專(zhuān)利名稱(chēng)：一種與水稻抗褐飛虱基因連鎖的scar分子標(biāo)記的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種與水稻抗褐飛虱基因連鎖的SCAR標(biāo)記，可用于分子標(biāo)記輔助育 種，屬于水稻抗蟲(chóng)育種和分子生物學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
20世紀(jì)70年代以來(lái)，各國(guó)科學(xué)家都致力于抗褐飛虱新基因的開(kāi)發(fā)和利用。到目前 為止，根據(jù)抗性基因?qū)Σ煌镄秃诛w虱的不同抗性反應(yīng)，至少已經(jīng)鑒定了 15個(gè)抗褐飛虱 基因(Athwal 等，1971 ；khush 等，1985 ；khush 和 Brar 等，1991 ；Ishii 等，1994 ；劉國(guó)慶等， 2001)，其中，Bphl 和 Bph2 抗生物型 1 和 3 ；Bph3、Bph4、Bph8、Bph9 和 BphlO (t)抗生物型 1、2和3 ；Bph5、Bph6、Bph7抗生物型4。對(duì)抗褐飛虱新基因進(jìn)行定位是有效利用抗褐飛虱 基因的基礎(chǔ)?，F(xiàn)在已經(jīng)將Bphl、bph2、Bph9、BphlO定位于水稻的第12號(hào)染色體上，bph(t) 和Bphll被定位于第3染色體上，Bph3、bph4、Bph (t)和bphl2分別被定位于第10、6、9、4 號(hào)染色體上[16]。1994年Ishii等采用RFLP分析方法將BphlO (t)定位在第12號(hào)染色體 距離RG4573. 68cM的位置上；1997年Huang等采用QTL分析法將一未命名的新抗性位點(diǎn)定 位在第12染色體的RG463和SdH-I之間；1998年Alam等以IR64和Azucena為親本，構(gòu)建 了一個(gè)含有131個(gè)單株的雙單倍體，應(yīng)用QTL方法研究IR64的抗性基因，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， IR64的主效抗性基因被定位在第12染色體上，同時(shí)在第1、2、3、4、6、8染色體上也存在抗性 位點(diǎn)；2001年劉國(guó)慶等利用緊穗野生稻與栽培稻品種02428遠(yuǎn)緣雜交后代將一個(gè)抗性基因 定位在第2染色體上，位于SSR標(biāo)記RM140和RM250之間，命名為Bphl3 (t)。在某些水稻品 種中還存在著抗褐飛虱基因的抑制基因，比如在水稻品種TKM6具有抗性基因Bphl和顯性 抑制基因Ibphl，所以TKM6對(duì)褐飛虱表現(xiàn)為感蟲(chóng)反應(yīng)，通過(guò)將TKM6和IR24雜交后兩對(duì)基因 發(fā)生分離，在雜交后代中可以選擇到抗蟲(chóng)單株，培育最終培育出抗褐飛虱新品種IR26。SCAR (sequence characterized amplified region) ；！5 歹曾 示 i 己 il 常是由RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化而來(lái)的。為了提高所找到的某一 RAPD標(biāo)記在應(yīng)用上的穩(wěn)定性，可將 該RAPD標(biāo)記片段從凝膠上回收并進(jìn)行克隆和測(cè)序，根據(jù)其堿基序列設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物 (18-24bp)，也可只對(duì)該RAPD標(biāo)記片段的末端進(jìn)行測(cè)序，在原來(lái)的10個(gè)堿基引物的基礎(chǔ)上 增加相鄰的14個(gè)左右的堿基，成為與原來(lái)RAPD標(biāo)記片段末端相配對(duì)的特異性引物。并對(duì) 基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，便可以擴(kuò)增出與原來(lái)RAPD標(biāo)記片段相同大小的特異性帶譜，這 種經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化的特異DNA分子標(biāo)記就成為SCAR標(biāo)記。SCAR標(biāo)記一般表現(xiàn)為擴(kuò)增帶譜的是否 存在，是一種顯性標(biāo)記。但有時(shí)也表現(xiàn)為長(zhǎng)度多態(tài)性標(biāo)記，為共顯性標(biāo)記[38]。相對(duì)RAPD 標(biāo)記，由于SCAR標(biāo)記所用的引物長(zhǎng)度和并且與模板完全配對(duì)，所以在相當(dāng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臈l件下， 我們可以得到穩(wěn)定性和重復(fù)性很好的結(jié)果，隨著SCAR標(biāo)記研究的不斷發(fā)展和完善，將會(huì)得 到越來(lái)越多的重要農(nóng)藝性狀的SCAR標(biāo)記，在將來(lái)的分子輔助育種中發(fā)揮中重要作用。隨著分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，大部分的農(nóng)作物的轉(zhuǎn)化已經(jīng)成為了可能，定位和分 離與重要農(nóng)藝性狀相關(guān)的基因已成為研究農(nóng)藝性狀發(fā)育過(guò)程的重要方向，也是應(yīng)用基因工 程技術(shù)改良植物遺傳性狀的關(guān)鍵所在。近年來(lái)發(fā)展和應(yīng)用了幾種基因的定位方法。利用分子標(biāo)記輔助選擇育種可以有效實(shí)現(xiàn)育種從表型選擇向基因型選擇的根本性轉(zhuǎn)變。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種與水稻抗褐飛虱基因連鎖的SCAR標(biāo)記，該標(biāo)記能夠用 于水稻抗褐飛虱的輔助選擇育種，為克隆新的抗褐飛虱基因奠定基礎(chǔ)。本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)上述目的一種與水稻抗褐飛虱基因連鎖的SCAR 標(biāo)記，由序列表中的SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2組成的引物對(duì)PCR擴(kuò)增獲得。所述分子 標(biāo)記SCAR694，是用RAPD分子標(biāo)記方法篩選出S2297(13分子標(biāo)記，再將S2297(13轉(zhuǎn)換成穩(wěn)定的 SCAR標(biāo)記，該標(biāo)記采用下列方法得到1、所用材料為藥用野生稻1665 (Oryza officinals Waii Ex Wat t)與栽培稻桂 99遠(yuǎn)緣雜交的B3F4代自交分離群體。2、用CTAB法提取水稻總DNA，分別溶于1 X TE中，并于_20°C保存?zhèn)溆茫?jīng)1. 0%的 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)水稻總DNA的完整性，并根據(jù)EB染色強(qiáng)度計(jì)算其濃度。3、采用RAPD分子標(biāo)記方法，對(duì)與水稻抗褐飛虱相關(guān)的分子標(biāo)記的篩選。4、選出一個(gè)RAPD分子標(biāo)記S2297Q3，經(jīng)過(guò)連鎖性鑒定，發(fā)現(xiàn)該標(biāo)記與水稻抗褐飛虱 基因相連鎖，與抗性基因的遺傳距離為10. ICMo5、將S2297Q3克隆測(cè)序后，根據(jù)所測(cè)序列，設(shè)計(jì)引物SEQ ID NO. 1和SEQ IDN0. 2，以 水稻總DNA為模板，PCR擴(kuò)增得到SCAR標(biāo)記，即SCAR694。采用RAPD分子標(biāo)記方法，進(jìn)行與水稻抗褐飛虱基因相連鎖的分子標(biāo)記，其篩選的 具體做法為1)標(biāo)記篩選本實(shí)驗(yàn)所用的材料為藥用野生稻1665 (Oryza officinals Waii Ex Wat t)與 栽培稻桂99遠(yuǎn)緣雜交的B3F4代自交分離群體選取B3F4代自交分離群體中10株不抗褐 飛虱植株總DNA混合作為不抗池DNA，10株抗褐飛虱植株總DNA混合作為抗池DNA，用每 一條RAPD引物分別對(duì)不抗池DNA和抗池DNA分別進(jìn)行RAPD PCR, PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系建 AL 10 X buffer 2uL ；2. 5mM dNTP2uL ； IOpM primer IuL ；總 DNA (20 50ng/uL) ； IuL Ex Taq(0. 5u/uL)2uL ；最后加 ddH20 補(bǔ)足至 20uL。反應(yīng)程序?yàn)?95°C 預(yù)變性 5min ；94°C 30s， 36°C 30s, 72°C Imin 40個(gè)循環(huán)；然后72°C延伸IOmin (袁勇芳等，2000)。PCR反應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn) 物用1. 5%瓊脂糖凝膠電泳然后經(jīng)EB染色檢測(cè)，并記錄每條擴(kuò)增帶譜在瓊脂糖凝膠上的位 置，篩選具有抗褐飛虱基因多態(tài)性的隨機(jī)引物。2)標(biāo)記S2297Q3的連鎖性鑒定利用篩選得到的RAPD引物S229TO3對(duì)近等基因系群體122個(gè)單株進(jìn)行PCR擴(kuò)增。 結(jié)果顯示，75株抗性單株中有66株存在特異帶，9株不存在特異帶；47株不抗單株中有1株 存在特異帶，46株沒(méi)有擴(kuò)增到特異帶。結(jié)果表明，特異片段S2297。3與水稻抗褐飛虱是緊密 連鎖的，但在抗性單株和敏感單株中均存在一定的交換。結(jié)合近等基因系群體的表型抗性 鑒定結(jié)果，采用MAPMAKER/EXP. Version 3. 0分析，軟件分析表明S2297(13與抗褐飛虱基因間 的遺傳距離為10. IcM03) RAPD標(biāo)記測(cè)序分析膠回收試劑盒購(gòu)自上海華舜生物工程有限公司，pGEM T-Easy vector kit購(gòu)自Promega公司。用篩選的RAPD引物大量擴(kuò)增RAPD標(biāo)記，PCR產(chǎn)物用1. 5%瓊脂糖凝膠電泳， 再用柱離心式小量膠回收試劑盒回收RAPD特異性標(biāo)記片段，并連接克隆至克隆載體pGEM T-Easy vector上，按照BIORAD公司電脈沖儀的操作程序，采用電激法轉(zhuǎn)化E. coliDH5 α， 在含有X-gal和IPTG的氨芐青霉素LA選擇培養(yǎng)基上挑選白色菌落，并用限制性?xún)?nèi)切酶 EcoR I酶切鑒定重組質(zhì)粒，送寶生物工程大連有限公司測(cè)序。測(cè)序結(jié)果顯示，該RAPD特異 性標(biāo)記片段大小為703bp。4) SCAR標(biāo)記的轉(zhuǎn)換根據(jù)RAPD標(biāo)記特異性片段DNA測(cè)序結(jié)果，設(shè)計(jì)特異性引物SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2。用特異性引物對(duì)15株不抗株DNA和15株抗性單株DNA進(jìn)行PCR，體系為10 X buffer 2uL,2. 5mM dNTP 2uL,IOpM primer 各 luL，總 DNA(20 50ng/uL)，IuL Ex Taq (0. 5u/ uL)2uL，加 ddH20補(bǔ)足至 20uL。反應(yīng)程序?yàn)?95°C預(yù)變性 5min，94°C 30s, 50°C 30s, 72°C Imin 30個(gè)循環(huán)，然后72°C延伸lOmin。PCR反應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物用1. 0%瓊脂糖凝膠電泳然后經(jīng)EB染 色檢測(cè)。結(jié)果在抗性單株中擴(kuò)增出了 694bp的特異帶，而在不抗單株中沒(méi)有檢測(cè)到相應(yīng)的
市ο本發(fā)明的突出效果在于該標(biāo)記能夠用于水稻抗褐飛虱的輔助選擇育種，為克隆新的抗褐飛虱基因奠定了 ■石出。
具體實(shí)施例方式采用RAPD分子標(biāo)記方法，得到與水稻抗褐飛虱相關(guān)的分子標(biāo)記S229TO3，該分子標(biāo) 記的實(shí)際長(zhǎng)度為703bp，用SCAR方法換成SCAR694標(biāo)記。一、水稻材料的準(zhǔn)備將藥用野生稻1665與栽培稻雜交，經(jīng)過(guò)幼胚培養(yǎng)得到的Fl代與栽培稻品種進(jìn)行 進(jìn)行遠(yuǎn)緣雜交，然后連續(xù)回交、自交和植株抗性鑒定，獲得近等基因系B3F4抗感群體，一共 122株。抗性表型鑒定結(jié)果見(jiàn)表1表1近等基因系B3F4植株抗性鑒定結(jié)果
近等基因系編號(hào)抗性植株數(shù)目 不抗植株數(shù)目群體數(shù)目B3F475 47122二、水稻總DNA提取取l-50g的新鮮水稻葉片，于液氮中研磨成粉末，將凍粉轉(zhuǎn)入預(yù)冷的離心管中，立 即加入等體積(w/v)65°C預(yù)熱的2XCTAB提取緩沖液，充分混勻，65°C保溫10-20分鐘，期 間不時(shí)搖動(dòng)。加入等體積的氯仿/異戊醇，輕緩顛倒離心管混勻，室溫下，12000r/mim離心 10-20分鐘。將上清夜轉(zhuǎn)入另一離心管中，加入1/10體積的10% CTAB，混勻，加入等體積 的氯仿/異戊醇，顛倒離心管混勻，室溫下，12000r/min離心10分鐘。取上清液，重復(fù)(4) 操作1次。將上清液轉(zhuǎn)入新的經(jīng)硅烷化處理的離心管中，加入1-1. 5倍體積的IXCTAB沉 淀緩沖液，混勻，室溫下放置30分鐘，觀察沉淀生成，如無(wú)明顯沉淀生成，延長(zhǎng)放置時(shí)間，隨 放置時(shí)間延長(zhǎng)，沉淀量增加。3500-4000r/min離心5_10分鐘，去上清，沉淀吹干，用200uL 10XTE溶解。
加入1-2. 5uL RNAse (10g/L)，37°C保溫 1 小時(shí)。加入 2_4uL 蛋白酶 K，55°C保溫 1 小時(shí)。加入150uL H2O和360uL(24 1)氯仿/異戊醇，輕緩搖動(dòng)6分鐘，混勻，室溫8000r/ min離心10分鐘。上相轉(zhuǎn)入另一新的離心管中，加入1/10體積預(yù)冷的NaAC (3M)，再加入2 倍體積預(yù)冷的無(wú)水乙醇，沉淀DNA，-20°C放置30分鐘以上，低溫下12000r/min離心10分 鐘。DNA沉淀用75%乙醇洗滌兩次，離心倒掉乙醇。風(fēng)干后，加入50UL1XTE溶解，-20°C保 存，備用。三、近等基因系(NIL)DNA混合池的構(gòu)建從近等基因系中選取10株抗性等級(jí)最高的抗性單株，解凍已經(jīng)稀釋的樣品DNA， 分別取出50uL混合在一起，構(gòu)成近等基因系的抗DNA混合池。根據(jù)同樣的原理，從近等基 因系中選取10株抗性等級(jí)最低的抗性單株，解凍已經(jīng)稀釋的樣品DNA，分別取出50uL混合 在一起，構(gòu)成近等基因系的不抗DNA混合池。四、擴(kuò)增多態(tài)性DNA (RAPD)分析用每一條RAPD弓丨物分別對(duì)不抗池DNA和抗池DNA分別進(jìn)行RAPD PCR, PCR擴(kuò)增 反應(yīng)體系建立10 X buffer 2uL ；2. 5mM dN TP 2uL ； IOpM RAPDprimer IuL ；總 DNA (20 50ng/uL) IuL ；Ex Taq (0. 5u/uL) 2uL ；加 ddH20 補(bǔ)足至 20uL。反應(yīng)程序?yàn)?95°C預(yù)變性 5min ； 940C 30s, 360C 30s, 72°C Imin 40 個(gè)循環(huán)，然后 72°C延伸 IOmin0 PCR 反應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物用 1. 5% 瓊脂糖凝膠電泳然后經(jīng)EB染色檢測(cè)，并記錄每條擴(kuò)增帶譜在瓊脂糖凝膠上的位置，分析每 個(gè)RAPD引物在不同DNA池的擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳圖譜，尋找在抗、感集團(tuán)中存在多態(tài)性的RAPD 引物，通過(guò)4輪的逐漸縮小范圍篩選，初步得到能擴(kuò)增與抗褐飛虱基因Bph連鎖的RAPD標(biāo) 記的隨機(jī)引物。篩選得到具有抗褐飛虱基因多態(tài)性的隨機(jī)引物S2297Q3。六、標(biāo)記S229TO3的連鎖性鑒定利用篩選得到的RAPD引物S229TO3對(duì)近等基因系群體122個(gè)單株進(jìn)行PCR擴(kuò)增。 結(jié)果顯示，75株抗性單株中有66株存在特異帶，9株不存在特異帶；47株不抗單株中有1株 存在特異帶，46株沒(méi)有擴(kuò)增到特異帶。結(jié)果表明，特異片段S2297。3與水稻抗褐飛虱是緊密 連鎖的，但在抗性單株和敏感單株中均存在一定的交換。結(jié)合近等基因系群體的表型抗性 鑒定結(jié)果，采用MAPMAKER/EXP. Version 3. 0分析，軟件分析表明S2297(13與抗褐飛虱基因間 的遺傳距離為10. IcM0七、RAPD標(biāo)記測(cè)序分析膠回收試劑盒購(gòu)自上海華舜生物工程有限公司，pGEM T-Easy vector kit購(gòu)自 Promega公司。用篩選的RAPD引物大量擴(kuò)增RAPD標(biāo)記，PCR產(chǎn)物用1. 5%瓊脂糖凝膠電泳， 再用柱離心式小量膠回收試劑盒回收RAPD特異性標(biāo)記片段，并連接克隆至克隆載體pGEM T-Easy vector上，按照BIORAD公司電脈沖儀的操作程序，采用電激法轉(zhuǎn)化E. coliTH5 α， 在含有X-gal和IPTG的氨芐青霉素LA選擇培養(yǎng)基上挑選白色菌落，并用限制性?xún)?nèi)切酶 EcoR I酶切鑒定重組質(zhì)粒，送寶生物工程大連有限公司測(cè)序。測(cè)序結(jié)果顯示，該RAPD特異 性標(biāo)記片段大小為703bp。八、分子標(biāo)記的SCAR轉(zhuǎn)換根據(jù)RAPD標(biāo)記特異性片段DNA測(cè)序結(jié)果，設(shè)計(jì)特異性引物SEQ ID NO. 1和SEQ ID N0. 2。用特異性引物對(duì)15株不抗株DNA和15株抗性單株DNA進(jìn)行PCR，體系為10 X buffer 2uL,2. 5mM dNTP 2uL,IOpM primer 各 IuL,總 DNA(20 50ng/uL)luL，Ex Taq (0. 5u/uL)2uL，加 ddH20 補(bǔ)足至 20uL。反應(yīng)程序?yàn)?5°C預(yù)變性 5min，94°C 30s, 50°C 30s, 72°C Imin 30個(gè)循環(huán)，然后72°C延伸lOmin。PCR反應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物用1. 0%瓊脂糖凝膠電泳然后經(jīng)EB染 色檢測(cè)。結(jié)果在抗性單株中擴(kuò)增出了 703bp的特異帶，而在不抗單株中沒(méi)有檢測(cè)到相應(yīng)的
市ο
權(quán)利要求
一種與水稻抗褐飛虱基因連鎖的SCAR分子標(biāo)記，其特征在于，由序列表中的SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2組成的引物對(duì)PCR擴(kuò)增得到。
2.權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記，是用RAPD分子標(biāo)記方法篩選出S229TO3分子標(biāo)記，再將 S229703轉(zhuǎn)換成穩(wěn)定的SCAR標(biāo)記，該SCAR標(biāo)記采用下列方法步驟獲得(1)所用材料為藥用野生稻1665(Oryza officinals Waii Ex Wat t)與栽培稻桂99 遠(yuǎn)緣雜交的B3F4代自交分離群體，(2)用CTAB法提取水稻總DNA，分別溶于IXTE中220°C保存?zhèn)溆茫?jīng)1.0%的瓊脂糖 凝膠電泳檢測(cè)水稻總DNA的完整性，并根據(jù)EB染色強(qiáng)度計(jì)算其濃度，(3)采用RAPD分子標(biāo)記方法，對(duì)與水稻抗褐飛虱相關(guān)的分子標(biāo)記的篩選，(4)選出一個(gè)RAPD分子標(biāo)記S2297Q3，該標(biāo)記與水稻抗褐飛虱基因相連鎖，與抗性基因 的遺傳距離為10. 1CM，(5)將S229703克隆測(cè)序后，根據(jù)所測(cè)序列，設(shè)計(jì)引物SEQID NO. 1和SEQID NO. 2，以水 稻總DNA為模板，PCR擴(kuò)增得到SCAR標(biāo)記，即SCAR694。
3.按照權(quán)利要求1所述的與水稻抗褐飛虱基因連鎖的SCAR分子標(biāo)記，其特征在于， 用RAPD分子標(biāo)記方法，進(jìn)行與水稻抗褐飛虱相關(guān)的分子標(biāo)記，其篩選的具體做法是選取 B3F4代自交分離群體中10株不抗褐飛虱植株總DNA混合作為不抗池DNA，10株抗褐飛虱 植株總DNA混合作為抗池DNA，用每一條RAPD引物分別對(duì)不抗池DNA和抗池DNA分別進(jìn)行 RAPD PCR，PCR 擴(kuò)增反應(yīng)體系建立10 X buffer 2uL 2. 5mM dNTP 2uL IOpM RAPD primer IuL 總 DNA (20 50ng/uL) IuL ExTaq (0. 5u/uL) 2uL,加 ddH20 補(bǔ)足至 20uL，95 "C 預(yù)變性 5min，94°C 30s, 36°C 30s, 72°C Imin 40 個(gè)循環(huán)，然后 72°C延伸 lOmin，PCR 反應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物用 1. 5%瓊脂糖凝膠電泳然后經(jīng)EB染色檢測(cè)。
4.按照權(quán)利要求2所述的與水稻抗褐飛虱基因連鎖的SCAR分子標(biāo)記，其特征在于，將 S229703轉(zhuǎn)換成穩(wěn)定的SCAR694標(biāo)記，具體做法為首先將標(biāo)記S229TO3克隆至克隆載體pGEM T-Easy vector上，按照BIORAD公司電脈沖儀的操作程序，采用電激法轉(zhuǎn)化E. coliDH5 α， 在含有X-gal和IPTG的氨芐青霉素LA選擇培養(yǎng)基上挑選白色菌落，并用限制性?xún)?nèi)切酶 EcoRI酶切鑒定重組質(zhì)粒，送寶生物工程大連有限公司測(cè)序，測(cè)序后，根據(jù)該序列設(shè)計(jì)2個(gè) SCAR引物Pl和P2，在B3F4代自交分離群體的抗性單株中分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增，均能擴(kuò)增出 預(yù)計(jì)的SCAR標(biāo)記SCAR6941全文摘要
一種與水稻抗褐飛虱基因連鎖的SCAR分子標(biāo)記，采用282個(gè)隨機(jī)引物對(duì)藥用野生稻1665和栽培稻桂99遠(yuǎn)緣雜交的抗褐飛虱近等基因系B3F4分離群體的不抗池DNA和抗池DNA進(jìn)行了特異性RAPD標(biāo)記篩選，從中篩選到一個(gè)具有明顯的特異性擴(kuò)增帶譜的RAPD標(biāo)記S229，S229序列長(zhǎng)度為703bp，與基因庫(kù)中已報(bào)道的水稻第四號(hào)染色體的BAC克隆(編號(hào)OS JNBa0070011)序列(67114269100)有51.86％的同源性。將RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的SCAR標(biāo)記。該標(biāo)記可用于水稻抗褐飛虱的輔助選擇育種，為克隆新的抗褐飛虱基因奠定了基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C12P19/34GK101880710SQ20101010121
公開(kāi)日2010年11月10日 申請(qǐng)日期2010年1月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月26日
發(fā)明者梁肖仍, 武波, 申佩弘, 蔣承建, 金科, 韋東 申請(qǐng)人:廣西大學(xué)