專利名稱：：與水稻抗白背飛虱基因相連鎖的分子標(biāo)記及其開發(fā)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)工程，特別涉及與水稻白背飛虱抗性基因相連鎖的分子標(biāo)記及其獲得方法。
背景技術(shù)：
：水稻白背飛虱(Sogatellaftircifera,Horvdth)是我國和東南亞水稻產(chǎn)區(qū)的主要害蟲之一，80年代以來，隨著我國高產(chǎn)雜交稻技術(shù)的推廣及可能與雜種優(yōu)勢有關(guān)的作物生理因素，白背飛虱已成為水稻主要害蟲。據(jù)中國農(nóng)業(yè)年鑒記載，在稻飛虱重發(fā)年份，受害面積超過我國水稻總面積的50%。1991年，我國發(fā)生的大范圍稻飛虱為害造成近16億公斤稻谷的損失，受害面積達(dá)2,933萬hm2;2005年稻飛虱又大爆發(fā)，加之與稻縱巻葉螟的疊加效應(yīng)，稻飛虱為害達(dá)2.6億畝次以上。因此，對白背飛虱的防治已成為保障糧食生產(chǎn)的重要內(nèi)容。大面積種植的主要水稻品種不帶抗性基因，是白背飛虱爆發(fā)的內(nèi)在原因，加上化學(xué)肥料的大量施用，茂盛生長的感蟲水稻為白背飛虱的快速繁殖提供了充足的食源。長期以來，白背飛虱的防治主要是依靠施用化學(xué)殺蟲劑。然而，農(nóng)藥殺蟲劑的濫用，殺死了稻田中的稻飛虱天敵，反而誘發(fā)白背飛虱的再猖獗。另外，白背飛虱屬大范圍遷飛性害蟲，每年的水稻生長季節(jié)，白背飛虱隨春夏暖濕氣流，由南往北逐代逐區(qū)遷入我國稻區(qū)。白背飛虱發(fā)生初期，若蟲的蟲體小，隱蔽性強(qiáng)，不易被農(nóng)民發(fā)現(xiàn)，防治不及時(shí)使其得以大量繁殖，蟲害便得以流行；蟲害爆發(fā)的水稻成熟灌漿期，稻株長勢旺盛，將殺蟲劑施到稻株基部的操作非常困難，加上成蟲有很好的移動(dòng)性和較強(qiáng)的抗藥性，結(jié)果屢屢造成危害和減產(chǎn)。水稻抗病蟲育種實(shí)踐證明，利用抗白背飛虱基因培育新品種是水稻白背飛虱綜合防治中最為經(jīng)濟(jì)有效的方法。栽種的水稻品種即使只帶有中等水平的抗性基因，也足以將白背飛虱的群體控制在造成危害的水平以下，不會(huì)導(dǎo)致白背飛虱大爆發(fā)、或?qū)嶋H危害及產(chǎn)量損失。另一方面，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，使難以鑒定、易受環(huán)境影響的抗病蟲性狀采用分子輔助育種已成為可能，該技術(shù)不僅可在早代進(jìn)行準(zhǔn)確、穩(wěn)定的選擇，而且可克服分離單株的顯隱性和純雜合問題，從而加速育種進(jìn)程，提高育種效率，但該技術(shù)的基礎(chǔ)是必須擁有優(yōu)良的目標(biāo)基因及與之緊密連鎖的分子標(biāo)記。為實(shí)現(xiàn)上述任務(wù)，挖掘新的抗性基因，發(fā)展緊密連鎖的新標(biāo)記成為水稻抗白背飛虱分子育種的關(guān)鍵。最早對水稻白背飛虱抗性開展分子定位研究的是McCouch，首先應(yīng)用TN1(臺(tái)中本地1號(hào))/IR36近等基因系將^&;jW定位到兩個(gè)RFLP標(biāo)記RG146和RG445之間，但由于該RFLP標(biāo)記是多拷貝標(biāo)記，而難以用作選擇標(biāo)記；此后，『6;/z2和『*/26w也先后被定位，但它們的遺傳距離分別為25.6cM和21.2cM，實(shí)際應(yīng)用仍有很大困難。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種與水稻抗白背飛虱基因相連鎖的分子標(biāo)記及其開發(fā)方法，本發(fā)明所得的分子標(biāo)記與白背飛虱抗性基因緊密連鎖，能用于水稻白背飛虱抗性輔助選擇育種。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種與水稻抗白背飛虱基因相連鎖的分子標(biāo)記，以水稻作為物種，該分子標(biāo)記引物選自下列引物對，其中的核苷酸序列為5'—3'，RM6917正向CTGGTTGTTTTCTGAACTCCGT反向GCATTAACCATAGCTGTCCACTC;AP4741正向AATCATGCTAGGTTATTACTCG反向GTGCAGAGATCATGCTTTTG。作為本發(fā)明的分子標(biāo)記的改進(jìn)RM6917定位于水稻第6染色體上；AP4741也定位于水稻第6染色體上。本發(fā)明還提供了上述分子標(biāo)記的開發(fā)方法，包括以下步驟1)、以粳稻品種春江06作為抗蟲基因供體親本與作為感蟲品種的臺(tái)中本地1號(hào)進(jìn)行雜交，從而獲得作為雜交后代的抗蟲單株；2)、用CTAB(十六烷基三乙基溴化銨，HexadecyltrimethylammoniumBromide)法提取水稻親本幼苗及雜交后代幼苗基因組DNA;3)、采用SSR(簡單重復(fù)序列，simplesequencerepeat)和/或STS(序列標(biāo)簽位點(diǎn)sequence-taggedsite)分子標(biāo)記方法進(jìn)行水稻白背飛虱抗性分子標(biāo)記的篩選；4)、篩選出一個(gè)SSR分子標(biāo)記RM6917和一個(gè)STS分子標(biāo)記AP4741。與水稻抗白背飛虱基因相連鎖的分子標(biāo)記RM6917和AP4741,具體是用下述方法得到的1)、抗蟲基因供體親本來自中國水稻研究所的粳稻品種春江06(CJ06)，與感蟲品種普通秈稻品種臺(tái)中本地l號(hào)(TN1)進(jìn)行雜交，抗、感蟲單株是通過雜交、回交和自交，獲得的抗、感蟲近等基因系用于配組和基因定位。2)、用CTAB法提取水稻親本幼苗及雜交后代幼苗基因組DNA。3)、采用SSR和STS分子標(biāo)記方法進(jìn)行水稻白背飛虱抗性分子標(biāo)記的篩選；4)、篩選出一個(gè)SSR分子標(biāo)記RM6917和一個(gè)STS分子標(biāo)記AP4741,經(jīng)連鎖分析，發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)標(biāo)記與水稻抗白背飛虱基因相連鎖。采用SSR和STS分子標(biāo)記進(jìn)行篩選與水稻抗白背飛虱基因相連鎖的分子標(biāo)記的方法具體是(1)、SSR、STS引物在抗、感親本以及它們的雜交后代間DNA多態(tài)性分析用SSR標(biāo)記技術(shù)篩選，采用根據(jù)Temnykh在2000年發(fā)表的分布于水稻12條染色體上的SSR引物，引物委托上海申能博彩公司合成，在PTC-225PCR儀上進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)體系為20ng/ul水稻基因組DNAlul,10xPCRBuffer2.0ul,25mMMgCl22.0ul，2mMdNTP2.0ul,10uM引物2.0ul,5U/ulTaqDNA聚合酶0.2ul，ddH20U.8ul，總體系20ul。反應(yīng)程序95'C變性5分鐘；94變性1分鐘，55退火1分鐘，72延伸1分鐘，40個(gè)循環(huán)；72補(bǔ)齊10分鐘；產(chǎn)物檢測在含有0.5^ug/ulEB的4.0X的瓊脂糖你叫電泳，紫外燈下觀察并照相記錄結(jié)果。用STS標(biāo)記技術(shù)篩選，首先對基因組已完成測序的日本晴(^://巧？.血&^&"gojp)和93-ll(http:〃www.rise.genomics.org.cn)的序列進(jìn)行序列比對，根據(jù)日本晴和93-11序列比對的結(jié)果設(shè)計(jì)合適的引物用于CJ06和TN1的多態(tài)性篩選，引物委托上海申能博彩公司合成，在PTC-225PCR儀上進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)體系為20ng/ul水稻基因組DNAlul,lOxPCRBuffer2.0ul，25mMMgCl22.0ul,2mMdNTP2.0ul,10uM引物2.0ul，5U/ulTaqDNA聚合酶0.2ul，ddH2011.8ul，總體系20ul。反應(yīng)程序95。C變性5分鐘；94。C變性1分鐘，52'C退火1分鐘，72'C延伸1分鐘，40個(gè)循環(huán)；72°C10分鐘；產(chǎn)物檢測在含有0.5%ug/ulEB的4.0%的瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察并照相記錄結(jié)果。(2)、分子標(biāo)記的連鎖分析CJ06和TN1雙親及其后代的白背飛虱抗性鑒定在田間進(jìn)行，在田間自然誘發(fā)條件下，于分蘗早期分別從遷入蟲數(shù)、蜜蟲害發(fā)生密度和被害程度等方面對雙親及后代分離群體進(jìn)行抗蟲性鑒定；分別提取抗蟲、感蟲單株的總DNA，用與前面同樣的反應(yīng)體系、篩選獲得的多態(tài)性引物及程序進(jìn)行單株的PCR擴(kuò)增，統(tǒng)計(jì)抗、感單株標(biāo)記帶的出現(xiàn)頻率和交換類型并計(jì)算交換值，用MapnakerEXP3.0b計(jì)算標(biāo)記與抗蟲基因之間的遺傳距離。本發(fā)明是用分子生物學(xué)方法以高抗白背飛虱水稻品種CJ06為材料，篩選和尋找新的、而且穩(wěn)定存在與白背飛虱抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記及其方法，用于水稻白背飛虱抗性輔助選擇育種；由于研究所用的材料對白背飛虱表現(xiàn)高抗的特性，其對我國稻區(qū)的白背飛虱具有普遍的抗性。另外，根據(jù)所得分子標(biāo)記也有助于水稻抗白背飛虱新基因的克隆。白背飛虱是危害水稻生產(chǎn)的主要蟲害。本發(fā)明是利用分子標(biāo)記方法得到兩個(gè)新的與白背飛虱抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記。利用這種方法，不僅克服了常規(guī)育種方法所需時(shí)間周期長等缺點(diǎn)，可以有目標(biāo)地將抗蟲基因在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)選擇獲得并有目的地進(jìn)行多個(gè)抗性基因的聚合，從而培育出具有穩(wěn)定抗性的水稻新品種。同時(shí)，也可利用這兩個(gè)白背飛虱抗性基因分子標(biāo)記，深入進(jìn)行抗白背飛虱基因的克隆并對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)和功能分析，這對于進(jìn)一步了解水稻抗白背飛虱的分子遺傳學(xué)機(jī)制有積極的意義。因此，本發(fā)明結(jié)果在水稻育種實(shí)踐及抗蟲理論研究上都有重要意義。其優(yōu)點(diǎn)具體歸納如下(1)本發(fā)明的與白背飛虱抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，是在對水稻高抗白背飛虱的CJ06及其抗性穩(wěn)定的雜交后代單株中獲得的新標(biāo)記，對水稻白背飛虱具有很強(qiáng)的抗性，而且穩(wěn)定存在，可用于水稻白背飛虱抗性品種的鑒定和水稻抗蟲后代的輔助選擇育種。(2)本發(fā)明所用的材料高抗水稻白背飛虱，還有著較強(qiáng)的抗褐飛虱能力，具有普遍的抗蟲特性。因此，根據(jù)所得的分子標(biāo)記有望克隆到新的白背飛虱抗性基因。(3)為克隆水稻白背飛虱抗性基因、基因序列分析以及轉(zhuǎn)抗白背飛虱基因水稻研究奠定了良好基礎(chǔ)。下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一歩詳細(xì)說明。圖1是兩個(gè)水稻品種及其后代基因組DNA的SSR分子標(biāo)記RM6917篩選電泳譜帶圖2是兩個(gè)水稻品種及其后代基因組DNA的STS分子標(biāo)記AP4741篩選電泳譜帶圖3是檢測分子標(biāo)記RM6917與抗蟲性連鎖的分子標(biāo)記的電泳譜帶圖4是檢測分子標(biāo)記AP4741與抗蟲性連鎖的分子標(biāo)記的電泳譜帶圖5是SSR分子標(biāo)記RM6917和STS分子標(biāo)記AP4741與抗蟲基因間的遺傳距離示意對上述圖1~5中符號(hào)分別作如下說明l代表抗蟲親本春江06;2代表感蟲親本TN1;3代表春江06/TNl的F1植株；4,5均代表春江06和TN1雜交后代的抗蟲單株，此抗蟲單株是通過雜交、回交的自交，從抗白背飛虱穩(wěn)定的高世代株系中得到；即4和5是將春江06的抗蟲基因借助標(biāo)記輔助選擇技術(shù)導(dǎo)入TN1而獲得的抗蟲材料；R代表帶抗白背飛虱基因的雜交后代的抗蟲單株；S代表不帶抗白背飛虱基因的雜交后代的感蟲單株。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1、用SSR分子標(biāo)記獲得與水稻抗白背飛虱基因相連鎖的分子標(biāo)記RM6917:具體做法是抗蟲基因供體親本來自中國水稻研究所的粳稻品種春江06(CJ06)，與感蟲品種普通秈稻品種臺(tái)中本地1號(hào)(TN1)進(jìn)行雜交，抗蟲單株是通過雜交、回交和自交，獲得的抗、感蟲近等基因系用于配組和基因定位，從該群體后代中鑒定得到76株隱性個(gè)體用于連鎖關(guān)系分析。以下所有步驟中，沒有詳細(xì)告知的均采用去離子水作為溶液。一、提取DNA1)、配制DNA提取緩沖液按順序依次加1體積的DNA提取溶液(0.35Msorbitol;0.1MTris，pH8.2;0.005MEDTA;)，1體積的核裂解液(0.2MTris,pH7.5;0.05MEDTA;2MNaCl;0.055MCTAB;)和0.4體積的5%sarkosyl;最后加入亞硫酸氫鈉，使之終濃度為0.02M。2)、對上述CJ06、TN1和76株抗蟲隱性個(gè)體的水稻葉片分別進(jìn)行如下處理①、稱取0.1g的水稻葉片用液氮研磨成粉狀，然后加入700nl的上述配制的DNA提取緩沖液，65。C水浴40分鐘。再加700|al的氯仿:異戊醇(24:1的體積比)，并混勻。10,000rpm離心5分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中。②、在上述步驟①離心后所得的上清液中加2/3-1倍體積預(yù)冷的異丙醇，輕輕混勻至DNA沉淀。13,000rpm離心8分鐘，倒出上清液。③、再用70。/。的已醇洗滌上述步驟②所得的DNA沉淀物。、將上述洗滌后的DNA涼干并溶于100piTE緩沖液或純水中。、紫外分光光度法檢測上述步驟④所得的DNA樣品的濃度，0.7%的瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的完整性。二、SSR分析根據(jù)Temnykh在2000年發(fā)表的分布于水稻12條染色體上的SSR引物序列，委托上海申能博彩公司合成引物90對，具體如表l所示表1、合成的90對SSR引物序列<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>1、PCR擴(kuò)增(1)、反應(yīng)體系為水稻基因組DNA20ng/ullul，10xPCRBuffer2.0ul，25mMMgCl22.0ul，2mMdNTP2.0ul，10uM引物2.0ul，5U/ulTaqDNA聚合酶0.2ul，ddH2010.8ul，總體系20ul。(2)、反應(yīng)程序95'C變性5分鐘；94變性1分鐘，55退火1分鐘，72延伸1分鐘，40個(gè)循環(huán)；72補(bǔ)齊10分鐘。2、電泳檢測取上述擴(kuò)增產(chǎn)物20ul，用4.0%的瓊脂糖凝膠(含有0.5^ug/ulEB)電泳，紫外燈下觀察并照相記錄結(jié)果。我們首先利用90對SSR引物對CJ06和TN1進(jìn)行多態(tài)性分析，其中有52對引物在雙親間表現(xiàn)出多態(tài)性。進(jìn)一步用這52對引物對CJ06、TNI和其76株的雜交后代單株進(jìn)行SSR分析，發(fā)現(xiàn)SSR引物RM6917在所有抗蟲的雜交后代單株中均出現(xiàn)抗蟲親本CJ06—樣的帶型。說明SSR引物RM6917與水稻抗白背飛虱特性存在聯(lián)系。RM6917引物序列為左翼5'-CTGGTTGTTTTCTGAACTCCGT，(SEQIDNO:1)，右翼5，-GCATTAACCATAGCTGTCCACTC-3，(SEQIDNO:2)，定位于水稻第6染色體上。三、SSR分子標(biāo)記RM6917的連鎖性鑒定CJ06和TN1雙親及其后代的白背飛虱抗性鑒定在田間進(jìn)行，在田間自然誘發(fā)條件下，于分蘗早期分別從遷入蟲數(shù)、蜜露分泌量、蟲害發(fā)生密度和被害程度等方面對雙親及后代分離群體進(jìn)行抗蟲性鑒定；提取隱性的抗蟲單株的總DNA，用與前面同樣的反應(yīng)體系及程序，用引物RM6917進(jìn)行單株的PCR擴(kuò)增，統(tǒng)計(jì)抗、感單株標(biāo)記帶的出現(xiàn)頻率和交換類型并計(jì)算交換值，用MapnakerEXP3.0b計(jì)算標(biāo)記與抗蟲基因之間的遺傳距離。以RM6917對雜交后代群體76個(gè)單株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增條件同上。結(jié)果顯示，76個(gè)抗蟲單株中有72單株的帶型與抗蟲親本CJ06—樣，有4株的帶型同時(shí)帶有雙親的帶型，沒發(fā)現(xiàn)與感蟲親本TN1帶型一樣的單株。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明SSR分子標(biāo)記RM6917與水稻的白背飛虱抗性緊密連鎖的，但在抗蟲單株中仍有一定的交換，如圖3所示，出現(xiàn)雙親帶型的單株表明發(fā)生了交換。經(jīng)計(jì)算，其重組率為2.6%，SSR分子標(biāo)記與抗蟲基因間的遺傳距離為2.6cM。實(shí)施例2:用STS分子標(biāo)記獲得與水稻抗白背飛虱基因相連鎖的分子標(biāo)記AP4741植物材料同實(shí)施例l，具體做法如下-一、提取DNA1)、首先配制DNA提取緩沖液同實(shí)施例1。2)、對每種水稻葉片分別進(jìn)行如下處理同實(shí)施例1。二、STS分析STS引物設(shè)計(jì)根據(jù)日本晴和93-11序列比對的結(jié)果設(shè)計(jì)合適的引物用于CJ06和TN1的多態(tài)性篩選，委托上海申能博彩公司合成設(shè)計(jì)的STS引物3對，具體如表2所示表2、合成的3對STS引物序列<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>1、PCR擴(kuò)增(1)、反應(yīng)體系為水稻基因組DNA20ng/ullul，10xPCRBuffer2.0ul，25mMMgCl22.0ul，2mMdNTP2.0ul，10uM引物2.0ul，5U/ulTaqDNA聚合酶0.2ul，ddH2010.8ul，總體系20ul。(2)、反應(yīng)程序95'C變性5分鐘；94變性1分鐘，55退火1分鐘，72延伸1分鐘，40個(gè)循環(huán)；72補(bǔ)齊10分鐘。2、電泳檢測取上述擴(kuò)增產(chǎn)物20ul，用4.0%的瓊脂糖凝膠(含有0.5^ug/ulEB)電泳，紫外燈下觀察并照相記錄結(jié)果。我們利用3對STS引物對CJ06和TN1進(jìn)行多態(tài)性分析，其中有1對引物在雙親間表現(xiàn)出多態(tài)性。進(jìn)一步用這對引物對CJ06、TN1和其雜交后代單株進(jìn)行STS分析，發(fā)現(xiàn)STS引物AP4741在所有抗蟲的雜交后代單株中均帶有抗蟲親本CJ06—樣的帶型。說明STS引物AP4741與水稻抗白背飛虱特性存在聯(lián)系。AP4741引物序列為左翼5，-AATCATGCTAGGTTATTACTCG-3，(SEQIDNO:3)，右翼5，-GTGCAGAGATCATGCTTTTG-3，(SEQIDNO:4)，定位于水稻第6染色體上。三、STS分子標(biāo)記AP4741的連鎖性鑒定CJ06和TN1雙親及其后代的白背飛虱抗性鑒定在田間進(jìn)行，在田間自然誘發(fā)條件下，于分蘗早期分別從遷入蟲數(shù)、蜜露分泌量、蟲害發(fā)生密度和被害程度等方面對雙親及后代分離群體進(jìn)行抗蟲性鑒定；提取隱性的抗蟲單株的總DNA，用與前面同樣的反應(yīng)體系及程序，用引物AP4741進(jìn)行單株的PCR擴(kuò)增，統(tǒng)計(jì)抗、感單株標(biāo)記帶的出現(xiàn)頻率和交換類型并計(jì)算交換值，用MapnakerEXP3.0b計(jì)算標(biāo)記與抗蟲基因之間的遺傳距離。以AP4741對雜交后代群體76個(gè)單株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增條件同上。結(jié)果顯示，76個(gè)抗蟲單株中有71個(gè)單株的帶型與抗蟲親本CJ06—樣，有5個(gè)單株的帶型同時(shí)帶有雙親的帶型，沒發(fā)現(xiàn)與感蟲親本TN1帶型一樣的單株。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明STS分子標(biāo)記AP4741與水稻的白背飛虱抗性緊密連鎖的，但在抗蟲單株中仍有一定的交換，如圖3示，出現(xiàn)雙親帶型的單株表明發(fā)生了交換。經(jīng)計(jì)算，其重組率為3.3%,STS分子標(biāo)記與抗蟲基因間的遺傳距離為3.3cM。最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的若干個(gè)具體實(shí)施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實(shí)施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。序列表SEQIDNO:1ctggttgttttctgaactccgt22SEQIDNO:2gcattaaccatagctgtccaetc23SEQIDNO:3aatcatgctaggttattacteg22SEQIDNO:4gtgcagagatcatgcttttg20權(quán)利要求1.一種與水稻抗白背飛虱基因相連鎖的分子標(biāo)記，以水稻作為物種，其特征是所述分子標(biāo)記引物選自下列引物對，其中的核苷酸序列為5′→3′，RM6917正向CTGGTTGTTTTCTGAACTCCGT反向GCATTAACCATAGCTGTCCACTC；AP4741正向AATCATGCTAGGTTATTACTCG反向GTGCAGAGATCATGCTTTTG。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的與水稻抗白背飛虱基因相連鎖的分子標(biāo)記，其特征是所述RM6917定位于水稻第6染色體上；所述AP4741也定位于水稻第6染色體上。3、如權(quán)利要求1或2所述的分子標(biāo)記的開發(fā)方法，其特征是包括以下步驟1)、以粳稻品種春江06作為抗蟲基因供體親本與作為感蟲品種的臺(tái)中本地1號(hào)進(jìn)行雜交，從而獲得作為雜交后代的抗蟲單株；2)、用CTAB法提取水稻親本幼苗及雜交后代幼苗基因組DNA;3)、采用SSR和/或STS分子標(biāo)記方法進(jìn)行水稻白背飛虱抗性分子標(biāo)記的篩選；4)、篩選出一個(gè)SSR分子標(biāo)記RM6917和一個(gè)STS分子標(biāo)記AP4741。全文摘要本發(fā)明公開了一種與水稻抗白背飛虱基因相連鎖的分子標(biāo)記，以水稻作為物種，分子標(biāo)記引物選自下列引物對，其中的核苷酸序列為5′→3′；RM6917正向CTGGTTGTTTTCTGAACTCCGT反向GCATTAACCATAGCTGTCCACTC；AP4741正向AATCATGCTAGGTTATTACTCG反向GTGCAGAGATCATGCTTTTG。本發(fā)明還同時(shí)提供了上述分子標(biāo)記的開發(fā)方法。本發(fā)明的分子標(biāo)記與白背飛虱抗性基因緊密連鎖，能用于水稻白背飛虱抗性輔助選擇育種。文檔編號(hào)C12N15/29GK101294161SQ200810061330公開日2008年10月29日申請日期2008年4月22日優(yōu)先權(quán)日2008年4月22日發(fā)明者堅(jiān)劉,張光恒,曾大力,李家洋,江胡,董國軍,郭龍彪,前錢申請人:中國水稻研究所