專利名稱：一個水稻抗稻瘟病基因的分子標(biāo)記方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)作物分子遺傳育種學(xué)領(lǐng)域，涉及水稻抗稻瘟病基因的分子標(biāo)記方法。
背景技術(shù)：
水稻是我國最重要的糧食作物之一，對保障我國糧食安全和國民經(jīng)濟(jì)增長具有重要意義。稻瘟病是我國水稻生產(chǎn)上最嚴(yán)重的病害，具有傳播快、發(fā)生廣、危害重等特點(diǎn)(凌忠專等，1989，我國北方稻區(qū)稻瘟病菌生理小種研究沖國農(nóng)業(yè)科學(xué)，22 (3) 7-13)。進(jìn)一步發(fā)掘和利用我國抗稻瘟病基因資源，培育和種植抗病品種是控制稻瘟病發(fā)生和減少水稻產(chǎn)量損失最經(jīng)濟(jì)有效的途徑。迄今，各國科學(xué)家從水稻中鑒定了 70多個抗稻瘟病基因，其中有17個抗病基因被成功克隆。這些抗病基因可以引入或聚合到現(xiàn)代品種，選育出高抗、廣譜的品種。但傳統(tǒng)育種方法費(fèi)時、費(fèi)力、表型鑒定困難、育種效率低，由于抗病基因多為顯性、基因間往往存在上位性互作，抗病基因聚合更為困難。通過分子標(biāo)記輔助育種可以有效解決這一問題。我國太湖流域稻作歷史悠久，被認(rèn)為是粳稻起源地之一，蘊(yùn)藏有豐富的稻種資源， 李培富等(1999，兩個太湖流域粳稻地方品種抗稻瘟病的遺傳研究.中國水稻科學(xué)，13(1) 11-14)報道我國太湖流域粳稻地方品種薄稻對稻瘟病菌的抗性表現(xiàn)廣譜和高抗的特點(diǎn)。從我國特有的種質(zhì)資源中鑒定和克隆抗稻瘟病基因，可以獲得具有自主知識產(chǎn)權(quán)的基因，對提高我國水稻抗稻瘟病育種水平，尤其是粳稻的抗稻瘟病育種有重大意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供水稻品種薄稻抗稻瘟病基因Pi-bdl (t)的分子標(biāo)記方法。 通過檢測與抗病基因Pi-bdl (t)緊密連鎖的分子標(biāo)記，可以確定有無抗病基因Pi-bdl (t)， 并預(yù)測水稻植株的的稻瘟病抗性，加快抗稻瘟病水稻新品種的選育進(jìn)度。本發(fā)明的目的可通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)水稻薄稻抗稻瘟病基因Pi-bdl (t)的分子標(biāo)記方法，包含如下操作步驟(1)取水稻樣品，提取水稻樣品基因組DNA ；(2)利用表1中的任意一對或兩對與水稻薄稻抗稻瘟病基因Pi-bdl (t)緊密連鎖的分子標(biāo)記引物，對所述的水稻樣品基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在8%非變性聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行電泳檢測，如果擴(kuò)增出對應(yīng)大小的分子標(biāo)記DNA片段，標(biāo)志著 Pi-bdl⑴基因的存在表 權(quán)利要求
1.水稻薄稻抗稻瘟病基因Pi-bdl(t)的分子標(biāo)記方法，其特征在于包括如下步驟(1)取水稻樣品，提取水稻樣品基因組DNA;(2)利用表1中的任意一對或兩對與水稻品種薄稻抗稻瘟病基因Pi-bdl(t)緊密連鎖的分子標(biāo)記引物，對所述的水稻樣品基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在8%非變性聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行電泳檢測，如果擴(kuò)增出對應(yīng)大小的分子標(biāo)記片段，標(biāo)志著Pi-bdl (t) 基因的存在；表1標(biāo)記引物名稱分子標(biāo)記引物特異性分子標(biāo)記大小(bp)RM60916091LSEQ ID NO. 11956091RSEQ ID N0.2RM2663226632LSEQIDN0.320526632RSEQ ID N0.4
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水稻薄稻抗稻瘟病基因Pi-bdl (t)的分子標(biāo)記方法，其特征在于所述的PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系為10X含Mg2+的緩沖液1. 0μ 1，4ρπι01/μ 1的所述分子標(biāo)記引物對 1 μ 1，2. 5mM dNTPs 0. 2 μ 1，5U/ μ 1 的 Taq 酶 0. 1 μ 1，IOng/ μ 1 的水稻樣品基因組模板DNA 1 μ 1，加水至10 μ 1 ；反應(yīng)程序?yàn)镈NA 94°C預(yù)變性5分鐘后；94°C變性30秒， 55°C退火30秒，72°C延伸展1分鐘，循環(huán)35次；最后72°C延伸10分鐘。
全文摘要
本發(fā)明屬于作物分子遺傳育種學(xué)領(lǐng)域，公開了水稻抗稻瘟病基因的分子標(biāo)記方法，包括如下步驟(1)取水稻樣品，提取水稻樣品基因組DNA；(2)利用RM6091和RM26632中的任意一對分子標(biāo)記的引物，對水稻樣品基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測，如果擴(kuò)增出對應(yīng)大小的分子標(biāo)記DNA片段，標(biāo)志著Pi-bd1(t)基因的存在。通過本發(fā)明提供的水稻抗稻瘟病基因Pi-bd1(t)的分子標(biāo)記可以檢測水稻薄稻及其雜交、回交和復(fù)交后代是否含有該基因，可預(yù)測其對稻瘟病的抗性水平，大大提高水稻抗稻瘟病材料的選擇效率，加快抗病育種進(jìn)程。
文檔編號C12Q1/68GK102162011SQ201110118819
公開日2011年8月24日 申請日期2011年5月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月9日
發(fā)明者張紅生, 王州飛, 王建飛, 環(huán)晶, 鮑永美, 黃驥 申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)