專利名稱：：抗il-12抗體、組合物、方法和用途的制作方法抗IL-12抗體、組合物、方法和用途本申請(qǐng)是發(fā)明名稱為"抗IL-12抗體、組合物、方法和用途"，申請(qǐng)?zhí)枮?1816961.9的分案申請(qǐng).發(fā)明背景發(fā)明領(lǐng)域本申請(qǐng)部分基于并要求2000年8月7日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)60/223，358和2000年9月29日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)60/236,827的優(yōu)先權(quán)，在此引入每一個(gè)作為參考.本發(fā)明涉及至少一種白介素-12(IL-12)蛋白或其片段的特異性抗體，包括特定的部分或變體，以及編碼所述抗IL-12抗體的核酸、其互補(bǔ)核酸、栽體、宿主細(xì)胞及其準(zhǔn)備方法和用途，包括治療制刑、給藥和設(shè)備.
背景技術(shù)：
：白介素-12(IL-12)是一種異二聚體細(xì)胞因子，由35和40kD的糖基化多肽鏈組成，這兩條鏈由二硫鍵連接。該細(xì)胞因子由樹突細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨嗜細(xì)胞、B細(xì)胞、朗格罕氏細(xì)胞和角化細(xì)胞以及天然殺傷(服)細(xì)胞等抗原呈遞細(xì)胞合成和分泌。IL-12介導(dǎo)許多生物學(xué)過程，被稱作服細(xì)胞刺激因子(MSF)、T細(xì)胞刺激因子、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞成熟因子和EBV轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞系因子(Curfs，J.H.A.J,，etal"ClinicalMicrobiologyReviews,10:742-780(1997))。白介素-12可以與細(xì)胞(如T細(xì)胞、NK細(xì)胞)膜上表達(dá)的IL-12受體結(jié)合，從而改變(如抑制、預(yù)防)生物學(xué)過程.例如，IL-12與IL-12受體的結(jié)合可以刺激預(yù)激活的T細(xì)胞和NK細(xì)胞的增殖，增強(qiáng)細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)、NK細(xì)胞和LAK(淋巴因子激活的殺傷)細(xì)胞的細(xì)胞溶解活性，誘導(dǎo)T細(xì)胞和m細(xì)胞產(chǎn)生y干擾素，并且誘導(dǎo)幼稚的Th0細(xì)胞分化為產(chǎn)生IFNy和il-12的Thl細(xì)胞(Trinchieri，G，，AnnualReviewofImmunology,13:251-276(1995)).具體地，IL-12對(duì)于產(chǎn)生細(xì)胞溶解性細(xì)胞(如NK，CTL)和產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答(如Thl細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答)是關(guān)鍵的.因此，IL-12對(duì)于保護(hù)性免疫(如根除感染)和病理性免疫應(yīng)答(如自身免疫)的產(chǎn)生和調(diào)節(jié)是至關(guān)重要的(Hendrzak,J.A.andBrunda，M.J.，LaboratoryInvestigation,72:619-637(1995)).因此，例如可以通過抗體等搮作IL-12的體內(nèi)生物學(xué)活性，從而增強(qiáng)、抑制或預(yù)防免疫應(yīng)答(如保護(hù)性的或病理性的)。非人哺乳動(dòng)物抗體、嵌合抗體、多克隆抗體(如抗血清)和/或單克隆抗體(Mabs)和抗體片段(如其蛋白水解消化產(chǎn)物或融合蛋白產(chǎn)物)是被研究在某些情況下嘗試用于治療某些疾病的潛在治療劑.然而，當(dāng)給予人類這些抗體或片段時(shí)可以引發(fā)免疫應(yīng)答.這種免疫應(yīng)答可以導(dǎo)致免疫復(fù)合物介導(dǎo)的從循環(huán)中清除抗體或片段，使得重復(fù)給藥不適用于治療，從而減少了對(duì)患者的治療益處并且限制了再次給予抗體或片段.例如，重復(fù)給予包含非人部分的抗體或片段可以導(dǎo)致血清病和/或過敏.為了避免這些和其它問題，采用了許多方法咸少這些抗體及其部分的免疫原性，包括嵌合化和人源化，這是本領(lǐng)域所公知的.然而，這些和其它方法仍然可以產(chǎn)生具有一些免疫原性、低親和力的抗體和片段，或具有細(xì)胞培養(yǎng)、大規(guī)模進(jìn)行、生產(chǎn)和/或低產(chǎn)率的問題。因此，這些抗體或片段對(duì)于生產(chǎn)或用作治療蛋白仍然不夠理想.因此，需要提供能夠克服這些問題中的一個(gè)或多個(gè)的抗TNF抗體或片段，以及改進(jìn)已知的抗體或其片段.發(fā)明概述本發(fā)明提供如這里所描述和實(shí)現(xiàn)的分離的人、靈長(zhǎng)類、嚙齒類、哺乳動(dòng)物、嵌合、人源化和/或CDR嫁接的抗IL-12抗體、免疫球蛋白、其裂解產(chǎn)物及特定的部分和變體，以及抗IL-12抗體組合物、其編碼或互補(bǔ)核酸、栽體、宿主細(xì)胞、組合物、制劑、設(shè)備、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、轉(zhuǎn)基因植物及其制備方法和用途，它們結(jié)合了本領(lǐng)域已知的成分.本發(fā)明也提供了至少一種這里所描述的抗IL-12抗體.本發(fā)明的抗體包括任何包含含有免疫球蛋白分子的至少一部分的分子的蛋白或肽，所述部分可以是，但不限于可以摻入本發(fā)明的抗體的至少一種重鏈或輕鏈或其配體結(jié)合部分的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)、重鏈或輕鏈可變區(qū)、重鏈或輕鏈恒定區(qū)、構(gòu)架區(qū)、或其任意部分.本發(fā)明的抗體可以包括或來源于任何哺乳動(dòng)物，例如，但不限于人、小鼠、兔、大鼠、嚙齒類動(dòng)物、靈長(zhǎng)類動(dòng)物或其任意組合等.本發(fā)明的一方面提供一種分離的核酸分子，它包含、互補(bǔ)于或雜交于一種編碼至少一種IL-12抗獨(dú)特型抗體的多核苷酸，該抗體包含至少一種其特定序列、結(jié)構(gòu)域、部分或變體.本發(fā)明進(jìn)一步提供了包含所述IL-12抗獨(dú)特型抗體的編碼核酸分子的重組栽體，含所迷核酸和/或重組栽體的宿主細(xì)胞,以及這種抗獨(dú)特型抗體核酸、栽體和/或宿主細(xì)胞的制備方法和/或用途.本發(fā)明也提供了至少一種在宿主細(xì)胞中表達(dá)至少一種抗IL-12抗體、或IL-12抗獨(dú)特型抗體的方法，包括按照此處的描迷在其中至少一種抗IL-12抗體以可檢測(cè)和/或可回收的重表達(dá)的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞.本發(fā)明也提供了至少一種組合物，它包含(a)如此處描述的分離的抗IL-12抗體的編碼核酸和/或抗體；和(b)合適的栽體或稀釋劑.栽體或稀釋劑可以任選是可藥用的已知栽體或稀釋劑.該組合物可以任選進(jìn)一步包含至少一種其它的化合物、蛋白或組合物.本發(fā)明進(jìn)一步提供了至少一種抗IL-12抗體方法或組合物，用于在本領(lǐng)域已知的和/或這里所描述的相關(guān)狀況之前、之后或之時(shí)以治療有效量給藥，以便調(diào)節(jié)或治療細(xì)胞、組織、器官、動(dòng)物或病人中的至少一種IL-12相關(guān)狀況。本發(fā)明也提供了至少一種遞送治療或預(yù)防有效量的至少一種本發(fā)明的抗IL-12抗體的組合物、設(shè)備和/或方法.本發(fā)明進(jìn)一步提供了至少一種抗IL-12抗體方法或組合物，用于在本領(lǐng)域已知的和/或這里所描述的相關(guān)狀況之前、之后或之時(shí)診斷細(xì)胞、組織、器官、動(dòng)物或病人中的至少一種IL-12相關(guān)狀況。本發(fā)明也提供了至少一種遞送用于診斷至少一種本發(fā)明的抗IL-12抗體的組合物、設(shè)備和/或方法。圖U和1B表示人抗IL-12mAb與固定化的人IL-12的濃度依賴性結(jié)合，用IXBSA/PBS對(duì)抗IL-12抗體進(jìn)行系列稀釋，并且在rhIL-12包被的板上在371C下袢育1小時(shí).用0.02XTween20(聚氣乙晞(20)脫水山梨醇單月桂酸醋)、0.15M鹽水洗滌兩次，然后用辣根過氣化物醃(冊(cè)P)標(biāo)記的山羊抗人IgGK特異性抗體在室溫下探測(cè)1小時(shí).再次用鄰苯二胺(OPD)底物洗滌板，在490nm處測(cè)定每個(gè)孔的光密度(OD).圖2:圖A和B中從左至右的道包含人IL-2，人IL12p40、鼠IL-12和預(yù)染色的分子量標(biāo)記，圖2A表示從總蛋白得到的染色帶.每道的主要帶是IL-12(75kd),p40人IL-12(40kd)，和鼠IL-12(75kd).圖2B表示從與圖2A所示相同的皿制備的蛋白印跡.在用HRP標(biāo)記的山羊抗人IgG標(biāo)且特異性檢測(cè)人IL-12(單體和多聚體)和人IL-12p40,與HRP標(biāo)記的山羊抗人IgG反應(yīng)的對(duì)照印跡(未示出)沒有顯示出任何帶。圍3:在用有或無抗IL-2抗體C340，8.6.2，同種型對(duì)照抗體時(shí)用IL-2，IL-12,IL-2+IL-12處理的人PBL中的IFNy基因表達(dá)的反轉(zhuǎn)錄PCR分析.對(duì)總RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，使用基因特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增.對(duì)每個(gè)樣品中的P肌動(dòng)蛋白mRNA水平進(jìn)行測(cè)定，將其作為mRNA完整性和含量的對(duì)照.圖4是表示人抗IL-12mAb(C340)抑制用IL-2加IL-12刺激的單核細(xì)胞耗盡的CD3+外周血單核細(xì)胞(pbmc)產(chǎn)生y干擾素(ifny)的柱狀圖。在對(duì)照培養(yǎng)基(未加細(xì)胞因子)，補(bǔ)加IL-12(0.1ng/ml)加IL-2(50IU/ml)(IL-12/IL-2)的培養(yǎng)基，含mAbC340(10ig/ml)的對(duì)照培養(yǎng)基，和含mAbC340(10pg/ml)的IL-12/IL-2培養(yǎng)基中培養(yǎng)PBMC5小時(shí).通過用CD3-PE和IFNy-FITC進(jìn)行的兩色免疫染色測(cè)量細(xì)胞內(nèi)IFNY.沒有顯示一個(gè)供體的數(shù)據(jù)。圖5表示用兩個(gè)不同批號(hào)的人抗IL-12mAb(C340)抑制由IL-2加IL-12剌激的外周血淋巴細(xì)胞分泌IFNy.在提到的10U/mlIL-2,IL-2加400pg/mlIL-12,或IL-2加IL-12和mAbC340存在下培養(yǎng)人PBL(8xl07ml)24小時(shí)。取出培養(yǎng)物上清液，通過EIA測(cè)定IFNv.圖6是表示人抗IL-12mAb(C340)對(duì)IL-12加IL-2誘導(dǎo)的LAK細(xì)胞的細(xì)胞毒性的劑量依賴性抑制的柱狀圖。在IL-12(400pg/ml)加IL-2(10U/ml)和mAbC340(如指出的5000ng/旭l或50ng/ml)存在下培養(yǎng)LAK效應(yīng)細(xì)胞(人PBL，8x107ml)24小時(shí).洗滌LAK效應(yīng)細(xì)胞，以80:1的效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞(E:T)比與51Cr標(biāo)記的Raji靶細(xì)胞一起培養(yǎng)4小時(shí)，測(cè)重Raji細(xì)胞裂解時(shí)釋放至培養(yǎng)基中的"Cr的量。結(jié)果表示為三個(gè)正常供體標(biāo)準(zhǔn)誤的平均值.IL-12陽性對(duì)照(IL-12)是有IL-12和無抗體時(shí)孵育的效應(yīng)細(xì)胞.本底(BKGD)是在無IL-12或抗體時(shí)孵育的效應(yīng)細(xì)胞，困7A和7B是表示人抗IL-12mAb(C340)抑制用IL-2加IL-12諸導(dǎo)的CD3+外周血單核細(xì)胞上表達(dá)CD95的柱狀圖。在mAbC340(10ng/ml)存在或不存在下在含O.1ng/mlIL-12和次最佳劑量的IL-2(50IU/ml)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)PBMC72小時(shí).用抗CD95-FITC染色的流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量CD95表達(dá).用兩色分析(CD3或CD56-PE與CD95-FITC)和正向與正交光"ft射進(jìn)行控制，圖8表示重組人抗人IL-12抗體(rC340)以不能區(qū)分于純化mAbC340的'方式與固定的IL-12結(jié)合.測(cè)定了三種產(chǎn)生rC340的重組細(xì)胞系的上清液中的rC340濃度，用ELISA評(píng)估上清液中的IL-12結(jié)合，用2jig/ml人IL-12包被板，用來自于原始雜交瘤(標(biāo)準(zhǔn))或重組細(xì)胞系上清液的純化mAbC340孵育.用堿性轔酸醃偶聯(lián)的山羊抗人IgG(重鏈+輕鏈)檢測(cè)IL-12結(jié)合的抗體.困9A-9C表示由三種獨(dú)立來源的產(chǎn)生rC340的重組細(xì)胞亞克隆分泌的抗體的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)和量(困9A，亞克隆C379B;困9B，亞克隆C381A;圖9C，亞克隆C389A)。將重組細(xì)胞以2x105的起始密度種植于T75燒瓶中的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基中。在各個(gè)時(shí)間，重懸細(xì)胞，測(cè)定培養(yǎng)基中的活細(xì)胞數(shù)目和量(Mg/ml).發(fā)明詳述本發(fā)明提供分離的、重組的和/或合成的人、靈長(zhǎng)類、嚙齒類、哺乳動(dòng)物、嵌合、人源化和/或CDR嫁接的抗IL-12抗體和IL-12抗獨(dú)特型抗體，以及包含至少一種編碼至少一種抗IL-12抗體或IL-12抗獨(dú)特型抗體的多核苷酸的組合物和編碼核酸分子.本發(fā)明進(jìn)一步包括，但不限于，所述核酸和抗體以及抗獨(dú)特型抗體的制備方法和用途，包括診斷和治療組合物、方法和i殳備.這里用到的"抗白介素12抗體"、"抗IL-12抗體"、"抗IL-12抗體部分"或"抗IL-12抗體片段"和/或"抗IL-12抗體變體"等包括任何含有一種分子的肽或多肽，該分子包含免疫球蛋白分子的至少一部分，例如，但不限于重鏈或輕鏈的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)或其配體結(jié)合部分、重鏈或輕鏈可變區(qū)、重鏈或輕鏈恒定區(qū)、構(gòu)架區(qū)或其任意部分，或可以摻入到本發(fā)明的抗體中的IL-12受體或結(jié)合蛋白的至少一部分.這種抗體任選進(jìn)一步影響特異性配體，例如，但不限于，這些抗體調(diào)節(jié)、減少、增加、拮抗、激動(dòng)、減輕、緩解、阻斷、抑制、消除和/或干擾至少一種IL-12活性或結(jié)合，或在體外、原位和/或體外具有IL-12受體活性或結(jié)合.作為非限制性的例子，本發(fā)明的適當(dāng)抗IL-12抗體、特定部分或變體可以結(jié)合至少一種IL-12、或其特定部分、變體或結(jié)構(gòu)域.適當(dāng)?shù)目笽L-12抗體、特定部分或變體也可以任選影響至少一種IL-12活性或功能，例如，但不限于，RNA、DNA或蛋白合成，IL-12釋放，IL-12受體信號(hào)傳遞、膜IL-12裂解、IL-12活性、IL-12產(chǎn)生和/或合成.術(shù)語"抗體"進(jìn)一步包含抗體、其消化片段、特定部分和變體，包括抗體模擬物或包括模li抗體或其特定片段或部分的結(jié)構(gòu)和/或功能的抗體部分，包括單鏈抗體及其片段.功能性片段包括與哺乳動(dòng)物IL-12結(jié)合的抗原結(jié)合片段.例如，本發(fā)明也包括能夠與IL-12或其部分結(jié)合的抗體片段，包括但不限于Fab(例如通過木瓜蛋白蘇消化)，F(xiàn)ab'(如通過胃蛋白酶消化和部分還原)和F(ab')2(如通過胃蛋白酶消化)，facb(如通過纖溶酶消化)，pFc'(如通過胃蛋白蘇或纖溶酶消化)，F(xiàn)d(如通過胃蛋白酶消化、部分還原和再聚集)，F(xiàn)v或scFv(如通過分子生物學(xué)技術(shù))片段(見例如，Colligan，Immunology,同上)-這些片段可以通過如本領(lǐng)域公知的和/或這里描述的蘇促裂解、合成或重組技術(shù)而產(chǎn)生.也可以用抗體基因產(chǎn)生各種截短形式的抗體，在這些基因中天然終止位點(diǎn)的上游導(dǎo)入了一個(gè)或多個(gè)終止密碼子.例如可以設(shè)計(jì)一種編碼F(abOz重鏈部分的組合基因，使其包含編碼重鏈CH,結(jié)構(gòu)域和/或鉸鏈區(qū)的DNA序列?？梢酝ㄟ^常規(guī)技術(shù)將抗體的各部分以化學(xué)方式連接在一起，或用基因工程技術(shù)制備作為連續(xù)蛋白的抗體的各部分。這里用到的術(shù)語"人抗體"是指這樣一種抗體，其中該蛋白的每個(gè)部分(如CDR，構(gòu)架區(qū)，CL，CH結(jié)構(gòu)域(如CHl,CH2,CH3),鉸鏈區(qū)，(VL,VH))在人類中基本是非免疫原性的，僅僅有微小的序列改變或變異。同樣，稱作靈長(zhǎng)類(猴、狒狒、猩猩等)、嚙齒類(小鼠、大鼠、兔、豚鼠、倉(cāng)鼠等)和其它哺乳動(dòng)物抗體的抗體是指這種物種、亞屬、屬、亞家族、家族特異性抗體。此外，嵌合抗體包括上述抗體的任意組合，這種改變或變異相對(duì)于未修飾抗體任選并優(yōu)選保留或減少人類在人或其它物種中的免疫原性，因此，人抗體與嵌合或人源化抗體不同.已經(jīng)指出，人抗體可以由能夠表達(dá)功能性重排的人免疫球蛋白(如重鏈和/或輕鏈)基因的非人動(dòng)物或原核或真核細(xì)胞產(chǎn)生。此外，當(dāng)人抗體是單鏈抗體時(shí)，它可以包含在天然人抗體中不存在的連接肽.例如，F(xiàn)v可以包含連接肽，例如大約2-8個(gè)甘氨酸或其它氨基酸殘基，它們連接重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)。這種連接肽被認(rèn)為是來源于人的.也可以使用雙特異性、異特異性、異偶聯(lián)或類似的抗體，它們是對(duì)至少兩個(gè)不同抗原具有結(jié)合特異性的抗體.在本申請(qǐng)中，一種結(jié)合特異性是針對(duì)至少一種IL-12蛋白，另一種是針對(duì)任意其它抗原。制備特異性抗體的方法是本領(lǐng)域中公知的.一般地，雙特異性抗體的重組產(chǎn)生是基于兩個(gè)免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(duì)的共表達(dá)，其中兩個(gè)重鏈具有不同的特異性(MilsteinandCuello,Nature305:537(1983)).由于免疫球蛋白重鏈和輕鏈的隨機(jī)分配，這些雜交瘤產(chǎn)生10中不同抗體分子的可能混合物，其中只有一種具有正確的雙特異性結(jié)構(gòu).通常通過親和層析步驟進(jìn)行的正確分子的純化是繁雜的，產(chǎn)率很低.相似的程序公開于，例如WO93/08829，USPatentNos，6210668,6193967,6132992，6106833,6060285，6037453,6010902，5989530，5959084，5959083，5932448,5833985，5821333，5807706,5643759,5601819，5582996，5496549，4676980，WO91/00360，WO92/00373，EP03089，Trauneckeretal.，EMBOJ.10:3655(1991)，Sureshetal.，MethodsinEnzymology121:210(1986)，在此引入其完整內(nèi)容作為參考.用于本發(fā)明的方法和組合物中的抗IL-12抗體(也稱作IL-12抗體)的特征可以任選在于與IL-12結(jié)合的高親和性，并且任選并優(yōu)選具有低毒性。具體地，本發(fā)明中使用其中各個(gè)成分，如可變區(qū)、恒定區(qū)和構(gòu)架區(qū)的和/或其集合任選和優(yōu)選具有低免疫原性的本發(fā)明的抗體、特定片段或變體。本發(fā)明中使用的抗體的特征任選在于它們能夠在很長(zhǎng)時(shí)間中治療患者，具有可測(cè)量的癥狀緩解和/或可接受的毒性。低或可接受的免疫原性和/或高親和性，以及其它適當(dāng)?shù)奶匦钥梢杂糜谶_(dá)到治療結(jié)果.此處定義的"低免疫原性"是指在約75X以下或優(yōu)選50i的受治療患者中引起顯著的HAHA，HACA或HAMA反應(yīng)，和/或在受治療患者中產(chǎn)生低滴度(用雙抗原酴免疫測(cè)定時(shí)小于約300,優(yōu)選小于約100)(Elliottetal，，Lancet344:1125-1127(1994)，在此引入其完整內(nèi)容作為參考K用途本發(fā)明的分離核酸可以用于產(chǎn)生至少一種抗IL-12抗體或其特定變體，所述抗體或其特定變體可以用于在細(xì)胞、組織、器官或動(dòng)物(包括哺乳動(dòng)物和人)中測(cè)重或起作用，用于診斷、監(jiān)測(cè)、調(diào)節(jié)、治療、緩解至少一種IL-12狀況，幫助預(yù)防該狀況的發(fā)生，或減輕其癥狀，所述狀況選自，但不限于，至少一種免疫紊亂或疾病、一種心血管紊亂或疾病、感染性、惡性和/或神經(jīng)紊亂或疾病或其它已知的或特定的IL-12相關(guān)狀況.這種方法包括將有效量的含有至少一種抗IL-12抗體的組合物或藥物組合物給予需要這種調(diào)節(jié)、治療、緩解、預(yù)防或減輕該癥狀、作用或機(jī)制的細(xì)胞、組織、器官、動(dòng)物或患者，有效量可以包括每單次(如快速001-500mg/kg，或每單次(如團(tuán)快速注射)、多次或連續(xù)給藥時(shí)達(dá)到約0.01-5000pg/ml的血清濃度，或用此處描述的或相關(guān)領(lǐng)域中已知的方法完成和測(cè)定的任意有效范圍或值.引用文獻(xiàn)在此引入這里所引用的所有出版物或?qū)＠耐暾麅?nèi)容作為參考，它為可能。出版物是指任何科學(xué)或?qū)＠_，或可以用任何媒體形式，包括所有錄音、電子或印刷形式獲得的任何其它信息，在此全文引入以下對(duì)比文獻(xiàn)作為參考Ausubel，etal.，ed.,CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWileyftSons,Inc.,NY，NY(1987-2001);Sambrook，etal.,MolecularCloning:ALaboratoryManual,2ndEdition,ColdSpringHarbor,NY(1989);HarlowandLane,antibodiesaLaboratoryManual,ColdSpringHarbor,NY(1989);Colligan,etal.,eds.，CurrentProtocolsinImmunology,JohnWileyftSons,Inc.:NY(1994-2001);Colliganetal,，CurrentProtocolsinProteinScience,JohnWiley&Sons,NY,NY，(1997-2001),本發(fā)明的抗體本發(fā)明的至少一種抗IL-12抗體可以任選通過本領(lǐng)域公知的細(xì)胞系、混合細(xì)胞系、永生化細(xì)胞或永生化細(xì)胞的克隆群產(chǎn)生.見，例如，Ausubel，etal.，ed.，CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWileyftSons,Inc.,NY,NY(1987-2001);Sambrook，etal.,MolecularCloning:ALaboratoryManual,2Edition,ColdSpringHarbor,NY(1989);HarlowandLane,antibodies,aLaboratoryManual,ColdSpringHarbor,NY(1989);Colligan,etal.,eds,,CurrentProtocolsinImmunology,JohnWileyftSons,Inc.,NY(1994-2001);Colliganetal.，CurrentProtocolsinProteinScience,JohnWiley&Sons,NY,NY，(1997-2001)，在此全文引入作為參考.可以通過用適當(dāng)?shù)拿庖咴钥乖?，如分離的和/或IL-12蛋白或其部分(包括合成分子，如合成肽)誘導(dǎo)產(chǎn)生人IL-12蛋白或其片段的特異性人抗體?？梢杂孟嗨频姆椒óa(chǎn)生其它特異性或普通哺乳動(dòng)物抗體.可以用適當(dāng)?shù)募夹g(shù)制備免疫原性抗原和產(chǎn)生單克隆抗體。在一種方法中，可以通過融合適當(dāng)?shù)挠郎?xì)胞系和抗體產(chǎn)生細(xì)胞而產(chǎn)生。所述細(xì)胞系如骨號(hào)瘤細(xì)胞系，例如，但不限于Sp2/0，Sp2/0-AG14,NSO,NS1，NS2，AE-l,L.5，>243，P3X63Ag8.653,Sp2SA3，Sp2MAI,Sp2SS1，Sp2SA5，U937，MLA144，ACTIV，M0LT4,DA-l,J匿AT,WEHI,K-562，COS,RAJI,NIH3T3，HL-60,MLA144,NAMAIWA,NEURO2A等，或異骨髄瘤，或本領(lǐng)域已知的其它細(xì)胞系.見，例如，兩.atcc.org,www,lifetech.com等。所述抗體產(chǎn)生細(xì)胞例如，但不限于分離的或克隆的脾細(xì)胞、外周血細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、扁桃體或其它免疫細(xì)胞或B細(xì)胞，或其它任何表達(dá)重鏈或輕鏈恒定區(qū)或可變區(qū)或構(gòu)架區(qū)或CDR序列的細(xì)胞，這些序列可以是內(nèi)源性或異源核酸，重組或內(nèi)源性的、病毒、細(xì)菌、藻類、原核生物、兩棲動(dòng)物、昆蟲、爬行動(dòng)物、魚類、哺乳動(dòng)物、嚙齒類、馬、山羊、綿羊、靈長(zhǎng)類、真核生物的基因組DM,cDNA，rDNA,線粒體DNA或RNA,葉綠體DNA或RNA,hnRNA,mRNA，tRNA，單鏈、雙鏈或三鏈、雜交序列等或其組合。見，例如Ausubel,同上，和Co出gan，Immunology,同上，第二章，在此引入作為參考.抗體產(chǎn)生細(xì)胞也可以從用感興趣的抗原免疫的人或其它適當(dāng)動(dòng)物的外周血或優(yōu)選脾或淋巴結(jié)獲得.也可以用任何其它適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞表達(dá)編碼本發(fā)明的抗體、其特定片段或變體的異源或內(nèi)源性核酸.可以用選擇性培養(yǎng)條件或其它適當(dāng)?shù)囊阎椒ǚ蛛x融合細(xì)胞(雜交瘤)或重組細(xì)胞，并且用有限稀釋或細(xì)胞分揀或其它公知方法進(jìn)行克隆.產(chǎn)生具有所需特異性的抗體的細(xì)胞可以通過適當(dāng)?shù)臏y(cè)定(如ELISA)進(jìn)行選擇.可以使用其它適當(dāng)?shù)漠a(chǎn)生或分離具有所需特異性的抗體，包括，但不限于本領(lǐng)域公知和/或此處描述的從能夠產(chǎn)生人抗體所有組成成分的肽或蛋白文庫(kù)(所述文庫(kù)例如，但不限于噬菌體、核糖體、寡核苷酸、RNA、cDNA等、展示文庫(kù)；如可以來自于CambridgeantibodyTechnologies,Cambridgeshire,UK;MorphoSys,Martinsreid/Planegg,DE;Biovation,Aberdeen,Scotland,UK;Biolnvent,Lund，SwedenjDyaxCorp.,Enzon,Affymax/Biosite;Xoma,Berkeley,CA;Ixsys，見，例如EP368,684，PCT/GB91/01134;PCT/GB92/01755;PCT/GB92/002240;PCT/GB92/00883;PCT/GB93/00605;US08/350260(5/12/94);PCT/GB94/01422;PCT/GB94/02662;PCT/GB97/01835;(CAT/MRC);WO90/W443;W090/14424;WO90/14430;PCT/US94/1234;W092/18619;W096/07754;(Scripps);EP614989(MorphoSys);WO95/16027(BioInvent);WO88/06630;W090/3809(Dyax);US4，704,692(Enzon);PCT/US91/02989(Affymax);WO89/06283;EP371998;EP550400;(Xoma);EP229046;PCT/US91/07149(Ixsys));或隨機(jī)產(chǎn)生的肽或蛋白-US5723323,5763192,5814476,5817483，5824514,5976862，W086/05803，EP590689(Ixsys，目前應(yīng)用的分子演變(AME),在此全文引入作為參考)；或依賴于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物免疫的肽或蛋白(所述轉(zhuǎn)基因動(dòng)物如SCID小鼠，Nguyenetal.,Microbiol.Immunol.41:901-907(1997);Sandhuetal.，Crit，Rev.Biotechnol.16:95-118(1996);Erenetal.，Immunol.93:154-161(1998)，每個(gè)文獻(xiàn)或相關(guān)專利和申請(qǐng)均在此引入作為參考)選擇重組抗體的方法.這些技術(shù)包括但不限于，核糖體展示(Hanesetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,94:4937-4942(May1997);Hanesetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95:14130-14135(Nov,1998));單細(xì)胞抗體產(chǎn)生技術(shù)(如選擇的淋巴細(xì)胞抗體方法("SLAM")(美國(guó)專利5，627，052,Wenetal.,J.Immunol.17:887-892(1987);Babcooketal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:7843-7848(1996));凝膠微滴和流式細(xì)胞術(shù)(Powelletal.，Biotechnol.8:333-337(1990);OneCellSystems,Cambridge,MA;Grayetal.,J.I鵬.Meth.182:155-163(1995);Kennyetal.，Bio/Technol.13:787-790(1995));B細(xì)胞選擇(Steenbakkersetal.,Molec.Biol.Reports19:125-134(1994)5Jonaketal.,ProgressBiotech,VoL5，InVitroI咖unizationinHybridomaTechnology,Borrebaeck，ed.,ElsevierSciencePublishersB.V.,Amsterdam,Netherlands(1988)),也可以使用本領(lǐng)域公知的工程化或人源化非人或人抗體的得到.一般地，人源化或工程化的抗體具有一個(gè)或多個(gè)非人來源的氨基酸，例如，但不限于來源于小鼠、大鼠、非人靈長(zhǎng)類或其它哺乳動(dòng)物.這些人類氛基酸殘基一般稱作"榆入"殘基.一般來自于已知人序列的"輸入"可變區(qū)、恒定區(qū)或其它結(jié)構(gòu)域.已知的人IgG序列公開于，例如www,ncbi,nhn.nih.gov/entrez/query.fcgi;www.atec.org/phage/hdb.htrol;www.sciquestcom/;www.abcam.com/;www,antibodyresource.com/onlinecomp.html;www.public.iastate.edu/H>edro/research_tools.htinl;www.mg饑uni.hcidelberg.de/SD/n7TT.h加l;www.whfrecman.coin/hraminology/CH05/lcuby05.htm;www.libraiy.thinkquestorg/12429/Iminune/Antibody.btml;www.hhmi.or_g/grants/lectures/1996Mab/;www.path,cam.ac,uk/~mrc7/nrikcimages.html;www,幼tibodyresource.com/;mcb.harv8rd.edu/BioLinks/Immunology.htrnl.www.inununologylink.com/;pathbox,wusrt.cdu/~hccntcr/indcx.html;www.biotech.ufl.edu/~hcl/;.:www.pebio.com/pa/340913/340913.html;www.nal,usda.gov/awic/pubs/an^ibody/;www.m.ehime-uac.jp/~yasuhito/EHsa.html;www.biodesign.com/table岬；www.icnet.uk/axp/facs/davies/Hnks.html;w\yw.biotech.ufl.edu/~fcc，/protocoLhtml;www.isac-net.org/sitcs_geo.html;aximtUmt,uni-marburg.de/~relc/A￡P(guān)St8rt.html;baserv.uci.kun,nlA"jraats/linksl.html;www.rccab.uni-hd.de/immuno.brpe.nwu.edu/;www.rarc-cpe.cam.ac.uk/imtKloc/public/INTRO.html;www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html;imgtcnusc.fr:8104/;www.biochem.ucl.ftc.uk/~martin/abs/index.html;antibody.bath,ac.ulc/;abgen,cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen.html;www.unizh.chA-bo加鉢er/AHOseminar/SHdcOI.html;www.cryst.bblcac.uk/~ubcg07s/;www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccacwg/ccacwg,h加；www.path.cara.ac.uk/Mnrc7/hunianisation/TAHHP.html;www.ibt.unam.mx/Vir/stnicture/stat_aim.htmI;www,biosci.missouri.edu/sinidigp/Jndcx.html;www.cryst.bioc.cam.ac.uk/~finolina/Wcb-pages/Pcpt/spottech.html;www.jerini.de/fr_products.htm;www.patents.ibm.com/ibtn.litmlJCabatetal.,SequencesofProteinsoflmm咖logicalInteres仁U.S.DeptHealth(1983),在此全文引入作為參考。這些輸入序列可以用于減少免疫原性，或用于減少、增強(qiáng)或修飾結(jié)合、親和性、開率(on-rate)、閉率(off-rate)、親和力、特異性、半衰期或任意其它適當(dāng)?shù)奶卣?，如本領(lǐng)域所公知的.保留非人或人CDR序列的大部分或全部，用人氨基酸或其它氨基取代可變區(qū)和恒定區(qū).任選對(duì)抗體人源化，保留抗體對(duì)抗原的高親和性和其它有利的生物學(xué)特性.為了達(dá)到這一目的，通過采用母體和人源化序列的三維模型分析母體序列和各種得到的人源化序列的過程任選制備人源化抗體.通常可以得到三維免疫球蛋白模型，并且是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的.說明和演示所選的候選免疫球蛋白序列的可能三維構(gòu)象結(jié)構(gòu)計(jì)算機(jī)程序是可得到的.檢查這些演示結(jié)果可以分析候選免疫球蛋白序列功能中殘基的可能作用，即，分析影響候選免疫球蛋白與其抗原的結(jié)合能力的殘基.以這種方式，可以選擇FR殘基，并且與共有序列和輸入序列結(jié)合，從而得到需要的抗體特征，如對(duì)靶抗原的親和性増加.概言之，CDR殘基直接并最大程度參與抗原結(jié)合的影響.本發(fā)明抗體的人源化或工程化可以采用任意已知的方法進(jìn)行，例如，但不限于，以下文獻(xiàn)中描述的方法，Winter(Jonesetal.，Nature321:522(1986);Riechmannetal.Nature332:323(1988);Verhoeyenetal.,Science239:1534(1988))，Simsetal.,J.Immunol.151:2296(1993);ChothiaandLesk，J.Mol.Biol.196:901(1987)，Carteretal.，Proc.Natl,Acad.Sci.U.S.A.89:4285(1992);Prestaetal.，J.Immunol.151:2623(1993)，美國(guó)專利5723323，5976862，5824514,5817483，5814476，5763192，5723323，5,766886,5714352,6204023，6180370，5693762,5530101,5585089,5225539;4816567，PCT/:US98/16280,US96/18978,US91/09630,US91/05939,US94/01234,GB89/01334,GB91/01134,GB92/01755;WO90/14443,W090/14424,WO90/14430,EP229246,在此全文引入每一篇文獻(xiàn)作為參考，抗IL-12抗體也可以任選通過免疫能夠產(chǎn)生人類抗體所有組成成分的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(如小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠、非人靈長(zhǎng)類等)而產(chǎn)生，如此處的描述和/或本領(lǐng)域所公知。產(chǎn)生人類抗IL-12抗體的細(xì)胞可以通過適當(dāng)?shù)姆椒◤倪@些動(dòng)物中分離并永生化，例如通過這里所描述的方法.可以產(chǎn)生與人抗原結(jié)合的人類抗體所有組成成分的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物是通過公知方法產(chǎn)生的(例如，但不限于授權(quán)于Lonberg等的美國(guó)專利5,770,428，5,569,825，5,545,806,5,625,126，5,625,825，5,633,425,5，661，016和5，789，650，Jakobovits等的WO98/50433,Jakobovits等的WO98/24893，Lonberg等的W098/24884,Lonberg等的WO97/13852，Lonberg等的WO94/25585,Kucherlapate等的WO96/34096，Kucherlapate等的EP0463151Bl，Kucherlapate等的EP0710719Al，Surani等的美國(guó)專利5，545，807，Bruggemann等的WO90/04036，Bruggemann等的EP0438474Bl,Lonberg等的EP0814259A2，Lonberg等的GB2272440A，Lonbergetal.Nature368:856-859(1994)，Tayloretal.，Int.Immunol.6(4)579-591(1994)，Greenetal,NatureGenetics7:13-21(1994)，Mendezetal"NatureGenetics15:146-156(1997)，Tayloretal.，NucleicAcidsResearch20(23):6287-6295(1992)，Tuaillonetal.，ProcNatlAcadSciUSA90(8)3720-3724(1993),Lonbergetal.，IntRevImmunol13(1):65-93(1995)和Fishwaldetal.，NatBiotechnol14(7):845-851(1996)，在此全文引入每一篇文獻(xiàn)作為參考，一般地，這些小鼠包含至少一種轉(zhuǎn)基因，所述轉(zhuǎn)基因包含來自于至少一種人免疫球蛋白基因座的DNA，它進(jìn)行了功能性重排，或可以進(jìn)行功能性重排.該小鼠中的內(nèi)源性免疫球蛋白基因座可以被破壞或去除，以便去除動(dòng)物產(chǎn)生由內(nèi)源性基因編碼的抗體的能力，可以通過肽展示文庫(kù)方便地完成篩選特異性與相似蛋白或片段結(jié)合的抗體。該方法包括篩選大量肽中具有所需功能或結(jié)構(gòu)的各個(gè)成員.肽展示文庫(kù)的抗體篩選是本領(lǐng)域公知的。展示的肽序列長(zhǎng)度可以為3-5000或更多氡基酸，通常長(zhǎng)度為5-100個(gè)氨基酸，一般長(zhǎng)度為約8-25個(gè)氨基酸。除了產(chǎn)生肽文庫(kù)的直接化學(xué)合成方法，也描述了一些重組DNA法。一種類型包括在噬菌體或細(xì)胞的表面展示肽序列.每種噬菌體或細(xì)胞含有具體展示的肽序列的編碼核苷酸序列.這些方法描述于PCT專利公開91/17271，91/18980，91/19818和93/08278,用于產(chǎn)生肽文庫(kù)的其它系統(tǒng)同時(shí)具有體外化學(xué)合成和重組方法.見PCT專利公開92/05258，92/14843和96/19256。也見美國(guó)專利5，658,754和5，643,768.肽展示文庫(kù)、栽體和篩選試劑盒可以從Invitrogen(Carlsbad,CA)和CambridgeantibodyTechnologies(Cambridgeshire,UK)等供應(yīng)商購(gòu)得。見，例如Enzon的美國(guó)專利4704692,4939666,4946778，5260203,5455030，5518889，5534621，5656730，5763733，5767260，5856456;Dyax的美國(guó)專利5223409，5403484，5571698，5837500;Affymax的美國(guó)專利5427908，5580717;CambridgeantibodyTechnologies的美國(guó)專利5885793;Genentech的美國(guó)專利5750373;Xoma的美國(guó)專利5618920,5595898,5576195，5698435，5693493，5698417;Colligan，同上；Ausubel，同上；Sambrook，同上，在此全文引入上述每個(gè)專利和出版物作為參考.也可以使用至少一種編碼抗IL-12抗體的核酸提供轉(zhuǎn)基因動(dòng)物:或哺乳動(dòng)物，從而制備本發(fā)明的抗體，所述動(dòng)物如山羊、牛、馬、綿羊等，它們?cè)谄淙橹挟a(chǎn)生這些抗體.這些動(dòng)物可以通過已知的方法提供，見，例如，但不限于美國(guó)專利5,827,690;5,849,992;4,873,316;5,849,992;5,994,616;5,565,362;5,304,489等，在此全文引入作為參考，還可以使用至少一種編碼抗IL-12抗體的核酸提供在植物部分或由其培養(yǎng)的細(xì)胞中產(chǎn)生所述抗體、特定部分或變體的轉(zhuǎn)基因植物并培養(yǎng)植物細(xì)胞(例如，但不限于煙草和玉米)，從而制備本發(fā)明的抗體.作為非限制性的實(shí)例，已經(jīng)成功使用表達(dá)重組蛋白的煙葉提供大量重組蛋白，如，使用誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，見，例如，Crameretal.,Curr,Top.Microbol.Immunol.240:95-118(1999)及其中引用的文獻(xiàn)，同樣，已經(jīng)采用轉(zhuǎn)基因玉米以商業(yè)生產(chǎn)水平表達(dá)哺乳動(dòng)物蛋白，其生物活性等于在其它重組系統(tǒng)產(chǎn)生或從天然來源純化的蛋白.見，例如Hoodetal.，Adv.Exp.Med.Biol.464:127-147(1999)及其中引用的文獻(xiàn)。也已經(jīng)從轉(zhuǎn)基因植物種子，包括煙草種子和馬鈴茅塊根中大量產(chǎn)生了抗體，包括抗體片段，例如單鏈抗體(scFv's)。見，例如Conradetal.,PlantMol.Biol.38:101109(1998)及其中引用的文獻(xiàn).這樣，也可以根據(jù)已知方法采用轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)生本發(fā)明的抗體。也見Fischeretal.，Biotechnol.Appl.Biochem.30:99-108(Oct.,1999)，Maetal.，TrendsBiotechnol.13:522-7(1995);Maetal.,PlantPhysiol.109:34卜6(1995);Whitelametal.，Biochem.Soc.Trans.22:940-944(1994);及其中引用的文獻(xiàn)。在此全文引用上述每一篇文獻(xiàn)作為參考.本發(fā)明的抗體可以以寬范圍的親和性(L)結(jié)合人IL-12,在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的至少一種人單克隆抗體可以任選以高親和性結(jié)合人IL-12。例如，人單克隆抗體可以與人IL-12結(jié)合，其乙等于或小于約107M，例如，但不限于0.1-9.9(或其中的任意范圍或任意值)x107,10—8,10'，10'°，1011，1012，10'3或其中的任意范圍或任意值，抗體與抗原的親和性或親和力可以采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行實(shí)驗(yàn)室測(cè)定.(見，例如，Berzofsky，etal.，"Antibody-AntigenInteractions,"InFundamentalImmunology,Paul,W.E.，Ed.，RavenPress:NewYork,NY(1984);Kuby,JanisImszlunolo,gy，W.H.FreemanandCompany:NewYork,NY(1992);及此處描述的方法)，如果在不同的條件(如鹽濃度，pH)下測(cè)定，所測(cè)定的特定抗體-抗原相互作用的親和性可以不同。因此，優(yōu)選用標(biāo)準(zhǔn)抗體和抗原溶液、標(biāo)準(zhǔn)緩沖液，如此處描述的4沖液測(cè)量親和性和其它抗原-抗體結(jié)合參數(shù)(例如Kd,L,核酸分子采用這里提供的信息，如編碼SEQIDN0S:1，2，3,4,5，6,7,8中的至少一種、其特定片段、變體或共有序列的至少70-100X的連續(xù)氨基酸的核苷酸序列，或包含這些序列中的至少一種的保藏栽體，可以根據(jù)此處描述或本領(lǐng)域公知的方法獲得編碼至少一種抗IL-12抗體的本發(fā)明的核酸分子.本發(fā)明的核酸分子可以是RNA形式，例如mRNA，hnRNA，tRNA或任意其它形式，或可以是DNA形式，包括，但不限于通過克隆或合成產(chǎn)生，或其任意組合而產(chǎn)生的cDNA和基因組DNA.DNA可以是三鏈、雙鏈或單鏈，或其任意組合。DNA或RNA的至少一條鏈的任意部分可以是編碼鏈，也稱作有義鏈，或可以是非編碼鏈，也稱作反義鏈.本發(fā)明的分離核酸分子可以包括含有開放讀碼框(ORF)，任選具有一種或多種內(nèi)含子的核酸分子，例如，但不限于至少一種重鏈(如SEQIDNOS:l-3)或輕鏈(如SEQIDNOS:4-6)的至少一種CDR，如CDR1，CDR2和/或CDR3的至少一個(gè)特定部分；包含抗IL-12抗體或可變區(qū)的編碼序列的核酸分子(如SEQIDNOS:7,8);以及包含基本不同于上述那些的核苷酸序列的核酸分子，但由于遣傳密碼簡(jiǎn)并性，它們?nèi)匀痪幋a此處描述和/或本領(lǐng)域公知的至少一種抗IL-12抗體，當(dāng)然，遣傳密碼是本領(lǐng)域公知的.因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員制備這種編碼本發(fā)明的特異性抗IL-12抗體的簡(jiǎn)并核酸變體是常規(guī)的。見，例如，Ausubel,etal.，同上，這些核酸變體包括在本發(fā)明中.本發(fā)明的分離核酸分子的非限制性例子包括分別編碼HCCDR1，HCCDR2，HCCDR3，LCCDR1，LCCDR2，LCCDR3，HC可變區(qū)和LC可變區(qū)的核酸。如此處指出的，包含編碼抗IL-12抗體的核酸的本發(fā)明的核酸分子可以包括，但不限于自身編碼抗體片段的氨基酸序列的核酸；完整抗體或其部分的編碼序列；抗體、片段或部分的編碼序列，以及其它的序列，例如至少一種信號(hào)前導(dǎo)肽或融合肽的編碼序列，它具有或不具有前面提到的其它編碼序列，如至少一種內(nèi)含子，同時(shí)具有其它的非編碼序列，包括，但不限于非編碼5，和3，序列，如在轉(zhuǎn)錄、mRNA加工，包括剪接和未翻譯的序^;編碼其它氨基酸，如提供其它功能的氨基酸的其一它序列.因此，編碼抗體的序列可以與標(biāo)記序列融合，例如與促進(jìn)包含抗體片段或部分的融合抗體純化的肽的編碼序列融合.選擇性與此處描述的多核苷酸雜交的多核苷酸本發(fā)明提供了在選擇性雜交條件下與此處公開的多核苷酸雜交的分離核酸。因此，該實(shí)施方案中的多核苷酸可以用于分離、檢測(cè)和/或定量包含所述多核普酸的核酸.例如，本發(fā)明的多核苷酸可以用于在保藏的文庫(kù)中鑒定、分離或擴(kuò)增部分或全長(zhǎng)克隆，在一些實(shí)施方案中，多核苷酸是分離的基因組或cDNA序列，或者互補(bǔ)于來自于人或哺乳動(dòng)物核酸文庫(kù)的cDNA。優(yōu)選地，cDNA文庫(kù)包含全長(zhǎng)序列的至少80、優(yōu)選包含全長(zhǎng)序列的至少8554或90、更優(yōu)選包含全長(zhǎng)序列的至少95、可以對(duì)cDNA文庫(kù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，以增加稀有序列的代表性。低或中度嚴(yán)格雜交條件一般、但不是專門用于相對(duì)于互補(bǔ)序列的序列等同性較低的序列.中度和高度嚴(yán)格性條件任選用于具有更高等同性的序列，低嚴(yán)格性雜交條件允許具有約的序列等同性的序列的選擇性雜交，并且可以用于鑒定直向同源序列或共生同源序列，本發(fā)明的多核苷酸任選編碼由此處描述的多核苷酸編碼的抗體的至少一部分。本發(fā)明的多核苷酸包括可以用于與編碼本發(fā)明的抗體的多核苷酸選擇性雜交的核酸序列.見，例如Ausubel,同上；Colligan，同上，在此全文引入作為參考.核酸的構(gòu)建本發(fā)明的分離核酸可以利用本領(lǐng)域公知的(a)重組方法，(b)合成技術(shù)，(c)純化技術(shù)或其組合進(jìn)行制備.核酸可以方便地包含除本發(fā)明的多核苷酸以外的序列.例如，可以將包含一個(gè)或多個(gè)內(nèi)切核酸酶限制位點(diǎn)的多克隆位點(diǎn)插入核酸，以幫助多核芬酸的分離，也可以插入可翻譯的序列以幫助本發(fā)明的被翻譯的多核苷酸的分離。例如，一種六組氨酸標(biāo)記序列提供了純化本發(fā)明的蛋白的方便方法.除編碼序列外，本發(fā)明的核酸任選為用于克隆和/或表達(dá)本發(fā)明的多核苷酸的栽體、連接物或接頭.在這種克隆和/或表達(dá)序列中也可以加入其它序列，用于優(yōu)化它們?cè)诳寺『?或表達(dá)中的功能，用于幫助多核苷酸的分離，用于改進(jìn)多核苷酸向細(xì)胞中的導(dǎo)入。克隆栽體、表達(dá)栽體、連接物和接頭的用途i本領(lǐng)域中公知的。(See,例如，Ausubel,同上；或Sambrook,同上)。構(gòu)建核酸的重組方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明的分離核酸組合物，如RNA，c卵A，基因組DNA或其任意組合可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的任何克隆方法從生物來源中獲得.在一些實(shí)施方案中，在嚴(yán)格條件下選擇性與本發(fā)明的多核苷酸雜交的寡核苷酸探針被用于筌定cDNA或基因組DNA文庫(kù)中的所需序列.RNA的分離和c卵A以及基因組文庫(kù)的構(gòu)建是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知的，(見，例如Ausubel，同上，'或Sambrook，同上)《核酸篩選和分離方法可以采用基于本發(fā)明的多核苷酸序列的探針篩選cDNA或基因組文庫(kù)，如此處所公開.可以用探針與基因組DNA或cDNA序列雜交，以分離相同或不同生物體中的同源基因.本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，在測(cè)定中可以使用不同嚴(yán)格性程度的雜交，雜交或洗滌介質(zhì)中的任意一個(gè)都可以是嚴(yán)格的。當(dāng)雜交條件更嚴(yán)格時(shí)，探針和靶序列之間的互補(bǔ)性必須更高，這樣才能形成雙鏈體。嚴(yán)格性程度可以由溫度、離子強(qiáng)度、pH和甲酰胺等部分變性溶劑的存在中的一個(gè)或多個(gè)條件進(jìn)行控制.例如，雜交的嚴(yán)格性可以通過改變反應(yīng)物溶液的極性而方便地改變，反應(yīng)物溶液的極性可以通過例如在04-50%的范圍內(nèi)操作甲跣胺的濃度而改變.可檢測(cè)的結(jié)合所要求的互補(bǔ)性程度(序列等同性)將根據(jù)雜交介質(zhì)和/或洗滌介質(zhì)的嚴(yán)格性而改變。互補(bǔ)性程度最佳為100X或70-100%，或其中的任意范圍或任意值。然而，應(yīng)該理解，探針和引物中的小量序列變異可以通過減少雜交和/或洗滌介質(zhì)的嚴(yán)格性而補(bǔ)償.擴(kuò)增RNA或DM的方法是本領(lǐng)域公知的，可以根據(jù)此處的教導(dǎo)和指導(dǎo)用于本發(fā)明，而不需要過多的實(shí)驗(yàn).已知的擴(kuò)增RNA或DNA的方法包括，但不限于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)和相關(guān)的擴(kuò)增方法(見，例如，Mullis等的美國(guó)專利4,683,195,4，683，202，4,800,159,4，965,188;Tabor等的4，795,699和4，921,794;Innis的5,142,033;Wilson等的5,122,464;Innis的5,091,310;Gyllensten等的5,066,584;Gelfand等的4,889,818;Silver等的4,994,370;Biswas的4，766，067;Ringold的4,656，134)和RNA介導(dǎo)的擴(kuò)增，該擴(kuò)增中使用靶序列的反義RNA作為模板用于雙鏈DNA合成(Malek等的美國(guó)專利5,130,238，商品名為NASBA),在此全文(j入所有參考文獻(xiàn)作為參考.(見，例如Ausubel,同上；或Sambrook,同上.)例如，可以用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)從基因組DNA或cDNA文庫(kù)直接擴(kuò)增本發(fā)明的多核苷酸序列和相關(guān)基因.也可以用PCR和其它體外擴(kuò)增方法克隆需要表達(dá)的蛋白的編碼核酸序列，制備用于檢測(cè)樣品中是否存在所需niRNA的探針，對(duì)核酸測(cè)序，或其它目的.足夠指導(dǎo)技術(shù)人員使用體外擴(kuò)增方法的技術(shù)的例子見，Berger，同上，Sambrook,同上，和Ausubel，同上，以及Mullis等的美國(guó)專利4,683,202(1987);以及Innis等,PCRProtocolsAGuidetoMethodsandApplications,Eds*，AcademicPressInc.,SanDiego,CA(1990),用于基因組PCR擴(kuò)增的商品化試劑盒是本領(lǐng)域已知的.見，例如，Advantage-GC基因組PCR試劑盒(Clontech)。此夕卜，如T4基因32蛋白(BoehringerMannheim)可以用于改進(jìn)長(zhǎng)PCR產(chǎn)物的產(chǎn)率。構(gòu)建核酸的合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明的分離核酸也可以根據(jù)已知方法通過直接化學(xué)合成而制備(見，例如Ausubel等，同上)。化學(xué)合成一般產(chǎn)生單鏈核苷酸，該單鏈核苷酸可以通過與互補(bǔ)序列雜交或通過用單鏈作為模板，采用DNA聚合酶進(jìn)行聚合而轉(zhuǎn)化為雙鏈DNA.本領(lǐng)域技術(shù)人員了解，盡管DNA的化學(xué)合成可以限制在約IOO或更多堿基的序列，也可以通過較短序列的連接獲得較長(zhǎng)的序列.重組表達(dá)盒本發(fā)明進(jìn)一步提供了包含本發(fā)明的核酸的重組表達(dá)盒.本發(fā)明的核酸序列，例如，編碼本發(fā)明的抗體的cDNA或基因組序列可以用于構(gòu)建重組表達(dá)盒，該表達(dá)盒可以被導(dǎo)入至少一種需要的宿主細(xì)胞.重組表達(dá)盒一般包含本發(fā)明的多核苷酸，該多核苷酸可操作性連接于指導(dǎo)多核苷酸在目的宿主中轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄起始調(diào)節(jié)序列.異源性和非異源性(即內(nèi)源性)啟動(dòng)子可以用于指導(dǎo)本發(fā)明的核酸分子的表達(dá).在一些實(shí)施方案中，作為啟動(dòng)子、增強(qiáng)子或其它元件的分離核酸可以導(dǎo)入本發(fā)明的多核普酸的非異源形式中的適當(dāng)位置(位于內(nèi)含子上游、下游或內(nèi)部)，以便上調(diào)或下調(diào)本發(fā)明的多核苷酸的表達(dá)，例如，可以通過突變、去除和/或取代而體內(nèi)或體外改變內(nèi)源性啟動(dòng)子，栽體和宿主細(xì)胞《本發(fā)明也涉及包含本發(fā)明的分離核酸分子的栽體，用重組栽體基因工程化的宿主細(xì)胞，以及通過本領(lǐng)域公知的重組技術(shù)產(chǎn)生至少一種抗IL-12抗體，見，例如，Sambrook等，同上；Ausubel等，同上，在此全文引入作為參考。多核苷酸可以任選與含有可選擇標(biāo)記的栽體連接，用于在宿主中增殖。一般地，將質(zhì)粒栽體導(dǎo)入一種沉淀物，例如褲酸鈣沉淀，或?qū)刖哂袔щ娭|(zhì)的復(fù)合物。如果栽體是病毒，可以用適當(dāng)?shù)陌b細(xì)胞系將其包裝后轉(zhuǎn)導(dǎo)至宿主細(xì)胞.DNA插入物可以操作性與適當(dāng)啟動(dòng)子連接。表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步包含轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)和轉(zhuǎn)錄區(qū)中的位點(diǎn)，以及用于翻譯的核糖體結(jié)合位點(diǎn)，由構(gòu)建體表達(dá)的天然轉(zhuǎn)錄物的編碼部分將優(yōu)選包含位于起始處的翻譯起始密碼子和位于被翻譯的mRNA末端適當(dāng)位置的終止密碼子(如UAA，UGA或UAG)，哺乳動(dòng)物或真核細(xì)胞表達(dá)優(yōu)選采用UAA和UAG。表達(dá)栽體優(yōu)選但任選包含至少一種可選擇標(biāo)記.這些標(biāo)記包括，例如，但不限于真核細(xì)胞培養(yǎng)物的氨甲嚷呤(MTX)、二氫葉酸還原酶(DHFR，美國(guó)專利4,399,216;4,634,665;4,656,134;4,956,288;5,149,636;5，179，017)、氨卡青霉素、新審素(G418)、審盼酸或谷氨酰胺合成酶(GS，美國(guó)專利5,122,464;5,770,359;5,827,739)抗性基因，以及大腸桿菌和其它細(xì)菌或原核生物的四環(huán)素或氨芐青霉素抗性基因(上迷專利在此全文引入作為參考)。上迷宿主細(xì)胞的適當(dāng)培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件是本領(lǐng)域公知的。適當(dāng)?shù)脑泽w是本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解的?？梢酝ㄟ^磷酸鈣轉(zhuǎn)染、DEAE-右旋糖苦介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、陰離子脂質(zhì)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、電穿孔、轉(zhuǎn)導(dǎo)、感染或其它已知方法將栽體構(gòu)建體導(dǎo)入宿主細(xì)胞.這些方法在本領(lǐng)域有描述，例如Sambrook,同上，l-4和16-18章；Ausubel，同上，1，9,13，15，16章.本發(fā)明的至少一種抗體可以以修飾的形式，例如以融合蛋白的形式表達(dá)，并且可以包括分泌信號(hào)和其它異源功能區(qū)。例如，其它的氨基酸區(qū)域，特別是帶電氨基酸區(qū)域可以添加至抗體的N端以改進(jìn)純化或隨后的加工和儲(chǔ)存過程中在宿主中的穩(wěn)定性和耐受性.也可以將本發(fā)明的肽部分添加至本發(fā)明的抗體，以促進(jìn)純化，這些區(qū)域可以在抗體或其至少一個(gè)片段的最終制備之前去除.這些方法描述于許多實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)，例如Sambrook，同上，17.29-17.42和18.1-18.74章;Ausubel，同J^，16,17和18章。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員了解，許多表達(dá)系統(tǒng)都可以用于表達(dá)編碼本發(fā)明的蛋白的核酸.作為選擇，本發(fā)明的核酸可以通過在包含編碼本發(fā)明的抗體的內(nèi)源性DNA的宿主細(xì)胞中打開(turningon)(通過操作)而在宿主細(xì)胞中表達(dá)，這些方法是本領(lǐng)域^^知的，如描述于美國(guó)專利5,580,734，5,641,670,5，733，746，和5，733，761,在此引入每一篇專利作為參考.用于產(chǎn)生抗體、其特定部分或變體的示例性的細(xì)胞培養(yǎng)物為哺乳動(dòng)物細(xì)胞。哺乳動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)一般是單層細(xì)胞的形式，但也可以使用哺乳動(dòng)物細(xì)胞懸浮液或生物反應(yīng)器。本領(lǐng)域中已經(jīng)開發(fā)了許多能夠表達(dá)完整糖基化蛋白的適當(dāng)宿主細(xì)胞系，包括C0S-1(如ATCCCRL1650)，C0S-7(如ATCCCRL1651)，HEK293，BHK21(如ATCCCRL-IO)，CH0(如ATCCCRL1610)和BSC-1(如ATCCCRL-26)細(xì)胞系，Cos-7細(xì)胞，CH0細(xì)胞，hepG2細(xì)胞，P3X63Ag8.653,SP2/0-Agl4，293細(xì)胞，HeLa細(xì)胞等，它們可以容易從例如美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心Manassas,Va(www.atcc.org)獲得。特別優(yōu)選的宿主細(xì)胞是P3X63Ag8.653細(xì)胞(ATCC保藏號(hào)CRL-1580)和SP2/0-Agl4細(xì)胞(ATCC保藏號(hào)CRL-1851)。在一種特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，重組細(xì)胞是P3X63Ab8.653或SP2/0-Ag14細(xì)胞.這些細(xì)胞的表達(dá)栽體可以包含一種或多種以下表達(dá)控制序列，例如，但不限于復(fù)制起點(diǎn)；啟動(dòng)子(如晚期或早期SV40啟動(dòng)子，CMV啟動(dòng)子(美國(guó)專利5，168，062;5,385，839)、HSVtk、pgk(褲酸甘油酯激酶)啟動(dòng)子、EF-lct啟動(dòng)子(美國(guó)專利5,266,491)、至少一種人類免疫球蛋白啟動(dòng)子)；增強(qiáng)子和/或加工信號(hào)位點(diǎn)，例如核糖體結(jié)合位點(diǎn)，RNA剪接位點(diǎn)、聚腺苷酸化位點(diǎn)(如SV40大TAg聚腺普酸添加位點(diǎn))和轉(zhuǎn)錄終止子序列。見，例如Ausubel等，同上；Sambrook，等，同上.其它用于產(chǎn)生本發(fā)明的核酸或蛋白的細(xì)胞是已知的和/或可得到的，例如從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞系和雜交瘤目錄(www.atcc.org)或商業(yè)來源得到.當(dāng)使用真核宿主細(xì)胞時(shí)，一般將聚腺苷酸化或轉(zhuǎn)錄終止子序列摻入栽體。終止子序列的一個(gè)例子是來自于牛生長(zhǎng)激素基因的聚腺苷酸化序列，也可以包括用于準(zhǔn)確剪接轉(zhuǎn)錄物的序列，剪接序列的一個(gè)例子是SV40的VP1內(nèi)含子(Sprague，etal.,J.Virol.45:773-781(1983)),此外，用于控制宿主細(xì)胞中復(fù)制的基因序列可以摻入本領(lǐng)域公知的栽體沖.抗體的純化可以通過公知的方法從重組細(xì)胞培養(yǎng)物中回收并純化抗IL-12抗體，所述方法包括，但不限于，蛋白A純化、碟酸銨或乙醇沉淀、酸提取、陰離子或陰離子交換層析、磷酸纖維素層析、疏水相互作用層析、親和層析、幾基褲灰石層析和凝集素層析，也可以采用高效液相層析("HPLC")進(jìn)行純化。見,例如,Colligan，CurrentProtocolsinI咖unology,或CurrentProtocolsinProteinScience,JohnWileyftSons,NY,NY，(1997-2001)，例如l，4，6，8,9，10章，在此全文引入作為參考。本發(fā)明的抗體包括天然純化產(chǎn)物，化學(xué)合成程序產(chǎn)物，以及通過重組技術(shù)從酵母、高等植物、昆蟲和哺乳動(dòng)物細(xì)胞等真核宿主產(chǎn)生的產(chǎn)物。根據(jù)在重組產(chǎn)生程序中使用的宿主，本發(fā)明的抗體可以本發(fā)明的抗體可以被糖基化或可以未糖基化，優(yōu)選被糖基化.這些方法描迷于許多實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)，例如Sambrook，同上，17.37-17.42部分；Ausubel，同上，10，12，13，16，18和20章；Colligan,ProteinScience,同上，12-14章，在此全文引入所有這些文獻(xiàn)作為參考。抗IL-12抗體本發(fā)明的分離抗體包含由任意適當(dāng)?shù)亩嗪塑账峋幋a的此處公開的抗體氨基酸序列，或任意分離的或制備的抗體。人抗體或抗原結(jié)合片段優(yōu)選結(jié)合人IL-12,并因此部分或基本上中和該蛋白的至少一種生物活性。部分或基本上中和至少一種IL-12蛋白或其片棟的生物活性的抗體或其特定部分或變體可以結(jié)合該蛋白或片段，從而抑制由IL-12與IL-12受體的結(jié)合介導(dǎo)的或其它IL-12依賴性或IL-12介導(dǎo)的機(jī)制。此處用到的術(shù)語"中和抗體"是指根據(jù)所采用的測(cè)定，可以抑制約20-120、，優(yōu)選至少約IO,20，30,40,50，55，60，65,70,75,80，85,90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，畫的IL-12依賴性活性的抗體.抗IL-12抗體抑制IL-12依賴性活性的能力優(yōu)選通過至少一種適當(dāng)?shù)腎L-12蛋白或受體測(cè)定方法進(jìn)行評(píng)估，如此處的描述和/或本領(lǐng)域公知。本發(fā)明的人抗體可以是任意類型(IgG，IgA，IgM，IgE，IgD等)或同種型，可以包含K或入輕鏈.在一種實(shí)施方案中，人抗體包含一個(gè)IgG重鏈或限定的片段，例如，同種型IgGl,IgG2，IgG3或IgG4中的至少一種.這種類型的抗體可以通過使用含有至少一種人輕鏈(如IgG,IgA和IgM(如Yl，Y2，Y3,Y4))轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因小鼠或其它轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng),制備，如此處的描述和/或本領(lǐng)域所公知.在另一種實(shí)施方案中，抗人IL-12人抗體包含一個(gè)IgGl重鏈和一個(gè)IgGl輕鏈.本發(fā)明的至少一種抗體結(jié)合至少一種特異于IL-12蛋白、其亞基、片段、部分或其任意組合的至少一種特定表位.所述至少一種表位包含至少一個(gè)抗體結(jié)合區(qū)，該區(qū)包含所述蛋白的至少一部分，該表位優(yōu)選由所述蛋白的至少一個(gè)細(xì)胞外、可溶性、親水性、外部或細(xì)胞質(zhì)部分組成.所述至少一種特定表位可以包含SEQIDN0:9的至少1-3個(gè)氨基酸至SEQIDNO:9的連續(xù)氨基酸的完整特定部分的任意組合。本發(fā)明的人抗體或抗原結(jié)合片段一般將包含一個(gè)抗原結(jié)合區(qū)，該區(qū)包含至少一個(gè)重鏈可變區(qū)的至少一個(gè)人互補(bǔ)決定區(qū)(CDR1，CDR2和CDR3)或變體和至少一個(gè)輕鏈可變區(qū)的至少一個(gè)人互補(bǔ)決定區(qū)(CDR1，CDR2和CDR3)或至少變體。作為非限制性的實(shí)例，抗體或抗原結(jié)合部分或變體可以包含至少一種具有SEQIDNO:3的氨基酸序列的重鏈CDR3，和/或具有SBQIDNO:6的氨基酸序列的輕鏈CDR3.在一種特定的實(shí)施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段可以具有一種抗原結(jié)合區(qū)，該區(qū)包含具有相應(yīng)CDR1，CDR2和/或CDR3的氨基酸序列(如SEQIDN0S:1,2和/或3)的至少一個(gè)重鏈CDR(即CDR1，CDR2和/或CDR3)的至少一部分.在另一種特定實(shí)施方案中，抗體或抗原結(jié)合部分或變體可以具有一種抗原結(jié)合區(qū)，該區(qū)包含具有相應(yīng)CDR1，CDR2和/或CDR3的氨基酸序列(如SEQIDN0S:4，5和/或6)的至少一個(gè)輕鏈CDR(即CDR1，CDR2和/或CDR3)的至少一部分。在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段的三種重鏈CDR和三種輕鏈CDR具有單克隆抗體TNV148，TNV14,TNV15,TNV196,TNV15，TNV118,TNV32，TNV86中的至少一種的相應(yīng)CRD的氨基酸序列，如此處的描述?？梢允褂贸Ｒ?guī)技術(shù)通過將抗體的各種部分(如CDR、構(gòu)架區(qū))化學(xué)連接在一起而制備這些抗體，也可以通過常規(guī)重組DNA技術(shù)或任何其它適當(dāng)方法制備和表達(dá)一種(即一種或多種)編碼抗體的核酸分子而制備這些抗體.抗IL-12抗體可以包含至少一種具有確定氨基酸序列的重鏈或輕鏈可變區(qū)。例如，在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，抗IL-12抗體包含至少一種任選具有SEQIDNO:7的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和/或至少一種任選具有SEQIDNO:8的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。結(jié)合于人IL-12的抗體和包含確定的重鏈和輕鏈可變區(qū)的抗體可以用適當(dāng)方法制備，例如噬菌體展示(Katsube，Y.，etal.,IntJMol.Med，1(5):863-868(199))或使用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的方法，如本領(lǐng)域所公知和/或此處所描述。例如，可以用人IL-12或其片段免疫轉(zhuǎn)基因小鼠以誘導(dǎo)抗體的產(chǎn)生，該轉(zhuǎn)基因小鼠包含功能性重排的人免疫球蛋白重鏈轉(zhuǎn)基因和包含來源于能夠進(jìn)行功能性重排的人免疫球蛋白輕鏈基因座的轉(zhuǎn)基罔.如果需要，可以采用此處描述的和/或本領(lǐng)域公知的方法分離抗體產(chǎn)生細(xì)胞以及制備雜交痛或其它永生化的抗體產(chǎn)生細(xì)胞.作為選擇，可以在適當(dāng)宿主細(xì)胞中用其編碼核酸或其部分表達(dá)抗體、其特定部分或變體.本發(fā)明也涉及包含與此處描述的氨基酸序列基本相同的序列中的氨基酸的抗體、抗原結(jié)合片段、免疫球蛋白鏈和CDR。這些抗體或抗原結(jié)合片段和包含所述鏈或CDR的抗體可以以高親和性(如Kd小于或等于約IO'M)與人IL-12結(jié)合.與此處描述的序列基本相同的氨基酸序列包括含有保守氨基酸取代和氨基酸去除和/或插入的序列。保守氨基酸取代是指，用具有與第一種氨基酸相似的化學(xué)和/或物理特性(如電荷、結(jié)構(gòu)、極性、疏水性/親水性)的笫二種氨基酸代替笫一種氨基酸.保守氨基酸取代包括用下列各組中的一種氨基酸代替另一種氨基酸賴氨酸(K)、精氨酸(R)和組氨酸(H);天冬氨酸(D)和谷氨酸(B);天冬酰胺(N),谷氨酜胺(Q),絲氨酸(S),蘇氦酸(T),酪氨酸(Y),K，R，H,D和E;丙氨酸(A)，纈氨酸(V)，亮氨酸(L)，異亮氨酸(I)，脯氦酸(P),苯丙氨酸(F),色氨酸(W)，甲疏氨酸(M)，半胱氨酸(C)和甘氨酸(G)F，W和Y;C,S和T。氛基酸代碼組成本發(fā)明的抗IL-12抗體的氨基酸通常以縮寫表示，可以通過單字母代碼、三字母代碼、名稱或三核苷酸密碼子表示氨基酸，這是本領(lǐng)域公知的(見(seeAlberts,B.，etal.,MolecularBiologyofTheCell,ThirdEd.,GarlandPublishing,Inc.,NewYork,1994):<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>本發(fā)明的IL-12抗體可以包括這里所指出的通過天然突變或人工操作導(dǎo)致的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、去除或添加.當(dāng)然，技術(shù)人員所進(jìn)行的氨基酸取代的數(shù)目將取決于許多因素，包括前面提到的那些。一般說來，任何給定的抗IL-12抗體、片段或變體的氨基酸取代、插入或去除的數(shù)目不超過40，30,20,19,18,17,16，15,14，13,12，11，10，9，8，7，6，5，4，3，2，1,例如l-30或其中的任意范圍或任意值，如此處所規(guī)定.可以通過本領(lǐng)域公知的方法鑒定對(duì)功能起關(guān)鍵作用的本發(fā)明的抗IL-12抗體中的氨基酸，如定點(diǎn)誘變或丙氨酸掃描誘變(如Ausubel,同上，8，15聿；CunninghaaiandWells,Science244:1081-1085(1989)),后一種程序在分子中每個(gè)殘基處導(dǎo)入單個(gè)丙氨酸突變。然后檢測(cè)得到的突變分子的生物活性，例如，但不限于至少一種IL-12中和'泉性。也可以通過結(jié)晶、核磁共振或光親和性標(biāo)記等結(jié)構(gòu)分析鑒定抗體結(jié)合的關(guān)鍵位點(diǎn)(Smith,etal.,J.Mol.Biol.224:899—904(1992)anddeVos，etal.，Science255:306-312(1992)),本發(fā)明的抗IL-12抗體可以包括，但不限于選自SEQIDNOS:1，2,3,4，5,6中至少一個(gè)的5個(gè)至所有連續(xù)氛基酸的至少一種部分、序列或組合，本發(fā)明的IL-12抗體或其特定部分或變體可以包括，但不限于選自SEQIDNO:1的至少3-5個(gè)連續(xù)氨基酸，SEQIDNO:2的5-17個(gè)連續(xù)氨基酸，SEQIDNO:3的5-10個(gè)連續(xù)氨基酸，SEQIDNO:4的5-11個(gè)連續(xù)氨基酸，SEQIDNO:5的5-7個(gè)連續(xù)氨基酸，SEQIDNO:6的5-9個(gè)連續(xù)氨基酸；SEQIDNO:7的Leu21，Lys76，Met83，Ser85的至少一部分、序列或組合。本發(fā)明的抗IL-12抗體可以進(jìn)一步任選包含SEQIDNOS:1，2，3，4,5,6，7或8中的至少一個(gè)的5，17，10，11,7,9，119或108個(gè)連續(xù)氨基酸的70-100X中的至少一個(gè)的多肽。在一種實(shí)施方案中，免疫球蛋白鏈的氨基酸序列或其部分(如可變區(qū)、CDR)與SEQIDNOS:7，8中的至少一個(gè)的相應(yīng)鏈的氨基酸序列具有約70—IOOX的等同性(如70，71,72,73，74，75，76，77，78，79，80，81,82，83,84，85，86，87，88，89，90,91，92，93,94，95,96,97,98，99，100或其中的任意范閨或任意值).例如，輕鏈可變區(qū)的氛基酸序列可以與SEQIDNO:8的序列相似，或重鏈CDR3的氨基酸序列可以與SEQIDNO:3相似，優(yōu)選地，用本領(lǐng)域>^知的適當(dāng)計(jì)算機(jī)算法確定出具有70-100%的氨基酸等同性(即90，91，92,93，94,95,96,97,98，99，IOO或其中的任意范圍或任意值).示例性的重鏈和輕鏈可變區(qū)序列見SEQIDNOS:7，8.本發(fā)明的抗體或其特定變體可以包含來源于本發(fā)明的一種抗體的任意數(shù)目的連續(xù)氨基酸，其中該數(shù)目選自抗IL-12抗體中連續(xù)殘基數(shù)目的10-100、該連續(xù)氨基酸的亞序列長(zhǎng)度為至少約10,20，30,40，50，60，70，80，90,100，110,120，130，140,150，160，170，180,190，200，210，220,230,240，250或更多，或其中的任意范圍或任意值.此外，這些亞序列的數(shù)目可以是選自l-20的任意整數(shù)，例如至少為2,3，4或5.本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，本發(fā)明包括本發(fā)明的至少一種生妝活性抗體。生物活性抗體具有天然(非合成)、內(nèi)源性或相關(guān)和已知抗體的至少20X，30X或40i的特異活性，優(yōu)選至少50、60X或70、最優(yōu)選具有天然、內(nèi)源性或相關(guān)和已知抗體的至少80S,90X或IOOOX的特異活性，測(cè)定和定量測(cè)定酶活性和底物特異性的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的.另一方面，本發(fā)明涉及此處描述的人抗體和抗原結(jié)合片段，它們可以通過共價(jià)連接有機(jī)部分而得到修飾.這種修飾可以產(chǎn)生具有改進(jìn)的藥代動(dòng)力學(xué)特性(如增加的體內(nèi)血清半衰期)的抗體或抗原結(jié)合片段。有機(jī)部分可以是線性或分支的疏水聚合物基團(tuán)、脂肪酸基團(tuán)或脂肪酸醋基團(tuán)，在特定實(shí)施方案中，親水聚合物基團(tuán)的分子量可以為約800-120000Da，并且可以是聚鏈烷醇(如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG))、碳水化合物聚合物、氨基酸聚合物或聚乙烯基吡咯烷嗣，脂肪酸或脂肪酸醋基團(tuán)可以包含約8-40個(gè)碳原子.本發(fā)明的修飾抗體和抗原結(jié)合結(jié)合片段可以包含與抗體直接或間接共價(jià)結(jié)合的一種或多種有機(jī)部分.與本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段結(jié)合的每一種有機(jī)部分可以獨(dú)立是親水聚合物基團(tuán)、脂肪酸基團(tuán)或脂肪酸酯基團(tuán)。這里用到的"脂肪酸"包括單羧酸和二羧酸，這里用到的"親水聚合物基團(tuán)"是指在水中比在辛烷中的溶解度更高的有機(jī)聚合物。例如，聚賴氨酸在水中比在辛烷中的溶解度更高.因此，本發(fā)明包括通過共價(jià)連接聚賴氨酸而被修飾的抗體.適于修飾本發(fā)明的抗體的親水聚合物可以是線性的或分支的，可以包括，例如聚鏈烷醉(如PEG、羊甲氣基-聚乙二醇(mPEG)、PPG等)，碳水化合物(如右旋糖普、纖維素、寡糖、多糖等)，親水氨基酸的聚合物(如聚賴氨酸、聚精氛酸、聚天冬氨酸等)，聚環(huán)氧烷(如聚環(huán)氧乙烷、聚環(huán)氧丙烷等)和聚乙烯基吡咯烷稱.修飾本發(fā)明的抗體的親水聚合物作為獨(dú)立分子實(shí)體的分子量?jī)?yōu)選為約800-150,000Da。例如，PEG，和PEG2。,,其中下標(biāo)是以Da為單位表示的可以使用的聚合物的分子量.可以用1至約6個(gè)烷基、脂肪酸或脂肪酸酯基團(tuán)取代親水聚合物?？梢圆捎眠m當(dāng)?shù)姆椒ㄖ苽溆弥舅峄蛑舅狨セ鶊F(tuán)取代的親水聚合物，例如，包含胺基的聚合物可以與脂肪酸或脂肪酸酯的羧基偶聯(lián)，脂肪酸或脂肪酸醋的上的活化羧基(如用N，N-羰基二咪唑活化)可以與聚合物上的幾基偶聯(lián).適于修飾本發(fā)明的抗體的脂肪酸和脂肪酸酯可以是飽和的或可以包含一個(gè)或多個(gè)不飽和單元.適于修飾本發(fā)明的抗體的脂肪酸包，，例如正十二烷酸(Cu，月桂酸)，正十四坑酸(Cm，肉豆蔻酸)，正十八^酸(Cu，硬脂酸)，正二十坑酸(C2。，花生酸)，正二十二坑酸(Cu,山脊酸)，正三十烷酸(C3。)，正四十烷酸(C")，順式-厶9-十八坑酸(C"，油酸)，全順式-△5,8，11，14-二十碳四蜂酸(Cw，花生四蜂酸)，辛二酸，十四烷二酸，十八烷二酸，二十二烷二酸等.適當(dāng)?shù)闹舅岽装ê芯€性或分支低級(jí)烷基的二羧酸單醋.低級(jí)烷基可以包含l個(gè)至約12個(gè)，優(yōu)選l個(gè)至約6個(gè)碳原子，可以通過適當(dāng)?shù)姆椒ǎ缤ㄟ^與一種或多種修飾刑反應(yīng)而制備修飾的人抗體和抗原結(jié)合片段.此處用到的"修飾劑"是指包括活化基團(tuán)的適當(dāng)有機(jī)基團(tuán)(如親水聚合物、脂肪酸、脂肪酸fil)."活化基團(tuán)"是指在適當(dāng)條件下，可以與笫二種化學(xué)基團(tuán)反應(yīng)，從而形成修飾劑與笫二種化學(xué)基團(tuán)之間的共價(jià)鍵的化學(xué)部分或官能團(tuán).例如，胺反應(yīng)性活化基團(tuán)包括親電子基團(tuán)，如甲苯磺酸醋、甲磺酰醋、鹵素(氯、溴、氟、碘)、N-羥基琥珀酰亞胺酯(NHS)等。可以與硤醇反應(yīng)的活化基團(tuán)包括，例如，馬來酰亞胺、碘代乙跣基、丙蜂耽基、二硤吡啶、5-硤羥-2-硝基苯甲酸硫醇(TNB硤醇)等?？梢詫⒋罟倌軋F(tuán)與含有酰胺或酰肼的分子偶聯(lián)，可以使疊氮基與三價(jià)磷酸基反應(yīng)形成氨基磷酸酯或亞氨代磷酸醋鍵.用于將活化基團(tuán)導(dǎo)入分子的適當(dāng)方法是本領(lǐng)域公知的(見例如，Hermanson,G.T.，BioconjugateTechniques.AcademicPress:SanDiego,CA(1996))。活化基團(tuán)可以直接與有機(jī)基團(tuán)(如親水聚合物、脂肪酸、脂肪酸酯)結(jié)合，或通過接頭部分與其結(jié)合，所述接頭部分例如為二價(jià)d-d2基團(tuán)，其中一個(gè)或多個(gè)碳原子可以被氣、氮或疏等雜原子取代.適當(dāng)?shù)慕宇^部分包括，例如，四甘醉、-(CH2)3-，-NH-(CH2)6-NH-，-(CH2)2-NH-和-CH廣0-CH廣CH廣0-CH廣CH廣0-CH-NH-。例如，可以在l-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDO存在下使單-Boc-烷基二亞胺(如單-Boc-乙二胺、單-Boc-二氨基己烷)與脂肪酸反應(yīng)，在游離胺和脂肪酸羧基之間形成酰胺鍵，以便產(chǎn)生包含接頭部分的修飾劑.用四象乙酸(TFA)處理產(chǎn)物，從而使伯胺暴露，可以從產(chǎn)物去除Boc保護(hù)基，該伯胺可以與上述另一羧基偶聯(lián)，或可以與馬來酸酐反應(yīng)，將得到的產(chǎn)物環(huán)化可以產(chǎn)生被活化的脂肪酸的馬來酰亞胺衍生物。(見，例如.Thompson,etal.，W092/16221，在此引入其完整教導(dǎo)作為參考。)本發(fā)明的修飾抗體可以通過使人抗體或抗原結(jié)合片段與修飾劑反應(yīng)而產(chǎn)生。例如，通過采用胺反應(yīng)性修飾刑，例如，PEG的NHS醋，有機(jī)部分可以與抗體以非位點(diǎn)特異性方式結(jié)合.也可以通過還原抗體或抗原結(jié)合片段的二硤鍵(如鏈內(nèi)二硫鍵)而制備修飾的人抗體或抗原結(jié)合片段.然后可以使被還原的抗體或抗原結(jié)合片段與碟醇反應(yīng)性修飾劑反應(yīng)，以便產(chǎn)生本發(fā)明的修飾抗體.可以采用反向蛋白水解等適當(dāng)方法制備包含與本發(fā)明抗體的特異位點(diǎn)結(jié)合的有機(jī)部分的修飾人抗體和抗原結(jié)合片段(Fischetal.，BioconjugateChem.,3:147-153(1992);Werlenetal.，BioconjugateChem.,5:411-417(1994);Kumaranetal.,ProteinSci.6(10):2233-2241(1997);Itohetal.,Bioorg.Chem.，24(1):59-68(1996)'，Capellasetal.，Biotechnol.Bioeng.,56(4):456-463(1997))，也可以采用描述于Hermanson，G.T.,BioconjugateTechniques,AcademicPress:SanDiego,CA(1996)中的方法，抗IL-12IG來源的蛋白組分的抗獨(dú)特型抗體除單克隆抗體或嵌合抗IL-12抗體外，本發(fā)明還涉及特異于本發(fā)明的這些抗體的抗獨(dú)特型(抗Id)抗體，抗Id抗體是識(shí)別獨(dú)特決定簇的抗體，所述決定簇一般與另一種抗體的抗原結(jié)合區(qū)相關(guān).可以用抗體或其含CDR的區(qū)域免疫與作為Id抗體來源的動(dòng)物相同物種和基因型(如小鼠抹)的動(dòng)物，從而制備抗Id,被免疫的動(dòng)物將識(shí)別免疫抗體的獨(dú)特型決定簇并對(duì)其產(chǎn)生應(yīng)答，并且產(chǎn)生抗Id抗體.抗Id抗體也可以用作"免疫原"以誘導(dǎo)另一動(dòng)物的免疫應(yīng)答，產(chǎn)生所謂的抗-抗獨(dú)特型抗體.抗IL-12IG來源的蛋白的組合物本發(fā)明也提供至少一種以天然存在的組合物、混合物或形式提供的抗IL-12抗體組合物，其中包含此處描述的和/或本領(lǐng)域公知的至少一種、至少兩種、至少四種、至少五種、至少六種或更多抗IL-12抗體，這些組合物包括天然存在的組分，包括抗IL-12抗體氨基酸序列的至少一種或兩種全長(zhǎng)的序列、C和/或N端去除的變體、結(jié)構(gòu)域、片段、或特定變體，該抗IL-12抗體氨基酸序列選自SEQIDN0S:1，2，3，4，5，6,7，8的70-100X的連續(xù)氨基酸或其特定片段、結(jié)構(gòu)域或變體.優(yōu)選的抗IL-12抗體組合物包括抗IL-12抗體氡基酸序列的至少一種含CDR或LBR的部分的至少一種或兩種全長(zhǎng)的序列、片段結(jié)構(gòu)域或變體，該抗IL-12抗體氨基酸序列選自SEQIDN0S:1，2,3，4，5,6的70-100X的連續(xù)氨基酸或其特定片段、結(jié)構(gòu)域或變體。更優(yōu)選的組合物包含選自SEQIDN0S:1,2，3，4,5，6的70-100%的連續(xù)氨基酸或其特定片段5結(jié)構(gòu)域或變體中的至少一種的40-99、組分百分比是液體或干溶液、混合物、懸浮液、乳狀液或膠體的重量、體積、濃度、體積克分子濃度或重量克分子濃度百分比，如本領(lǐng)域所公知或此處的描述.本發(fā)明的抗IL-12抗體可以進(jìn)一步包含任意適當(dāng)?shù)挠行Я康慕M分或藥物組分中的至少一種，所述組分包括需要這種調(diào)節(jié)、處理或治療的細(xì)胞、組織、器官、動(dòng)物或病人的至少一種抗IL-12抗體，該組合物任選進(jìn)一步包含至少一種選自以下物質(zhì)的組分至少一種TNF拮抗劑(例如，但不限于TNF抗體或片段、可溶性TNF受體或其片段、其融合蛋白、或小分子TNF拮抗劑)、抗風(fēng)濕藥物(如氨甲噪呤、金諾芬、金疏葡萄糖、疏唑嗜呤、etanercept、疏代蘋果酸金鈉、硤酸羥基氯喹、來氣米特、柳氮磺胺吡啶)、肌肉松弛劑、麻醉藥(narcotic)、非甾體類抗炎藥(NSAID)、鎮(zhèn)痛藥、麻醉劑(anesthetic)、鎮(zhèn)靜劑、局部麻醉劑、神經(jīng)肌肉阻滯劑、抗微生物劑(如氨基糖苷、抗真菌劑、抗寄生蟲刑、抗病毒劑、carbapenem、頭孢菌素、flurorquinolone、大環(huán)內(nèi)酯、青審素、碌胺、四環(huán)素、其它抗微生物劑)、抗牛皮癬藥物、皮質(zhì)類固醇、促蛋白合成類固醇、糖尿病相關(guān)試刑、礦物質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)刑、甲狀腺制刑、維生素、鈣相關(guān)激素、抗腹瀉藥、止咳藥、抗嘔吐藥、抗?jié)兯?、通便藥、抗凝劑、促紅細(xì)胞生成素(如epoetinot)、非爾司啶(如G-CSF,Neupogen)、沙拉斯(GM-CSF，白細(xì)胞素)、疫苗、免疫球蛋白、免疫抑制刑(如basiliximab、環(huán)孢審素、dacliz咖ab)、生長(zhǎng)激素、激素替代藥物、雌激素受體調(diào)節(jié)劑、散瞳劑、睫狀肌麻痹劑、烷化刑、抗代謝藥、有絲分裂抑制劑、放射性藥物、抗抑郁劑、抗精神病藥物、抗躁狂藥、抗精神病藥物、抗焦慮藥、催眠藥、擬交感神經(jīng)藥物、刺激劑、donepezil、他克林、抗哮喘藥、P激動(dòng)劑、吸入性類固醇、白三烯抑制劑、甲基黃嘌呤、9-氨基四氫吖啶、腎上腺素或類似物、a鏈道醃(Pulmozyme)、細(xì)胞因子或細(xì)胞因子拮抗劑.細(xì)胞因子的非限制性實(shí)例包括，但不限于IL-1至IL-23中的任意一種.適當(dāng)?shù)膭┝渴潜绢I(lǐng)域公知的，見，例如，Wellsetal.,eds.,PharmacotherapyHandbook,2ndEdition,AppletonandLange，Stamford,CT(2000);PDRPharmacopoeia,TarasconPocketPharmacopoeia2000,DeluxeEdition,TarasconPublishing,LomaLinda,CA(2000)，在此全文引入作為參考。這些抗癌或抗感染試劑也可以包括與本發(fā)明的至少一種抗體締合、結(jié)合、共同制劑化或共同給藥的毒素分子.毒素可以任選選擇性殺滅病變細(xì)胞或組織。病變細(xì)胞可以癌或其它細(xì)胞.這些毒素可以是，但不限于，純化或重組毒素或毒素片段，它包含如選自蓖麻毒素、白喉毒素、蛇毒毒素或細(xì)菌毒素中的至少一種的毒素的至少一種功能性細(xì)胞毒性結(jié)構(gòu)域.毒素也包括由任意天然存在的、突變或重組細(xì)菌或病毒的內(nèi)毒素和外毒素，它們可以導(dǎo)致人類或其它哺乳動(dòng)物中的任意病理學(xué)狀況，包括致死的毒素休克。這些毒素可以包括，但不限于，產(chǎn)腸毒素的大腸桿菌的熱不穩(wěn)定性腸毒素(LT)、熱穩(wěn)定性腸毒素(ST)、志賀氏菌細(xì)胞毒素、Aeromonas腸毒素、中毒性休克綜合征毒素-1(TSST-1)、葡萄球菌煬毒素A(SEA),B(SEB)或C(SEC)、鏈球菌腸毒素等.所述細(xì)菌包括，但不限于，產(chǎn)腸毒素的大腸桿菌(ETEC)、腸出血性大腸桿菌(如血清型0157:H7的菌抹)、葡萄球菌物種(如金黃色葡萄球菌、化膿性葡萄球菌)、志賀氏菌物種(如痢疾志賀氏菌、弗氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏菌和索氏志賀氏菌)、沙門氏菌物種(如傷寒沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、腸炎沙門氏菌)、梭菌物種(如產(chǎn)氣莢膜梭菌、艱難梭菌、肉毒梭菌)、彎曲桿菌物種(如空腸彎曲桿菌、胚胎彎曲桿菌)、螺桿菌物種(如幽門螺桿菌)、氣單胞菌物種(如溫和氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌)、類志賀鄰單孢菌、小腸結(jié)腸鹽耶爾森氏菌、Vibrios物種(如霍亂弧菌、副溶血弧菌)、克雷白氏菌物種、銅綠假單孢菌和鏈球菌.見，例如，Stein，ed.，INTERNALMEDICINE,3rded.，pp卜13,Uttle，BrownandCo.，Boston,(1990);Evansetal.,eds.，BacterialInfectionsofHu鵬ans:EpidemiologyandControl,2d.Ed.,pp239-254,PlenumMedicalBookCo.,NewYork(1991);Mandelletal，PrinciplesandPracticeofInfectiousDiseases,3d.Ed.,ChurchillLivingstone,NewYork(1990);Berkowetal,eds.，TheMerckManual,16thedition,MerckandCo.，Rahway，N.J.，1992;Woodetal，F(xiàn)EMSMicrobiologyImmunology,76:121-134(1991);Marracketal，Science,248:705-711(1990)，在此全文引入這些參考文獻(xiàn)的完整內(nèi)容作為參考.本發(fā)明的抗IL-12抗體化合物、組合物或其組合可以進(jìn)一步包含任意適當(dāng)輔助物質(zhì)，例如，但不限于稀釋液、粘合刑、穩(wěn)定劑、緩沖刑、鹽、親脂溶劑、防腐劑、佐劑等中的至少一種，優(yōu)選藥學(xué)可接受的輔助物質(zhì)，這些無菌溶液的非限制性的例子和制備方法是本領(lǐng)域公知的'，例如，但不限于Gennaro，Ed，，Remington'sPharmaceuticalSciences,18lhEdition,MackPublishingCo.(Eastern,PA)1990.可以常規(guī)選擇藥學(xué)可接受的栽體，這些栽體適于抗IL-12抗體、片段或變體組合物的給藥方式、溶解度和/或穩(wěn)定性，如本領(lǐng)域公知或此處的描述.用于本發(fā)明的組合物的藥物賦形劑和添加刑包括，但不限于蛋白、肽、氨基酸、脂質(zhì)和碳水化合物(如糖，包括單糖、雙糖、三糖、四糖和寡糖；衍生糖，如^醇、S^酸、酶化糖等；以及多糖或糖聚合物)，可以單個(gè)或組合存在，單獨(dú)或組合占重量或體積1-99.99、。示例性的蛋白賦形劑包括血清白蛋白，如人血清白蛋白(HSA)、重組人白蛋白(rHA)、明膠、酪蛋白等.可以起緩沖作用的代表性氨基酸/抗體成分包括丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、甜菜減、組氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、賴氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、翔氨酸、甲硤氛酸、笨丙氨酸、天冬酰胺等.一種優(yōu)選的氨基酸是甘氨酸。適用于本發(fā)明的碳水化合物賦形劑包括，例如單糖，如果糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖等；雙糖，如乳糖、蔗糖、海藻糖、纖維二糖等；多糖，如棉籽糖、松三糖、麥芽糖糊精、右旋糖苷、淀粉等；以及搭醇，如甘露醇、木糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、木糖醇山梨糖醇(葡萄糖醇)、肌醇等。用于本發(fā)明的優(yōu)選的碳水化合物賦形劑是甘露醇、海藻糖和棉籽糖?？笽L-12抗體組合物也可以包含緩沖劑或pH調(diào)節(jié)劑；一般地，緩沖劑是由有機(jī)酸或堿制備的鹽。代表性的緩沖劑包括有機(jī)酸鹽，例如檸檬酸、抗壞血酸、葡萄糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、乙酸或鄰苯二甲酸的鹽；Tris，鹽酸t(yī)romethamine、或轔酸緩沖液.用于本發(fā)明的組合物中的優(yōu)選緩沖劑是有機(jī)酸鹽如檸檬酸鹽。此外，本發(fā)明的抗IL-12抗體組合物可以包含聚合物賦形劑/添加劑，如聚乙烯基吡咯烷嗣、ficolls(—種聚合的糖)、dextrates(如環(huán)糊精，例如2-羥基丙基-p-環(huán)糊精)、聚乙二醇、矯味劑、抗微生物刑、增甜劑、抗氣化刑、抗靜電劑、表面活性劑(如聚山梨醇醋，例如"TWEEN20"和"TWEEN80")、脂質(zhì)(如鱗脂、脂肪酸)、類固醇(如膽固醇)和螯合劑(如EDTA),適用于抗IL-12抗體、部分或變體組合物的這些和其它已知藥物賦形劑和/或添加劑是本領(lǐng)域公知的，例如，列于"Remington:TheSc'ience&PracticeofPharmacy",19thed.,WilliamsftWilliams,(1995),和"Physician'sDeskReference1*,52nded.，MedicalEconomics,Montvale,NJ(1998)，在此引入其完整公開內(nèi)容作為參考.優(yōu)選的栽體或賦形劑物質(zhì)是碳水化合物(如糖和搭醇)和緩沖劑(如檸檬酸鹽)或聚合劑.制劑如前面所指出的，本發(fā)明提供了穩(wěn)定的制劑，優(yōu)選為含有鹽或選擇的鹽的轔酸緩沖液，以及含有防腐劑的儲(chǔ)存溶液和制刑，適于藥用或善醫(yī)用途的多用途儲(chǔ)存制劑，它包含置于藥學(xué)可接受制劑中的至少一種抗IL-12抗體。儲(chǔ)存制劑包含至少一種已知的防腐刑或任選選自至少一種苯紛、間甲紛、對(duì)甲盼、鄰甲酚、氯甲盼、苯甲醇、亞硝酸苯汞、笨氧基乙醇、甲搭、氯丁醇、氯化鎂(如六水合物)、對(duì)羥基苯甲酸烷基醋(甲基、乙基、丙基、丁基等)、苯扎氯銨、苯索氯銨、脫氮乙酸鈉和乙基汞硫代水楊酸鈉，或其在一種水性稀釋液中的混合物.可以使用本領(lǐng)域公知的任何適當(dāng)濃度或混合物，例如0.001-5、，或其中的任意范圍或任意值，例如，但不限于，0,001，0.003，0.005,0.009,0,01，0.02,0.03,0.05,0.09，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7,0.8，0.9，1.0,1.1，1.2,1.3,1.4，1.5，1.6，1.7,1.8,1.9,2.0,2.1，2.2，2.3，2.4,2.5，2.6，2.7，2.8，2.9，3.0，3.1，3.2，3.3，3.4，3.5,3.6,3.7，3.8，3.9，4.0，4,3，4.5，4.6,4.7,4.8，4.9，或其中的任意范圍或任意值。非限制性實(shí)例包括，無防腐劑，0.1-2%間甲盼(如0.2，0.3,0.4，0.5，0.9，1.0%),0.l-3X苯甲醇(如0.5，0.9,1.1，1.5，1.9,2.0,2.554)，0.001-0.5%乙基汞疏代水楊酸鈉(如0.005，0.01)，0.001-2.0%苯酚(如O.05，0.25，0.28，0.5，0.9，1.0X)，0.0005-1.0X對(duì)羥基苯甲酸烷基酯(如0.00075，0.0009，0.001，0.002,0.005，0.0075，0.009,0.01，0.02，0.05,0.075，0.09，0.1，0.2，0.3,0.5，0.75，0.9,1.0X)等。如前面所指出的，本發(fā)明提供了一種制品，包括包裝材料和至少一個(gè)管形瓶，其中包含至少一種抗IL-12抗體的溶液和規(guī)定的緩沖劑和/或防腐劑，任選溶于一種水性稀釋液，其中所述包裝材料包括一種標(biāo)簽，它指出所述溶刑可以保留1、2、3、4、5、6、9、12、18、20、24、30、36、40、48、54、60、66、72小時(shí)或更長(zhǎng)的時(shí)間。本發(fā)明進(jìn)一步包辨一種制品，包括包裝材料和含有至少一種冷冷凍干燥燥的抗IL-12抗體的笫一個(gè)管形瓶，和含有規(guī)定的緩沖劑或防腐劑的水性稀釋液的笫二個(gè)管形瓶，其中包裝材料包括一種標(biāo)簽，它指導(dǎo)患者在水性稀釋液中重構(gòu)至少一種抗IL-12抗體，以便形成可以保留24小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間的溶液.根據(jù)本發(fā)明而使用的至少一種抗IL-12抗體可以通過重組方法產(chǎn)生，包括從哺乳動(dòng)物細(xì)胞或轉(zhuǎn)基因制劑重組產(chǎn)生，或者從其它生物來源純化，如此處所描述或本領(lǐng)域公知。在本發(fā)明的產(chǎn)品中的至少一種抗IL-12抗體的范圍包括在濕/干體系中重構(gòu)時(shí)，產(chǎn)生約l.0ng/ml至約1000ing/nil的量，但更低和更高的濃度也是可行的，并且依賴于準(zhǔn)備使用的遞送栽體，例如，溶液制劑將不同于經(jīng)皮貼劑、肺、經(jīng)粘膜或滲透或微泵方法，優(yōu)選地，水性稀釋液任選進(jìn)一步包含藥學(xué)可接受的防腐刑，優(yōu)選的防腐劑包括選自笨酚、間甲酚、對(duì)甲酚、鄰甲酚、氣甲盼、苯甲醇、對(duì)羥基苯甲酸烷基酯(甲基、乙基、丙基、丁基等)、苯扎氦銨、苯索氣銨、脫氫乙酸鈉和乙基汞硤代水楊酸鈉，或其混合物的那些.用于制劑中的防腐刑的濃度為足以產(chǎn)生抗微生物作用的濃度.這些濃度取決于選擇的防腐劑，并且本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易確定.可以任選和優(yōu)選將其它賦形劑，如等滲劑、緩沖刑、抗氣化劑、防腐增強(qiáng)劑加入稀釋液中，甘油等等滲劑通常以公知的濃度使用。優(yōu)選加入生理耐受的緩沖劑以改進(jìn)pH控制。制劑可以有寬范閨的pH值，例如pH約4-10，優(yōu)選pH約5-9，最優(yōu)選約6.0-8.0,本發(fā)明的制劑的pH優(yōu)選為約6.8-7.8.優(yōu)選的緩沖刑包括轔酸緩沖液，最優(yōu)選為褲酸鹽，特別是轔酸緩沖鹽水(PBS).也可以任選向制劑或組合物中加入其它添加刑，如藥學(xué)可接受的增溶劑，如Tween20(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐單月桂酸酯)、Tween40(聚氣乙烯(20)山梨糖醇酐單棕櫚酸酯)、Tween80(聚氣乙烯(20)山梨糖醇酐單油酸酯)、PluronicF68(聚氣乙蜂聚氧丙烯嵌段共聚物)和PEG(聚乙二醇)或非離子型表面活性刑，例如聚山梨糖醇醋20或80、或poloxamer184或188、Pluronic豕多元醇其它共聚物，以及螯合劑如EDTA和EGTA，以減少聚集.如果用泵或塑料容器給予制刑，則這些添加劑特別有用.藥學(xué)可接受的表面活性劑的存在減少了蛋白聚集的傾向，可以通過以下方法制備本發(fā)明的制刑，包括將至少一種抗2抗體和選自苯酚、間甲酚、對(duì)甲盼、鄰甲酚、氦甲酚、苯甲醇、對(duì)羥基苯甲酸烷基醋(甲基、乙基、丙基、丁基等)、苯扎氣銨、苯索氣銨、脫氣乙酸鈉和乙基汞硤代水楊酸鈉，或其混合物在一種水性稀釋液中混合.采用常規(guī)的溶解和混合步驟在一種水性稀釋液中混合所迷至少一種抗IL-12抗體和防腐劑，為了制備適當(dāng)?shù)闹菩?，例如，可以將測(cè)得量的溶于緩沖液中的至少一種抗IL-12抗體在其量足以提供需要濃度的蛋白和防腐刑的緩沖液中混合.本領(lǐng)域技術(shù)人員可以了解該方法的變化.例如，加入各成分的順序、是否使用其它添加劑、制備該制劑的溫度和pH都是可以對(duì)使用的濃度和給藥方式進(jìn)行優(yōu)化的因素。可以將本發(fā)明的制劑以澄清的溶液或作為雙管形瓶的形式提供給患者，雙管形瓶包含一個(gè)裝有至少一種冷冷凍干燥燥的抗IL-12抗體的管形瓶，將其用含有水、防腐劑和/或賦形劑，優(yōu)選磷酸緩沖劑和/或鹽水和溶于水性稀釋液中的選擇的鹽的第二個(gè)管形瓶重構(gòu).單一溶液的管形瓶或要求重構(gòu)的雙管形瓶可以重復(fù)使用多次，并且可以滿足病人治療的單個(gè)或多個(gè)周期，因此比當(dāng)前存在的方法提供更方便的治療方案.本發(fā)明的制品可用于在24小時(shí)左右或更長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)給藥.因此，本發(fā)明的制備為患者提供了顯著的優(yōu)勢(shì).本發(fā)明的制劑任選可以儲(chǔ)存在約2-40TC的溫度下儲(chǔ)存，并且在長(zhǎng)時(shí)間保持蛋白的生物活性，因此，包裝標(biāo)簽指出，該溶液可以在超過6、12、18、24、36、48、72或96小時(shí)的時(shí)間內(nèi)保留和/或使用。如果使用了儲(chǔ)存稀釋液，該標(biāo)簽指出，該溶液可以在1-12個(gè)月，半年，一年半和/或兩年的時(shí)間內(nèi)用完.本發(fā)明中的至少一種抗IL-12抗體溶液可以通過包括在水性稀釋液中混合至少一種抗體的方法而制備，采用常規(guī)的溶解和混合步驟進(jìn)行混合，為了制備適當(dāng)?shù)南♂屢?，例如，可以將測(cè)得量的溶于水或緩沖液中的至少一種抗體以足以提供所需濃度的蛋白和任選的防腐劑或緩沖液的量混合，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以了解該方法的變化.例如，加入各成分的順序、是否使用其它添加劑、制備該制劑的溫度和pH都是可以對(duì)使用的濃度和給藥方式進(jìn)行優(yōu)化的因素.本發(fā)明的產(chǎn)品可以以澄清的溶液或作為雙管形瓶的形式提供給患者，雙管形瓶包含一個(gè)裝有至少一種冷冷凍干燥燥的抗IL-12抗體的管形瓶，將其用含有水性稀釋液的第二個(gè)管形瓶重構(gòu).單一溶液的管形瓶或要求重構(gòu)的雙管形瓶可以重復(fù)使用多次，并且可以滿足病人治療的^個(gè)或多個(gè)周期，因此比當(dāng)前存在的方法提供更方便的治療方案.本發(fā)明的產(chǎn)品可以以澄清的溶液或作為雙管形瓶的形式提供給藥店、診所、或其它機(jī)構(gòu)和設(shè)施，從而直接提供給患者，其中雙管形瓶包含一個(gè)裝有至少一種冷冷凍干燥燥的抗IL-12抗體的管形瓶，將其用含有水性稀釋液的第二個(gè)管形瓶重構(gòu).此情況下的澄清溶液最多可達(dá)1升或甚至更多，提供于大的儲(chǔ)存容器，從中可以一次或多次取出至少一種抗體溶液的更小部分，將其轉(zhuǎn)移至更小的管形瓶中，由藥店或診所提供給客戶和/或病人。公認(rèn)的包括這些單個(gè)管形瓶體系的設(shè)備包括用于遞送溶液的筆式注射器，例如BDPens,BDAutojector,H鵬ject豕，NovoPen,B-DPen,AutoPen,以及0ptiPen逸，GenotropinPen,GenotronormPen,HumatroPen,Reco—Peno,RoferonPen,Biojector,iject,J一tipNeedle-FreeInjector,Intraject,Medi-Ject,如由以下公司生產(chǎn)BectonDickensen(Franklin,Lakes,NJ,www.bectondickenson.com)，Disetronic(Burgdorf,Switzerland,www.disetronic.com;Bioject,Portland,Oregon(www.Moject.com);NationalMedicalProducts,WestonMedical(Peterborough,UK,www.weston-medical.com),Medi-JectCorp(Minneapolis,MN，www.mediject.com)*公認(rèn)的包括雙管形瓶的設(shè)備包括用于在藥筒中遞送重構(gòu)的冷冷凍干燥燥藥物的筆式注射器系統(tǒng)，例如HumatroPen,當(dāng)前要求保護(hù)的產(chǎn)品包括包裝材料，除了管理部門要求的信息，包裝材料提供了可以使用該產(chǎn)品的條件，本發(fā)明的包裝材料為病人提供了用兩個(gè)管形瓶中的濕/千產(chǎn)品在水性稀釋液中重構(gòu)至少一種抗IL-12抗體，以形成溶液，并且在2-24小時(shí)或更長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)使用該溶液的說明。對(duì)于單一管形瓶中的溶液產(chǎn)品，該標(biāo)簽說明該溶液可以在2-24小時(shí)或更長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)使用。當(dāng)前要求保護(hù)的產(chǎn)品可以用于人類藥用產(chǎn)品用途.本發(fā)明的制刑可以通過以下方法制備，包括混合至少一種抗IL-12抗體和選定的緩沖液，優(yōu)選含有鹽水或選定的鹽的磷酸緩沖液.用常規(guī)溶解和混合步驟在水性緩沖液中混合至少一種抗體和緩沖刑。為了制備適當(dāng)?shù)闹苿?，例如，可以將測(cè)得量的溶于水或緩沖液中的至少一種抗體以足以提供所需濃度的蛋白和緩沖刑的量與所需緩沖刑在水中混合.本領(lǐng)域技術(shù)人員可以了解該方法的變化.例如，加入各成分的順序、Ji否使用其它添加刑、制備該制劑的溫度和pH都是可以對(duì)使用的濃度和給藥方式進(jìn)行優(yōu)化的因素。要求保護(hù)的穩(wěn)定或儲(chǔ)存的制劑可以以澄清的溶液或作為雙管形瓶的形式提供給患者，雙管形瓶包含一個(gè)裝有至少一種冷冷凍干燥燥的抗IL-12抗體的管形瓶，將其用含有水性稀釋液的第二個(gè)管形瓶重構(gòu).單一溶液的管形瓶或要求重構(gòu)的雙管形瓶可以重復(fù)使用多次，并且可以滿足病人治療的單個(gè)或多個(gè)周期，因此比當(dāng)前存在的方法提供更方便的治療方案?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明通過各種遞送方法給予患者此處描述的至少一種抗IL-12抗體的穩(wěn)定或儲(chǔ)存制劑或溶液；所述方法包括皮下或肌內(nèi)注射；經(jīng)皮、肺部、經(jīng)粘膜、植入、滲透泵、藥筒、微泵，或其它本領(lǐng)域公知的本領(lǐng)域技術(shù)人員了解的方法.治療用途本發(fā)明也提供了使用本發(fā)明的至少一種IL-12抗體調(diào)節(jié)或治療細(xì)胞、組織、器官、動(dòng)物或患者中的至少一種本領(lǐng)域公知或此處描述的IL-12相關(guān)疾病的方法。本發(fā)明也提供了一種調(diào)節(jié)或治療細(xì)胞、組織、器官、動(dòng)物或患者中的至少一種IL-12相關(guān)疾病的方法，所迷疾病包括，但不限于，肥胖、免疫相關(guān)疾病、心血管疾病、感染性疾病、惡性疾病或神經(jīng)疾病中的至少一種。本發(fā)明也提供了一種調(diào)節(jié)或治療細(xì)胞、組織、器官、動(dòng)物或患者中的至少一種免疫相關(guān)疾病的方法，所述疾病包括，但不限于，以下疾病中的至少一種類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身發(fā)病的幼年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮褲關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)制性脊柱炎、胃潰瘍、血清陰性關(guān)節(jié)病、骨關(guān)節(jié)炎、炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、抗磷脂綜合征、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經(jīng)炎、特發(fā)性肺纖維化、系統(tǒng)性血管炎/Wegener's肉芽腫、肉樣瘤病、睪丸炎/輸精管切除逆轉(zhuǎn)程序、過敏性/特應(yīng)性疾病、哞喘、過敏性鼻炎、濕務(wù)、過敏性接觸性皮炎、過敏性結(jié)膜炎、過敏性肺炎、移植、器官移植排斥、移植物抗宿主疾病、全身炎癥反應(yīng)綜合征、膿毒癥綜合征、革蘭氏陽性菌膿毒癥、革蘭氏陰性菌膿毒癥、培養(yǎng)陰性菌膿毒癥、真菌膿毒癥、中性粒細(xì)胞減少性發(fā)熱、尿膿毒癥、腦膜炎球菌血癥、創(chuàng)傷/出血、燒傷、離子輻射暴露、急性胰腺炎、成人呼吸窘迫綜合征、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、酒精誘導(dǎo)的肝炎、慢性炎性病變、肉樣瘤病、克隆氏病、鐮狀細(xì)胞貧血、糖尿病、腎病、特應(yīng)性疾病、過敏反應(yīng)、過敏性鼻炎、枯草熱、終年性肺炎、結(jié)膜炎、子宮內(nèi)膜異位、哮喘、風(fēng)療、全身過敏、皮炎、惡性貧血、溶血性疾病、血小板減少癥、任何器官或組織的移植排斥、腎移植排斥、心臟移植排斥、肝移植排斥、胰腺移植排斥、肺移植排斥、骨號(hào)移植(BMT)排斥、皮膚同種異體移植排斥、軟骨移植排斥、骨移植排斥、小腸移植排斥、胎兒胸腺移植排斥、甲狀旁腺移植排斥、任何器官或組織的異種移植排斥、同種異體排斥、抗受體過敏反應(yīng)、格雷夫斯病、雷諾氏病、B型胰島素抵抗糖尿病、哮喘、重癥肌無力、抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性、III型過敏反應(yīng)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、POEMS綜合征(多發(fā)性神經(jīng)病、器官巨大、內(nèi)分泌病、單克隆Y球蛋白病和皮膚改變綜合征)、多發(fā)性神經(jīng)病、器官巨大、內(nèi)分泌病、單克隆Y球蛋白病和皮膚改變綜合征、抗磷脂綜合征、天皰瘡、硬皮病、混合性結(jié)締組織病、特發(fā)性阿狄森氏病、糖尿病、慢性活動(dòng)性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、白癜風(fēng)、血管炎、MI心臟切開后綜合征、IV型過敏、接觸性皮炎、過敏性肺炎、同種異體排斥、細(xì)胞內(nèi)生物引起的肉芽腫、藥物過敏、代謝性/特發(fā)性威爾遜氏病、血色素沉著病、tx-l-抗胰島素缺陷、糖尿病腎病、橋本氏甲狀腺炎、骨質(zhì)疏松癥、下丘腦-垂體-腎上腺軸評(píng)估、原發(fā)性膽汁性肝硬化、甲狀腺炎、腦脊號(hào)炎、惡液質(zhì)、囊性纖維化、新生兒慢性肺疾病、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、家族性血巨喧細(xì)胞淋巴細(xì)胞組織細(xì)胞增多癥、皮膚病學(xué)狀況、牛皮癖、斑禿、腎病綜合征、腎炎、腎小球腎炎、急性腎衰竭、血液透析、尿毒癥、中毒、驚厥前狀態(tài)、okt3治療、抗cd3治療、細(xì)胞因子治療、化療、放療(如包括，但不限于toasthenia、貧血、惡液質(zhì)等)、慢性水楊酸鹽中毒等。見，例如theMerckMa腿l，12th-17thEditions,Merck&Company,Rahway,NJ(1972，1977,1982，1987，1992,1999),PharmacotherapyHandbook,Wellsetal.，eds.，SecondEdition,AppletonandLange，Stamford,Conn.(1998，2000),在此引入作為參考.本發(fā)明也提供了一種調(diào)節(jié)或治療細(xì)胞、組織、器官、動(dòng)物或患者中的至少一種心血管疾病的方法，所述疾病包括，但不限于，進(jìn)一步包括在之前、同時(shí)和/或之后，給予至少一種選自下組的藥物至少一種TNF拮抗劑(例如，但不限于TNF抗體或片段、可溶性TNF受體或其片段、其融合蛋白、或小分子TNF拮抗劑)、抗風(fēng)濕藥物(如氨甲喋呤、金諾芬、金硤葡萄糖、碟唑嘌呤、etanercept、硫代蘋果酸金鈉、硫酸羥基氯喹、來氟米特、柳氮磺胺吡啶)、肌肉松他劑、麻醉藥、非甾體類抗炎藥(NSAID)、鎮(zhèn)痛藥、麻醉劑、鎮(zhèn)靜刑、局部麻醉劑、神經(jīng)肌肉阻滯劑、抗微生物劑(如氨基糖苷、抗真菌劑、抗寄生蟲劑、抗病毒劑、carbapenem、頭孢菌素、flurorquinolone、大環(huán)內(nèi)酯、青審素、碌胺、四環(huán)素、其它抗微生物劑)、抗牛皮癬藥物、皮質(zhì)類固醇、促蛋白合成類固醇、糖尿病相關(guān)試劑、礦物質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)劑、甲狀腺制劑、維生素、鈣相關(guān)激素、抗腹瀉藥、止咳藥、抗嘔吐藥、抗?jié)兯?、通便藥、抗凝刑、促紅細(xì)胞生成素(如epoetina)、非爾司啶(如G-CSF,Neupogen)、沙拉斯(GM-CSF，白細(xì)胞素)、疫苗、免疫球蛋白、免疫抑制劑(如basiliximab、環(huán)孢審素、daclizumab)、生長(zhǎng)激素、激素替代藥物、雌激素受體調(diào)節(jié)刑、散瞳劑、睫狀肌麻痹劑、烷化刑、抗代謝藥、有絲分裂抑制劑、放射性藥物、抗抑郁劑、抗精神病藥物、抗躁狂藥、抗精神病藥物、抗焦慮藥、催眠藥、擬交感神經(jīng)藥物、刺激刑、donepezil、他克林、抗哞喘藥、P激動(dòng)劑、吸入性類固醇、白三烯抑制刑、甲基黃噪呤、9-氨基四氫吖啶、腎上腺素或類似物、ct鏈道酶(Pulmozyme)、細(xì)胞因子或細(xì)胞罔子拮抗劑。細(xì)胞因子的非限制性實(shí)例包括，但不限于IL-1至IL-23中的任意一種，適當(dāng)?shù)男塘渴潜绢I(lǐng)域公知的.見，例如，Wellsetal.，eds.，PharmacotherapyHandbook,2ndEdition,AppletonandLange，Stamford,CT(2000);PDRPharmacopoeia,TarasconPocketPharmacopoeia2000，DeluxeEdition,TarasconPublishing,Lo肌Linda,CA(2000)，在此全文引入作為參考.適用于本發(fā)明的組合物、聯(lián)合治療、共同給藥、設(shè)備和/或方法的TNF拮抗劑(進(jìn)一步包括本發(fā)明的至少一種抗體、其特定片段和變體)包括，但不限于，抗TNF抗體、其抗原結(jié)合片段、以及與TNF特異性結(jié)合的受體分子；防止和/或抑制TNF合成、TNF釋放或TNF作用于靶細(xì)胞的化合物，如蘇胺噥啶嗣、替尼達(dá)普、褲酸二酯蘇抑制刑(如己酮可可堿、環(huán)戊笨吡嗣)、A2b腺苷受體激動(dòng)劑和A2b腺苷受體增強(qiáng)刑；防止和/或抑制TNF受體信號(hào)傳遞的化合物，如有絲分裂原激活的蛋白(MAP)激蘇抑制劑；阻斷和/或抑制膜TNF裂解的化合物，如金屬蛋白酶抑制刑；阻斷和/或抑制TNF活性的化合物，如血管緊張素轉(zhuǎn)化睞(ACE)抑制劑(如卡托普利)；和阻斷和/或抑制TNF活性產(chǎn)生和/或合成的化合物，如MAP激酶抑制劑.這里用到的"腫瘤壞死因子抗體"、"TNF抗體"、"TNFcc抗體"或片段等在體外、原位和/或優(yōu)選體內(nèi)減少、阻斷、抑制、消除或干擾TNFa活性。例如，本發(fā)明的適當(dāng)TNF人抗體可以結(jié)合TNFa并且包括特異性與TNFa結(jié)合的抗TNF抗體、其抗原結(jié)合片段、及其特定突變體或結(jié)構(gòu)域.適當(dāng)?shù)腡NF抗體或片段也可以減少、阻斷、抑制、消除、千擾、防止和/或抑制TNFRNA、DNA或蛋白合成、TNF釋放、TNF受體信號(hào)傳遞、膜TNF裂解、TNF活性、TNF產(chǎn)生和/或合成，嵌合抗體cA2由稱作A2的高親和性中和性小鼠抗人TNFccIgGl抗體的抗原結(jié)合可變區(qū)和人IgGlK免疫球蛋白的恒定區(qū)組成.人IgGlFc區(qū)改進(jìn)同種異體基因抗體效應(yīng)功能，增加血清循環(huán)半衰期和減少抗體的免疫原性。嵌合抗體cA2的親和力和表位特異性來源于鼠抗體A2的可變區(qū)。在特定實(shí)施方案中，編碼鼠抗體A2可變區(qū)的核酸的優(yōu)選來源是A2雜交瘤細(xì)胞系。嵌合A2(cA2)以劑量依賴性方式中和天然和重組人IL-12的細(xì)胞毒作用。從嵌合抗體cA2和重組人IL-12的結(jié)合測(cè)定可以計(jì)算出，嵌合抗體cA2的親和常數(shù)為1.04x1010T.通過竟?fàn)幮砸种茰y(cè)定單克隆抗體特異性和親和性的優(yōu)選方法可以參見，Harlow，etal.，antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NewYork,1988;Colliganetal.，eds.，CurrentProtocolsinIrramunology,GreenePublishingAssoc.andWileyInterscience，NewYork,(1992-2000);ozboretal.，linintinolToday,4:72-79(1983);Ausubeletal.，eds.CurrentProtocolsinMolecularBiology,WileyInterscience,NewYork(1987-2000);和Muller，Meth.Enzymol.，92:589-601(1983)，在此全文引入每一篇作為參考。在特定實(shí)施方案中，鼠單克隆抗體由稱作c134A的細(xì)胞系產(chǎn)生，嵌合抗體cA2由稱作c168A的細(xì)胞系產(chǎn)生.其它可以用于本發(fā)明的單克隆抗IL-12抗體的例子在本領(lǐng)域中有描述(見，例如，美國(guó)專利No.5,231,024;Moller,A.etal.,Cytokine2(3):162-169(1990);美國(guó)申請(qǐng)No.07/943,852(1992年9月11曰提交)；Rathjenetal.，國(guó)際公開No.W091/02078(1991年2月11日公開)；Rubinetal.,歐洲專利申請(qǐng)No.0218868(1987年4月22日公開)；Yoneetal.，歐洲專利申請(qǐng)No.0288088(1988年10月26曰)；Liang,etal.，Biochem.Biophys.Res.Coma.137:847-854(1986);Meager,etal.,Hybridoma6:305-311(1987);Fendlyetal.，Hybrido咖6:359-369(1987);Bring咖n，etal.，Hybridoma6:489-507(1987);和Hirai，etal,，J.Immunol.Meth.96:57-62(1987)，在此全文引入作為參考.TNF受體分子用于本發(fā)明的優(yōu)選TNF受體分子是以高親和性與TNFa結(jié)合(見，例如Feldmannetal.，國(guó)際公開No.W092/07076(1992年4月30日7>開)；Schalletal.，Cell61:361-370(1990);和Loetscheretal"Cell61:351-359(1990)，在此全文引入作為參考)并且任選具有低免疫原性的受體。具體地，55kDa(p55TNF-R)和75kDa(p75TNF-R)TNF細(xì)胞表面受體可以用于本發(fā)明。這些受體的截短形式，包括受體的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(ECD)或其功能部分(見，例如Corcoranetal-,Emir,J.Biochem.223:831-840(1994))也可以用于本發(fā)明。已經(jīng)在尿和血清中檢測(cè)到了作為30kDa和40kDa的TNFct抑制性結(jié)合蛋白的截短形式的TNF受體，其中包含ECD(Engelmann,H,etal,,J.Biol.Chem.265:1531-1536(1990))。TNF受體多聚分子和TNF免疫受體融合分子，及其衍生物和片段或部分是本發(fā)明的方法和組合物中可以使用的TNF受體分子的其它例子?？梢杂糜诒景l(fā)明的TNF受體分子的特征在于可以在延長(zhǎng)的時(shí)間中治療患者，具有良好至極佳的癥狀緩解作用，以及低毒性.低免疫原性和/或高親和性，以及其它未確定的特性，都可以對(duì)達(dá)到治療結(jié)果起作用，用于本發(fā)明的TNF受體多聚分子包含兩種或多種TNF受體的BCD的所有或功能性部分，它們通過一種或多種多肽接頭或其它非肽接頭，例如聚乙二醇(PEG)連接。多聚分子可以進(jìn)一步包含指導(dǎo)多聚分子表達(dá)的被分泌蛋白的信號(hào)肽.這些多聚分子和產(chǎn)生它們的方法描述于美國(guó)申請(qǐng)No.08/437,533(1995年5月9日提交)，在此引入其完整內(nèi)容作用參考，用于本發(fā)明的方法和組合物中的TNF免疫受體融合分子包含一種或多種免疫球蛋白分子的至少一部分和一種或多種TNF受體的全部或功能性部分。這些免疫受體融合分子可以組裝為單體、或異或同多聚體.免疫受體融合分子也可以是單價(jià)或多價(jià)的.這種TNF免疫受體融合分子的一個(gè)例子是TNF受體/IgG融合蛋白.TNF免疫受體融合分子和產(chǎn)生它們的方法在本領(lǐng)域中已有描述(Lesslaueretal.，Eur.J.I咖unol.21:2883-2886(1991);Ashkenazietal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:10535-10539(1991);Peppeletal.，J.Exp.Med.174:1483-1489(1991);Kollsetal.,Proc,Natl.Acad.Sci.USA91:215-219(1994);Butleretal.，Cytokine6(6):616623(1994).,Bakeretal.，Eur.J.Immunol.24:2040-2048(1994);Beutleretal.,美國(guó)專利No.5，447，851;和美國(guó)申請(qǐng)No.08/442,133(1995年5月16日提交)，在此全文引入每一篇作為參考).產(chǎn)生免疫受體融合分子的方法也參見Caponetal.，美國(guó)專利No.5,116,964;Caponetal.，美國(guó)專利No.5，225，538;和Caponetal.，Nature337:525-531(1989),在此全文引入作為參考。TNF受體的功能等價(jià)物、衍生物、片段或區(qū)域是指TNF受體分子的部分，或編碼TNF受體分子的TNF受體分子序列的部分，它們的大小和序列足以在功能上類似于可以用于本發(fā)明的TNF受體分子(如，以高親和性結(jié)合TNF并且具有低免疫原性)。TNF受體分子的功能等價(jià)物也包括修飾的TNF受體分子一一該分子在功能上類似于可以用于本發(fā)明的TNF受體分子(如，以高親和性結(jié)合TNF并且具有低免疫原性)。例如，TNF受體分子的功能等價(jià)物可以包含"沉默"密碼子或一種或多種氨基酸取代、去除或添加(如用一種氛基酸取代另一種氨基酸；或用編碼相同或不同疏水性氨基酸的密碼子取代另一種編碼疏水性氨基酸的密碼子)。參見，Ausubeletal.，CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssoc.andWiley-Interscience，NewYork(1987-2000)。細(xì)胞因子包括任何已知的細(xì)胞因子.見，例如CopewithCytokines.com,細(xì)胞因子拮抗刑包括，但不限于，任何抗體、其片段或模擬物、任何可溶性受體、其片段或模擬物、任何小分子拮抗劑或任何其組合.治療處理。本發(fā)明的任何方法可以包括治療IL-12介導(dǎo)的疾病，包括給予需要這種調(diào)節(jié)、處理或治療的細(xì)胞、組織、器官、動(dòng)物、病人有效量的包含至少一種IL-12抗體的組合物或藥物組合物.所述方法可以任選進(jìn)一步包括用于治療這些免疫疾病的共同給藥或聯(lián)合治療，其中給予所述至少一種抗IL-12抗體、其特定部分或變體，進(jìn)一步包括在之前、同時(shí)和/或之后，給予至少一種選自下組的藥物至少一種TNF拮抗刑(例如，但不限于TNF抗體或片段、可溶性TNF受體或其片段、其融合蛋白、或小分子TNF拮抗劑)、抗風(fēng)濕藥物(如氨甲嚷呤、金諾芬、金碟葡萄糖、硫唑噪呤、etanercept、硤代蘋果酸金鈉、硫酸羥基氯喹、來象米特、柳氮磺胺吡啶)、肌肉松弛劑、麻醉藥、非甾體類抗炎藥(NSAID)、鎮(zhèn)痛藥、麻醉劑、鎮(zhèn)靜劑、局部麻醉劑、神經(jīng)肌肉阻滯刑、抗微生物刑(如氨基糖苷、抗真菌劑、抗寄生蟲劑、抗病毒劑、carbapenem、頭孢菌素、flurorquinolone、大環(huán)內(nèi)酯、青審素、橫胺、四環(huán)素、其它抗微生物劑)、抗牛皮癬藥物、皮質(zhì)類固醇、促蛋白合成類固醇、糖尿病相關(guān)試劑、礦物質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)劑、甲狀腺制刑、維生素、鈣相關(guān)激素、抗腹瀉藥、止咳藥、抗嘔吐藥、抗?jié)兯帯⑼ū闼?、抗凝劑、促紅細(xì)胞生成素(如epoetina)、非爾司啶(如G-CSF，Neupogen)、沙拉斯(GM-CSF,白細(xì)胞素)、疫苗、免疫球蛋白、免疫抑制劑(如basiliximab、環(huán)孢霉素、daclizumab)、生長(zhǎng)激素、激素替代藥物、雌激素受體調(diào)節(jié)劑、散睹劑、睫狀肌麻痹劑、烷化刑、抗代謝藥、有絲分裂抑制劑、放射性藥物、抗抑郁劑、抗精神病藥物、抗躁狂藥、抗精神病藥物、抗焦慮藥、催眠藥、擬交感神經(jīng)藥物、刺激劑、donepezil、他克林、抗哮喘藥、P激動(dòng)劑、吸入性類固醇、白三蜂抑制劑、甲基黃嘌呤、9-氨基四氬吖啶、腎上腺素或類似物、a鏈道酶(Pulmozyme)、細(xì)胞因子或細(xì)胞因子拮抗劑.一般地，病理學(xué)狀況的治療是通過給予有效童或刑量的至少一種抗IL-12抗體組合物而實(shí)現(xiàn)的，該組合物中平均總共含有至少約0.01-500mg至少一種抗IL-12抗體/千克患者體重/劑，優(yōu)選每單次或多次給藥約0.01-100郵抗體/千克患者體重，這取決于組合物中含有的比活性。作為選擇，有效血清濃度可以包括每單次或多次給藥0.1-5000Mg/ml的血清濃度。適當(dāng)?shù)膭┲厥轻t(yī)學(xué)從業(yè)者已知的，當(dāng)然，取決于特定的疾病狀態(tài)、給予的組合物的比活性、以及患者正在進(jìn)行的具體治療.在一些情況下，為獲得需要的治療量，必須提供重復(fù)給藥，即重復(fù)特定監(jiān)測(cè)或計(jì)量劑量的各次給藥，其中重復(fù)各次給藥，直到達(dá)到需要的每日劑量或效果。優(yōu)選的劑量可以任選包括O.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、"、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99和/或100-500mg/kg/給藥，或其中的任意范圍、任意值或任意分?jǐn)?shù)，或每單次或多次給藥達(dá)到0.1、0.5、0,9、1.0、1.1、1.2、1.5、1.9、2.0、2.5、2.9、3.0、3.5、3.9、4.0、4.5、4.9、5.0、5.5、5.9、6.0、6.5、6.9、7.0、7.5、7.9、8,0、8.5、8.9、9.0、9.5、9.9、10、10.5、10.9、11、11.5、11.9、20、12.5、12.9、13.0、13.5、13.9、14.0、14.5、4.9、5.0、5.5、5.9、6.0、6.5、6.9、7.0、7.5、7.9、8.0、8.5、8.9、9.0、9.5、9.9、10、10.5、10.9、11、11.5、11.9、12、12.5、12.9、13.0、13.5、13.9、14、14.5、15、15.5、15.9、16、16.5、16.9、17、17.5、17.9、18、18.5、18.9、19、19.5、19.9、20、20.5、20.9、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、96、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、和/或5000pg/ml血清濃度，或其中的任意范圍、任意值或任意分?jǐn)?shù)，此外，給藥劑量可以根據(jù)已知因素而改變，例如具體試劑的藥代動(dòng)力學(xué)特征，以及其給藥模式和途徑；接受者的年齡、健康和體重；癥狀的性質(zhì)和范圍；同時(shí)進(jìn)行的治療的類型、頻率，以及需要的效果.活性成分的劑量通常為約0.1-100mg/kg體重'通常為0.1-50，優(yōu)選0.1-10mg/kg/給藥，或以有效獲得需要的結(jié)果的持續(xù)釋放形式.作為非限制性實(shí)例，人或動(dòng)物的治療可以通過一次或周期劑量的至少一種本發(fā)明的抗體而提供，其劑量為0.1-100mg/kg，例如O.5、0.9、1.0、1.1、1,5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、45、50、60、70、80、90或100邊g/kg/日，在第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40天中的至少一天給藥，或作為選擇或類外地在笫1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、或52周的至少一周給藥，或作為選擇或額外地在l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20年中的至少一年中給藥，或其任意組合，采用單次輸注或重復(fù)給藥.適于內(nèi)部給藥的劑型(組合物)一般包含約0.lmg-約500nig活性成分/單位或容器，在這些藥物組合物中，活性成分的量一般為組合物總重量的約0.5-99.999wtX。對(duì)于腸胃外給藥，可以將抗體配制為與藥學(xué)可接受的腸胃外栽體結(jié)合或分別提供的溶液、懸浮液、乳狀液或冷冷凍干燥燥的粉末.這些栽體的例子為水、鹽水、林格氏液、右旋糖溶液、和l-10X的人血清白蛋白。也可以使用脂質(zhì)體和非水性栽體如固定的油。栽體或冷凍干燥的粉末可以含有維持等滲性(如氯化鈉、甘露醇)和化學(xué)穩(wěn)定性(如緩沖劑和防腐劑)。該制劑可以通過已知或適當(dāng)技術(shù)滅菌.適當(dāng)?shù)乃幬镌泽w描述于本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)Remington'sPharmaceuticalSciences,A.Osol的最新版本，作為選擇的給藥可以根據(jù)本發(fā)明采用許多公知的和開發(fā)的方式給予藥學(xué)有效量的本發(fā)明的至少一種抗IL-12抗體，盡管在以下說明書中使用了肺部給藥，根據(jù)本發(fā)明可以使用其它給藥方式，得到適當(dāng)?shù)慕Y(jié)果.本發(fā)明的IL-12抗體在栽體中遞送，作為溶液、乳狀液、膠體或懸浮液、或作為干粉末遞送，采用適于通過此處描述的或本領(lǐng)域公知的吸入或其它方式進(jìn)行給藥的任何設(shè)備和方法.腸胃外制劑和給藥腸胃外給藥的制刑可以包含作為常規(guī)賦形刑的無菌水或鹽水、聚鏈烷醇如聚乙二醇、植物油、氫化萘等.可以通過適當(dāng)?shù)娜榛瘎┗驖?rùn)濕劑和懸浮劑根據(jù)已知方法制備用于注射的水性或油性懸浮液.用于注射的試刑可以是無毒的、非口服給藥的稀釋刑，如水溶液或無菌可注射溶液或溶刑中的懸浮液.作為可使用的栽體或溶刑，可以使用水、林格氏液、等滲鹽水等；作為普通溶劑或懸浮溶劑，可以使用無菌的不揮發(fā)油.對(duì)于這些目的，可以使用任意類型的不揮發(fā)油和脂肪酸，包括天然或合成的或半合成的脂肪油或脂肪酸；天然或合成的或半合成的甘油單酴或二酯或三酯，腸胃外給藥是本領(lǐng)域公知的，包括，但不限于，常規(guī)注射工具、描述于美國(guó)專利No.5,851,198的氣加壓的無針頭注射設(shè)備，和描述于美國(guó)專利No.5,839,446的激光穿孔器設(shè)備，在此全文引入上述專利作為參考。作為選擇的遞送本發(fā)明進(jìn)一步涉及通過腸胃外、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)、囊內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、體腔內(nèi)、小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、結(jié)腸內(nèi)、子宮頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、骨內(nèi)、盆腔內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、快速注射、陰道、直腸、頰、舌下、鼻內(nèi)或經(jīng)皮設(shè)備而給予至少一種抗IL-12抗體.可以制備至少一種抗IL-12抗體的組合物，用于腸胃外(皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi))或任意其它給藥，特別是以液體溶液或懸浮液給藥；用于陰道或直腸給藥，特別是以半固體形式給藥，例如，但不限于以霜和栓劑形式給藥；用于類部或舌下給藥，例如，但不限于以片劑或膠囊形式給藥；或用于鼻內(nèi)給藥，例如，但不限于以粉末、鼻滴液或氣溶膠或某些制劑形式給藥；或用于經(jīng)皮給藥，例如，但不限于以凝膠、油奮、洗液、懸浮液或貼刑遞送系統(tǒng)給藥，同時(shí)用化學(xué)增強(qiáng)劑如二甲基亞砜修飾皮膚結(jié)構(gòu)或增加經(jīng)皮貼劑的藥物濃度(Junginger，etal.In"DrugPermeationEnhancement";Hsieh，D.S.,Eds.，pp.59-90(MarcelDekker，Inc.NewYork1994,)在此全文引入作為參考)，或使用氣化刑以便將含有蛋白和肽的制劑應(yīng)用于皮膚上(WO98/53847)，或施加電場(chǎng)以便產(chǎn)生電穿孔等瞬時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)途徑，或增加帶電藥物通過皮膚的遷移率，如離子電滲療法，或應(yīng)用超聲，如超聲電滲療法(美國(guó)專利Nos.4，309,989和4,767,402)(上述文獻(xiàn)和專利在此全文引入作為參考)，肺部/真部給藥對(duì)于肺部給藥，至少一種抗IL-12抗體組合物優(yōu)選以優(yōu)選到達(dá)肺的下氣道或養(yǎng)竇的顆粒大小進(jìn)行遞送.根據(jù)本發(fā)明，至少一種抗IL-12抗體可以通過本領(lǐng)域公知的各種吸入或鼻設(shè)備遞送，用于通過吸入進(jìn)行治療劑的給藥。這些設(shè)備可以將氣溶膠化的制劑沉積在患者的鼻竇腔或肺泡中，所迷設(shè)備包括計(jì)量吸入器、噴灑器、干粉產(chǎn)生器、噴霧器等.其它適于指導(dǎo)抗體的肺或鼻給藥的設(shè)備是本領(lǐng)域公知的.所有這些設(shè)備可以使用適于以氣溶膠形式給予分散抗體的制劑.這些氣溶膠可以由溶液(水性和非水性)或固體顆粒組成.Ventolii^等計(jì)量吸入器一般使用推進(jìn)氣體并且在吸入時(shí)要求激活(見，例如W094/16970，W098/35888),由InhaleTherapeutics出售的Turbuhaler(Astra)、Rotahaler(Glaxo)、Diskus(Glaxo)、SpirosTM吸入器(Dura)等干粉吸入器以及Spinhaler粉末吸入器使用呼吸激活的混合粉末(US4668218Astra,EP237507Astra,WO97/25086Glaxo，WO94/08552Dura,US5458135Inhale,W094/06498Fisons，在此全文引入作為參考)。AERxT"Aradigm、Ultravent噴灑器(Mallinckrodt)和Acorn118噴灑器(MarquestMedicalProducts)((US5404871Aradigm,W097/22376)，上述參考文獻(xiàn)在此全文引入作為參考)從溶液產(chǎn)生氣溶膠，而計(jì)量吸入器、干粉吸入器等產(chǎn)生小顆粒氣溶膠。這些商購(gòu)吸入設(shè)備的具體例子是用于代表適于本發(fā)明的實(shí)施的具體設(shè)備，不準(zhǔn)備限制本發(fā)明的范圍.包含至少一種抗IL-12抗體的組合物優(yōu)選通過干粉吸入器或噴霧器遞送.用于本發(fā)明的至少一種抗體的給藥的吸入設(shè)備具有一些需要的特征.例如，通過吸入設(shè)備遞送是有利的，它可靠、可重復(fù)并且準(zhǔn)確。吸入設(shè)備可以任選遞送小的干顆粒，例如小于約10pm，優(yōu)選約l-5nm,以便能夠較好地呼吸.作為噴霧給予IL-12抗體組合物可以迫使至少一種抗IL-12抗體的懸浮液和溶液在壓力下通過噴嘴，從而產(chǎn)生包括IL-12抗體組合物的噴霧.可以選擇噴嘴大小和構(gòu)型、施加的壓力和填入液體的速度而達(dá)到需要的輸出量和顆粒大小.可以通過連接于毛細(xì)管或噴嘴的電場(chǎng)產(chǎn)生電噴霧.有利的是，由噴霧遞送的至少一種抗IL-12抗體組合物蛋白的顆粒大小小于約lOMm，優(yōu)選約1-5nm，最優(yōu)選約2-3md.適用于噴霧器的至少一種抗IL-12抗體組合物蛋白的制刑一般包含溶于水溶液中的抗體組合物蛋白，其濃度為約每毫升溶液約0.l-約100mg至少一種抗IL-12抗體組合物蛋白或mg/g邁，或其中的任意范圍或任意值，例如，但不限于O.1、0,2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、45、50、60、70、80、90或100mg/ml或mg/giD.該制劑可以包含賦形刑、緩沖刑、等滲試刑、防腐刑、表面活性刑和優(yōu)選鋅等試劑.該制刑也可以包含賦形劑或用于穩(wěn)定組合物蛋白的試劑，例如緩沖刑、還原刑、大分子蛋白或碳水化合物。用于配制抗體組合物蛋白的大分子蛋白包括白蛋白、魚精蛋白等.用于配制抗體組合物蛋白的典型碳水化合物包括蔗糖、甘露醇、乳糖、海藻糖、葡萄糖等.抗體組合物蛋白制劑也可以包含表面活性劑，它可以減少或防止由于溶液形成氣溶膠時(shí)的霧化導(dǎo)致的表面誘導(dǎo)的抗體組合物蛋白的聚集，可以使用各種常規(guī)的表面活性刑，例如聚氣乙烯脂肪酸酯和醇，以及聚氣乙烯山梨糖醇脂肪酸酶.其含量一般為制劑重量的約0.001-14S,用于本發(fā)明的特別優(yōu)選的表面活性劑為聚氧乙烯失水山梨糖醇單油酸酯、聚山梨糖醇酯80、聚山梨糖醉酯20等.用于IL-12抗體或其特定部分或變體的蛋白制劑的其它試劑是本領(lǐng)域公知的，也可以包含在制刑中.通過噴灑器給予IL-12抗體組合物可以通過噴灑器給予抗體組合物，例如噴射噴灑器或超聲噴灑器。一般地，在噴射噴灑器中，用壓縮氣體源通過一個(gè)孔而產(chǎn)生高速氣體噴射.當(dāng)其它膨脹超過噴嘴時(shí)，產(chǎn)生低壓區(qū)，該區(qū)將抗體組合物蛋白溶液拉拽通過與液體儲(chǔ)存器連接的毛細(xì)管。通過毛細(xì)管的液體流出管時(shí)被剪切成不穩(wěn)定的細(xì)絲和微滴，產(chǎn)生氣溶膠.可以使用各種構(gòu)型、流速和擋板類型一般從給定的噴射噴灑去達(dá)到需要的性能特征。在超聲噴灑器中，采用高頻電能產(chǎn)生振動(dòng)、機(jī)械能，一般采用壓電式換能器.該能童被直接或通過耦合流體轉(zhuǎn)移至抗體組合物制劑，產(chǎn)生包含抗體組合物蛋白的氣溶膠，有利地，由噴灑器遞送的抗體組合物蛋白的顆粒大小小于約lOMm，優(yōu)選約l-5pin，最優(yōu)選約2-3iim,噴射噴灑器或超聲噴灑器中適用的至少一種抗IL-12抗體制劑的濃度一般為每毫升溶液約0.1-100mg至少一種抗IL-12抗體蛋白.該制劑可以包含賦形劑、緩沖刑、等滲試劑、防腐劑、表面活性劑和優(yōu)選鋅等試劑。該制劑也可以包含賦形劑或用于穩(wěn)定至少一種抗IL-12抗體組合物蛋白的試劑，例如緩沖刑、還原劑、大分子蛋白或碳水化合物.用于配制至少一種抗IL-12抗體的大分子蛋白包括白蛋白、魚精蛋白等^用于配制至少一種抗IL-12抗體的典型碳水化合物包括蔗糖、甘露醇、乳糖、海藻糖、葡萄糖等。至少一種抗IL-12抗體制刑也可以包含表面活性刑，它可以減少或防止由于溶液形成氣溶膠時(shí)的霧化導(dǎo)致的表面誘導(dǎo)的至少一種抗IL-12抗體的聚集.可以使用各種常規(guī)的表面活性刑，例如聚氧乙烯脂肪酸酯和醇，以及聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸醋.其含量一般為制劑重量的約0.001-4、用于本發(fā)明的特別優(yōu)選的表面活性刑為聚氧乙烯失水山梨糖醇單油酸酯、聚山梨糖醇酯80、聚山梨糖醇醋20等。用于抗體蛋白等蛋白制劑的其它試劑是本領(lǐng)域公知的，也可以包含在制劑中.通過計(jì)量吸入器給予IL-12抗體組合物在計(jì)量吸入器(MDI)中，在一個(gè)小罐中裝有作為包含液化的壓縮氣體的混合物的推進(jìn)劑、至少一種抗IL-12抗體和任意賦形劑或其它添加刑.計(jì)量閥的激活釋放作為氣溶膠的混合物，優(yōu)選含有大小小于約10nm，優(yōu)選約l-5^m，最優(yōu)選約2-3pm的可以.需要的氣溶膠顆粒大小可以通過使用由本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的各種方法，包括噴射研磨、噴霧干燥、臨界點(diǎn)濃縮等方法產(chǎn)生的抗體組合物蛋白制劑而獲得.優(yōu)選的計(jì)量吸入器包括由3M或Glaxo制造并且使用氫象碳推進(jìn)劑的那些.計(jì)量吸入器設(shè)備中使用的至少一種抗IL-12抗體一般包含精細(xì)分割的粉末，其中含有作為非水介質(zhì)中的懸浮物的至少一種抗IL-12抗體，例如，在表面活性劑的幫助下懸浮于一種推進(jìn)劑中。用于此目的的推進(jìn)劑可以是任何常規(guī)材料，如氯氟碳、氫氯氟碳、氫氟碳或烴，包括三氣氟甲烷、二氯二象甲烷、二氯四象乙醇和1,1，1,2-四象乙烷、HFA-lWa(氛氣鏈烷-134a)、HFA-227(氫象鏈烷-227)等。推進(jìn)劑優(yōu)選是氫氟碳.可以選擇表面活性劑以穩(wěn)定作為推進(jìn)劑中的懸浮物的至少一種抗IL-12抗體，從而保護(hù)活性試劑免受化學(xué)降解等.適當(dāng)?shù)谋砻婊钚詣┌ㄉ嚼嫣谴既退狨?、大豆卵褲脂、油酸?在一些情況下，溶液氣溶膠優(yōu)選使用乙醇等溶劑。本領(lǐng)域已知的用于蛋白制劑的其它試劑，如蛋白，也可以包含在制刑中.本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明的方法可以通過此處沒有描述的設(shè)備對(duì)至少一種抗IL-12抗體組合物進(jìn)行肺部給藥而達(dá)到，口服制劑和給藥口服制刑依賴于佐劑(如間苯二酚和非離子型表面活性劑如聚氣乙烯油醋和正十六烷基聚乙烯酯)的共同給藥而人工增加腸壁的通透性，并且依賴于酶抑制劑(如胰蛋白蘇抑制劑、二異丙基象代碟酸醋(DFF)和抑肽酶)的共同給藥而抑制酶促降解.用于口服給藥的固態(tài)劑型的活性組成化合物可以與至少一種添加劑混合，所述添加刑包括蔗糖、乳糖、纖維素、甘露醇、海藻糖、棉籽糖、麥芽糖醇、右旋糖苷、淀粉、瓊脂、arginates、幾丁質(zhì)、脫乙酰殼聚糖、果膠、黃芪樹膠、阿拉伯樹膠、明膠、膠原、酪蛋白、白蛋白、合成或半合成聚合物和甘油醋.這些刑型也可以包含其它類型的添加劑，如非活性稀釋劑、潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂、對(duì)鞋基苯甲酸醋、防腐劑如山梨酸、抗壞血酸、ct生育盼、抗氣化劑如半胱氨酸、崩解劑、粘合劑、增稠劑、緩沖劑、增甜劑、矯味劑、芳香劑等。片劑和丸劑可以進(jìn)一步加工成腸衣制劑.用于口服給藥的液體制刑包括允許醫(yī)學(xué)應(yīng)用的乳狀液、糖漿、脈劑、懸浮液和溶液制劑。這些制劑可以含有所述領(lǐng)域常用的非活性稀釋劑，如水，也已經(jīng)描述將脂質(zhì)體用作胰島素和肝素的藥物遞送系統(tǒng)(美國(guó)專利No,4,239,754).最近，已經(jīng)使用混合氨基酸(類蛋白)的人工聚合物微球體來遞送藥物(美國(guó)專利No.4，925，673)。此外，美國(guó)專利No.5,879,681和美國(guó)專利No.5,5,871,753中描述的栽體化合物也已經(jīng)用于口服遞送生物活性試刑，這是本領(lǐng)域^^知的。粘膜制劑和給藥對(duì)于通過粘膜表面吸收，給予至少一種抗IL-12抗體的組合物和方法包括含有多種亞微米顆粒、粘膜吸附性大分子、生物活性肽和水性連續(xù)相的乳狀液，它通過達(dá)到乳狀液顆粒的粘膜吸附而促進(jìn)通過粘膜表面的吸收(美國(guó)專利Nos.5,514,670)。適于施加本發(fā)明的乳狀液的粘膜表面可以包括角膜、結(jié)膜、類、舌下、養(yǎng)、陰道、肺、胃、腸和直腸給藥途徑》用于陰道或直腸給藥的制劑，如栓劑，可以包含賦形劑，例如聚鏈烷醇、凡士林、可可油等，用于鼻內(nèi)給藥的制劑可以是固體，包含賦形劑，例如乳糖，或可以是水性或油性的鼻滴液.對(duì)于頰部給藥，賦形劑包括糖、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、預(yù)膠化淀粉等(美國(guó)專利Nos,5,849,695)。經(jīng)皮制劑和給藥對(duì)于經(jīng)皮給藥，將至少一種抗IL-12抗體包被于遞送栽體，如脂質(zhì)體或聚合納米顆粒、微顆粒、微膠囊或微球體中(除非特別指出，統(tǒng)一稱作微顆粒)。已知有許多適當(dāng)?shù)脑O(shè)備，包括由以下成分組成的微顆粒合成聚合物如多羥基酸，如聚乳酸、聚乙醇酸及其共聚物、聚原酸癍、聚肝和聚褲腈，以及天然聚合物如膠原、聚氨基酸、鋁和其它蛋白、藻酸鹽和其它多糖、及其組合(美國(guó)專利Nos.5,814,599).延長(zhǎng)的給藥和制劑有時(shí)可能需要在延長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)向受試者遞送本發(fā)明的化合物，例如，單次給藥在一周至一年的時(shí)間.可以使用各種緩釋、儲(chǔ)存或植入刑型.例如，該劑型可以包含化合物的藥學(xué)可接受的無毒鹽，該化合物在體液中具有低溶解度，例如，(a)多價(jià)酸的酸加成鹽，所述酸例如褲酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、鞣酸、pamoic酸、藻酸、聚谷氨酸、萘單或二磺酸、聚半乳糖搭酸等；多價(jià)金屬陽離子的鹽，所述陽離子如鋅、鈣、鉍、鋇、鎂、鋁、銅、鈷、鎳、鎘等，或與有機(jī)陽離子如N,N'-二爺基-乙二胺或乙二胺形成的鹽；或(c)，(a)和(b)的組合物，如鞣酸鋅.此外，本發(fā)明的化合物或優(yōu)選相對(duì)不溶的鹽，如前面描述的化合物和鹽，可以與芝麻油等適于注射的物質(zhì)一起配制于單硬脂酸鋁凝膠等凝膠中.特別優(yōu)選的鹽是鋅鹽、鞣酸鋅鹽、pamoate鹽等。用于注射的緩釋儲(chǔ)存制劑的另一種類型包含用于包被于膠囊中的分散的化合物或鹽，所迷化合物或鹽位于緩慢降解、無毒、非抗原性的聚合物中，如描述于美國(guó)專利No.3，773，919的聚乳酸/聚乙醇酸聚合物。該化合物或優(yōu)選相對(duì)不溶的鹽，如前面描述的化合物和鹽，也可以配制于膽固醇基質(zhì)硅橡膠丸，特別是用于動(dòng)物.其它緩釋、儲(chǔ)存或植入制劑，如氣體或液體脂質(zhì)體是本領(lǐng)域公知的(美國(guó)專利Nos.5,770,222和"SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems",J.R.Robinsoned.，MarcelDekker，Inc.,N.Y.,1978).前面已經(jīng)一般性地描述了本發(fā)明，參考以下實(shí)施例可以更容易理解本發(fā)明，實(shí)施例是用于舉例說明，而不是限制性的，用栽體pC4表達(dá)IL-12抗體表達(dá)。質(zhì)粒pC4是質(zhì)粒pSV2-dhfr(ATCC保藏號(hào)No.37146)的衍生物。該質(zhì)粒含有SV40早期啟動(dòng)子控制下的小鼠DHFR基因.可以通過在選擇性培養(yǎng)基(如ot-MEM,LifeTechnologies,Gaithersburg,MD)中培養(yǎng)細(xì)胞而選擇用這些質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞或其它缺乏二氫葉酸活性的細(xì)胞，該培養(yǎng)基中補(bǔ)加了化療劑氨曱喋呤.抗氨甲嚷呤(MTX)的細(xì)胞中的DHFR基因的擴(kuò)增已經(jīng)有記栽(見，例如F.W.Alt,etal.，J.Biol.Chem.253:1357-1370(1978);J.L.HamlinandC,Ma，Biochem.etBiophys.Acta1097:107-143(1990);和M.J.PageandM.A.Sydenham,Biotechnology9:64—68(1991)),在不斷增加的MTX濃度下培養(yǎng)的細(xì)胞通過靶酶DHFR的過量產(chǎn)生發(fā)生了對(duì)藥物的抗性，這是因?yàn)镈HFR基因的擴(kuò)增.如果將第二種基因連接于DHFR基因，它通常被共擴(kuò)增并且過度表達(dá)。本領(lǐng)域公知該方法可以用于開發(fā)攜帶多于IOOO拷貝的被擴(kuò)增基因的細(xì)胞系.因此，當(dāng)撤去氨甲喋呤時(shí)，獲得了含有整合到宿主細(xì)胞的一個(gè)或多個(gè)染色體的被擴(kuò)增基因.質(zhì)粒pC4含有用于表達(dá)目的基因的勞斯肉瘤病毒長(zhǎng)末端重復(fù)(LTR)的強(qiáng)啟動(dòng)子(Cullen，etal.，Molec.Cell.Biol.5:438-447(1985))和從人巨細(xì)胞病毒(CMV)的立即早期基因的增強(qiáng)子分離的片段(Boshart,etal.，Cell41:521-530(1985))。啟動(dòng)子下游是允許基因整合的BamHI，Xbal，和Asp718限制酶裂解位點(diǎn)。該質(zhì)粒在這些克隆位點(diǎn)之后含有3，內(nèi)含子和大鼠前胰島素原基因的聚腺苷酸化位點(diǎn).其它高效啟動(dòng)子也可以用于表達(dá)，例如人P肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子、SV40早期或晚期啟動(dòng)子或來自于其它逆轉(zhuǎn)錄病毒，如HIV和HTLVI的長(zhǎng)末端重復(fù).Clontech的Tet-0ff和Tet-0n基因表達(dá)系統(tǒng)和相似的系統(tǒng)可以用于在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中以經(jīng)調(diào)節(jié)的途徑表達(dá)IL-12(M.Gossen,andH,Bujard，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:5547-5551(1992)).對(duì)于mRNA的聚腺苷酸化，也可以使用例如人生長(zhǎng)激素或球蛋白基因的其它信號(hào).攜帶整合到染色體中的目的基因的穩(wěn)定細(xì)胞系也可以通過用可選擇標(biāo)記如gpt,G418或潮審素共轉(zhuǎn)染而進(jìn)行選擇.在開始時(shí)使用G418加氨甲喋呤等一種以上的可選擇標(biāo)記是有利的。用限制醉消化pC4質(zhì)粒，然后通過本領(lǐng)域公知的程序用小牛腸磷酸酶去磷酸化，然后從1%瓊脂糖凝膠分離栽體.根據(jù)已知的方法步驟，使用了編碼完整IL-12抗體的DNA序列，如相應(yīng)于本發(fā)明的IL-12抗體HC和LC可變區(qū)的SEQIDN0S:1和2所示序列.此構(gòu)建體中也使用了編碼適當(dāng)人恒定區(qū)(即HC和LC區(qū))的分離核酸(如提供于栽體p1351).然后用T4DNA連接蘇連接分離的可變區(qū)和恒定區(qū)編碼DNA和去褲酸化的栽體。然后轉(zhuǎn)化大脈桿菌HB101或XL-1Blue細(xì)胞，并且例如用限制酶分析鑒定含插入pC4質(zhì)粒的片段的細(xì)菌.用缺乏DHFR基因的中國(guó)倉(cāng)鼠印巢(CHO)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染.用0.5jigpSV2-neo質(zhì)粒采用脂質(zhì)轉(zhuǎn)染共轉(zhuǎn)染5mg表達(dá)質(zhì)粒pC4.pSV2-neo質(zhì)粒含有顯性可選擇標(biāo)記，即來自于Tn5的neo基因，它編碼一種酶，該觫賦予對(duì)包括G418的一組抗生素的抗性.將這些細(xì)胞種植在補(bǔ)加lng/mlG418的aHEM中.兩天后，用胰蛋白酶消化細(xì)胞并且種植在雜交瘤克隆板上(Greiner，Germany),置于補(bǔ)加10、25或50ng/ml氨甲嚷呤+1pg/mlG418的a"MEM中.大約10-14天后，用胰蛋白酶消化單個(gè)克隆，然后種植在6孔培養(yǎng)皿或10ml燒瓶中，使用不同濃度的氨甲嚷呤(50nM,100nM，200nM,400nM，800nM),然后將在最高濃度氨甲喋呤下生長(zhǎng)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染到新的6孔板中，該板含有更高濃度的氨甲喋呤(lmM，2mM，5mM，10mM,20mM).重復(fù)同樣的程序，直到獲得在100-200mM的濃度下生長(zhǎng)的克隆。例如，通過SDS-PAGE和蛋白印跡或反相HPLC分析所需基因產(chǎn)物的表達(dá)。實(shí)施例2:用轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生與人IL-12反應(yīng)的高親和性人IgG單克隆抗體概要使用含有人類重鏈和輕鏈免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠，產(chǎn)生高親和性的完全的人單克隆抗體，該抗體可以治療性使用以抑制IL-12的作用，從而治療一種或多種IL-12介導(dǎo)的疾病.用人重組IL-12免疫含有人重鏈和輕鏈可變區(qū)和恒定區(qū)抗體轉(zhuǎn)基因的(CBA/JxC57/BL6/J)R雜交小鼠(Tayloretal.,Intl.Immunol.6:579-591(1993);Lonberg，etal.，Nature368:856-859(1994);Neuberger，M.,NatureBiotech.14:826(1996);Fishwild，etal,,NatureBiotechnology14:845-851(1996)),—些融合產(chǎn)生了一組或多組完全的人IL-12反應(yīng)性IgG單克隆抗體，進(jìn)一步鑒定完全的人抗IL-12抗體.它們都是IgGlp.發(fā)現(xiàn)這些抗體的親和常數(shù)為約lxl0'-9x1012。這些完全的人單克隆抗體的預(yù)料不到的高親和性使它們成為IL-12相關(guān)疾病、病理或紊亂的治療應(yīng)用的適宜候選物.縮寫B(tài)SA-牛血清白蛋白C02-二氣化碳DMSO-二甲基亞鞏EIA-酶免疫測(cè)定FBS—胎牛血清&02-過氣化氫HRP-辣根過氧化物酶XID-皮內(nèi)Ig-免疫球蛋白IL-12-組織壞死因子aIP-腹膜內(nèi)IV-靜脈內(nèi)Mab-單克隆抗體0D-光密度0PD-鄰苯二胺二氫氯化物PEG-聚乙二醇PSA-青霉素，鏈霉素，兩性審素RT-室溫SQ-皮下v/v-體積/體積w/v-重量/體積材料和方法動(dòng)物可以表達(dá)人抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠是本領(lǐng)域公知的并且可以購(gòu)得(例如，購(gòu)自GenPharmInternational,SanJose，CA;Abgenix，F(xiàn)reemont，CA及其它公司)，它們表達(dá)人免疫球蛋白，而不是小鼠IgM或IgM.例如，這些轉(zhuǎn)基因小鼠含有人序列轉(zhuǎn)基因，這些基因進(jìn)行了V(D)J連接、重鏈類轉(zhuǎn)換、和體細(xì)胞突變，以產(chǎn)生人序列免疫球蛋白所有組成成分(Lonberg,etal.，Nature368:856-859(1994)),輕鏈轉(zhuǎn)基因可以部分來自包含近一半種系人Vn區(qū)的酵母人工染色體克隆。此外，重鏈轉(zhuǎn)基因可以編碼人M和人Y1(Fishwild，etal.，NatureBiotechnology14:845—851(1996))和/或恒定區(qū).來源于適當(dāng)基因系的小鼠可以用于免疫和融合過程，以產(chǎn)生完全的人IL-12單克隆抗體。免疫可以用一種或多種免疫方案產(chǎn)生抗IL-12人雜交瘤.在以下示例性的免疫程序后可以進(jìn)行最初的幾次融合，但也可以使用其它相似的公知程序。用1-1000pg重組人IL-12對(duì)一些14-20周齡的雌性和/或手術(shù)去勢(shì)的轉(zhuǎn)基因雄性小鼠進(jìn)行IP或ID免疫，這些重組人IL-12采用等體積的TITERMAX或弗氏完全佐刑進(jìn)行乳化，其最終體積為100-400mL(如200).每只小鼠也可以任選在2個(gè)SQ位點(diǎn)之一接受溶于100nL生理鹽水的1-10pg。然后可以在1-7，5-12,10-18，17-25和/或21-34天后用等體積TITERMAX或弗氏不完全佐劑乳化的IL-12進(jìn)行IP(1-400pg)和SQ(1400Hgx2)免疫.12-25和25-40天之后可以通過不抗凝條件下的眶后穿刺而從小鼠取血.然后使血液在RT下凝固1小時(shí)，收集血清，根據(jù)已知的方法采用IL-12EIA測(cè)定滴度。當(dāng)重復(fù)注射不導(dǎo)致滴度增加時(shí)進(jìn)行融合.此時(shí)，可以用稀釋于100pL生理鹽水的l-400pgIL-12給予小鼠最后一次IV加強(qiáng)注射.3天后，通過斷頸推處死小鼠，在無菌條件下去除脾，浸入含有100U/mL青霉素、100fjg/mL鏈霉素、和0.25Mg/mL兩性霉素B(PSA)的lOmL冰冷鹽酸緩沖鹽水(PBS).通過用PSA-PBS無菌灌注脾而收獲脾細(xì)胞，用臺(tái)盼藍(lán)染色排除法計(jì)數(shù)，并且重懸于含25mMHepes的RPMI1640培養(yǎng)基.細(xì)胞融合可以根據(jù)已知的方法，如本領(lǐng)域公知的方法進(jìn)行融合，鼠骨髄瘤細(xì)胞與存活脾細(xì)胞的比例為l:1至1:10,作為非限制性的實(shí)例，將脾細(xì)胞和骨號(hào)瘤細(xì)胞一起沉淀.然后在37TC下，在lmL50^4(w/v)PEG/PBS溶液(PEG分子量1450，Sigma)中重懸沉淀30秒以上.然后通過緩慢加入10.5mL含有25mMHepes(37TC)的RPMI1640培養(yǎng)基1分鐘以上，以便終止融合。以500-1500rpm將融合細(xì)胞離心5分鐘.然后將細(xì)胞重懸于HAT培養(yǎng)基(RPMI1640培養(yǎng)基，含有25mMHepes，F(xiàn)etalCloneI血清(Hyclone)，1mM丙稱酸鈉，4mML-谷氨酰胺，10pg/mL慶大霉素，Origen培養(yǎng)補(bǔ)充物(Fisher),10、653調(diào)節(jié)的RPMI1640/Hepes培養(yǎng)基，50/iM2-疏基乙醇，100uM次黃噪呤，0.4MM氨嚷呤和16MM胸香)，并且以200pL/孔平鋪于15個(gè)96孔平底組織培養(yǎng)板.然后將板置于含有C02和95%空氣的潮濕的371C孵育器中7-IO天.檢測(cè)小鼠血清中的人IgG抗IL-12抗體可以用固相EIA從小鼠血清中篩選人IL-12的特異性人IgG抗體.簡(jiǎn)言之，用PBS中的2pg/mLIL-12包被平板過夜.在含有0.02%(v/v)Tween20的0.15M鹽水中洗滌后，用PBS中的1X(w/v)BSA，以200pL/孔在RT下封閉各個(gè)孔1小時(shí)，立即使用平板或在-2ox:下冷凍，以便將來使用.在IL-12包被的板上以50pL/孔在RT下觶育小鼠血清稀釋液l小時(shí).洗滌平板，然后用在IXBSA-PBS中1:30000特異性稀釋的50pL/孔HRP標(biāo)記的山羊抗人IgGFc在RT下探測(cè)l小時(shí).再次洗滌平板，在RT下加入100pL/孔檸檬酸鹽-砩酸鹽底物溶液(0.1M杼檬酸和0.2M硤酸鈉，0.HA和1mg/mL0PD)15分鐘.然后加入25pL/孔終止溶液(4N疏酸)，在490nm下通過自動(dòng)平板分光光度計(jì)讀出OD值.在雜交瘤上清液中檢測(cè)完全的人免疫球蛋白可以使用適當(dāng)?shù)腅IA檢測(cè)分泌完全人免疫球蛋白的生長(zhǎng)陽性雜交瘤.簡(jiǎn)言之，可以用溶于碳酸鈉緩沖液的10Mg/mL山羊抗人IgGFc在4C下包被96孔板(VWR,610744)過夜。洗滌板，用1%BSA-PBS在37t:下封閉1小時(shí)，立即使用或冷凍于-20TC,37TC下在板上孵育未稀釋雜交瘤的上清液。洗滌平板，然后用在IXBSA-PBS中1:10000稀釋的HRP標(biāo)記的山羊抗人IgGk在371C下探測(cè)1小時(shí).然后按上述方法用底物溶液孵育板.測(cè)定完全的人抗IL-12活性可以用適當(dāng)?shù)腞IA或其它測(cè)定方法同時(shí)測(cè)定上述雜交瘤的活性。例如，按上述方法在山羊抗人IgGFc板上觶育上清液，洗滌，然后用放射性標(biāo)記的IL-12在室溫下探測(cè)1小時(shí)，每孔具有適當(dāng)?shù)挠?jì)數(shù).用PBS洗滌孔兩次，用適當(dāng)?shù)挠?jì)數(shù)器對(duì)結(jié)合的放射性標(biāo)記的IL-12進(jìn)行定量。可以在細(xì)胞培養(yǎng)物中擴(kuò)增人IgGlk抗IL-12分泌性雜交瘤，通過有限稀釋進(jìn)行系列亞克隆?？梢詳U(kuò)增得到的克隆細(xì)胞群，并且在冷凍培養(yǎng)基FBS，DMSO)中冷凍保存并儲(chǔ)存于液氮中.同種型分析使用EIA，采用類似于在小鼠免疫血清中篩選特異性滴度的形式完成抗體的同種型測(cè)定?？梢园瓷鲜龇椒▽L-12包被在96孔板上，并且可以在室溫下于平板上觶育2ng/mL的純化抗體1小時(shí)，洗滌平板，然后用HRP標(biāo)記的山羊抗人IgG,或在IXBSA-PBS中1:4000稀釋的肌P標(biāo)記的山羊抗人IgG3在室溫下探測(cè)1小時(shí)。然后按上述方法再次洗滌板，并且用底物溶液孵育板.人類抗人IL-12抗體與人IL-12的結(jié)合動(dòng)力學(xué)例如，用IL-12捕獲EIA和BIAcore技術(shù)對(duì)抗體的結(jié)合特征進(jìn)行適當(dāng)測(cè)定?？梢栽诎瓷鲜龇椒ㄟM(jìn)行的測(cè)定中評(píng)估純化的人IL-12抗^的分級(jí)濃度與2ug/mLIL-12包被的EIA板的結(jié)合.然后可以將0D表示為半對(duì)數(shù)圖，該圖表示相對(duì)結(jié)合效率.可以通過例如如下描述或任意其它已知的適當(dāng)方法獲得定重結(jié)合常數(shù)。將BIAcoreCM-5(羧甲基)芯片置于BIAcore2000單位中，HBS緩沖液(O.01MHEPES，0.15MNaCl,3mMEDTA，0.005Xv/vP20表面活.性劑，pH7.4)以5ML/分鐘流過芯片的流動(dòng)室，直到獲得穩(wěn)定的基線.將200mL水中的15mgEDC(N-乙基-N'-(3-二甲基-氨基丙基)-鹽酸碳二亞胺)的溶液(100pL)加入200|iL水中的2.3mgNHS(N-幾基琥珀酰亞胺)的lOOpL溶液.將40mL得到的溶液注射到芯片上，將6pL人IL-12溶液(15iL/mL,溶于10mM醋酸鈉，pH4.8)注射到芯片上，導(dǎo)致約500RU的增加.將緩沖液改變?yōu)門BS/Ca/Mg/BSA流動(dòng)緩沖液(20mMTris,0.15M氯化鈉，2mM氯化鈣，2mM醋酸鎂，0.5%TritonX-IOO，25Mg/mLBSA，pH7.4)，流過芯片過夜使其平衡，并且水解未反應(yīng)的琥珀酰亞胺醋或?qū)ζ浞舛?，將抗體以33.33、16.67、8.33和4.17nM的濃度溶解于流動(dòng)緩沖液，將流速調(diào)節(jié)為30jiL/分，儀器溫度調(diào)節(jié)為251C.將兩個(gè)流動(dòng)細(xì)胞用于動(dòng)力學(xué)研究，在其中一個(gè)細(xì)胞上固定IL-12(樣品)，在笫二個(gè)細(xì)胞為未衍生化的流動(dòng)細(xì)胞(空白)。將120pL的每一種濃度抗體的注射在30mL/分的流動(dòng)細(xì)胞上(締合相)，然后連續(xù)流過緩沖液360秒(解離相)，通過兩次連續(xù)注射各30pL2M異破氛酸胍而重建芯片的表面(解離腫瘤壞死因子ot/抗體復(fù)合物)。用本領(lǐng)域v^知的BIAevaluation3.0或CLAMP2.0分析數(shù)據(jù).對(duì)于每一種抗體，從樣品的感應(yīng)困(sensogram)中減去空白的感應(yīng)田，得到每種抗體的濃度。對(duì)解離(kdsec')和締合(k,，mo廣sec—》以及計(jì)算得到的(kd/k,)解離常數(shù)(L，mol)進(jìn)行總體擬合.當(dāng)抗體親和性足夠高，使得捕獲的抗體的RUs〉100時(shí)，進(jìn)行抗體的額外稀釋.結(jié)果和討論抗人IL-12單克隆抗體的產(chǎn)生進(jìn)行一些融合，將每種融合物種植于15個(gè)平板(1440孔/融合物)，產(chǎn)生數(shù)十種人IL-12的特異性抗體.其中的一些由人和小鼠Ig鏈的組合組成，剩下的雜交瘤分泌完全由人重鏈和輕鏈組成的抗IL-12抗體.所有的人雜交瘤預(yù)計(jì)都是IgGlK.人類抗人IL-12抗體與人IL-12的結(jié)合動(dòng)力學(xué)ELISA分析證明來源于大多數(shù)或所有這些雜交痛的純化抗體以濃度依賴性方式結(jié)合IL-12.困1-2表示這些抗體的相對(duì)結(jié)合效力的結(jié)果.在此情況下，測(cè)量每種抗體與其相關(guān)抗原(表位)的親和力.應(yīng)該注意，IL-12與EU板的直接結(jié)合可以導(dǎo)致蛋白的變性，表觀結(jié)合親和性不能反應(yīng)與未變性蛋白的結(jié)合，在一定范圍的濃度中得到50X結(jié)合.通過人抗體BIAcore分析獲得定量結(jié)合常數(shù)，發(fā)現(xiàn)一些人單克隆抗體的親和性非常高，Kn為lxl0'至7xl0—12.結(jié)論使用來自于雜交小鼠的脾細(xì)胞進(jìn)行一些融合，該雜交小鼠含有人可變區(qū)和恒定區(qū)轉(zhuǎn)基因，并且用人IL-12免疫，產(chǎn)生了一組完全的人IL-12IgG單克隆抗體，這些抗體為IgGlK同種型。進(jìn)一步鑒定完全的人IL-12抗體。產(chǎn)生的一些抗體的親和常數(shù)為lxlO'至9xl012.這些完全的人單克隆抗體的預(yù)料不到的高親和性使它們適用于IL-12依賴性疾病、病理或相關(guān)狀況的治療應(yīng)用.實(shí)施例3:C340是一種中和性人多克隆抗體發(fā)現(xiàn)CD340在各種IL-12依賴性活性測(cè)定中中和IL-12的生物活性.由于IL-12增加由NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的IFNy，檢驗(yàn)了C340抗體對(duì)IFNyrnRNA的上調(diào)和C340抗體對(duì)IFNy產(chǎn)量的影響(Trinchieri,G.,CurrentOpinioninImmunology,9:17-23(1997),Morris,S.C.，etal.,JournalofImmunology,152:1047-1056(1994)),在這些研究中也測(cè)定了C340中和IL-12驅(qū)動(dòng)的淋巴細(xì)胞激活的殺傷(LAK)細(xì)胞活性的誘導(dǎo)的能力(Kutza,J.andMurasko，D.M.，MechanismsofAgeingandDevelopment,90:209-222(1996)，Stem,A.S.,etal.，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheU.S.A.，87:6808-6812(1990)).最后，檢驗(yàn)了CD340對(duì)T和服細(xì)胞上的IL-12介導(dǎo)的CD95細(xì)胞表面表達(dá)的上調(diào)的作用(Medvedev,A.E.,etal.，Cytokine,9:394404(1997)),抑制IFNymRNA轉(zhuǎn)錄為了測(cè)定C340是否在人PBL中抑制IL-12誘導(dǎo)的IFNy基因轉(zhuǎn)錄，進(jìn)行了反轉(zhuǎn)錄PCR測(cè)定，用P肌動(dòng)蛋白(mRNA完整性和含量的對(duì)照)和IFNY的特異性引物擴(kuò)增從被刺激的人PBL獲得的cDNA.困3表示C340在IL-12/IL-2(2小時(shí))激活的PBMC中下調(diào)IFNymRNA,流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量的細(xì)胞內(nèi)IFNy的抑制反應(yīng)于各種信號(hào)和作為激活的測(cè)重，T細(xì)胞和NK細(xì)胞可以被誘導(dǎo)而分泌細(xì)胞因子.更具體地，用IL-2和IL-12處理的PBL在刺激后4-8小時(shí)內(nèi)起始IFNy的大量合成.可以通過流式細(xì)胞#測(cè)Brefeldin-A處理的PBL細(xì)胞質(zhì)中的該產(chǎn)量.困4證明了當(dāng)C340IL-12與IL-12聯(lián)合加入5小時(shí)時(shí)，該培養(yǎng)物中IFNy產(chǎn)量減少60、il-12諸導(dǎo)的ifny分泌的抑制圖5明確表示兩個(gè)不同批號(hào)的C340以劑量依賴性方式抑制外周血淋巴細(xì)胞分泌IFNy。將400pgIL-12與各種量的C340預(yù)混合，然后加入IL-2刺激的PBL培養(yǎng)物。18-24小時(shí)后通過EU測(cè)量IFNy時(shí),檢測(cè)到用少至1pg/mLC340抗體顯著減少了IFNy的量。IL-12謙導(dǎo)的LAK細(xì)胞的細(xì)胞毒性的抑制Raji細(xì)胞，即一種IL-12敏感性Burkitt淋巴瘤來源的細(xì)胞系，是抗服細(xì)胞的LA細(xì)胞敏感性細(xì)胞系。將三份Raji細(xì)胞與存在或不存在人單克隆抗體C340(5000ng/mL或50ng/mL)M下用400pg/mLIL-12和10U/mLIL-2激活的LAK細(xì)胞一起培養(yǎng)4小時(shí)。圖6表示從三個(gè)正常健康供體得到的結(jié)果。效應(yīng)細(xì)胞的IL-12+IL-2激活導(dǎo)致相對(duì)于用IL-2單獨(dú)激活的細(xì)胞的細(xì)胞毒活性增加.C340抗體抑制該IL-12依賴性作用。抑制的強(qiáng)度與抗體濃度相關(guān)，所檢驗(yàn)的最高濃度將細(xì)胞毒性減少至本底水平.抑制CD95上調(diào)報(bào)道描述了高度純化的CD56+PBL表面的IL-12誘導(dǎo)的CD95上調(diào).如圖7A和7B所示，分布性流式細(xì)胞術(shù)分析發(fā)現(xiàn)，用IL-12加IL-2處理72小時(shí)后，CD3+T細(xì)胞和CD56+服細(xì)胞上的CD95表達(dá)顯著上調(diào)。伴隨的抗IL-12處理抑制了CD3+和CD56+細(xì)胞群的CD95表達(dá)，CD3+細(xì)胞:fe抑制了(圖7A)。CD56+細(xì)胞被抑制了(困7B)，這是由MFI指數(shù)(比未刺激的對(duì)照高出的百分比)減少所證明的.實(shí)施例4:基因克隆和鑒定克隆和純化了含C340重鏈基因或C340輕鏈的基因組DNA片段.用Sau3A限制酶部分消化從C340雜交瘤細(xì)胞系的基因組DNA，通過10-40%蔗糖梯度的離心分離進(jìn)行大小選擇。將大小范圍為15-23kb的DNA片段克隆至噬菌體栽體EMBL3中，并且包裝至噬菌體顆粒中.一些包裝反應(yīng)產(chǎn)生了l百萬噬菌體克隆的文庫(kù).使用含人IgGl重鏈恒定區(qū)序列或人K輕鏈恒定區(qū)序列的S2P標(biāo)記的基因組卵A片段作為探針，通過噬斑雜交從文庫(kù)中篩選約600,000個(gè)克隆.檢測(cè)了13個(gè)重鏈和9個(gè)輕鏈克隆.其中，通過兩輪或多輪篩選純化3個(gè)重鏈克隆和4個(gè)輕鏈克隆.通過噬菌體DNA的PCR分析證明一個(gè)重鏈克隆和兩個(gè)輕鏈克隆含有編碼序列的5'和3'端，重鏈(HC)克隆H4的DM插入片段大小為16kb,并且包含3.6kb的5'側(cè)翼序列和至少2kb的3'側(cè)翼序列。輕鏈(LC)克隆LC1的DNA插入片段大小為15kb，并且包含4.4kb的5'側(cè)翼序列和6.0kb的3'側(cè)翼序列。從噬菌體栽體去除作為Sail片段的完整插入片段，并且克隆至質(zhì)粒表達(dá)栽體p1351的Xhol和Sall位點(diǎn)之間，所述栽體提供了gpt可選擇標(biāo)記基因.由于在重鏈可變區(qū)編碼序列中有一個(gè)內(nèi)部Sail位點(diǎn)，必須將兩個(gè)Sail片段從噬菌體H4轉(zhuǎn)移至p1351表達(dá)栽體.得到的重鏈和輕M^達(dá)質(zhì)粒分別稱作pl560和p1558。分別用限制酶分析和PCR測(cè)定重鏈和輕鏈基因在這兩個(gè)質(zhì)粒中相對(duì)于pi351栽體序列中的定向。在兩種情況下，其定向4吏得Ab基因的5，末端片段臨近于gpt的3'末端。對(duì)克隆基因的編碼區(qū)的兩條鏈進(jìn)行測(cè)序。質(zhì)粒pl560和p1558的序列分別見圖11A-11K和圖13A-13J.實(shí)施例5:制備重組細(xì)胞系通過PvuI限制酶消化將重鏈質(zhì)粒pl560顯性化，用Sail限制酶將輕鏈質(zhì)粒pl558線性化，按照描述的方法，通過電穿孔用預(yù)混合的線性化質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染p3X63Ag8.653(653)和SP2/0-Ag14(SP2/0)細(xì)胞，培養(yǎng)細(xì)胞，用審紛酸選擇被轉(zhuǎn)染細(xì)胞(Knight，etal..MolecularImmunology30:1443(1993))。約兩周后，測(cè)定來自于抗審酚酸集落的細(xì)胞上清液中的人IgG(即重組C340(rC340)),為此，在用特異于人IgG的Fc部分的山羊抗體包被的96孔ELISA板上醉育細(xì)胞上清液。按照描述的方法用堿性褲酸醃偶聯(lián)的山羊抗人IgG(重鏈+輕鏈)抗體和堿性磷酸酶底物檢測(cè)與包被的板結(jié)合的人IgG(Knight，etal.，MolecularImmunology30:1443(1993)),將克隆產(chǎn)量高的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至24孔培養(yǎng)皿的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基中并鋪展(IMDM,5乂FBS，2mM谷氨酰胺，霉酚酸選擇培養(yǎng)物).用純化的C340mAb作為標(biāo)準(zhǔn)，通過ELISA仔細(xì)對(duì)產(chǎn)生的抗體量(即分泌至消耗的培養(yǎng)物的培養(yǎng)基中)進(jìn)行定量.然后將選擇的克隆擴(kuò)展至T75燒瓶中，通過ELISA對(duì)這些克隆產(chǎn)生的IgG進(jìn)行定量。根據(jù)這些值，對(duì)6個(gè)獨(dú)立的653轉(zhuǎn)染物和3個(gè)獨(dú)立的SP2/0轉(zhuǎn)染物進(jìn)行亞克隆(通過在96孔板中平均種植1個(gè)細(xì)胞/孔)，通過測(cè)定(ELISA)各個(gè)亞克隆集落的上清液而確定由亞克隆產(chǎn)生的抗體重.選擇3個(gè)亞克l^，653轉(zhuǎn)染物19-20(C379B)和SP2/0轉(zhuǎn)染物84-81(C381A)和22-56(C389A)進(jìn)行進(jìn)一步分析.測(cè)定rC340抗原結(jié)合按上述方法對(duì)所選擇的細(xì)胞系進(jìn)行亞克隆前，用三種親代細(xì)胞系(653轉(zhuǎn)染物克隆2和克隆18和SP2/0轉(zhuǎn)染物克隆1)的上清液檢驗(yàn)rC340的抗原結(jié)合特征。首先通過ELISA測(cè)定三種細(xì)胞上清液樣品中的rC340濃度.然后在2pg/ml人IL-12包被的96孔板中孵育滴定重的上清液樣品或純化的C340陽性對(duì)照.然后用械性轔酸酶偶聯(lián)的山羊抗人IgG(重鏈+輕鏈)抗體和適當(dāng)?shù)膲A性磷酸酶底物檢測(cè)結(jié)合的mAb,如圖8所示，rC340以不同于原始的C340mAb的方式特異性結(jié)合于人IL-12.鑒定所選摔的細(xì)胞系通過以2x105細(xì)胞/ml的起始細(xì)胞密度種植T75燒瓶中的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基或無血清的SFM-5培養(yǎng)基進(jìn)行生長(zhǎng)曲線分析，然后每日監(jiān)測(cè)細(xì)胞數(shù)目和rC340濃度，直到培養(yǎng)物消耗.標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基中的培養(yǎng)結(jié)果見困9A-9C。C379B，C381A和C389A的最大C340mAb產(chǎn)生水平分別為135ng/ml,150ig/inl,和110pg/ml。嘗試使C379B細(xì)胞適應(yīng)SFM-5培養(yǎng)基沒有成功.C381A細(xì)胞在SFM-5培養(yǎng)基中與在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基中產(chǎn)生相同重的rC340，而C389A在SFM-5培養(yǎng)基中產(chǎn)生的rC340只有在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基中的產(chǎn)量的一半.在不同時(shí)間段中，在具有標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基或無霉盼酸選擇的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基的24孔培^jDL中培養(yǎng)細(xì)胞，以便評(píng)估三個(gè)克隆的rC340mAb產(chǎn)量隨時(shí)間的穩(wěn)定性.觀察到C379B和C381A在存在或不存在選擇的條件下分別在30天(檢測(cè)的最大時(shí)間)和75天的時(shí)間段穩(wěn)定產(chǎn)生rC340.C389A細(xì)胞系不穩(wěn)定，培養(yǎng)"天后產(chǎn)生的抗體僅僅是研究開始時(shí)產(chǎn)量的20、應(yīng)該明確的是，本發(fā)明的實(shí)施可以不限于前面說明書和實(shí)施例的具體描述。根據(jù)前面的教導(dǎo)，可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種修飾和變化，它們都屬于所附權(quán)利要求的范圍.序列表<110>D.希利；D.克奈特B.斯卡爾倫；J.吉勒斯-科馬爾；D.佩里特<120>IL-12抗體、組合物、方法和用途<130>CEN248<160>15<170〉PatentlnVer2.0<210〉1<211〉5<212〉PRT<213>人(Homosapiens)<400>1ThrTyrTrpLeuGly15<210〉2<211〉17<212〉PRT<213>人(Homosapiens)<400>2lieMetSerProValAspSerAsplieArgTyrSerProSerPheGin151015Gly<210>3<211>10<212〉PRT<213>人(Homosapiens)<400>3ArgArgProGlyGinGlyTyrPheAspPhe1510<210>4<211>11<212〉PRT<213〉人(Ho邁osapiens)<400>4ArgAlaSerGinGlylieSerSerTrpLeuAla1510<210〉5<211>7<212>PRT<213〉人(Homosapiens)<400〉5AlaAlaSerSerLeuGinSer15〈210〉6<211>9<212〉PRT<213>人(Ho邁osapiens)<400>6GinGinTyrAsnlieTyrProTyrThr15<210>7<211〉119<212>PRT<213〉人(Ho邁osapiens)<400>7GluValGinLeuValGinSerGlyAlaGluValLysLysProGlyGlu151015SerLeuLyslieSerCysLysGlySerGlyTyrSerPheThrThrTyr202530TrpLeuGlyTrpValArgGinMetProGlyLysGlyLeuAspTrplie354045GlylieMetSerProValAspSerAsplieArgTyrSerProSerPhe505560GinGlyGinValThrMetSerValAspLysSerlieThrThrAlaTyr65707580LeuGinTrpAsnSerLeuLysAlaSerAspThrAlaMetTyrTyrCys859095AlaArgArgArgProGlyGinGlyTyrPheAspPheTrpGlyGinGly100105110ThrLeuValThrValSerSer115<210〉8<211〉108<212>PRT<213〉人(Homosapiens)<400>8AsplieGinMetThrGinSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrlieThrCysArgAlaSerGinGlylieSerSerTrp202530LeuAlaTrpTyrGinGinLysProGluLysAlaProLysSerLeulie354045TyrAlaAlaSerSerLeuGinSerGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrlieSerSerLeuGinPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysGinGinTyrAsnlieTyrProTyr859095ThrPheGlyGinGlyThrLysLeuGlulieLysArg100105<210〉9〈211〉503<212〉PRT<213>人(Homosapiens)<400>9ArgAsnLeuProValAlaThrProAspProGlyMetPheProCysLeu151015HisHisSerGinAsnLeuLeuArgAlaValSerAsnMetLeuGinLys202530AlaArgGinThrLeuGluPheTyrProCysThrSerGluGlulieAsp354045HisGluAsplieThrLysAspLysThrSerThrValGluAlaCysLeu505560ProLeuGluLeuThrLysAsnGluSerCysLeuAsnSerArgGluThr65707580SerPhelieThrAsnGlySerCysLeuAlaSerArgLysThrSerPhe859095MetMetAlaLeuCysLeuSerSerlieTyrGluAspLeuLysMetTyr100105110GinValGluPheLysThrMetAsnAlaLysLeuLeuMetAspProLys115120125ArgGinliePheLeuAspGinAsnMetLeuAlaVallieAspGluLeu130135140MetGinAlaLeuAsnPheAsnSerGluThrValProGinLysSerSer145150155160LeuGluGluProAspPheTyrLysThrLyslieLysLeuCyslieLeu165170175LeuHisAlaPheArglieArgAlaValThrlieAspArgValMetSer180185190TyrLeuAsnAlaSerlieTrpGluLeuLysLysAspValTyrValVal195200205GluLeuAspTrpTyrProAspAlaProGlyGluMetValValLeuThr210215220CysAspThrProGluGluAspGlylieThrTrpThrLeuAspGinSer225230235240SerGluValLeuGlySerGlyLysThrLeuThrlieGinValLysGlu245250255PheGlyAspAlaGlyGinTyrThrCysHisLysGlyGlyGluValLeu260265270SerHisSerLeuLeuLeuLeuHisLysLysGluAspGlylieTrpSer275280285ThrAsplieLeuLysAspGinLysGluProLysAsnLysThrPheLeu290295300ArgCysGluAlaLysAsnTyrSerGlyArgPheThrCysTrpTrpLeu305310315320<table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table>TrpAlaSerValProCysSer500<210>10<211〉15<212〉陽<213〉人(Homosapiens)<400>10agatatactatgcac15〈210〉11〈211〉51〈212〉隠<213〉人(Ho迅osapiens)<400〉11gttatatcatttgatggaagcaataaatactacgtagactccgtgaagggc51<210〉12<211〉30〈212〉隱<213〉人(Homosapiens)〈400〉12gaggcccggggatcgtatgcttttgatatc30<210〉13<211〉33<212〉隨<213〉人(Homosapiens)<400>13ctctcctgcagggccagtcagagtgttagcagctacttagcc33<210〉14<211〉21<212〉隱<213〉人(Homosapiens)<400〉14gatgcatccaacagggcc18<210〉15<211〉27<212>DNA<213>人(Homosapiens)〈400〉15cagcagcgtagcaactggcct2權(quán)利要求1.一種分離的抗-IL-12抗體，其包含含有SEQIDNO7的重鏈氨基酸序列和SEQIDNO8的輕鏈氨基酸序列的可變區(qū)。2.根據(jù)權(quán)利要求1的抗-IL-12抗體，其中所迷抗體與IL-12以選自至少10'M、至少10lflM、至少IO"M或至少10—"M中的至少一種的親和性結(jié)合。3.根據(jù)權(quán)利要求1的抗-IL-12抗體，其中所迷抗體基本中和至少一種IL-12蛋白的至少一種活性.4.一種編碼至少一種分離的哺乳動(dòng)物抗IL-12抗體的分離核酸分子，所述抗體包含SEQIDNO:7的重鏈氨基酸序列和SEQIDNO:8的輕鏈氨基酸序列。5.—種包含根據(jù)權(quán)利要求4的分離核酸分子的分離核酸栽體.6.—種包含根據(jù)權(quán)利要求5的分離栽體的分離原核或真核宿主細(xì)胞，7.根據(jù)權(quán)利要求6的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞為至少一種選自下組的細(xì)胞C0S-1、C0S-7、HEK293、BHK21、CH0、BSC-1、HepG2、653、SP2/0、293、HeLa、骨髄瘤或淋巴瘤細(xì)胞，或其任意衍生、永生化或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。8.—種產(chǎn)生抗-IL-12抗體的方法，所迷方法包括在體外條件下翻譯權(quán)利要求4的核酸分子，使得IL-12抗體以可檢測(cè)或可回收的量表達(dá).9.一種包含分離的哺乳動(dòng)物抗-IL-12抗體和至少一種藥學(xué)可接受栽體或稀釋劑的組合物，所述抗體包含SEQIDNO:7的重鏈氨基酸序列和SEQIDNO:8的輕鏈氨基酸序列。10.根據(jù)權(quán)利要求9的組合物，其進(jìn)一步包含至少一種包含有效量的選自下組的至少一種化合物或蛋白的組合物至少一種可檢測(cè)標(biāo)記或報(bào)道分子、TNF拮抗劑、抗風(fēng)濕藥物、肌肉松他劑、麻醉藥、非甾體類抗炎藥(NSAID)、鎮(zhèn)痛藥、麻醉劑、鎮(zhèn)靜劑、局部麻醉刑、神經(jīng)肌肉阻滯刑、抗微生物劑、抗牛皮癬藥物、皮質(zhì)類固醇、促蛋白合成類固醇、促紅細(xì)胞生成素、疫苗、免疫球蛋白、免疫抑制刑、生長(zhǎng)激素、激素替代藥物、放射性藥物、抗抑郁刑、抗精神病藥物、刺激劑、抗哞喘藥、P激動(dòng)劑、吸入性類固醇、腎上腺素或類似物、細(xì)胞因子和細(xì)胞因子拮抗劑.11.一種特異性結(jié)合分離的哺乳動(dòng)物抗-IL-12抗體的抗獨(dú)特型抗體或片段，所迷抗-IL-12抗體包含SEQIDN0:7的重鏈氨基酸序列和SEQIDNO:8的輕鏈氨基酸序列.12.分離的哺乳動(dòng)物抗-IL-12抗體在制備用于治療和/或預(yù)防或診斷IL-12相關(guān)狀況的藥物中的應(yīng)用，其中所迷抗體具包含SEQIDNO:7的重鏈氛基酸序列和SEQIDNO:8的輕鏈氨基酸序列，13.根據(jù)權(quán)利要求12的應(yīng)用，其中使用包含0.001-50mg/kg細(xì)胞、組織、器官或動(dòng)物的所述分離的哺乳動(dòng)物抗-IL-12抗體的有效量.14.根據(jù)權(quán)利要求12的應(yīng)用，其中所述藥物能夠通過至少一種選自下列的途徑接觸或給藥腸胃外、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)、囊內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、體腔內(nèi)、小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、結(jié)腸內(nèi)、子宮頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、骨內(nèi)、盆腔內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、快速注射、陰道、直腸、類、舌下、養(yǎng)內(nèi)和經(jīng)皮給藥。15.根據(jù)權(quán)利要求12的應(yīng)用，其中所述藥物是與至少一種包含有效量的選自下組的至少一種化合物或蛋白的組合物聯(lián)合使用的藥物至少一種可檢測(cè)標(biāo)記或報(bào)道分子、TNF拮抗劑、抗風(fēng)濕藥物、肌肉松弛刑、麻醉藥、非甾體類抗炎藥(NSAID)、鎮(zhèn)痛藥、麻醉刑、鎮(zhèn)靜劑、局部麻醉劑、神經(jīng)肌肉阻滯劑、抗微生物劑、抗牛皮癬藥物、皮質(zhì)類固醇、促蛋白合成類固醇、促紅細(xì)胞生成素、疫苗、免疫球蛋白、免疫抑制刑、生長(zhǎng)激素、激素替代藥物、放射性藥物、抗抑郁刑、抗精神病藥物、刺激刑、抗嗜喘藥、P激動(dòng)劑、吸入性類固醇、腎上腺素或類似物、細(xì)胞因子和細(xì)胞因子拮抗劑.16.根據(jù)權(quán)利要求12的應(yīng)用，其中所述IL-12相關(guān)狀況是牛皮癬.17.根據(jù)權(quán)利要求12的應(yīng)用，其中所述IL-12相關(guān)狀況是多發(fā)性硬化。18.根據(jù)權(quán)利要求12的應(yīng)用，其中所述IL-12相關(guān)狀況是局限性回腸炎，19.一種醫(yī)學(xué)設(shè)備，其包含分離的哺乳動(dòng)物抗-IL-12抗體，所述抗體包含SEQIDNO:7的重鏈氨基酸序列和SEQIDNO:8的輕鏈氛基酸序列，其中所述設(shè)備適于所述抗-IL-12抗體的接觸或給藥，該接觸或錄f藥是通過選自下組的至少一種方式進(jìn)行的腸胃外、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)、囊內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、體腔內(nèi)、小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、結(jié)腸內(nèi)、子宮頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、骨內(nèi)、盆腔內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、快速注射、陰道、直腸、類、舌下、鼻內(nèi)和經(jīng)皮.20.—種產(chǎn)生分離的哺乳動(dòng)物抗-IL-12抗體的方法，所迷抗體包含SEQIDNO:7的重鏈氨基酸序列和SEQIDNO:8的輕鏈氨基酸序列，該方法包括提供能夠表達(dá)可回收量的所述抗體的宿主細(xì)胞或轉(zhuǎn)基因非人類動(dòng)物或轉(zhuǎn)基因植物或植物細(xì)胞.21.根據(jù)權(quán)利要求20的方法產(chǎn)生的抗IL-12抗體.22.分離的哺乳動(dòng)物抗-IL-12抗體，其包含(i)SEQIDN0S:1、2和3的所有重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)氨基酸序列；和(ii)SEQIDN0S:4、5和6的所有輕鏈CDR氨基酸序列。23.根據(jù)權(quán)利要求22的抗-IL-12抗體，其中所述抗體與IL-12以選自至少10'M、至少10M°M、至少IO"M或至少l(T"M中的至少一種的親和性結(jié)合。24.根據(jù)權(quán)利要求23的抗-IL-12抗體，其中所述抗體基本中和至少一種IL-12蛋白的至少一種活性。25.—種編碼分離的哺乳動(dòng)物抗-IL-12抗體的分離核酸分子，所述抗體具有(i)SEQIDN0S:1、2和3的所有重鏈CDR氨基酸序列；和(ii)SEQIDN0S:4、5和6的所有輕鏈CDR氨基酸序列，26.—種包含根據(jù)權(quán)利要求25的分離核酸分子的分離核酸栽體，27.—種包含根據(jù)權(quán)利要求26的分離栽體的原核或真核宿主細(xì)胞.28.根據(jù)權(quán)利要求27的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞為至少一種選自下組的細(xì)胞COS-1、C0S-7、HEK293、BHK21、CH0、BSC-l、HepG2、653、SP2/0、293、HeLa、骨髄瘤或淋巴瘤細(xì)胞，或其任意衍生、永生化或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。29.—種產(chǎn)生抗-IL-12抗體的方法，所述方法包括在體外條件下翻譯權(quán)利要求25的核酸分子，使得抗-IL-12抗體以可檢測(cè)或可回收的量表達(dá).30.—種包含分離的哺乳動(dòng)物抗-IL-12抗體和至少一種藥學(xué)可接受栽體或稀釋劑的組合物，所述抗體具有(i)SEQIDN0S:1、2和3"的所有重鏈CDR氨基酸序列；和(ii)SEQIDN0S:4、5和6的所有輕鏈CDR氨基酸序列。31.根據(jù)權(quán)利要求30的組合物，其進(jìn)一步包含至少一種包含有效量的選自下組的至少一種化合物或蛋白的組合物至少一種可檢測(cè)標(biāo)記或報(bào)道分子、TNF拮抗劑、抗風(fēng)濕藥物、肌肉松他刑、麻醉藥、非甾體類抗炎藥(NSAID)、鎮(zhèn)痛藥、麻醉刑、鎮(zhèn)靜刑、局部麻醉劑、神經(jīng)肌肉阻滯刑、抗微生物劑、抗牛皮癬藥物、皮質(zhì)類固醇、促蛋白合成類固醇、促紅細(xì)胞生成素、疫苗、免疫球蛋白、免疫抑制刑、生長(zhǎng)激素、激素替代藥物、放射性藥物、抗抑郁劑、抗精神病藥物、刺激刑、抗哞喘藥、P激動(dòng)刑、吸入性類固醇、腎上腺素或類似物、細(xì)胞因子和細(xì)胞因子拮抗劑.32.—種特異性結(jié)合分離的哺乳動(dòng)物抗-IL-12抗體的抗獨(dú)特型抗體或片段，所述抗IL-12抗體具有(i)SEQIDN0S:1、2和3的所有重鏈CDR氨基酸序列；和(ii)SEQIDN0S:4、5和6的所有輕鏈CDR氨基酸序列.33.分離的哺乳動(dòng)物抗-IL-12抗體在制備用于治療和/或預(yù)防或診斷IL-12相關(guān)狀況的藥物中的應(yīng)用，所述抗體具有(i)SEQIDN0S:1、2和3的所有重鏈CDR氨基酸序列；和(ii)SEQIDN0S:4、5和6的所有輕鏈CDR氨基酸序列。34.根據(jù)權(quán)利要求33的應(yīng)用，其中使用包含O.001-50mg/kg細(xì)胞、組織、器官或動(dòng)物的所述分離的哺乳動(dòng)物抗-IL-12抗體的有效量。35.根據(jù)權(quán)利要求33的應(yīng)用，其中所述藥物能夠通過至少一種選自下列的途徑接觸或給藥腸胃外、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)、囊內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、體腔內(nèi)、小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、結(jié)腸內(nèi)、子宮頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、骨內(nèi)、盆腔內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、快速注射、陰道、直場(chǎng)、顛、舌下、鼻內(nèi)或經(jīng)皮給藥刑型。36.根據(jù)權(quán)利要求33的應(yīng)用，其中所述藥物是與至少一種包含有效量的選自下組的至少一種化合物或蛋白的組合物聯(lián)合使用的藥物至少一種可檢測(cè)標(biāo)記或報(bào)道分子、TNF拮抗劑、抗風(fēng)濕藥物、肌肉松弛刑、麻醉藥、非甾體類抗炎藥(NSAID)、鎮(zhèn)痛藥、麻醉劑、鎮(zhèn)靜劑、局部麻醉劑、神經(jīng)肌肉阻滯刑、抗微生物劑、抗牛皮癬藥物、皮質(zhì)類固醇、促蛋白合成類固醇、促紅細(xì)胞生成素、疫苗、免疫球蛋白、免疫抑制劑、生長(zhǎng)激素、激素替代藥物、放射性藥物、抗抑郁劑、抗精神病藥物、刺激劑、抗哮喘藥、P激動(dòng)刑、吸入性類固醇、腎上腺素或類似物、細(xì)胞因子和細(xì)胞因子拮抗劑.37.根據(jù)權(quán)利要求33的應(yīng)用，其中所迷抗-IL-12相關(guān)狀況是牛皮褲.38.根據(jù)權(quán)利要求33的應(yīng)用，其中所述IL-12相關(guān)狀況是多發(fā)性硬化。39.根據(jù)權(quán)利要求33的應(yīng)用，其中所述IL-12相關(guān)狀況是局限性回腸炎。40.—種醫(yī)學(xué)設(shè)備，其包含分離的哺乳動(dòng)物抗-IL-12抗體，所述抗體具有(i)SEQIDNOS:1、2和3的所有重鏈CDR氨基酸序列；和(ii)SEQID冊(cè)S:4、5和6的所有輕鏈CDR氨基酸序列，其中所述設(shè)備適于所迷抗-IL-12抗體的接觸或給藥，該接觸或給藥是通過選自下組的至少一種方式進(jìn)行的腸胃外、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)、嚢內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、體腔內(nèi)、小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、結(jié)腸內(nèi)、子宮頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、骨內(nèi)、盆腔內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直煬內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、快速注射、陰道、直腸、類、舌下、鼻內(nèi)和經(jīng)皮.41.一種產(chǎn)生分離的哺乳動(dòng)物抗-IL-12抗體的方法，所述抗體具有(i)SEQIDN0S:1、2和3的所有重鏈CDR氨基酸序列；和(ii)SEQIDN0S:4、5和6的所有輕鏈CDR氨基酸序列，該方法包括提供能夠表達(dá)可回收量的所述抗體的宿主細(xì)胞或轉(zhuǎn)基因非人類動(dòng)物或轉(zhuǎn)基因植物或植物細(xì)胞，42.根據(jù)權(quán)利要求41的方法產(chǎn)生的抗IL-12抗體，全文摘要本發(fā)明涉及至少一種抗IL-12抗體，包括編碼至少一種抗IL-12抗體的分離核酸、IL-12、載體、宿主細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或植物、及其制備方法和用途，包括治療組合物、方法和設(shè)備。文檔編號(hào)C12NGK101550190SQ20081010002公開日2009年10月7日申請(qǐng)日期2001年8月7日優(yōu)先權(quán)日2000年8月7日發(fā)明者B·斯卡爾倫,D·M·克奈特,D·佩里特,D·希利,J·吉勒斯-科馬爾申請(qǐng)人:森托科爾公司