴(kuò)增抗蟲感蟲基因組DNA的電泳圖譜。圖4為本發(fā)明的RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記OPN-07373標(biāo)記擴(kuò)增抗蟲感蟲基因組DNA的電泳圖譜。圖5為本發(fā)明的RAPD標(biāo)記與抗蚜基因的連鎖圖譜。圖6為本發(fā)明應(yīng)用OPN-07727SCAR標(biāo)記對已經(jīng)鑒定的抗蟲感蟲品種基因組DNA的電泳圖譜。圖7為本發(fā)明應(yīng)用OPN-07373SCAR標(biāo)記對已經(jīng)鑒定的抗蟲感蟲品種基因組DNA的電泳圖譜。具體實施例方式1.材料和方法1.1供試材料高粱試驗試材BTAM428(抗親)、ICS-12B(感親)由遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)室提供。BTAM428來源于美國得克薩斯州A&M大學(xué)農(nóng)學(xué)系，經(jīng)多年鑒定高抗麥二叉蚜(在美國侵染高粱的優(yōu)勢小種)，20世紀(jì)80年代初引入我國后經(jīng)遼寧省農(nóng)科院植保所和高粱所多年鑒定，高抗甘蔗黃蚜(我國高粱蚜蟲優(yōu)勢小種)，抗蚜性為一級。列為最佳抗蚜源。試材田間隨機(jī)排列，設(shè)單行區(qū)，小區(qū)行長5m，每區(qū)不少于30株，除防治粘蟲外，一律不施藥。6月20日7月20日蚜蟲大發(fā)生期間，先后3次人工接蟲逐漸鑒定&的抗蚜性。首次調(diào)查前1015天，取有無翅若蚜20頭的小葉片，去掉天敵，卡在接蚜株下數(shù)第三片葉腋間。每區(qū)從第三株起連續(xù)接10株，調(diào)查葉蚜量，依葉蚜量對&劃分抗性等級，盛發(fā)期調(diào)查23次。確定抗性等級選擇抗性為l級的高抗單株98株，抗性為9級的高感單株34株。表1抗蚜性分級標(biāo)準(zhǔn)Table1Thestandardofresistantaphid5<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注抗蚜性標(biāo)準(zhǔn)來自全國農(nóng)作物品種資源鑒定專業(yè)組制定的高粱抗蚜性分級標(biāo)準(zhǔn)。Notes:Thestandardofresistantaphidofsorghumdrawupbyspecializecertificationstandardofthewholenationcropvarietalresource.1.2藥品、儀器與設(shè)備10-mer弓|物A-Z(除去B組)購自O(shè)peron公司。Taq酶購自PE公司。PCR儀美國PE公司的"PE9600"。紫外透射反射分析儀，型號NT。1.3實驗總體設(shè)計近等基因池的建立一基固組DNA的提取(CTAB法)一RAPD擴(kuò)增一瓊脂糖電泳一電泳譜帶分析一數(shù)據(jù)處理分析一多態(tài)性片段的回收、純化、克隆與鑒定、序列分析—RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記一用于抗性品種鑒定一確定抗感鑒定方法一選育新品種1.4近等基因池的建立應(yīng)用分離群體分組分析法(BulkedSegregationAnalysis)即BSA法。將F2代分為抗池及感池，抗池和感池是分別由F2代98株抗岈株葉片及34株感岈株葉片提取DNA混勻而成，制備時每株均取2ngDNA。1.5RAPD分析PCR擴(kuò)增反應(yīng)系統(tǒng)總體積為25iiL，含1倍擴(kuò)增緩沖液，1.5UTaq酶，50ng的模板DNA，100iimol/L的dNTP，0.2ymol/L引物，上覆礦物油。反應(yīng)程序為預(yù)變性94°C3min—變性94°C20s，退火38°C30s，延伸72°Clmin，循環(huán)35次一延伸72°C10min。用Operon公司生產(chǎn)的A-Z(除B組外)共500個引物，對親本及抗池、感池4個樣品進(jìn)行分析，如4個樣品擴(kuò)增出的RAPD產(chǎn)物帶型相同，則無多態(tài)性，而如擴(kuò)增產(chǎn)物中的帶型有差異，則對這些引物進(jìn)行重復(fù)并進(jìn)行連鎖分析。1.6產(chǎn)物檢測擴(kuò)增產(chǎn)物在1.4%含0.5iig/mLEB的瓊脂糖凝膠中電泳，電壓為每厘米3-4伏，電泳結(jié)果用紫外透射反射分析儀觀察。61.7連鎖分析當(dāng)某一引物在鑒定的抗蚜基因的F2代抗感分離群體(即抗池及感池)及抗感親本間選到穩(wěn)定的多態(tài)性片段(RAPD)標(biāo)記后，取&抗、感單株各10株，用篩選到的引物進(jìn)行分析。如果存在連鎖關(guān)系進(jìn)一步擴(kuò)大群體分析，統(tǒng)計單株的RAPD標(biāo)記，計算重組率和遺傳距離。若RAPD標(biāo)記與抗病基因緊密連鎖，則進(jìn)行多態(tài)性片段回收。交換型抹數(shù)重組率=抗性林?jǐn)?shù)+感性株^100%交換型株數(shù)=抗性單株樣本群中不含多態(tài)性譜帶的株數(shù)+感性單株樣本群中含有多態(tài)性譜帶的株數(shù)。再通過Mapmaker3.0計算機(jī)軟件分析，可將重組率轉(zhuǎn)換為遺傳距離即是圖距單位(centimorgan，cM)。1.8多態(tài)性片段的回收、純化、克隆與鑒定將回收純化的片段克隆于pMD18-TVector載體上。在ABIPRISMTM377XL測序儀上進(jìn)行測序。1.9RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記根據(jù)測序結(jié)果，從序列兩端按引物的要求設(shè)計出一對20-24堿基的引物，引物由寶生物工程(大連)有限公司合成。SCAR的PCR擴(kuò)增條件擴(kuò)增反應(yīng)物總體積為25iiL，含2.5iiL擴(kuò)增緩沖液；5UTaq酶，50ng的模板DNA，100ymol/L的dNTP，0.2ymol/L的引物I，0.2ymol/L的引物II，上覆20iiL礦物油。通過對特異引物OPN-07和OPN-08的PCR反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化，SCAR反應(yīng)程序分別定為預(yù)變性94°C3min—變性98°C30s，退火60°C59s，延伸72°C59min，循環(huán)35次一延伸72°ClOmin。預(yù)變性94°C3min—變性98°C30s，退火52°C59s，延伸72°C59min，循環(huán)35次—延伸72°ClOmin。用這對引物檢測BTAM428(抗親)、ICS-12B(感親)及二者雜交后的F2抗池、感池和單株，比較其與RAPD分析的一致性和可靠性。1.10對高梁F3代及部分抗感品種的SCAR分析在孕穗期分別選F3代抗感單株20株，進(jìn)行SCAR分析。取已鑒定的穩(wěn)定的抗蚜保持系TAM428，LR9198,5-27，2000-3259B-1及感蚜品種ICS-12B，矮四，TX622B，三尺三進(jìn)行SCAR分析。實施例1:抗蚜基因連鎖的RAPD多態(tài)性標(biāo)記的獲得應(yīng)用RAPD技術(shù)篩選500個隨機(jī)引物，共擴(kuò)增出1614條DNA譜帶，其中引物OPN-07，OPN-08和OPY-14的擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)具有連鎖性的多態(tài)性片段，對這3條引物進(jìn)行了進(jìn)一步的連鎖分析，共分析了&代分離群體132株，其中98株抗蚜，34株感蚜。0PN-07727、OPN-08373及OPY-146oo的重組率分別為3.0X、6.1%及9.1%。應(yīng)用Mapmaker3.0軟件包換算成圖距單位分別為3.2cM、6.5cM和11.7cM。OPN-07727、OPN-08^的F2單株擴(kuò)增結(jié)果見圖1、2。從圖1可見，抗親(1)、抗池(3)及抗蚜單株(6，9，11，13，15，16，18)都擴(kuò)增出了OPN-07^這條多態(tài)性片段，而感親(2)、感池(4)及感蚜單株(5，10，12，14，17)則未擴(kuò)增出這條多態(tài)性片段。其中第7譜帶為回收的OPN-07m多態(tài)性片段。圖l中抗親-l，感親-2，抗池-3，感池-4，F(xiàn)2抗單株(6，9，11，13，15，16，18)，？2感單株(5，10，12，14，17)，Marker(100bpDNAladderplus)。從圖2可見，抗親(1)、抗池及抗蚜單株(5)都擴(kuò)增出了OPN-08373這條多態(tài)性片段，而感親(2)、感池(4)及感蚜單株(6)，都未擴(kuò)增出這條多態(tài)性片段。圖2中抗親-l，感親-2，F(xiàn)2抗池-3，F(xiàn)2感池-4，F(xiàn)2抗蚜單株-5，？2感蚜單株-6，Marker(PBR322/BstNI)-7。實施例2:與抗蚜基因連鎖的RAPD標(biāo)記的回收，克隆及測序?qū)PN-07727和OPN-08373二條多態(tài)性片段回收、克隆和測序。測序結(jié)果OPN-08擴(kuò)增的多態(tài)性片段為373bp，而OPN-07擴(kuò)增出的多態(tài)性片段測定出的核苷酸序列如序列見表2和表3。根據(jù)測序結(jié)果將這兩個多態(tài)性片段命名為OPN-07727和OPN-08373。圖中黑體劃線堿基為隨機(jī)引物序列。表2RAPD標(biāo)記OPN-07727的測序結(jié)果Table2SequencedresultsofpolymorphismfragmentofOPN-071AAACGACGGCCAGTGCCAAGCTTGCATGCCTGCAGGTCGACGATTCAGCC101TGCTGGAATCTACTAAGCATTAACTGGGACAAATCCCTCCAACCTTTTGG151TATGCTGATCAAAGTTAGAACAGATTTTGGAATGCACATCTTTAGAGAAA201TTTTCATCTCGGCTTGCTGGTCAATCTGGAAAGTCAGAAATAGAATTATC251TTTGACAATAAGGCACTCTCCTTAGTTGAATGGAAATTGGTCCAAAAAGA301GGATCTTAGACTGGTTTGCATTAGGGCTAAGAGGAAAATTGCAGAACCCT401TTGGCCGTGAGGGCCTTGTACCCCCTATTCTAACGGAGCATCTAATTAAG551TATGACACAACTAGTACATGCGCTTATTGGCCAGAACCCTGTCTTTCATG8651GCGATGCTTTGGAGAATGGAAGCATTTCTACCTATTTTGTCGGCACAAAA701GGCTAACTCACAGACATTGTAAGTTTGTAACGAATGCATTAGTGCAAATT751TGTTTCCATGAACTCTGGGCTGAATCTCTAGAGGATCCCCGGGTACCGAG表3RAPD標(biāo)記OPN-08373的測序結(jié)果Table3SequencedresultsofpolymorphismfragmentofOPN-0751TCAGCTCGAAAAGAAATAGTGGAGTCATAAGAGTACCTAAAAAGATGCTTCTTATAAATTTTTGATAATTGATATATTTAGGCCGCCATCCATCTTGTTGCATCTTGTTG401TTTATTATTGGAGCTGAGGTAATCGTCGACCTGCAGGCATGCAAGGCTTGG實施例3:RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記根據(jù)特異片段OPN-07727、OPN-08373兩端序列和引物設(shè)計原則(避免發(fā)夾結(jié)構(gòu)，適當(dāng)?shù)腉+C含量)，在序列兩端設(shè)計了兩對特異性引物。用這對引物檢測BTAM428(抗親)、ICS-12B(感親)及二者雜交后的F2抗池、感池和單株，結(jié)果表明SCAR標(biāo)記和抗岈基因的RAPD標(biāo)記的連鎖性完全一致，以O(shè)PN-08373a和OPN-08373b為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增(即SCAR分析)，結(jié)果見圖3。從圖3中可見，抗親(l)、抗池(3)及抗蚜單株(5-13)都擴(kuò)增出OPN-08^—條譜帶，而感親(2)、感池(4)及感蚜單株(14-22)都未擴(kuò)增出任何片段。圖4是以O(shè)PN-07727a和OPN-07727b為弓|物進(jìn)行的PCR擴(kuò)增(即SCAR分析)，結(jié)果可見，抗親(l)、抗池(3)及抗蚜單株(513)擴(kuò)增出了OPN-07m譜帶，而感親(2)、感池(4)及感蚜單株(1422)均未有此譜帶的出現(xiàn)。說明SCAR標(biāo)記特異性強(qiáng)，PCR產(chǎn)物只為一條727bp或373bp的條帶，易于區(qū)分。這樣就順利地將RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為了穩(wěn)定性重復(fù)性很好的SCAR標(biāo)記。實施例4:抗蚜基因連鎖群的建立OPN-07727、OPN-08373及OPY-146。。與抗蚜基因的圖距單位分別為3.2cM、6.5cM、11.7cM。3個分子標(biāo)記與抗蚜基因的連鎖順序為OPN-08373-抗蚜基因-OPN-07727-OPY-146。。。繪制連鎖圖見圖5:實施例5:幾種抗感品種的SCAR分析取已鑒定的穩(wěn)定的抗蚜保持系TAM428,LR9198,5-27，2000-3259B-1及感蚜品種ICS-12B，矮四，TX622B，三尺三于3葉1心期取葉片，每個品種取20株的葉片裝入塑料袋，用四分法取樣，分別提取各個品種的DNA，以提取的DNA為模板進(jìn)行SCAR分析。分析結(jié)果如圖6，7所示。從圖6和圖7中可見，對抗岈品種TAM428(1)，LR9198(2，3)，5-27(4，5)，200-3259B-l(6)分別以O(shè)PN-07727a，OPN-07727b及OPN-08373a、OPN-08373b二對特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果分別擴(kuò)增出了OPN-07^、OPN-08^這兩條特異性譜帶。而在感蚜品種ICS-12B(7)，矮四(8)，TX622B(9)，三尺三(10，11)的擴(kuò)增產(chǎn)物中都沒有擴(kuò)增出任何產(chǎn)物。這再一次證實了SCAR標(biāo)記檢測的可靠性及其應(yīng)用與抗蚜基因緊密連鎖的分子標(biāo)記作為抗蚜育種輔助選擇的可行性。實施例6:抗感品種的鑒定新品種的選育應(yīng)用本發(fā)明進(jìn)行抗蚜品種的選育，已經(jīng)應(yīng)用本發(fā)明進(jìn)行品種鑒定，已鑒定的品種為遼雜17號(124AX801)，306AX304雜交種以及0126AX304雜交種，其母本都應(yīng)用本發(fā)明鑒定為抗蚜。權(quán)利要求高粱抗蚜基因緊密連鎖的SCAR標(biāo)記，其所述高粱抗蚜基因的SCAR標(biāo)記OPN-07727和OPN-07373。2.如權(quán)利要求1所述的高粱抗蚜基因緊密連鎖的SCAR標(biāo)記的應(yīng)用，其所述的SCAR標(biāo)記OPN-07727和OPN-07373在后代植株選育中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及高梁抗蚜基因緊密連鎖的SCAR標(biāo)記及其應(yīng)用。以BTAM428×ICS-12B雜交后代為材料，采用BSA法，應(yīng)用RAPD和SCAR篩選技術(shù)對高粱抗蚜基因進(jìn)行了分子標(biāo)記，獲得了兩個與高粱抗蚜基因緊密連鎖的RAPD標(biāo)記OPN-07727和OPN-07373。該基因的RAPD標(biāo)記OPN-07727和OPN-07373與高粱抗蚜基因緊密連鎖，經(jīng)測序得到核苷酸序列。同時本發(fā)明將OPN-07727和OPN-07373轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的SCAR標(biāo)記，并用此標(biāo)記對F2代及部分高粱抗感品種進(jìn)行了檢測，從抗性品種中找到了分子標(biāo)記特異譜帶，為分子標(biāo)記輔助育種提供了依據(jù)，克服了那些由于表型鑒定采用通常的方法輔助選擇工作量非常巨大的困難，為實現(xiàn)分子標(biāo)記輔助育種、縮短育種周期提供了技術(shù)保障。文檔編號C12N15/11GK101691603SQ20091001336公開日2010年4月7日申請日期2009年8月25日優(yōu)先權(quán)日2009年8月25日發(fā)明者劉天華,彭霞,徐昕,李玥瑩,李雪梅,林鳳,鄒劍秋,陳琳,陶思源,馬純艷申請人:沈陽師范大學(xué)