專利名稱：：用opr3-樣基因的rna干擾控制線蟲的組合物和方法用OPR3-樣基因的RNA干擾控制線蟲的組合物和方法對相關(guān)申請的交叉引用線蟲的生命周期具有三個主要階段卵、幼體和成體。該生命周期在線蟲物種之間不同。例如，SCN的生命周期在最適條件下通?？梢杂?4-30日內(nèi)完成，而其他物種可能經(jīng)過長達(dá)一年或更長時間以完成生命周期。當(dāng)溫度和濕度水平在春季變得適宜時，蠕蟲形狀的幼體在土壤中從卵孵化出來。僅幼體發(fā)育階段的線蟲能夠感染大豆根。在采食一段時間后，作為成體不膨脹的雄性SCN線蟲從根遷移至土壤內(nèi)并使膨大的雌性成體受精。雄性線蟲隨后死亡，而雌性線蟲仍附著于根系統(tǒng)并繼續(xù)采食。膨大雌性線蟲中的卵開始發(fā)育，最初在身體外的團(tuán)塊或卵嚢(amassoreggsac)中并隨后在線蟲體腔內(nèi)發(fā)育。雌性成體的整個體腔最終充滿卵，并且雌線蟲死亡。正是充滿卵的死亡雌線蟲體才稱作胞嚢。最后胞嚢釋放并游離存在于土壤中。胞嚢的壁變得極堅韌，從而為胞嚢內(nèi)所含大約200-400粒卵提供良好的保護(hù)作用。SCN卵在胞嚢內(nèi)存活直至適宜的孵化條件出現(xiàn)。盡管眾多的卵可以在第一年中孵化，然而很多卵也會在保護(hù)性胞嚢內(nèi)存活幾年。防治線蟲侵染的常規(guī)方法包括在線蟲侵染的土地中保持合理的土壤養(yǎng)分和土壤pH水平；控制其他的植物疾病以及昆蟲與雜草病害；使用消毒措施，如僅在處理完線蟲非侵染田地后才翻耕、播種和中耕線蟲侵染的田地；在侵染的田地中工作后用高壓水或蒸汽徹底清潔設(shè)備；不使用在侵染田地中生長的種子播種非侵染田地，除非這種種子已經(jīng)得到正確地清潔；輪作受侵染田地并且用非宿主作物替換宿主作物；使用殺線蟲劑；和4番種抗性植物品種。第ll段已經(jīng)提出方法用于遺傳轉(zhuǎn)化植物以^J^予植物對寄生線蟲增加的抗性。美國專利號5，589，622和5,824,876涉及線蟲附著后在采食植物的部位內(nèi)或其附近特異性表達(dá)的植物基因的鑒定。這些植物耙基因的啟動子然后能夠用于指導(dǎo)有害蛋白質(zhì)或酶的特異性表達(dá)，或指導(dǎo)對耙基因或?qū)σ话慵?xì)胞基因反義的RNA的表達(dá)。這些植物啟動子也可以用于通過用含有與其產(chǎn)物被攝取后誘導(dǎo)線蟲致死的基因連接的植物耙基因的啟動子的構(gòu)建體轉(zhuǎn)化植物來在采食部位特異性賦予線蟲抗性。對于RNAi的作用已提出了許多的模型。在哺乳動物系統(tǒng)中，大于30個核苷酸的雙鏈RNA以一種非序列特異性方式引發(fā)誘導(dǎo)合成干擾素以及蛋白質(zhì)合成的總體停止。但是，美國專利號6,506,559揭示，在線蟲中，對應(yīng)于靼基因序列的雙鏈RNA的長度可為至少25、50、100、200、300或400堿基，甚至更長的雙鏈RNA也能有效誘導(dǎo)秀麗隱桿線蟲中的RNAi。已知當(dāng)用包含98~854個核苷酸的雙鏈區(qū)的發(fā)夾RNA構(gòu)建體轉(zhuǎn)化許多植物品種時，能有效沉默耙植物基因。一般認(rèn)為在包括線蟲和植物的許多有機(jī)體中，大片的雙鏈RNA在細(xì)胞內(nèi)被裂解成大約19-24個核苷酸的片段(siRNA)，這些siRNA是RNAi現(xiàn)象的實際介質(zhì)。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供一種制備能夠表達(dá)雙鏈RNA分子庫的轉(zhuǎn)基因植物的方法，其中每個雙鏈RNA分子與植物中的OPR3樣基因的一部分基本上相同，所述方法包括步驟a)制備具有與OPR3樣基因的一部分基本上相同的區(qū)域的核酸，其中所述核酸一旦在所述植物中表達(dá)，能夠形成OPR3樣基因一部分的雙鏈轉(zhuǎn)錄物；b)用所述核酸轉(zhuǎn)化受體植物；c)生成所述受體植物的一個或多個轉(zhuǎn)基因子代；和d)選擇表達(dá)所述轉(zhuǎn)錄物的子代。本發(fā)明進(jìn)一步提供包含與OPR3樣基因的一部分基本上相同的序列的表達(dá)盒和表達(dá)載體。[第25段在另一個實施方案中，本發(fā)明提供一種控制寄生線蟲感染植物的方法，包括用雙鏈RNA分子轉(zhuǎn)化植物的步驟，該雙鏈RNA分子有效地連接到根優(yōu)選的、線蟲可誘導(dǎo)的或采食部位優(yōu)選的啟動子上，該雙鏈RNA包含一條與耙核酸的一部分基本上相同的鏈，該耙核酸對于采食部位的形成、M或支持，特別是合胞體或巨大細(xì)胞的形成、發(fā)展或支持是必需的，從而通過去除或功能性失活所述采食部位、合胞體或巨大細(xì)胞來控制線蟲對植物的感染，其中所述耙核酸是OPR3樣基因。圖1列出了指定給相應(yīng)序列的序列號表格。[第27段]圖2a-2c展示了OPR3樣蛋白質(zhì)的氨基酸比對全長GmOPR3樣蛋白質(zhì)(SEQIDNO:30)、番茄的Q9FEW9(S叫IDNO:8)、擬南芥At2g06050編碼的蛋白質(zhì)(SEQIDNO:10)、橡膠樹的AAY27752(SEQIDNO:12)、稻的EAZ42984(SEQIDNO:14)、玉蜀黍的AAY26527(SEQIDNO:16)、玉蜀黍的AAY26528(SEQIDNO:18)、落花生的EG030595(SEQIDNO:20)、馬鈴薯TA29350—4113編碼的蛋白質(zhì)(SEQIDNO:22)、桃TA4283—3760編碼的蛋白質(zhì)(SEQIDNO:24)、陸地棉TA23750—3635編碼的蛋白質(zhì)(SEQIDNO:26)和中果咖啡TA7248—49390編碼的蛋白質(zhì)(SEQIDNO:28)。用VectorNTI軟件組進(jìn)4亍上述比對(空位開放罰分=10，空位延伸罰分=0.05，空位分隔罰分=8)。全長GmOPR3樣序列通過如實施例4所述的5，RACEPCR來確定。圖4展示了示例性樣基因的整體核苷酸同一性百分比全長GmOPR3樣DNA(SEQIDNO:29)、番茄的Q9FEW9DNA(SeqIDNO:7)、擬南芥的At2g06050DNA(SEQIDNO:9)、橡膠樹的AAY27752DNA(SEQIDNO:11)、稻的EAZ42984DNA(SEQIDNO:13)、玉蜀黍的AAY26527DNA(SEQIDNO:15)、玉蜀黍的AAY26528DNA(SEQIDNO:17)、落花生的EG030595DNA(SEQIDNO:19)、馬鈴薯的TA29350—4113DNA(SEQIDNO:21)、桃的TA4283—3760DNA(SEQIDNO:23)、陸地棉的TA23750_3635DNA(SEQIDNO:25)和中果咖啡的TA7248—493卯DNA(SEQIDNO:27)。用EMBOSS-4.0.0的Needle計算配對比對和同一性百分比。本發(fā)明可以通過參考以下詳細(xì)描述的本發(fā)明優(yōu)選實施方案及本文所包含實施例而更容易地理解。除非另外說明，本文中所用術(shù)語將根據(jù)相關(guān)領(lǐng)域普通^^支術(shù)人員的習(xí)慣用法加以理解。除了下文提供的術(shù)語定義外，分子生物學(xué)中常用術(shù)語的定義也可以在Rieger等，1991Glossaryofgenetics:classical和molecular,第五版，Berlin:Springer國Verlag;和在CurrentprotocolsinMolecularBiology,F.M.Ausubel等編著，CurrentProtocols,GreenePublishingAssociates,Inc.與JohnWiley&Sons,Inc.的合資企業(yè)(1998增刊)中找到。應(yīng)當(dāng)理解如本說明書及在權(quán)利要求書中所用，"一種(a)"或"一個(an)"可以意指一個或多個，這取決于該冠詞所用的上下15文。因此，例如對"單數(shù)細(xì)胞"的稱謂可以意指可以使用至少一個細(xì)胞。還應(yīng)當(dāng)理解本文中使用的術(shù)語僅僅旨在描述具體實施方案而并非意味對其限制性。另外OPR3樣基因(OPR3樣基因同源物)可以用此處提供的信息和生物
技術(shù)領(lǐng)域：
技術(shù)人員已知的技術(shù)從大豆之外的植物中分離。例如，在嚴(yán)緊條件下與SEQIDNO:l的核酸雜交的植物核酸分子可以從植物組織cDNA文庫中分離?；蛘?，可以從植物細(xì)胞中分離mRNA(例如通過Chirgwin等人，1979，Biochemistry18:5294-5299的胍鹽-石危氰酸鹽抽提方法)，cDNA可以用反轉(zhuǎn)錄酶制備(例如MoloneyMLV反轉(zhuǎn)錄酶，可購自Gibco/BRL，Bethesda，MD;或AMV反轉(zhuǎn)錄酶，可購自SeikagakuAmerica,Inc.,St.Petersburg,FL)?？梢曰赟EQIDNO:l中所示的核苷酸序列設(shè)計用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增的合成寡核苦酸引物。可以基于具有SEQIDNOs:2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27和29中限定的序列的OPR3樣基因序列設(shè)計其它寡核苷酸引物。對應(yīng)于此處限定的OPR3樣乾基因的核酸分子可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)PCR擴(kuò)增技術(shù)用cDNA或備選的基因組DNA作為模板和適宜的寡核苷酸引物擴(kuò)增。這樣擴(kuò)增的核酸分子可以克隆至合適的載體中，并通過DNA序列分析來表征。[第35段]此處使用的"RNAi，，或"RNA干擾"指的是雙鏈RNA(dsRNA)介導(dǎo)的植物中序列特異性轉(zhuǎn)錄后基因沉默方法。此處使用的"dsRNA，，指部分或完全雙鏈的RNA。雙鏈RNA還指小或短的干擾RNA(siRNA)、短干擾核酸(siNA)、短干擾RNA、微小-RNA(miRNA)等等。在RNAi方法中，將包含與乾基因(例如OPR3樣基因)的一部分基本上相同的第一鏈和與第一鏈互補(bǔ)的第二鏈的雙鏈RNA引入植物中。在引入植物以后，該靼基因特異性雙鏈RNA被加工成相對小的片段(siRNA)，接著能夠分布整個植物，導(dǎo)致具有表型的功能缺失突變，這種表型在一代的時間內(nèi)可能會與靼基因的部分或完全缺失產(chǎn)生的表型非常接近?；蛘?，耙基因特異性雙鏈RNA與調(diào)節(jié)元件或啟動子有效地結(jié)合，導(dǎo)致該雙鏈RNA在組織中以空間性的、空間性的或可誘導(dǎo)的方式表達(dá)，可被含有RNAi加工結(jié)構(gòu)的植物細(xì)胞進(jìn)一步加工為相對小的片段，從而得到功能缺失表型。另外，該調(diào)節(jié)元件或啟動子可指導(dǎo)對根或合胞體或巨大細(xì)胞優(yōu)先的表達(dá)，其中所述雙鏈RNA可以或者在這些組織中組成型表達(dá)或者被線蟲或幼體線蟲(例如J2線蟲)的采食而誘導(dǎo)表達(dá)。[第36段1如本文中所用，考慮到比較RNA和DNA序列時尿嘧咬替換胸腺嘧咬，用于dsRNA的術(shù)語"基本上相同"意指dsRNA的一條鏈的核苷酸序列與耙基因的20個或更多個連續(xù)核苷酸至少約80%-90%相同，更優(yōu)選地、與粑基因的20個或更多個連續(xù)核苷酸至少約90-95%相同并且最優(yōu)選與乾基因的20個或更多個連續(xù)核苷酸至少約95%、96%、97%、98%、99%相同或完全相同。20個或更多個核苷^A指耙基因至少約20、21、22、23、24、25、50、100、200、300、400、500、1000、1500或2000個連續(xù)堿基的部分或至多靼基因的全長?！嫉?7段如此處所用，"互補(bǔ)的"多核苷^1那些能夠根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)沃森-克里克互補(bǔ)規(guī)則威基配對的多核苷酸。具體而言，嘌呤會與嘧咬減基配對形成鳥嘌呤與胞嘧啶配對(G:C)、對于DNA是腺嘌呤與胸腺嘧咬(A:T)、或?qū)τ赗NA是腺嘌呤與尿嘧啶配對(A:U)的組合?？梢岳斫饧词共煌耆パa(bǔ)兩種多核苷酸也可以互相雜交，只要各自具有與對方基本上互補(bǔ)的至少一個區(qū)域。如此處所用，"基本上互補(bǔ)"指兩個核酸序列的核苷酸至少超過80%互補(bǔ)。優(yōu)選這兩個核酸序列至少超過85%、90%、95%、96%、97%、98%、99。/?；蚋嗷蛉亢塑账峄パa(bǔ)?；蛘?，"基本上互補(bǔ)"指兩個核^f列能夠在高度嚴(yán)緊的條件下雜交。如此處所用，術(shù)語"基本上相同"或"對應(yīng)于"指兩個核酸序列具有至少80%的序列同一性。優(yōu)選這兩個核酸序列具有至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性。[第38段如此處所用，術(shù)語"核酸"和"多核苷酸"指線性或分支的、單鏈或雙鏈的RNA或DNA或其雜合體。該術(shù)語還包括RNA/DNA雜合體。當(dāng)合成制備雙鏈RNA時，不常見的堿基(例如肌酐、5-甲基胞嘧啶、6-曱基腺嘌呤、次黃嘌呤及其他)也可用于反義RNA、雙鏈RNA和核酶配對。例如含有尿苷和胞苷的C-5丙炔類似物的多核苷酸已表明能以高親和力結(jié)合RNA并作為基因表達(dá)的有效的反義抑制劑。也可以進(jìn)行其他修飾，例如對磷酸二酯骨架的修飾或?qū)NA的核糖基團(tuán)中的2，-羥基修飾。[第39段如此處所用的術(shù)語"控制，，當(dāng)用于感染的上下文中時指感染的降低或預(yù)防。減低或預(yù)防線蟲的感染會使植物具有對線蟲增加的抗性；但是，這種增加的抗性并不意味著植物必須100。/。地抗線蟲感染。在優(yōu)選實施方案中，在抗性植物中對線蟲感染的抗性比對線蟲無抗性的野生型植物高10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、卯％或95%。優(yōu)選所述野生型植物是具有與線蟲抗性增加的植物相似或更優(yōu)選相同的基因型，但是不包含針對耙基因的雙鏈RNA的植物。植物對線蟲感染的抗性可以是由于當(dāng)線蟲暴露于含有雙鏈RNA的植物時，線蟲的死亡、不育、停止發(fā)育或移動性受損造成的，所述雙鏈RNA特異性針對對于功能性采食部位、合胞體或巨大細(xì)胞的發(fā)育或維持必須的基因。此處使用的術(shù)語"對線蟲感染的抗性"或"具有線蟲抗性的植物"指與野生型植物相比，植物避免線蟲感染、殺死線蟲或阻止、減少或停止線蟲的發(fā)育、生長或增殖的能力。這可以通過主動過程達(dá)到，例如通過產(chǎn)出對線蟲有害的物質(zhì)，或通過^L動過程達(dá)到，例如含有降低的線蟲所需的營養(yǎng)價值或不形成由線蟲采食部位誘導(dǎo)的結(jié)構(gòu)例如合胞體或巨大細(xì)胞。植物的線蟲抗性水平可以以多種方法檢測，例如，計數(shù)能夠在植物上建立寄生的線蟲數(shù)量，或測量線蟲發(fā)育時間、雌雄線蟲的比例，或?qū)τ诎麌熬€蟲計數(shù)在感染的植物的根部或植物分析系統(tǒng)中產(chǎn)生的胞囊數(shù)量或線蟲卵的數(shù)量。[第40段]若非上下文中另外說明。術(shù)語"植物"涵蓋植物發(fā)育或成熟的任何階段，以及取自或衍生自任何這樣的植物的任何組織或器官(植物部分)。植物部分包括，但不限于莖、根、花、胚珠、雄蕊、種子、葉、胚、分生組織區(qū)、愈傷組織、花藥培養(yǎng)物、配子體、孢子體、花粉、孩吏孢子、原生質(zhì)體、毛根培養(yǎng)物等等。本發(fā)明還包括用本發(fā)明的植物制備的種子。在一個實施方案中，與植物種子的野生型變體相比，種子確實被育種為有提高的抗線蟲感染的抗性。如此處所用，"植物細(xì)胞"包括但不限于，原生質(zhì)體、生產(chǎn)配子的細(xì)胞和再生為完整植林的細(xì)胞。植物多種組織的組開二、'、。''[第"段如此處使用的術(shù)語"轉(zhuǎn)基因"指含有至少一個重組多核普酸的全部或部分的任何植物、植物細(xì)胞、愈傷組織、植物組織或植物部分。在許多情況下，重組多核苷酸的所有或部分被穩(wěn)定整合入染色體中，或是穩(wěn)定的染色體外元件，從而能夠傳遞至下一代。出于本發(fā)明的目的，術(shù)語"重組多核苷酸"指的是已經(jīng)由遺傳工程改變、重排或修飾的多核苷酸。其實例包括連接到或加入到異源序列的任何克隆多核苷酸。術(shù)語"重組"并非指天然發(fā)生事件所導(dǎo)致的多核苷酸的改變，例如自發(fā)突變，或通過選擇性育種導(dǎo)致的非自發(fā)突變。[第42段如此處所用的術(shù)語"有效抑制表達(dá)的量"指的;1A以降低植物中耙基因產(chǎn)生的mRNA或蛋白質(zhì)的水平或穩(wěn)定性的雙鏈RNA的濃度或量。如此處所用的"抑制表達(dá)"指來自耙基因的蛋白質(zhì)和/或mRNA產(chǎn)物的水平的缺乏或可觀察到的降低。耙基因表達(dá)的抑制可能對于寄生線蟲是致死的，其可以直接或間接通過對采食部位、合胞體或巨大細(xì)胞的修飾或根除達(dá)成，或者，如果對全功能采食部位、合胞體或巨大細(xì)胞的進(jìn)入與寄生線蟲的生命周期的特定階段相關(guān)的話，這樣的抑制可以拖延或防止進(jìn)入特殊的發(fā)育步驟(例如變態(tài))?？梢酝ㄟ^檢測植物根部胞嚢的減少或消除，或線蟲或線蟲侵染的其他性質(zhì)來確認(rèn)抑制的結(jié)果(見下文實施例3所述)。[第"段根據(jù)本發(fā)明，用核酸或雙鏈RNA轉(zhuǎn)化植物，該核酸或雙鏈RNA特異性抑制OPR3樣基因在植物中表達(dá)，該基因?qū)τ诓墒巢课?、合胞體或巨大細(xì)胞的發(fā)育和維持是必需的，最后影響線蟲的存活、變態(tài)或繁殖。在一個實施方案中，所述雙鏈RNA由已經(jīng)轉(zhuǎn)化入所感染的植物的4且林中的載體編碼。優(yōu)選表達(dá)該雙鏈RNA的核酸序列在根部特異性啟動子或寄生線蟲采食細(xì)胞特異性啟動子或線蟲可誘導(dǎo)的啟動子的轉(zhuǎn)錄控制下。[第44段所以，本發(fā)明的雙鏈RNA包含與植物基因組的OPR3樣靼基因的一部分基本上相同的第一鏈和與第一鏈基本上互補(bǔ)的第二鏈。在優(yōu)選的實施方案中，耙基因選自由下列多核苷酸組成的組中a)含有SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸；b)編碼具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中限定的序列的多肽的多核苦酸；和c)與含有SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸有70%序列同一性的多核苷酸該基本上相同的雙鏈核苷酸序列的長度可以是至少大約OPR3樣基因的19、20、21、22、23、24、25、50、100、200、300、400、500、1000、1500個連續(xù)堿基或至多OPR3樣基因的全長。在一個優(yōu)選實施方案中，雙鏈核苷酸序列的長度為從大約19至大約200-500個連續(xù)核苷酸的長度。在另一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的雙鏈RNA與SEQIDNO:2的堿基1-229基本上相同或相同。[第45段如上所述，長度大于約19-24個核苷酸的雙鏈RNA片段由線蟲和植物細(xì)胞內(nèi)裂解成大約19-24個核苷酸長的siRNA，這些siRNA是RNAi現(xiàn)象的實際介質(zhì)。圖5a-5j中的表格列出了此處限定的OPR3樣基因的示例性21-mers。該表格也可用于通it^各21mer加上或減去適宜數(shù)量的核苷酸計算19、20、22、23或24-mer。所以，本發(fā)明的雙鏈RNA長度范圍在大約21個核苷酸至200個核苷酸。優(yōu)選本發(fā)明的雙鏈RNA具有OPR3樣基因大約21個核苷酸至600個連續(xù)的核苷酸，或至多全長的OPR3樣基因。更優(yōu)選本發(fā)明的雙鏈RNA具有大約21個核苷酸至500個連續(xù)核苷酸的長度，或約21個至大約200個連續(xù)核苷酸的長度。[第46段如此處所公開的，不需要RNA與耙基因100%序列同一性來實現(xiàn)本發(fā)明。當(dāng)優(yōu)選含有與OPR3樣基因的部分序列相同的核普酸序列的雙鏈RNA用于抑制時，本發(fā)明可以容忍因為基因操作或合成、基因突變、品系多態(tài)性或進(jìn)化趨異導(dǎo)致的可預(yù)期的序列變化。所以本發(fā)明的雙鏈RNA還涵蓋與乾基因具有至少1、2或更多核苷酸錯配的雙鏈RNA。例如，本發(fā)明中可以預(yù)見圖5a畫5j中示例性示出的21mer雙鏈RNA序列可包含1、2或更多核苷酸的添加、刪除或取代，只要得到的序列仍然干擾OPR3樣基因的功能。第47段1可以用本領(lǐng)域已知的序列比較和比對算法(見Gribskov和Devereux，SequenceAnalysisPrimer,StocktonPress,1991，和其中引用的參考文獻(xiàn))來優(yōu)化本發(fā)明的雙鏈RNA和OPR3樣乾基因之間的序列同一性，并通過例如BESTFIT軟件程序(例如威斯康辛大學(xué)遺傳計算組)中實施的Smith-Waterman算法以默認(rèn)參數(shù)計算核苷酸序列間的差異百分比。優(yōu)選在抑制性RNA和耙基因的部分之間的序列同一性大于80%、90%，甚至100%?；蛘撸琑NA的雙鏈體區(qū)域可以功能性地限定為能夠在嚴(yán)緊^Ht下與靶基因轉(zhuǎn)錄物的部分雜交的核苷酸序列(嚴(yán)緊條件例如為400mMNaCl,40mMPIPESpH6.4，ImMEDTA，60。C雜交12-16小時，然后65。C下用0.1%SDS和0.1%SSC洗滌大約15-60分鐘)。[第48段當(dāng)本發(fā)明的雙鏈RNA長度大于約21個核苷酸時，例如50~1000個核苷酸，其會在植物或寄生線蟲細(xì)胞內(nèi)被隨機(jī)裂解成大約21個核苷酸的雙鏈RNA，即siRNA。本發(fā)明的較長雙鏈RNA的裂解會產(chǎn)生來自該較長雙鏈RNA的大約21mer(19mer24mer范圍內(nèi))的雙鏈RNA的庫。該約21mer雙鏈RNA庫也包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)，不管是在植物或線蟲細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的還是用已知的寡核苷酸合成技術(shù)合成的。第49段本發(fā)明的siRNA具有對應(yīng)于在整個OPR3樣乾基因完整序列中跨越19-24個連續(xù)核苷酸片段的序列。例如，衍生自如SEQIDNO:1、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的OPR3樣基因的本發(fā)明的siRNA庫包括多種RNA分子，其選自含有與圖5a-5j中所示SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29的21mer核苷^本上相同的一條鏈的寡核苷酸。衍生自SEQIDNO:1、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29所述的OPR3樣基因的本發(fā)明siRNA庫也可以包括含有衍生自圖5a-5j中所述SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29的寸壬意21個連續(xù)核苷酸序列的特定RNA分子的任意組合。并且，如上所述，植物中多個專門切酶產(chǎn)生通常在19-24個核苷酸大小的siRNA(見Henderson等人，2006.NatureGenetics38:721-725)。本發(fā)明的siRNA范圍可以在約19個連續(xù)核苷酸至約24個連續(xù)核苷酸之間。同樣，本發(fā)明的siRNA庫可包括多個RNA分子，其具有衍生自SEQIDNO:1、2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26的約19、20、21、22、23或24個連續(xù)核苷酸序列的任意一種?；蛘?，本發(fā)明的siRNA庫可包括多個RNA分子，其具有衍生自SEQIDNO:1、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29的約19、20、21、22、23和/或24個連續(xù)核苷酸序列的4壬意組合。[第50段1本發(fā)明的雙鏈RNA可任選地包括在一端或兩端的單鏈突出。該雙鏈結(jié)構(gòu)可以通過單鏈自身互補(bǔ)RNA鏈形成(即形成發(fā)夾環(huán))或兩個互補(bǔ)的RNA鏈形成。RNA雙鏈體的形成可以在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外起始。當(dāng)本發(fā)明的雙鏈RNA形成發(fā)夾環(huán)時，可任選地包括內(nèi)含子(如US2003/0180945A1中所述)或核苷酸間割區(qū)，該間割區(qū)是在互補(bǔ)的RNA鏈間的序列片段以穩(wěn)定細(xì)胞中的發(fā)夾轉(zhuǎn)基因。制備各種雙鏈RNA分子的方法記載于例如WO99/53050和美國專利No.6,506,559中。RNA可以允許每個細(xì)胞輸送至少一個拷貝的量引入。更高劑量的雙鏈材料會得到更有效的抑制。[第51段在另一個實施方案中，本發(fā)明提供分離的重組表達(dá)載體，其包含編碼如上所述雙鏈RNA的核酸，其中與宿主植物細(xì)胞的野生型品種相比，該載體在宿主植物細(xì)胞中的表達(dá)導(dǎo)致對寄生線蟲的抗性增加。如此處所用的術(shù)語"載體"指能夠轉(zhuǎn)運(yùn)其已經(jīng)連接的另一個核酸的核酸分子。一種類型的載體是"質(zhì)粒"，指環(huán)狀雙鏈DNA環(huán)，附加的DNA片段可以連接其中。另一種類型的載體是病毒載體，其中附加的DNA片段可以連接到病毒基因組中。某些載體能夠在它們導(dǎo)入的宿主植物細(xì)胞中自主復(fù)制。其他栽體在導(dǎo)入宿主細(xì)胞時整合入宿主植物細(xì)胞的基因組中，從而隨著宿主基因組一起復(fù)制。此外，某些載體能夠指導(dǎo)其有效連接的基因的表達(dá)。這樣的載體在此稱為"表達(dá)栽體"，用于重組DNA技術(shù)的表達(dá)栽體一般是質(zhì)粒的形式。在本說明書中，"質(zhì)粒，，和"栽體"可互換使用，因為質(zhì)粒是載體的最常用形式。但是，本發(fā)明意欲包括具有相同功能的表達(dá)載體的其他形式，例如病毒載體(例如馬鈴薯病毒X，煙草rattle病毒和雙粒病毒組)。[第52段1本發(fā)明的重組表達(dá)載體包括以適宜在宿主植物細(xì)胞中表達(dá)核酸的形式的本發(fā)明核酸，意思是該重組表達(dá)載體包括一個或多個調(diào)節(jié)序列，例如啟動子，該調(diào)節(jié)序列基于待用于表達(dá)的宿主植物細(xì)胞進(jìn)行選擇，被有效連接至待表達(dá)的核酸序列。至于重組表達(dá)載體，術(shù)語"有效連接，，和"有效結(jié)合，，可以互換，意為以允許核苷酸序列表達(dá)的方式(即，當(dāng)載體被引入宿主植物細(xì)胞中時在宿主植物細(xì)胞中表達(dá))將目的核苷i^列連接到調(diào)節(jié)序列。術(shù)語"調(diào)節(jié)序列"包括啟動子、增強(qiáng)子和其他表達(dá)控制元件(例如多聚腺苷酸信號)。例如這類調(diào)節(jié)序列記載于Goeddel，GeneExpressionTechnology:MethodsinEnzymology185，AcademicPress,SanDiego,CA(1990)已及Gruber和Crosby的MethodsinPlantMolecularBiologyandBiotechnology,Glick和Thompson編著，第7章，89-108，CRCPress:BocaRaton,Florida中，包括其參考文獻(xiàn)。調(diào)節(jié)序列包括在許多類型的宿主細(xì)胞中指導(dǎo)核苷酸序列的組成型表達(dá)的那些和僅僅在某些宿主細(xì)胞中或在某些情況下指導(dǎo)核苷酸序列表達(dá)的那些。本領(lǐng)域技術(shù)人員了解表達(dá)載體的設(shè)計可取決于諸如要轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的選擇、所需雙鏈RNA的表達(dá)水平等因素。本發(fā)明的表達(dá)載體可引入植物宿主細(xì)胞中進(jìn)而產(chǎn)生此處所述的核酸編碼的本發(fā)明的雙鏈RNA分子。[第53段根據(jù)本發(fā)明，重組表達(dá)栽體包括有效連接到核苷酸序列的調(diào)節(jié)序列，該核苷酸序列是本發(fā)明雙鏈RNA的一條或兩M的模板。在一個實施方案中，所述核酸分子進(jìn)一步包括在所述核酸分子任何一端側(cè)翼的啟動子，其中該啟動子驅(qū)動各個DNA鏈的表達(dá)，從而產(chǎn)生雜交形成雙鏈RNA的兩個互補(bǔ)的RNA。在另一個實施方案中，核酸分子包含轉(zhuǎn)錄成在一個轉(zhuǎn)錄單元中有雙鏈RNA的兩條鏈的核苷酸序列，其中正義鏈從轉(zhuǎn)錄單元的5'端開始轉(zhuǎn)錄，反義鏈從3，端開始轉(zhuǎn)錄，其中這兩條鏈被大約3-500個堿基對或更多堿基對隔開，轉(zhuǎn)錄后，該RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物自身折疊形成發(fā)夾。根據(jù)本發(fā)明，發(fā)夾轉(zhuǎn)錄物中的間隔區(qū)可以是任何DNA片段。[第54段根據(jù)本發(fā)明，所引入的多核苷酸如果合并入非染色體自主復(fù)制子中或整合入植物染色體中，會在植物細(xì)胞中穩(wěn)定保持?；蛘?，所引入的多核苷酸可以存在于染色體外非復(fù)制栽體上，并瞬時表達(dá)或瞬時有活性。不管存在于染色體外非復(fù)制載體中還是整合入染色體的載體中，該多核苷酸優(yōu)選位于植物表達(dá)盒中。植物表達(dá)盒優(yōu)選含有能夠驅(qū)動在植物細(xì)胞中基因表達(dá)的調(diào)節(jié)序列，該調(diào)節(jié)序列得到有效地連接，從而使得每個序列都能夠發(fā)揮其功能，例如通過多苷酸信號終止轉(zhuǎn)錄。優(yōu)選的多聚腺苷酸信號是那些來自于根癌農(nóng)桿菌(^g^cteWw附f"附e/fl"'e附)t-DNA的信號，例如已知為Ti-質(zhì)粒pTiACH5的章魚堿合成酶的基因3(Gielen等人，1984,EMBOJ.3:835)或其功能等同物，還有植物中的所有其他有功能活性的終止子都適用。因為植物基因的表達(dá)通常不在轉(zhuǎn)錄水平限制，植物表達(dá)盒優(yōu)選包含其他有效連接的序列，例如像翻譯增強(qiáng)子的序列，例如來自煙草花葉病毒的含有5，-不翻譯前導(dǎo)序列的增速驅(qū)動序列，可增加每個RNA產(chǎn)生的多肽比例(Gallie等人，1987，Nucl.AcidsResearch15:8693-8711)。植物表達(dá)載體的實例包括詳細(xì)描述于下列文獻(xiàn)中的栽體Becker,D.等人，1992，Newplantbinaryvectorswithselectablemarkerslocatedproximaltotheleftborder,PlantMol.Biol.20:1195-1197;Bevan，M.W.，1984，Binary々rc6a"m'M附vectorsforplanttransformation,Nucl.Acid.Res.12:8711-8721;和TransgenicPlants第1巻，EngineeringandUtilization中的VectorsforGeneTransferinHigherPlants;Kung和R.Wu編著,AcademicPress,1993，S.15-38。[第55段植物基因的表達(dá)應(yīng)該有效地連接至適當(dāng)啟動子，該啟動子以時間優(yōu)先、空間優(yōu)先、細(xì)胞類型優(yōu)先和/或組織優(yōu)先方式使該基因表達(dá)。用于本發(fā)明表達(dá)盒的啟動子包括能夠在存在于植物根部的植物細(xì)胞中起始轉(zhuǎn)錄的任何啟動子。這類啟動子包括但不限于，那些能夠從植物、植物病毒和含有在植物中表達(dá)的基因的細(xì)菌(如農(nóng)桿菌和根瘤菌)中得到的啟動子。優(yōu)選本發(fā)明的表達(dá)盒包括根特異性啟動子、病原體可誘導(dǎo)的啟動子或線蟲可誘導(dǎo)的啟動子。更優(yōu)選該線蟲可誘導(dǎo)的啟動子是寄生線蟲采食部位特異性啟動子。寄生線蟲采食部位特異性啟動子可以對合胞體細(xì)胞或巨大細(xì)胞具有特異性或?qū)@兩種細(xì)胞都具有特異性。如果一個啟動子在其誘導(dǎo)狀態(tài)下的活性(通過其控制下產(chǎn)生的RNA量來測定)比未誘導(dǎo)狀態(tài)下的活性高至少30%、40%、50%,優(yōu)選至少60%、70%、80%、卯％，更優(yōu)選至少100%、200%、300%，那么這個啟動子是可誘導(dǎo)的啟動子。如果一個啟動子的活性(通過其控制下產(chǎn)生的RNA量來測定)在特定的細(xì)胞類型、組織或器官中比在同一個植物的其他細(xì)胞類型、組織中要高至少30%、40%、50%,優(yōu)選至少60%、70%、80%、90%,更優(yōu)選至少100%、200%、300%，那么這種啟動子是細(xì)胞、組織或器官特異性啟動子，優(yōu)選所述其他的細(xì)胞類型或組織是相同植物器官(例如根)的細(xì)胞類型或組織。在器官特異性啟動子的情況中，啟動子活性應(yīng)該與其他植物器官中的啟動子活性比較，例如葉、莖、花或種子。[第56段啟動子可以是組成型的、可誘導(dǎo)的、發(fā)育階段優(yōu)先的、細(xì)胞類型優(yōu)先的、組織優(yōu)先的或器官優(yōu)先的。組成型啟動子在大多數(shù)情況下都有活性。組成型啟動子的非限制實例包括CaMV19S和35S啟動子(Odell等人，1985，Nature313:810-812)、sXCaMV35S啟動子(Kay等人，1987，Science236:1299-1302)、Sepl啟動子、稻肌動蛋白啟動子(McElroy等人，20081990，PlantCell2:163-171)、擬南芥肌動蛋白啟動子、泛素啟動子(Christensen等人，1989，PlantMolec.Biol.18:675-689)、pEmu(Last等人，1991，Theor.Appl,Genet.81:581-588)、玄參花斑病病毒35S啟動子、Smas啟動子(Velten等人，1984，EMBOJ.3:2723-2730)、GRP1-8啟動子、肉桂醇脫氫酶啟動子(美國專利5,683,439)、來自農(nóng)桿菌屬T-DNA的啟動子，例如甘露堿合成酶、胭脂堿合成酶和章魚堿合成酶、核酮糖磷酸氫鹽羧化酶(ssuRUBISCO)啟動子的小亞基等。優(yōu)選在接觸寄生線蟲的細(xì)胞中表達(dá)雙鏈RNA的啟動子?；蛘撸鰡幼涌梢则?qū)動雙鏈RNA在遠(yuǎn)離接觸線蟲的部位的植物組織中表達(dá)，然后該雙鏈RNA可以由植物轉(zhuǎn)運(yùn)至接觸寄生線蟲的細(xì)胞中，在線蟲采食部位的特定細(xì)胞中或接近線蟲采食部位的細(xì)胞中，例如合胞體細(xì)胞或巨大細(xì)胞。[第57段可誘導(dǎo)的啟動子在特定環(huán)境條件下是有活性的，例如存在或缺乏營養(yǎng)素或代謝產(chǎn)物、熱或冷、光照、病原體攻擊、缺氧條件等。例如，已經(jīng)表明啟動子TobRB7、AtRPE、AtPyk10、Geminil9和AtHMGl可以由線蟲誘導(dǎo)(對于線蟲可誘導(dǎo)的啟動子的綜述，請參見Ann.Rev.Phytopathol.(2002)40:191-219;還參見U.S.Pat.No.6,593,513)。分離可以由線蟲i秀導(dǎo)的其他啟動子的方法在美國專利5,589,622和5，824，876中列出。其他可以誘導(dǎo)的啟動子包括蕓莒屬的hsp80啟動子，其可由熱休克誘導(dǎo)；PPDK啟動子，其由光誘導(dǎo)；煙草、擬南芥和玉蜀黍的PR-1啟動子，其可以由病原體感染誘導(dǎo)；和Adhl啟動子，其由缺氧和冷脅迫誘導(dǎo)。植物基因表達(dá)也可由可誘導(dǎo)的啟動子促進(jìn)(關(guān)于綜述參見Gatz，1997，Annu.Rev.PlantPhysiol.PlantMol.Biol.48:89-108)。如果需要時間特異性基因表達(dá)，可化學(xué)誘導(dǎo)的啟動子特別適用。這種啟動子的非限制性實例是可水楊酸誘導(dǎo)的啟動子(PCT申請No.WO95/19443)、可四環(huán)素誘導(dǎo)的啟動子(Gatz等人，1992，PlantJ,2:397-404)和可乙醇誘導(dǎo)的啟動子(PCT申請No.WO93/21334),[第58段發(fā)育階段優(yōu)先的啟動子在發(fā)育的特定階段優(yōu)先表達(dá)。組織和器官優(yōu)先的啟動子包括那些在特定組織和器官優(yōu)先表達(dá)的啟動子，例如葉、根、種子或木質(zhì)部。組織優(yōu)先或器官優(yōu)先啟動子的實例包括但不限于果實優(yōu)先、胚珠優(yōu)先、雄性組織優(yōu)先、種子優(yōu)先、珠被優(yōu)先、塊莖優(yōu)先、柄優(yōu)先、果皮優(yōu)先和葉子優(yōu)先、柱頭優(yōu)先、花粉優(yōu)先、花藥優(yōu)先、花瓣優(yōu)先、萼片優(yōu)先、花梗優(yōu)先、長角果優(yōu)先、才艮優(yōu)先、莖優(yōu)先等等。種子優(yōu)先的啟動子在種子發(fā)育和/或萌發(fā)時優(yōu)先表達(dá)。例如，種子優(yōu)先啟動子可以是胚優(yōu)先、胚乳優(yōu)先和種皮優(yōu)先的。見Thompson等人，1989，BioEssays10:108。種子優(yōu)先的啟動子包括但不限于纖維素合酶(eelA)、Ciml、y-玉米醇溶蛋白、球蛋白-1、玉蜀黍19kD玉米醇溶蛋白(cZ19Bl)等。[第59段1其他適宜的組織優(yōu)先或器官優(yōu)先啟動子包括但不限于，油菜的油菜籽蛋白基因啟動子(美國專利號5，608，152)、蠶豆(W"Vi/^i)USP-啟動子(Baeumlein等人，1991，MolGenGenet.225(3):459畫67)、擬南芥油質(zhì)蛋白啟動子(PCT申請No.WO98/45461)、菜豆(尸/^^o/"sv"/g"A)菜豆素啟動子(美國專利號5,504,200)、蕓苔屬Bce4-啟動子(PCT申請No.WO91/13980)、或豆球蛋白B4啟動子(LeB4;Baeumlein等人，1992，PlantJournal,2(2):233-9)，以及在像玉蜀黍、大麥、小麥、黑麥、稻等單子葉植物中賦予種子特異性表達(dá)的啟動子。要關(guān)注的適宜啟動子是大麥的lpt2或lptl-基因啟動子(PCT申請No.WO95/15389和PCT申請No.WO95/23230)，或在PCT申請No.WO99/16890中描述的那些啟動子(大麥醇溶蛋白基因、稻的谷蛋白基因、稻的水稻素基因、稻的醇溶谷蛋白基因、小麥的麥膠蛋白基因、小麥的谷蛋白基因、燕麥的谷蛋白基因、高粱的kasirin基因和黑麥的黑麥^因)。[第60段用于本發(fā)明的表達(dá)盒的其他啟動子包括但不限于，主要葉綠素a/b結(jié)合蛋白啟動子、組蛋白啟動子、Ap3啟動子、p-conglycin啟動子、油菜籽蛋白啟動子、大豆凝集素啟動子、玉蜀黍15kD玉米醇溶蛋白啟動子、22kD玉米醇溶蛋白啟動子、27kD玉米醇溶蛋白啟動子、g-玉米醇溶蛋白啟動子、蠟質(zhì)基因(waxy)啟動子、超甜基因(shrunken)1啟動子、超甜基因2啟動子和bronze基因啟動子、Zml3啟動子、(美國專利號5，086，169)、玉蜀黍多聚半乳糖醛酸酶啟動子(PG)(美國專利號5，412，085和5，545，546)和SGB6啟動子(美國專利號5,470,359)，以及合成的或其他天然啟動子。[第61段根據(jù)本發(fā)明，所"達(dá)盒包括與核苷酸序列有效連接的表達(dá)控制序列，該核普酸序列是所述雙鏈RNA的一條或兩條鏈的模板。該雙鏈RNA模板包括(a)第一鏈，具有與OPR3樣基因的大約l9500個或至多全長的連續(xù)核苷i^本上相同的序列；和(b)第二鏈，具有與第一鏈基本上互補(bǔ)的序列。在進(jìn)一步的實施方案中，啟動子位于所述模板核苷^列任一端的側(cè)翼，其中所述啟動子驅(qū)動各個單獨的DNA鏈的表達(dá)，進(jìn)而產(chǎn)生兩條互補(bǔ)的RNA，這兩條互補(bǔ)的RNA能夠雜交并形成所述雙鏈RNA。在備選的實施方案中，核苷酸序列被轉(zhuǎn)錄成在一個轉(zhuǎn)錄單元上的雙鏈RNA的兩#^1,其中，正義鏈從轉(zhuǎn)錄單元的5'端轉(zhuǎn)錄，而反義鏈從3，端轉(zhuǎn)錄，其中這兩^^隔開3-500個4^&對，并且轉(zhuǎn)錄之后，該RNA轉(zhuǎn)錄物自身:忻疊形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。[第62段在另一個實施方案中，所述載體含有雙向啟動子，驅(qū)動兩個核酸分子的表達(dá)，由此一個核酸分子編碼與OPR3樣基因的一部分基本上相同的序列，而另一個核酸分子編碼與第一鏈基本上互補(bǔ)的第二序列，并且當(dāng)兩個序列都轉(zhuǎn)錄時能夠形成雙鏈RNA。雙向啟動子是能夠在兩個方向介導(dǎo)表達(dá)的啟動子。[第63段在另一個實施方案中，所述栽體含有兩種啟動子，一個介導(dǎo)與OPR3樣基因的一部分基本上相同的序列的轉(zhuǎn)錄，另一個啟動子介導(dǎo)與第一鏈基本上互補(bǔ)的第二序列的轉(zhuǎn)錄，并且當(dāng)兩個序列都轉(zhuǎn)錄時能夠形成雙鏈RNA。第二啟動子可以是不同的啟動子。[笫64段1不同啟動子指就細(xì)胞或組織特異性來說具有不同活性，或?qū)χT如病原體、非生物脅迫或化學(xué)品等不同的誘導(dǎo)物呈現(xiàn)表達(dá)的啟動子。例如，一個啟動子可以是組成型的或組織特異性的，而另一個則可能是組織特異性或可被病原體^"導(dǎo)的。在一個實施方案中，一個啟動子介導(dǎo)與過表達(dá)OPR3樣基因相適應(yīng)的核酸分子的轉(zhuǎn)錄，而另一個啟動子介導(dǎo)互補(bǔ)核酸的組織或細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄或病原體誘導(dǎo)的表達(dá)。[第65段本發(fā)明還涉及能表達(dá)本發(fā)明的雙鏈RNA、進(jìn)而抑制例如根部、采食部位、合胞體和/或巨大細(xì)胞中的耙基因的轉(zhuǎn)基因植物。所述植物或轉(zhuǎn)基因植物可以是諸如但不限于樹、切花(cutflowers)、觀賞植物、蔬菜或農(nóng)作物植物的任何植物。上述植物可來自選自由苜蓿屬(Medicago)、番癡屬(Lycopersicon)、蕓苔屬(Brassica)、香瓜屬(Cucumis)、癡屬(Solan腿)、核桃屬(Juglans)、棉屬(Gossypium)、蘋果屬(Malus)、葡萄屬(Vitis)、金魚草屬(Antirrhinum)、楊屬(Populus)、草莓屬(Fragaria)、擬南芥屬(Arabidopsis)、云杉屬(Picea)、辣椒屬(Capsicum)、蓁屬(Chenopodium)、菊屬(Dendranthema)、牽牛屬(Pharbitis)、松屬(Pi腿)、豌豆屬(Pis腿)、稻屬(Oryza)、玉蜀黍?qū)?Zea)、小麥屬(Triticum)、黑小麥屬(Triticale)、黑麥屬(Secale)、黑麥草屬(Lolium)、大麥屬(Hordeum)、大豆屬(Glycine)、黃杉屬(Pseudotsuga)、伽藍(lán)菜屬(Kalanchoe)、甜菜屬(Beta)、向日葵屬(Helianthus)、煙草屬(Nicotiana)、南瓜屬(Cucurbita)、薔薇屬(Rosa)、草莓屬、百脈根屬(Lotus)、苜蓿屬、驢食草屬(Onobrychis)、車軸草屬(trifolium)、胡盧巴屬(Trigonella)、5L豆屬(Vigna)、橘屬(Citrus)、亞麻屬(Linum)、老鸛草屬(Geranium)、木薯屬(Manihot)、胡蘿卜屬(Daucus)、蘿卜屬(Raphanus)、白芥屬(Sinapis)、顛茄屬(Atropa)、曼陀羅屬(Datura)、天仙子屬(Hyoscyamus)、煙草屬、碧冬茄屬(Petunia)、毛地黃屬(Digitalis)、Majorana、菊苣屬(Ciahorium)、萵苣屬(Lactuca)、雀麥屬(Bromus)、天門冬屬(Asparagus)、金魚草屬、萱草屬(Heterocallis)、水仙屬(Nemesis)、天竺葵屬(Pelargonium)、黍?qū)?Panicum)、狼尾草屬(Pennisetum)、毛萊屬(Ranunculus)、千里光屬(Senecio)、喇"八舌屬(Salpiglossis)、藍(lán)英花屬(Browaalia)、菜豆屬(Phaseolus)、燕麥屬(Avena)和蔥屬(Allium)組成的組中的屬。所述植物可以來自選自下列屬的屬擬南芥屬、苜蓿屬、番茄屬、蕓苔屬、香瓜屬、茄屬、核桃屬、棉屬、蘋果屬、葡萄屬、金魚草屬、Brachipodium、楊屬、草莓屬、擬南芥屬、云杉屬、辣椒屬、藜屬、菊屬、牽牛屬、松屬、豌豆屬、稻屬、玉蜀黍?qū)佟⑿←湆?、黑小麥屬、黑麥屬、黑麥草屬、大麥屬、大豆屬、黃杉屬、伽藍(lán)菜屬、甜菜屬、向日葵屬、煙草屬、南瓜屬、薔薇屬、草莓屬、百樂M艮屬、苜蓿屬、驢食草屬、車軸草屬、胡盧巴屬、虹豆屬、橘屬、亞麻屬、老鸛草屬、木薯屬、胡蘿卜屬、蘿卜屬、白芥屬、顛茄屬、曼陀羅屬、天仙子屬、煙草屬、碧冬茄屬、毛地黃屬、Majorana、菊苣屬、萵苣屬、雀麥屬、天門冬屬、金魚草屬、萱草屬、7jC仙屬、天竺葵屬、黍?qū)?、狼尾草屬、毛萊屬、千里光屬、喇叭舌屬、藍(lán)英花屬、菜豆屬、燕麥屬和蔥屬組成的組中的屬。在一個實施方案中，所述植物是單子葉植物或雙子葉植物。[第66段在另一個實施方案中，所述植物是農(nóng)作物植物。農(nóng)作物植物是用于農(nóng)業(yè)的所有植物。根據(jù)一個實施方案，所述植物是單子葉植物，優(yōu)選禾本科(Poaceae)、芭蕉科(Musaceae)、百合科(Liliaceae)或鳳梨科(Bromdiaceae)植物，優(yōu)選是禾本科植物。因此，在又一個實施方案中，所述植物是禾本科玉蜀黍?qū)?、小麥屬、稻屬、大麥屬、黑麥屬、燕麥屬、甘蔗?Saccharum)、高粱屬(Sorghum)、狼尾草屬、狗尾草屬(Setaria)、黍?qū)佟⒓R屬(Eleusine)、芒屬(Miscanthus)、短柄草屬(Brachypodium)、羊茅屬(Festuca)或黑麥草屬植物。當(dāng)植物是玉蜀黍?qū)贂r，優(yōu)選物種是玉米(Zea附"")。當(dāng)該植物是小麥屬時，優(yōu)選物種是普通小麥(7W/ZcM附fle幼Vw附)、斯佩爾特小麥(7W"cwws/^/toe)或圓柱小麥(7Wft'cw附rf"r"附)。當(dāng)所述植物是稻屬時，優(yōu)選物種是稻(as^v)。當(dāng)所述植物是大麥屬植物時，優(yōu)選物種是大麥(i/WY^"WV"/gfl—。當(dāng)所述植物是黑麥屬植物時，優(yōu)選物種是黑麥(^ecfl/ece""/e)。當(dāng)所述植物是燕麥屬植物時，優(yōu)選物種是燕麥(^WWtfs"ftVfl)。當(dāng)戶斤述植物是甘蔗屬植物時,優(yōu)選物種是甘蔗(iSflcr/^ni附oj^dmir"附)。當(dāng)所述植物是高粱屬植物時，優(yōu)選物種是高粱C^^A"附vw/gflre)、高粱(5V/^/tmimA/co/w)或蘇丹草(5^fg/r"/nswrf""e"s^)。當(dāng)所述植物是狼尾草屬植物時，優(yōu)選物種是御谷(/^wi/ye似wg/n"cM附)。當(dāng)所述植物是狗尾草屬植物時，優(yōu)選物種是粱(&tonVi/to//c)。當(dāng)所述植物是黍?qū)僦参飼r，優(yōu)選物種是野生稷(i^r/i/cw附w//iVicewiw)或杉p斗支稷(戶flw/cw附vzVgfl似附)。當(dāng)所述植物是糝屬(Eleusine)植物時，優(yōu)選物種是糝子(五7e"s/"ecwflc"mi)。當(dāng)戶斤述植物是芒屬植物時，優(yōu)選物種是芒(Miscanthussinensis)。當(dāng)所述植物是羊茅屬(Festuca)植物時，優(yōu)選物種是flr"m//mwiVi、紫羊茅CFeW"cflr"6m)或草甸草CF^y似ctf/vyi紐似/力。當(dāng)所述植物是黑麥草屬植物時，優(yōu)選物種是黑麥草(丄C'ww/7e/wme)或多花黑麥草(丄0//"附附M似yZora附)?；蛘?，所述植物是黑小麥(rnric仍ecfl/e)。[第67段]作為備選方案，在一個實施方案中，植物為雙子葉植物，優(yōu)選豆科(Fabaceae)、癡科(Solanaceae)、十字花科(Brassicaceae)、藜科(Chenopodiaceae)、菊科(Asteraceae)、錦葵科(Malvaceae)、亞麻科(Linacea)、大戟科(E叩horbiaceae)、旋花科(Convolvulaceae)、薔薇科(Rosaceae)、葫聲科(Cucurbitaceae)、山茶科(Theaceae)、萏草科(Rubiaceae)、梧桐科(Sterculiaceae)或柑桔科(Citrus)植物。在一個實施方案中，所述植物是豆科、茄科或十字花科植物。所以，在一個實施方案中，所述植物是豆科植物，優(yōu)選的屬是大豆屬、豌豆屬、落花生屬(Arachis)、鷹嘴豆屬(Cicer)、蠶豆屬(Vicia)、菜豆屬(Phaseolus)、羽扇豆屬(Lupinus)、苜蓿屬(Medicago)或兵豆屬(Lens)。豆科的優(yōu)選物種是蒺藜苜蓿(M;《r朋cfl似/")、紫花苜蓿(Af.5^/v")、大豆、婉豆、落花生(A/r，ogfl^)、鷹p觜豆(G"n'C/fi"附)、蠶豆(K./a^1)、菜豆CP.vw/gar/s)、白羽扇豆(丄w/wViwsfl/6w51)、黃羽扇豆(丄M/7/"MS1/"feM51)、狹葉羽扇豆(丄M尸/簡Sa"gHSfl/o//ws)、苜蓿(M.s^/vtf)或兵豆(J^附cw/,Vm/^)。更優(yōu)選是大豆、落花生和紫花苜蓿。最優(yōu)選的物種是大豆。當(dāng)所述植物是茄科時，優(yōu)選的屬是茄屬、番癡屬、煙草屬或辣椒屬。茄科的優(yōu)選物種是馬鈴薯(S.似6mmi附)、番茄(￡.^cM/ew似附)、煙草(7V;似6"ccn附)或黃燈籠辣椒(Cc/h"ewse)。更優(yōu)選的是馬鈴薯。因此，在一個實施方案中，所述植物是十字花科，優(yōu)選屬是蕓苔屬或蘿卜屬。十字花科的優(yōu)選物種是歐洲油菜(及w印ws)、甘藍(lán)(及o/mimi)、芥(及>""")或蕪青(及m/m)。更優(yōu)選的物種是歐洲油菜。當(dāng)所述植物是藜科植物時，優(yōu)選屬是甜菜屬植物。且優(yōu)選物種是甜菜(必.v"&"r的。當(dāng)所述植物是菊科植物時，優(yōu)選屬是向日葵屬，優(yōu)選物種是向日葵(漢《朋"附)。當(dāng)所述植物是錦葵科植物時，優(yōu)選屬是棉屬或秋葵屬。當(dāng)所述屬是棉屬時，優(yōu)選物種是陸地棉(G.AZraw/"w)或海島棉(G.6flMtfflfe附e)。最優(yōu)選的是陸地棉。秋葵屬的優(yōu)選物種是咖啡黃葵(A"c"/ew《附)。當(dāng)所述植物是亞麻科時，優(yōu)選屬是亞麻屬，優(yōu)選物種是亞麻(丄.附/似他s/附"/w)。當(dāng)所述植物是大戟科植物時，優(yōu)選的屬木薯屬、麻風(fēng)樹屬(Jatropa)、或蓖麻屬(Rhizinus)植物。優(yōu)選物種是木薯(A/;MCM,ewto)、麻風(fēng)樹(丄c""fls)或蓖麻(及."附附""/"。當(dāng)所述植物是旋花科植物時，優(yōu)選屬是番薯屬，優(yōu)選物種是甘薯(丄.M似tos)。當(dāng)所述植物是薔薇科時，優(yōu)選屬是薔薇屬、蘋果屬、梨屬、李屬、懸鉤子屬(Rubus)、茶薦子屬(Ribes)、越橘屬(Vaccinium)或草莓屬植物。優(yōu)選物種是雜交草莓(Fragariaxananassa)。當(dāng)所述植物是葫,科植物時，優(yōu)選是香瓜屬、西瓜屬(Citrullus)或南瓜屬(Cucurbita)植物。優(yōu)選物種是黃瓜(C"c"附/s15^,V"力、西瓜(Om〃"51/fl"齒s)或西葫,(C"c"r6/,a/7印0)。當(dāng)所述植物是山茶科時，優(yōu)選屬是山茶屬，優(yōu)選物種是山茶(C.wVie附/s)。當(dāng)所述植物是茜草科植物時，優(yōu)選屬是咖啡屬，優(yōu)選物種是小果咖啡(C1"n^/ai)或中果咖啡(C.ome/7/^ni)。當(dāng)所述植物是梧桐科時，優(yōu)選屬是可可屬(Theobroma)，優(yōu)選物種是可可樹(T.cflcflo)。當(dāng)所述植物是柑桔屬時，優(yōu)選物種是甜橙(C.w'"e附i》、檸檬(C.///n卵)、桔(C"ric"/fl似)、柚(C1wax/附a),和柑桔屬物種的雜交品種，等等。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述植物是大豆、馬鈴薯或谷物植物。在一個實施方案中所述植物是豆科植物，耙基因是與SEQIDNO:1、2、19或29基本上相似。在進(jìn)一步的實施方案中，所述植物是十字花科植物，耙基因與SEQIDNO:9基本上相同。在一個備選的實施方案中，所述植物是茄科植物，乾基因與SEQIDNO:7或21基本上相同。在一個進(jìn)一步的實施方案中，所述植物是禾本科植物，耙基因與SEQIDNO:13、15或17基本上相同。在一個實施方案中，所述植物是錦葵科植物，耙基因與SEQIDNO:25基本上相同。[第68段1轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染包括植物細(xì)胞的宿主細(xì)胞的適當(dāng)方法在植物生物生物
技術(shù)領(lǐng)域：
內(nèi)已知。任何方法都可以用于將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化入植物細(xì)胞中以獲得本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物。轉(zhuǎn)化雙子葉植物的一般方法公開于例如美國專利號4，940，838和5,464,763等中。轉(zhuǎn)化具體雙子葉植物(例如棉花)的方法在美國專利號5,004,863、5,159,135和5，846，797中列出。大豆轉(zhuǎn)化方法于美國專利號4,992,375、5,416,011、5,569,834、5,824,877和6,384,301中列出，也可以使用EP0301749B1中的方法。[第69段]轉(zhuǎn)化方法可包括直接或間接轉(zhuǎn)化法。適當(dāng)?shù)闹苯臃òň垡叶颊T導(dǎo)的DNA攝取、脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化(US4,536,475)、用基因槍的生物發(fā)射技術(shù)(FrommME等人，Bio/Technology，8(9):833-9，1990;Gordon-Kamm等人PlantCell2:603，1990)、電穿孔、在含DNA的溶液中孵育干胚的方法和微注入法。在直接轉(zhuǎn)化法的情況下，所用質(zhì)粒不需要滿足任何特殊要求?？梢允褂煤唵蔚馁|(zhì)粒，例如pUC系列的質(zhì)粒、pBR322、M13mp系列和pACYC184等等。如果要從轉(zhuǎn)化的細(xì)胞再生完整的植物，優(yōu)選在質(zhì)粒中有一個附加的選擇性標(biāo)記基因。直接轉(zhuǎn)化技術(shù)對雙子葉和單子葉植物都同等適用。[第70段還可以通過利用農(nóng)桿菌(例如EP0116"S)的細(xì)菌感染、利用病毒載體(EP0067553、US4,407,956、WO95/34668、WO93/03161)的病毒感染來進(jìn)行轉(zhuǎn)化或借助花粉轉(zhuǎn)化(EP0270356;WO85/01856;US4,684,611)。農(nóng)桿菌類轉(zhuǎn)化技術(shù)(尤其是對于雙子葉植物)為本領(lǐng)域公知的技術(shù)。農(nóng)桿菌菌林(例如根癌農(nóng)桿菌或發(fā)根農(nóng)桿菌(/^n^flrcter/i/wW^oge/fM))包括質(zhì)粒(Ti或Ri質(zhì)粒)和用農(nóng)桿菌感染之后轉(zhuǎn)移入植物的T-DNA元件。該T-DNA(轉(zhuǎn)移DNA)被整合到植物細(xì)胞的基因組中。T-DNA可定位在Ri-或Ti-質(zhì)粒上，或者分開包括在所謂的雙元載體中。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法記栽于例如HorschRB等人(1985)Science225:1229中。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化最適用于雙子葉植物，也已經(jīng)適用于單子葉植物。用農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化記載于下列文獻(xiàn)中，例如WhiteFF，VectorsforGeneTransferinHigherPlants,TransgenicPlants,第1巻，EngineeringandUtilization,S.D.Kung和R.Wu編著，AcademicPress,1993，第15—38頁、JenesB等人TechniquesforGeneTransfer,TransgenicPlants,第1巻，EngineeringandUtilization,S.D.Kung和R.Wu編著,AcademicPress,1993,第128-143頁和Potrykus(1991)AnnuRevPlantPhysiolPlantMolecBiol42:205-225中。\1咪唑煙酸(用于AHAS基因的選擇劑)(BASFCorporation,FlorhamPark,NJ),pH為5.8。按照說明書的指導(dǎo)，用Invitrogen的GeneRacer試劑盒(L1502-01)分離與部分cDNA克隆45174942(SEQIDNO:1)100%同源的全長轉(zhuǎn)錄序列。根據(jù)Invitrogen的GeneRacer試劑盒說明書制備SCN感染后6天收獲的大豆根部的總RNA。制備的RNA根據(jù)GeneRacer試劑盒說明書反轉(zhuǎn)錄，并用作用于PCR的RACE文庫模板，以根據(jù)GeneRacer試劑盒說明書用首次和第二(巢氏)PCR反應(yīng)分離5'cDNA末端。根據(jù)說明書指導(dǎo)進(jìn)4亍巢氏PCR反應(yīng)，以得到所需的擴(kuò)增產(chǎn)物。[第92段用凝膠電泳分離第二次PCR反應(yīng)的特定產(chǎn)物。根據(jù)說明書從瓊脂糖凝膠中純化片段并克隆到PCR4-TOPO載體(Invitrogen)中。小量制備得到的克隆并測序。記為SEQIDNO:29(全長GmOPR3樣DNA)的一個全長片段與SEQIDNO:l(45174942DNA序歹寸)的重疊區(qū)有100%同一性。該全長大豆GmOPR3樣序列和來自其他植物物種的OPR3樣基因編碼的蛋白質(zhì)之間的比對示于圖2a-2c。[第93段本領(lǐng)域技術(shù)人員會知曉，或僅僅通過常規(guī)的實驗就能夠確定此處描述的本發(fā)明具體實施方案的許多等同物。所附權(quán)利要求書意在涵蓋這些等同物。40權(quán)利要求1、一種雙鏈RNA分子，包含i)第一鏈，包含與OPR3-樣基因的一部分基本上相同的序列；和ii)第二鏈，包含與第一鏈基本上互補(bǔ)的序列，其中所述OPR3-樣基因的一部分來自選自下組的多核苷酸a)包含SEQIDNO1、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸；b)編碼具有SEQIDNO3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中限定的序列的多肽的多核苷酸；c)與具有SEQIDNO1、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸有至少70％序列同一性的多核苷酸；d)編碼與具有SEQIDNO3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中所限定序列的多肽有至少70％序列同一性的多肽的多核苷酸；e)包括具有SEQIDNO1、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸的至少19個連續(xù)核苷酸、或至少50個連續(xù)核苷酸、或至少100個連續(xù)核苷酸或至少200個連續(xù)核苷酸片段的多核苷酸；f)包含片段的多核苷酸，所述片段編碼具有SEQIDNO3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中限定的序列的多肽的生物活性部分；g)在嚴(yán)緊條件下與下述多核苷酸雜交的多核苷酸，所述多核苷酸包括具有SEQIDNO1、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中所限定序列的多核苷酸的至少19個連續(xù)核苷酸、或至少50個連續(xù)核苷酸、或至少100個連續(xù)核苷酸或至少200個連續(xù)核苷酸；和h)在嚴(yán)緊條件下與下述多核苷酸雜交的多核苷酸，所述多核苷酸包括編碼具有SEQIDNO3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中所限定序列的多肽的多核苷酸的至少19個連續(xù)核苷酸、或至少50個連續(xù)核苷酸、或至少100個連續(xù)核苷酸、或至少200個連續(xù)核苷酸。2、如權(quán)利要求1所述的雙鏈RNA，其中所述多核苷酸包含SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29限定的序歹'。3、如權(quán)利要求1所述的雙鏈RNA，其中所述多核苷酸與具有SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸有至少70%同一性。4、如權(quán)利要求1所述的雙鏈RNA，其中所述多核普酸編碼具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中限定的序列的多肽。5、如權(quán)利要求1所述的雙鏈RNA，其中所述多核苷酸編碼與具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中所限定序列的多肽有至少70%序列同一性的多肽。6、如權(quán)利要求1所述的雙鏈RNA,其中所述多核苷酸在嚴(yán)緊^Ht下與包含SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸雜交。7、如權(quán)利要求1所述的雙鏈RNA，其中所述多核苦酸包含編碼具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中所限定序列的多肽的生物活性部分的片段。8、一種雙鏈RNA分子庫，包括多種RNA分子，每個RNA分子包含長度為約19-24個核苷酸的雙鏈區(qū)，其中所述雙鏈RNA分子衍生自選自下組的多核苷酸的一部分a)包含SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸；b)編碼具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中限定的序列的多肽的多核苷酸；c)與具有SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸有至少卯％序列同一性的多核苷酸；和d)編碼與具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、28或30中所限定序列的多肽有卯％序列同一性的多肽的多核苷酸。9、如權(quán)利要求8所述的雙鏈RNA庫，其中所述多核苷酸包含SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列。10、如權(quán)利要求8所述的雙鏈RNA庫，其中所述多核苷酸與具有SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸有至少90%序列同一性。11、如權(quán)利要求8所述的雙鏈RNA庫，其中所述多核苷酸編碼具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中限定的序列的多肽。12、如權(quán)利要求8所述的雙鏈RNA庫，其中所述多核苷酸編碼與具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中限定的序列的多肽有至少90%序列同一性的多肽。13、一種轉(zhuǎn)基因植物，能夠表達(dá)與OPR3樣基因的一部分基本上相同的雙鏈RNA，其中所述OPR3樣基因的一部分來自選自下組的多核苷酸a)包含SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸；b)編碼具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中限定的序列的多肽的多核苷酸；c)與具有SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸有至少70%序列同一性的多核苷酸；d)編碼與具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中所限定序列的多肽有至少70%序列同一性的多肽的多核苷酸；e)包括具有SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中所限定序列的多核苷酸的至少19個連續(xù)核苷酸、或至少50個連續(xù)核苷酸、或至少100個連續(xù)核苷酸或至少200個連續(xù)核苷酸片段的多核苷酸；f)包含片段的多核苷酸，所述片段編碼具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中限定的序列的多肽的生物活性部分；g)在嚴(yán)緊條件下與下述多核苷酸雜交的多核苷酸，所述多核苷酸包括具有SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中所限定序列的多核苷酸的至少19個連續(xù)核苷酸、或至少50個連續(xù)核苷酸、或至少100個連續(xù)核苷酸或至少200個連續(xù)核苷酸；和h)在嚴(yán)緊條件下與下述多核苷酸雜交的多核苷酸，所述多核苷酸包括編碼具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中所限定序列的多肽的多核苷酸的至少19個連續(xù)核苷酸、或至少50個連續(xù)核苷酸、或至少100個連續(xù)核苷酸、或至少200個連續(xù)核苷酸。14、如權(quán)利要求13所述的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述雙鏈RNA包括多種RNA分子，每種RNA分子包含長度為約1924個核苷酸的雙鏈區(qū)，其中所述RNA分子衍生自選自下組的多核苷酸的一部分a)包含SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸；b)編碼具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中限定的序列的多肽的多核苷酸；c)與具有SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中所限定序列的多核苷酸有至少卯％序列同一性的多核苷酸；和d)編碼與具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中所限定序列的多肽有至少90%序列同一性的多肽的多核苷15、如權(quán)利要求13所述的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述植物選自玉蜀黍、小麥、大麥、高粱、黑麥、黑小麥、稻、甘蔗、柑桔樹、菠蘿、椰子、香蕉、咖啡、茶、煙草、向日葵、豌豆、苜蓿、大豆、胡蘿卜、芽菜、番茄、馬鈴薯、棉花、煙草、茄子、胡椒、油菜、蕓苔、甜菜、巻心菜、花椰菜、嫩莖花椰菜、萵苣、百樂M艮屬物種、蒺藜苜蓿、prerennialgrass、黑麥草和擬南芥。16、如權(quán)利要求13所述的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述植物是大豆。17、如權(quán)利要求13所述的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述多核苷酸包含SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列。18、如權(quán)利要求13所述的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述多核苷酸與具有SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸有至少70%的序列同一性。19、如權(quán)利要求13所述的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述多核苦酸編碼具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中限定的序列的多肽。20、如權(quán)利要求13所述的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述多核苷酸編碼與具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中限定的序列的多肽有至少70%序列同一性的多肽。21、一種制備能夠表it^植物中抑制OPR3樣耙基因表達(dá)的雙鏈RNA的轉(zhuǎn)基因植物的方法，所述方法包括下列步驟i)制備具有與OPR3樣基因的一部分基本上相同的區(qū)域的核酸，其中所述核酸一旦在所述植物中表達(dá)，能夠形成雙鏈轉(zhuǎn)錄物；ii)用所述核酸轉(zhuǎn)化受體植物；iii)生成所述受體植物的一個或多個轉(zhuǎn)基因子代；和iv)選擇表達(dá)所述轉(zhuǎn)錄物的子代，其中所述耙基因的一部分是選自下組的多核苷酸的19-500個核苷酸a)包含SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸；b)編碼具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中限定的序列的多肽的多核苷酸；c)與具有SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸有至少70%序列同一性的多核苷酸；d)編碼與具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中所限定序列的多肽有至少70%序列同一性的多肽的多核苷酸；e)包括具有SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中所限定序列的多核苷酸的至少19個連續(xù)核苷酸、或至少50個連續(xù)核苷酸、或至少100個連續(xù)核苷酸或至少200個連續(xù)核苷酸片段的多核苷酸；f)包含片段的多核苷酸，所述片段編碼具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中限定的序列的多肽的生物活性部分；g)在嚴(yán)緊條件下與下述多核苷酸雜交的多核苷酸，所述多核苷酸包括具有SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸的至少19個連續(xù)核苷酸、或至少50個連續(xù)核苷酸、或至少100個連續(xù)核香酸或至少200個連續(xù)核苷酸；和h)在嚴(yán)緊條件下與下述多核苷酸雜交的多核苷酸，所述多核苷酸包括編碼具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中所限定序列的多肽的多核苷酸的至少19個連續(xù)核苷酸、或至少50個連續(xù)核苷酸、或至少100個連續(xù)核苷酸、或至少200個連續(xù)核苦酸。22、如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述雙鏈RNA包括多種RNA分子，每種RNA分子包含長度為約19~24個核苷酸的雙鏈區(qū)，其中所述RNA分子衍生自選自下組的多核苷酸a)包含SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸；b)編碼具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中限定的序列的多肽的多核苷酸；c)與具有SEQIDNO:l、2、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27或29中限定的序列的多核苷酸有至少90%序列同一性的多核普酸；和d)編碼與具有SEQIDNO:3、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30中所限定序列的多肽有至少卯％序列同一性的多肽的多核苷酸。23、如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述植物選自大豆、馬鈴薯、番茄、花生、棉花、木薯、咖啡、椰子、菠蘿、柑桔樹、香蕉、玉米、油菜、甜菜、向日葵、高粱、小麥、燕麥、黑麥、大麥、稻、嫩莢菜豆、利馬豆、豌豆和煙草。24、如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述植物是大豆。25、如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述雙鏈RNA在植物根部或線蟲采食部位表達(dá)。全文摘要本發(fā)明涉及能夠在植物中抑制建立或維持線蟲感染所必需基因的表達(dá)的雙鏈RNA組合物和轉(zhuǎn)基因植物，和其相關(guān)方法。具體而言，本發(fā)明涉及RNA干擾抑制目的OPR3樣植物基因表達(dá)的用途，還涉及產(chǎn)生具有對寄生線蟲增加的抗性的植物。文檔編號C12N15/82GK101605894SQ200880004223公開日2009年12月16日申請日期2008年2月5日優(yōu)先權(quán)日2007年2月8日發(fā)明者A·威格申請人:巴斯福植物科學(xué)有限公司