專利名稱::γ-L-PGA生產(chǎn)微生物、使用該微生物的γ-L-PGA制造方法、交聯(lián)體及皮膚外用劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
:本發(fā)明涉及一種聚—Y—L一谷氨酸高生產(chǎn)微生物及其變異株、使用該微生物或變異株的聚一Y—L一谷氨酸的制造方法以及高分子量聚一Y—L一谷氨酸。另外,本發(fā)明還涉及一種聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體、其制造方法以及內(nèi)含該交聯(lián)體而成的水凝膠。更具體而言,涉及一種吸水性及生物降解能力出色而且可以穩(wěn)定地供給需要的質(zhì)量的聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體、其制造方法以及含有該交聯(lián)體而成的水凝膠。進(jìn)而,本發(fā)明還涉及一種皮膚外用劑。更具體而言,涉及一種內(nèi)含具有高保濕效果的聚一y—L一谷氨酸及聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體中的至少一種,優(yōu)選作為保濕劑、化妝品而使用的皮膚外用劑。
背景技術(shù):
:近年來(lái),地球環(huán)境的劣惡化被視為問(wèn)題,急于開(kāi)發(fā)環(huán)境修復(fù)*保護(hù)技術(shù)。作為環(huán)境污染的原因,例如廣泛認(rèn)為是工廠廢水等人類生產(chǎn)活動(dòng)的擴(kuò)大引起的。不過(guò),還已知深入滲透到我們的生活的、成為現(xiàn)代的"生活必需品"的塑料制品給環(huán)境帶來(lái)與生產(chǎn)活動(dòng)的擴(kuò)大同等程度或比其更厲害的環(huán)境負(fù)荷。多數(shù)常用塑料或合成聚合物是通過(guò)石油化學(xué)制造的。這些化成品極為穩(wěn)定,輕型、強(qiáng)韌且廉價(jià)及其便利性是驚人的。另一方面,反復(fù)輕率利用和廢棄也是事實(shí)。如今,這些廢棄物大多在自然環(huán)境中不能被分解,所以被指責(zé)導(dǎo)致了生態(tài)系統(tǒng)的破壞。由于利用廢棄處理法而成為二噁英(dioxin)等環(huán)境激素(內(nèi)分泌擾亂化學(xué)物質(zhì))的發(fā)生源,其威脅不可估對(duì)環(huán)境問(wèn)題重視的提高成為了重新認(rèn)識(shí)生物降解之類的功能性的契機(jī)。產(chǎn)生了被稱為生物降解性塑料的概念,需要盡快地將其實(shí)用化。微生物生產(chǎn)的生物聚合物被認(rèn)為有希望成為作為提供生物降解性塑料或水凝膠的材料。尤其在氨基酸以特殊的結(jié)合方式連接而成的被稱為聚氨基酸的一組生物高聚物中發(fā)現(xiàn)的潛在能力備受矚目。已被同定的有聚一Y—谷氨酸(以下有時(shí)也記載為PGA)、聚一s—賴氨酸及藻青素這3種聚氨基酸。最近,已知聚氨基酸的結(jié)構(gòu)特征(構(gòu)成氨基酸的旋光性或種類、分子尺寸、結(jié)合方式等)強(qiáng)有力地反映其功能性。PGA是谷氨酸的a—氨基與Y—羧基以酰胺鍵結(jié)合的聚氨基酸。PGA己知為納豆產(chǎn)絲的主體物質(zhì),而這極大地來(lái)自于其具有魅力的功能性。為人所熟知的點(diǎn)可以舉出兼具生物降解性和高吸水性。期待利用這些功能,在食品、化妝品、醫(yī)療品等眾多領(lǐng)域中有各種用途。但是,目前被制品化的PGA是從納豆菌或其親緣菌生產(chǎn)而來(lái)的,谷氨酸的兩個(gè)旋光異構(gòu)體被生產(chǎn)為隨機(jī)地結(jié)合的化學(xué)雜聚合物。因此,考慮PGA作為塑料的代替材料,其實(shí)用化具有很大的障礙。還有生產(chǎn)均聚一Y—谷氨酸的菌的報(bào)道。例如報(bào)道了炭疽桿菌Bacillusanthracis生產(chǎn)只由D—谷氨酸構(gòu)成的聚一Y—D—谷氨酸(以下有時(shí)也記載為D—PGA)(非專利文獻(xiàn)l)。但是,由于本菌為具有強(qiáng)病原性的細(xì)菌,所以不適合作為工業(yè)上的PGA生產(chǎn)菌,生產(chǎn)的D—PGA的分子量也小。另夕卜,還報(bào)道了嗜堿性細(xì)菌嗜堿芽孢桿菌(Bacillushalodurans)生產(chǎn)僅由L一谷氨酸構(gòu)成的聚一Y—L一谷氨酸(以下有時(shí)也記載為L(zhǎng)一PGA)(非專利文獻(xiàn)2)。但是,本菌生產(chǎn)的L一PGA的分子量也極小。另一方面,作為較高分子量的均聚一Y—谷氨酸的生產(chǎn)菌,報(bào)道了嗜堿性古細(xì)菌Natrialbaaegyptiaca僅生產(chǎn)分子量為10萬(wàn)100萬(wàn)左右的聚一Y—L一谷氨酸。但是,本菌在液體培養(yǎng)條件下生產(chǎn)分子量為IO萬(wàn)左右的較小的谷氨酸,而且?guī)缀醪簧a(chǎn)聚一Y—L—谷氨酸,所以作為工業(yè)上的生產(chǎn)菌存在問(wèn)題(非專利文獻(xiàn)3、專利文獻(xiàn)l)。除了上述以外,作為生產(chǎn)聚一Y—L一谷氨酸的生物,可以舉出水螅等,但水螅的情況也同樣存在分子量極小的問(wèn)題(非專利文獻(xiàn)4)。作為PGA的利用領(lǐng)域,包括化妝品領(lǐng)域。在化妝品領(lǐng)域中應(yīng)用PGA時(shí),如PGA之類的水溶性高分子化合物所需要的性質(zhì)為光學(xué)純度均一,而且具有高的保濕性能和增粘性。但是,為了同時(shí)滿足這兩個(gè)要件,需要光學(xué)純度均一的高分子量PGA。另外,吸水性樹(shù)脂在眾多領(lǐng)域中被用作紙尿片或生理用品、醫(yī)療、建設(shè)、土木工學(xué)、建筑領(lǐng)域、觸感改善劑、用于食品的鮮度保持劑、進(jìn)而用于園藝等農(nóng)學(xué)領(lǐng)域中的綠化工學(xué)的重要的基材等。在吸水性樹(shù)脂中,丙烯酸系的吸水性樹(shù)脂具有出色的吸水性,而且廉價(jià),所以被使用在廣泛的領(lǐng)域。但是,丙烯酸系的吸水性樹(shù)脂幾乎不具有生物降解性。所以,難以利用微生物等的分解來(lái)處理丙烯酸系的吸水性樹(shù)脂。例如,不適于混合肥料處理之類的生物處理,另外,即使在填埋處理場(chǎng)等也不能被分解而殘存。作為解決該問(wèn)題的吸水性樹(shù)脂,例如在專利文獻(xiàn)1中公開(kāi)了由聚一y—谷氨酸交聯(lián)體構(gòu)成的生物降解性吸水樹(shù)脂。PGA是由各種生物合成的高分子化合物,生物降解性出色。所以,在專利文獻(xiàn)l中的生物降解性吸水性樹(shù)脂可以安全且簡(jiǎn)單地進(jìn)行廢氣處理。此外,對(duì)過(guò)去己知的PGA進(jìn)行歸納,如在專利文獻(xiàn)2中使用的PGA,通常為由L—谷氨酸及D—谷氨酸這兩旋光異構(gòu)體不規(guī)則地結(jié)合而成的PGA,還有僅由D—谷氨酸結(jié)合而成的PGA(非專利文獻(xiàn)1)或僅由L一谷氨酸結(jié)合而成的PGA(專利文獻(xiàn)l、非專利文獻(xiàn)24)的報(bào)道。此外,在本說(shuō)明書中,為了便于說(shuō)明,將D—谷氨酸及L一谷氨酸結(jié)合而成的PGA記載為"DL—PGA"。另夕卜,將僅由D—谷氨酸構(gòu)成的PGA記載為"D—PGA",將僅由L—谷氨酸構(gòu)成的PGA記載為"聚一y—L—谷氨酸"或"L—PGA"。但是,以專利文獻(xiàn)2中的生物降解性吸水性樹(shù)脂難以穩(wěn)定地制造具有需要質(zhì)量的生物降解性吸水性樹(shù)脂,或者,起始制造構(gòu)成該生物降解性吸水性樹(shù)脂的DL—PGA的交聯(lián)體本身是困難的。具體而言,在專利文獻(xiàn)2中公開(kāi)的作為DL—PGA交聯(lián)體的原料的DL—PGA利用BacillusSubtillus等納豆菌或其親緣菌來(lái)合成。但是,在從納豆菌或其親緣菌獲得的DL—PGA中,D—谷氨酸及L一谷氨酸不規(guī)則地結(jié)合,D—谷氨酸及L一谷氨酸的含有比率或序列在每次培養(yǎng)生產(chǎn)菌時(shí)都發(fā)生改變。因此,DL—PGA交聯(lián)體的每一分子結(jié)構(gòu)不同,其每一分子性質(zhì)也不同。這樣一來(lái),在制作交聯(lián)體時(shí),使用的DL—PGA的批次間容易產(chǎn)生質(zhì)量差,難以穩(wěn)定地制造具有需要質(zhì)量的PGA交聯(lián)體。進(jìn)而,如果如上所述,成為原料的DL—PGA的質(zhì)量不一定,則難以穩(wěn)定地獲得交聯(lián)體。在本發(fā)明人等的探討中也不能得到DL—PGA的交聯(lián)體。認(rèn)為這是因?yàn)椋缟纤觯珼L—PGA的每一分子結(jié)構(gòu)不同。就是說(shuō),制作PGA的交聯(lián)體時(shí)的交聯(lián)效率依賴于分子的結(jié)構(gòu),在每一分子結(jié)構(gòu)不規(guī)則地不同時(shí),交聯(lián)效率顯著地降低。因而,難以使每一分子結(jié)構(gòu)不同的DL—PGA交聯(lián),交聯(lián)體的效率也極低。而且目前沒(méi)有獲得L一PGA的交聯(lián)體的報(bào)道。認(rèn)為這是由于以下的原因。即,過(guò)去在液體培養(yǎng)時(shí),不能獲得平均分子量大的L一PGA。另一方面,極難獲得低分子量的有機(jī)化合物的交聯(lián)體是技術(shù)常識(shí)。這樣的話,從業(yè)者甚至很難想象獲得低分子量的L一PGA的交聯(lián)體。因此,甚至沒(méi)有嘗試獲得L—PGA的交聯(lián)體的報(bào)道。此外,工業(yè)用途的PGA要求可以利用液體培養(yǎng)來(lái)制造。這是因?yàn)椋绻闷桨迮囵B(yǎng),則一時(shí)難以培養(yǎng)大量的微生物,另外,從平板培養(yǎng)基上收集L一PGA的效率也差。例如,作為合成L一PGA的生物,在非專利文獻(xiàn)l中,公開(kāi)有嗜堿性細(xì)菌嗜堿芽孢桿菌(Bacillushalodurans),以及在非專利文獻(xiàn)2中,公開(kāi)有水螅。但是,利用這些生物合成的L一PGA的分子量為IO萬(wàn)左右,極小。另外,在專利文獻(xiàn)2及非專利文獻(xiàn)3中,報(bào)道了如果用平板培養(yǎng)基培養(yǎng)作為嗜堿性古細(xì)菌的Natrialbaaegyptiaca,則生產(chǎn)分子量10萬(wàn)100萬(wàn)左右的L—PGA。但是,該Natrialbaaegyptiaca在液體培養(yǎng)條件下合成的L一PGA的分子量為IO萬(wàn)左右,而且其合成效率極低。即使能夠獲得D—PGA的交聯(lián)體,也不適合用于產(chǎn)業(yè)上。這是因?yàn)?,在非專利文獻(xiàn)4中公開(kāi)的合成D—PGA的菌為具有強(qiáng)病原性的炭疽桿菌Bacillusanthracis。極不適合使用炭疽桿菌制造產(chǎn)業(yè)上利用的PGA。粗糙皮膚存在由于角質(zhì)細(xì)胞的剝離而引起和由于干燥使皮膚的健康狀況變差直至表皮的硬化或損傷的情況。其中,角質(zhì)細(xì)胞的剝離引起的粗糙皮膚的發(fā)生是由膽固醇、神經(jīng)酰胺、脂肪酸等從角質(zhì)細(xì)胞間脂質(zhì)洗脫、紫外線、洗滌劑等引起的角質(zhì)細(xì)胞的變性、表皮細(xì)胞的增值平衡及/或角9化平衡的崩潰引起的角質(zhì)層透過(guò)屏障的形成障礙等引起的。過(guò)去,為了預(yù)防或治療粗糙皮膚,進(jìn)行了合成角質(zhì)細(xì)胞間脂質(zhì)成分或與其類似的角質(zhì)細(xì)胞間脂質(zhì)并向皮膚供給等的探討。角質(zhì)細(xì)胞間脂質(zhì)是指棘層及顆粒層的細(xì)胞生物合成的層板顆粒在緊鄰角質(zhì)層的下方釋放到細(xì)胞間,并伸展,形成層板(lamellar)結(jié)構(gòu),由此向細(xì)胞間擴(kuò)展的物質(zhì)。層板顆粒由葡糖苷酰鞘氨醇、膽固醇、神經(jīng)酰胺、磷脂質(zhì)等構(gòu)成,而在角質(zhì)細(xì)胞間脂質(zhì)中幾乎不含有葡糖苷酰鞘氨醇。即,認(rèn)為層板顆粒中的葡糖苷酰鞘氨醇在卩一葡糖腦苷酯酶的作用下發(fā)生水解,轉(zhuǎn)換成神經(jīng)酰胺。認(rèn)為神經(jīng)酰胺通過(guò)形成層板結(jié)構(gòu),作為角質(zhì)細(xì)胞間脂質(zhì),發(fā)揮改善角質(zhì)層透過(guò)屏障的形成、防止粗糙皮膚的屏障的功能。尤其報(bào)道了可以有效地向洗滌劑等引起的粗糙皮膚中補(bǔ)充神經(jīng)酰胺,在改善皮膚粗糙方面顯示出較高的效果(非專利文獻(xiàn)5)。另一方面,為了防止表皮硬化或損傷引起的粗糙皮膚,過(guò)去使用具有保濕效果的化妝品等皮膚外用劑。通過(guò)使用具有保濕效果的皮膚外用劑,可以防止從皮膚揮發(fā)水分,在表皮及角質(zhì)層中保持水分。這樣,可以維持皮膚的正常性,可以保持保濕性、柔軟性,可以保持嬌嫩的皮膚。作為過(guò)去報(bào)道的對(duì)皮膚具有保濕效果的親油性物質(zhì),可以舉出橄欖油等植物油、羊毛脂等動(dòng)物來(lái)源的脂質(zhì)等。另外,作為對(duì)皮膚具有保濕效果的親水性物質(zhì),可以舉出甘油、1,3—丁二醇、丙二醇、山梨糖醇等水溶性多元醇,透明質(zhì)酸及蒼耳烷橡膠(xanthanegum)等多糖類,聚乙二醇等水溶性高分子,吡咯垸酮羧酸鹽、氨基酸為代表的低分子量的天然保濕因子,植物萃取物等。作為這樣具有對(duì)皮膚的保濕效果的物質(zhì),存在各種物質(zhì),但近年來(lái),由于重視安全性等,存在避免動(dòng)物來(lái)源的物質(zhì)或化學(xué)合成品的趨勢(shì)。那么,優(yōu)選天然物質(zhì)來(lái)源的物質(zhì)或利用微生物的發(fā)酵生產(chǎn)物。進(jìn)而,期待并備受矚目的是不僅對(duì)生物體而且對(duì)環(huán)境的負(fù)荷均小的生物降解性原材料。在生物降解性原材料中,期望的是微生物生產(chǎn)的生物聚合物。在生物聚合物中,氨基酸縮聚構(gòu)成的被稱為聚氨基酸的一組生物聚合物可見(jiàn)各種功能,其潛在能力備受矚目。尤其矚目的是所述的作為聚氨基酸的PGA。如上所述,PGA是谷氨酸的ct一氨基與羧基進(jìn)行酰胺鍵合而成的10聚氨基酸。PGA已知為從古代開(kāi)始為日本人所熟悉的納豆產(chǎn)絲的主體物質(zhì),是吸水性的聚氨基酸,而作為這樣熟悉的背景,極大地利用的是其具有魅力的功能性。作為PGA的具有魅力的功能,已知同時(shí)具備生物降解性及高吸水性。期待利用這些功能,以所述的化妝品為首,用于醫(yī)療品、食品等各種領(lǐng)域、用途中。但是,在含有所述過(guò)去的PGA的皮膚外用劑中,具有難以穩(wěn)定地制造具有需要質(zhì)量的皮膚外用劑的問(wèn)題,或者保濕性不充分的問(wèn)題。如上所述,目前,被制品化的DL—PGA在化學(xué)上為雜聚合物。具體而言,PGA由納豆菌或其親緣菌生產(chǎn)得到,而D—谷氨酸及L一谷氨酸不規(guī)則地結(jié)合,其含有比率或序列在每次培養(yǎng)生產(chǎn)菌時(shí)會(huì)發(fā)生改變。通常聚氨基酸的結(jié)構(gòu)特征(構(gòu)成的氨基酸的旋光性或種類、分子尺寸、結(jié)合樣式等)很大程度地影響其功能。所述DL—PGA的每一分子結(jié)構(gòu)不同,其每一分子性質(zhì)也不同。這樣一來(lái),難以穩(wěn)定地制造具有需要質(zhì)量的DL—PGA。另外,由于DL—PGA的保濕性不充分,所以作為化妝品的皮膚外用劑的實(shí)用化成為較大的課題。過(guò)去,還沒(méi)有制造內(nèi)含L一PGA的皮膚外用劑的報(bào)道。這是因?yàn)橐韵略?。通常在使用PGA制造皮膚外用劑的情況下,要求保濕性,所以高分子量的PGA是不可缺少的。另一方面,過(guò)去,在液體培養(yǎng)中,不能得到平均分子量較大的L一PGA。這樣一來(lái),甚至難以設(shè)想制造內(nèi)含L一PGA的保濕劑。另外,如上所述,工業(yè)上用途的PGA要求可以利用液體培養(yǎng)來(lái)制造,而如果用平板培養(yǎng),則一時(shí)難以培養(yǎng)大量的微生物,從平板培養(yǎng)基上收集L一PGA的效率也差。另外,如上所述,D—PGA不適合用于產(chǎn)業(yè)上。在專利文獻(xiàn)2中,DL—PGA的交聯(lián)體被用作吸水性樹(shù)脂,但難以將DL—PGA的交聯(lián)體用作皮膚外用劑。在專利文獻(xiàn)2中公開(kāi)的作為DL—PGA的原料的DL—PGA利用BacillusSubtillus等納豆菌或其親緣菌合成。這樣一來(lái),成為原料的DL—PGA的質(zhì)量不一定,所以難以穩(wěn)定地獲得交聯(lián)體。即使在本發(fā)明人等的探討中,也不能得到DL—PGA的交聯(lián)體。認(rèn)為這是因?yàn)?,如上所述,DL一PGA的每一分子結(jié)構(gòu)不同。就是說(shuō),制作PGA的交聯(lián)體時(shí)的交聯(lián)效率依賴于分支結(jié)構(gòu),在每一分子結(jié)構(gòu)不規(guī)則地不同的情況下,交聯(lián)效率顯著降低。因而,難以使每一分子結(jié)構(gòu)不同的DL—PGA交聯(lián),交聯(lián)體的收率也極低。因而,即使使用DL—PGA的交聯(lián)體,也難以穩(wěn)定地制造需要質(zhì)量的皮膚外用劑。另一方面,過(guò)去還沒(méi)有獲得L一PGA的交聯(lián)體的報(bào)道。這是因?yàn)椋缟纤?,在液體培養(yǎng)中,不能得到平均分子量較大的L一PGA。極難獲得低分子量的有機(jī)化合物的交聯(lián)體是技術(shù)常識(shí)。從業(yè)者甚至很難想象獲得低分子量的L—PGA的交聯(lián)體。因此,甚至沒(méi)有嘗試獲得L一PGA的交聯(lián)體的報(bào)道。另外,即使可以獲得D—PGA的交聯(lián)體,如上所述,D—PGA的生產(chǎn)菌目前只是炭疽桿菌,所以不適合用于產(chǎn)業(yè)上。專利文獻(xiàn)l:特表2002—517204號(hào)公報(bào)(2002年6月18日公表)專利文獻(xiàn)2:特開(kāi)平10—251402號(hào)公報(bào)(1998年9月22日)非專利文獻(xiàn)1:Makino,S.,I.Uchida,N.Terakado,C.Sasakawa,andM.Yoshikawa,Molecularcharacterizationandproteinanalysisofthecapregion,whichisessentialforencapsulationinBacillusanthracis,JournalofBacteriology,1989,171,722-730.非專利文獻(xiàn)2:Aono,R.,M.Ito,andT.Machida,ContributionoftheCellWallComponentTeichuronopeptidetopHHomeostasisandAlkaliphilyintheAlkaliphileBacilluslentusC-125,JournalofBacteriology,1999,Vol.181,6600-6606.非專利文獻(xiàn)3:Hezayen,F.F.,B.H.A.Rehm,B.J.TindallandA.Steinbuchel,TransferofNatrialbaasiaticaBITtoNatrialbataiwanensissp.nov.anddescriptionofNatrialbaaegyptiacasp.nov"anovelextremelyhalophilic,aerobic,non-pigmentedmemberoftheArchaeafromEgyptthatproducesextracellularpoly(glutamicacid),InternationalJournalofSystematicandEvolutionaryMicrobiology,2001,51,1133-1142,非專利文獻(xiàn)4:Weber,J.,Poly(gamma-glutamicacid)sarethemajorconstituentsofnematocystsinHydra(Hydrozoa,Cnidaria),JournalofBiologicalChemistry,1990,Vol.265,9664-9669.非專利文獻(xiàn)5:皮膚與美容,36,210(2004)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是以所述課題為背景的發(fā)明。即,本發(fā)明的目的在于提供一種高生產(chǎn)光學(xué)純度均一的聚一Y—L一谷氨酸的微生物或其變異株,和使用該微生物的高分子量的聚一Y—L一谷氨酸的生產(chǎn)方法及高分子量且光學(xué)純度均一的聚一Y—L—谷氨酸。另外,本發(fā)明的目的還在于穩(wěn)定地提供一種具有需要質(zhì)量的L—PGA交聯(lián)體。另外,本發(fā)明的目的還在于穩(wěn)定地提供一種具有需要質(zhì)量的皮膚外用劑。本發(fā)明人等進(jìn)行了潛心研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn),利用以下所示的手段可以解決所述課題,以至完成本發(fā)明。即,本發(fā)明由以下結(jié)構(gòu)構(gòu)成。1.一種微生物,其中,在液體培養(yǎng)條件下,生產(chǎn)分子量為130萬(wàn)以上的聚一y—L—谷氨酸。2.根據(jù)l所述的微生物,其中,聚一Y—L一谷氨酸的分子量為200萬(wàn)以上。3.根據(jù)l所述的微生物,其中,聚一Y—L一谷氨酸的分子量為350萬(wàn)以上。4.根據(jù)13中任意一項(xiàng)所述的微生物,其中,誘變處理具有聚一y—L一谷氨酸的生產(chǎn)能力的微生物而得到。5.根據(jù)4所述的微生物,其中,在NaCl濃度為10%(w/v)以下的固體培養(yǎng)條件下呈粘液(mucoid)狀。6.根據(jù)4或5所述的微生物,其中,微生物為嗜鹽菌。7.根據(jù)46中任意一項(xiàng)所述的微生物,其中,嗜鹽菌為極端嗜鹽菌。8.根據(jù)47中任意一項(xiàng)所述的微生物,其中,極端嗜鹽菌是古細(xì)菌。9.根據(jù)38中任意一項(xiàng)所述的微生物,其中,極端嗜鹽性古細(xì)菌為Natrialbaaegyptiaca。10.根據(jù)19中任意一項(xiàng)所述的微生物,其中,微生物為Natrialbaaegyptiaca0830—82株(保藏編號(hào)FERMBP—10747)、Natrialbaaegyptiaca0830—243株(保藏編號(hào)FERMBP—10748)、或者Natrialbaaegyptiaca0831—264株(保藏編號(hào)FERMBP—10749)。11.一種高分子量聚一Y—L—谷氨酸的制造方法,其中,培養(yǎng)在110中任意一項(xiàng)所述的微生物,利用其培養(yǎng)液收集高分子量的聚一Y—L一谷氨酸。12.根據(jù)11所述的高分子量聚一Y—L一谷氨酸的制造方法,其中,培養(yǎng)液中的鹽濃度為530W/V%。13.—種高分子量的聚一Y—L一谷氨酸,其是利用權(quán)利要求11或12所述的制造方法而得到的。14.一種聚一y—L一谷氨酸,其平均分子量為130萬(wàn)以上。15.—種聚一Y—L一谷氨酸,其平均分子量為200萬(wàn)以上。16.—種聚一Y—L一谷氨酸,其平均分子量為350萬(wàn)以上。17.—種微生物,其中,微生物為Natrialbaaegyptiaca0830—82株(保藏編號(hào)FERMBP—10747)、Natrialbaaegyptiaca0830—243株(保藏編號(hào)FERMBP—10748)、或者Natrialbaaegyptiaca0831—264株(保藏編號(hào)FERMBP_10749)。18.—種聚一Y—L一谷氨酸生產(chǎn)變異株的篩選方法,其中,至少包括下述(a)(c)的各工序(a)誘變處理具有聚一Y—L—谷氨酸的生產(chǎn)能力的微生物的工序,(b)在母株沒(méi)有形成粘液狀菌落的條件的固體培養(yǎng)條件下培養(yǎng)誘變處理后的該微生物,篩選呈粘液狀的變異株的工序,(c)在液體培養(yǎng)條件下培養(yǎng)在(b)中篩選出的變異株,進(jìn)一步篩選出比母株顯著地生產(chǎn)聚一Y—L—谷氨酸的變異株的工序。1419.一種聚一Y—L一谷氨酸生產(chǎn)變異株的篩選方法,其中,至少包括下述(a)(c)的各工序.(a)誘變處理具有聚一Y—L—谷氨酸的生產(chǎn)能力的微生物的工序,(b)在NaCl濃度為15%(w/v)以下的固體培養(yǎng)條件下培養(yǎng)誘變處理后的該微生物,篩選呈粘液狀的變異株的工序,(c)在液體培養(yǎng)條件下培養(yǎng)在(b)中篩選出的變異株,進(jìn)一步篩選出比母株顯著地生產(chǎn)聚一Y—L—谷氨酸的變異株的工序。20.—種聚一Y—L—谷氨酸交聯(lián)體,其中,具有聚一Y—L一谷氨酸分子之間的交聯(lián)結(jié)構(gòu)。21.根據(jù)20所述的聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體,其中,所述聚一Y—L一谷氨酸的平均分子量為100萬(wàn)以上。22.根據(jù)20所述的聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體,其中,所述聚一Y—L一谷氨酸的平均分子量為200萬(wàn)以上。23.根據(jù)20所述的聚一r"L一谷氨酸交聯(lián)體,其中,所述聚一Y—L一谷氨酸的平均分子量為350萬(wàn)以上。24.根據(jù)2023中任意一項(xiàng)所述的聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體,其中,吸水倍率為IO倍以上、5000倍以下。25.—種水凝膠(hydrogel),其中,含有2024中任意一項(xiàng)所述的聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體而成。26.—種聚一Y—L—谷氨酸交聯(lián)體的制造方法,其中,包括使聚一Y—L—谷氨酸的分子之間交聯(lián)的交聯(lián)工序。27.根據(jù)26所述的聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體的制造方法,其中,在所述交聯(lián)工序中,通過(guò)照射放射線使聚一Y—L—谷氨酸的分子之間交聯(lián)。28.根據(jù)27所述的聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體的制造方法,其中,所述放射線為Y射線。29.根據(jù)26所述的聚一y—L—谷氨酸交聯(lián)體的制造方法,其中,所述交聯(lián)工序中的凝膠化率為50%以上、100%以下。30.根據(jù)26所述的聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體的制造方法,其中,還包括使用Natrialbaaegyptiaca合成所述聚一y—L一谷氨酸的聚一Y一L一谷氨酸合成工序。31.根據(jù)30所述的聚一y—L—谷氨酸交聯(lián)體的制造方法,其中,所述Natrialbaaegyptiaca為從Natrialbaaegyptiaca0830—82株(保藏編號(hào)FERMBP—10747)、Natrialbaaegyptiaca0830—243株(保藏編號(hào)FERMBP—10748)、以及Natrialbaaegyptiaca0831—264株(保藏編號(hào)FERMBP—10749)構(gòu)成的組中選擇的至少一種菌株。32.—種皮膚外用劑,其中,含有聚—Y—L一谷氨酸及聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體中的至少一種。33.根據(jù)32所述的皮膚外用劑,其中,所述皮膚外用劑為化妝品。34.根據(jù)32所述的皮膚外用劑,其中,所述皮膚外用劑為保濕劑。,本發(fā)明的進(jìn)一步的其他目的、特征及優(yōu)點(diǎn)可以利用以下所示的記載明確。另外,可以通過(guò)參照附圖的以下說(shuō)明來(lái)理解本發(fā)明的好處。圖1是表示變異株聚一Y—L—谷氨酸生產(chǎn)率的圖。圖2是表示聚一y—L—谷氨酸Na鹽的IR分析結(jié)果的圖。圖3是表示聚一Y—L一谷氨酸的游離(free)體的IR分析結(jié)果的圖。圖4是表示聚一Y—L—谷氨酸的H—NMR的光譜(500MHz)的圖。圖5是表示在本發(fā)明的實(shí)施例中得到的L一PGA的H—NMR的光譜的圖。圖6是表示在本發(fā)明的實(shí)施例中,使用2重量XL—PGA,Na鹽水溶液得到的L一PGA交聯(lián)體的吸水倍率與在L一PGA交聯(lián)體的制作中照射的Y射線的照射線量之間的關(guān)系的探討結(jié)果的圖。圖7是表示在本發(fā)明的實(shí)施例中,使用2重量XL—PGA*Na鹽水溶液得到的L—PGA交聯(lián)體的吸水倍率與在L一PGA交聯(lián)體的制作中照射的Y射線的照射線量之間的關(guān)系的探討結(jié)果的圖。圖8是表示在本發(fā)明的實(shí)施例中的保濕性評(píng)價(jià)結(jié)果的圖。圖9是表示在本發(fā)明的實(shí)施例中的人皮膚粗糙試驗(yàn)的結(jié)果的圖。具體實(shí)施例方式對(duì)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的說(shuō)明如下所述。其中,本發(fā)明的范圍不被這些說(shuō)明所限制,即使在以下的例示以外,可以在不破壞本發(fā)明的宗旨的范圍內(nèi)適當(dāng)?shù)刈兏?lt;1;聚一Y—L一谷氨酸高生產(chǎn)微生物或其變異株、使用該微生物的聚一Y—L一谷氨酸的制造法及高分子量聚一y—L—谷氨酸〉本發(fā)明的"聚一Y—L—谷氨酸"是指僅由L一谷氨酸構(gòu)成的均聚物。其結(jié)構(gòu)為式(1)所示的結(jié)構(gòu)。在式(1)中,n表示聚一Y—L一谷氨酸的聚合數(shù)。HCOOH9,C—(CH2)2—OH(i)本發(fā)明的"分子量"是指利用支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的分子量換算算出的數(shù)均分子量(Mn)。優(yōu)選為130萬(wàn)以上,更優(yōu)選為200萬(wàn)以上,進(jìn)而優(yōu)選為350萬(wàn)以上。本發(fā)明的"微生物"只要是生產(chǎn)高分子量的聚一Y—L一谷氨酸的微生物即可,沒(méi)有特別限定??梢允褂靡吧偷奈⑸锘蚶眠@些變異株及基因重組技術(shù)造成的微生物。優(yōu)選嗜鹽菌或其誘變處理株。只要具有作為嗜鹽菌的性質(zhì),則可以為嗜熱菌、極端嗜熱菌、嗜冷菌、嗜氧菌、嗜壓菌及低溫生長(zhǎng)菌等。本發(fā)明的嗜鹽菌為要求0.2M以上的NaCl濃度最適宜增殖的原核生物。嗜鹽菌只要是低度嗜鹽菌(以0.2—0.5M的NaCl濃度生長(zhǎng))、中度嗜鹽菌(以0.5—2.5M的NaCl濃度生長(zhǎng))、極端嗜鹽菌(以2.5—5.2M的NaCl濃度生長(zhǎng))即可。優(yōu)選為極端嗜鹽菌。本發(fā)明的"嗜鹽菌"也可以為"古細(xì)菌"。"古細(xì)菌"包括極端嗜鹽古細(xì)菌(有時(shí)也稱為嗜鹽古細(xì)菌)、嗜熱古細(xì)菌、甲垸菌(甲垸生成古細(xì)菌)等,但只要是能夠生產(chǎn)聚一y—L一谷氨酸的古細(xì)菌即可,沒(méi)有特別限定。優(yōu)選極端嗜鹽古細(xì)菌。其中,嗜鹽性古細(xì)菌占了極端嗜鹽菌的大半。極端嗜鹽古細(xì)菌例如可以舉出Halobacterium屬、Haloarcula屬、Haloferax屬、Halococcus屬、Halorubrum屬、Halobaculum屬、Natrialba屬、Natronomonas屬、Natronobacterium屬、Natronococcus屬等,優(yōu)選Natrialba屬,進(jìn)而優(yōu)選Natrialbaaegyptiaca。"粘液狀"是指菌落為粘性狀態(tài),是指內(nèi)含共價(jià)鍵合于多肽鏈的主鏈上的單糖或多糖鏈側(cè)鏈的高分子。本發(fā)明的"粘液狀"是指聚一Y—L—谷氨酸與多糖結(jié)合而成的粘性狀態(tài)的菌落。本發(fā)明的最重要的公開(kāi)內(nèi)容之一是顯著地生產(chǎn)聚一Y—L一谷氨酸的微生物的獲取方法。另外,還有顯著地生產(chǎn)聚一Y—L一谷氨酸的微生物的篩選方法。微生物可以進(jìn)行誘變處理,也可以不進(jìn)行。更優(yōu)選進(jìn)行誘變處理。在本發(fā)明的顯著地生產(chǎn)聚一Y—L一谷氨酸的微生物的獲取方法或篩選方法中,重要的公開(kāi)內(nèi)容為篩選鹽感性高的聚一Y—L一谷氨酸生產(chǎn)微生物。該篩選方法通常只要在難以生產(chǎn)聚一Y—L一谷氨酸的鹽濃度下培養(yǎng)聚一Y—L一谷氨酸生產(chǎn)微生物,以顯示粘液狀的菌落為基準(zhǔn)實(shí)施篩選即可。其中,也可以在該篩選工序之前或篩選工序中,實(shí)施誘變處理。在此所述的"鹽感性"是指微生物對(duì)開(kāi)始聚一Y—L一谷氨酸的生產(chǎn)的鹽濃度的敏感性。鹽感性高的微生物或其變異株是指例如即使在5%20%(W/V)NaCl中也生產(chǎn)聚一y—L一谷氨酸的變異株,優(yōu)選即使在7%15%(W/V)NaCl濃度中也生產(chǎn)聚一r"L—谷氨酸的變異株。鹽是指鈉、鉀、鎂、錳、鈣、鋅及鐵等普通的鹽即可,沒(méi)有必要限定。其中,優(yōu)選鈉。另外,作為誘變處理方法,可以舉出例如利用基因重組的方法、使細(xì)胞或芽孢接觸具有變異原性的藥劑的方法、另外還有照射X射線或Y射線之類的放射線、紫外線等的方法等。作為在使其接觸所述藥劑的方法中使用的藥劑,例如可以舉出N—甲基一N,一硝基一N—亞硝基胍(NTG)、乙基甲烷磺酸(EMS)等垸基化劑。在實(shí)施這些誘變處理的情況下,優(yōu)選誘變處理后的微生物的生存率成為1%以下左右的強(qiáng)度,但沒(méi)有特別限定。篩選得到的微生物或其變異株也可以接著進(jìn)一步篩選能夠用液體培養(yǎng)生產(chǎn)聚一Y—L—谷氨酸的株。18本發(fā)明的更有利的點(diǎn)在于,容易獲得能夠在液體培養(yǎng)中生產(chǎn)聚一Y—L—谷氨酸的微生物或其變異株。不實(shí)施所述篩選方法而實(shí)施利用液體培養(yǎng)的篩選,獲得能夠在液體培養(yǎng)中生產(chǎn)聚一Y—L—谷氨酸的微生物或其變異株,這對(duì)于從業(yè)者而言,是不容易的。這是因?yàn)?,必須將利用固體培養(yǎng)得到的每個(gè)菌落進(jìn)行液體培養(yǎng),來(lái)確認(rèn)其聚—Y—L一谷氨酸的生產(chǎn)量。該操作是天文數(shù)字,事實(shí)上是不可能的,這對(duì)于從業(yè)者而言可以很容易地理解。本發(fā)明人等進(jìn)行了潛心努力,發(fā)現(xiàn)了可以容易地獲得能夠利用液體培養(yǎng)來(lái)生產(chǎn)聚一Y—L—谷氨酸的微生物或其變異株的所述篩選方法。利用本發(fā)明,由于可以用液體培養(yǎng)生產(chǎn)聚一Y—L—谷氨酸,所以聚一Y—L一谷氨酸的工業(yè)化變得容易,因此能夠?qū)Ξa(chǎn)業(yè)的發(fā)展作出很大貢獻(xiàn)。通過(guò)液體培養(yǎng)利用本發(fā)明得到的微生物或其變異株,可以以工業(yè)規(guī)模制造高分子量的聚一Y—L一谷氨酸。液體培養(yǎng)方法只要在能夠使篩選出來(lái)的微生物或其變異株生長(zhǎng),能夠生產(chǎn)高分子量的聚一Y—L—谷氨酸的條件下培養(yǎng)即可,沒(méi)有特別限定。例如在培養(yǎng)篩選出來(lái)的微生物或其變異株時(shí),在利用通常的方法例如110140°C、820分鐘對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行殺菌之后,向培養(yǎng)基中添加變異株。其中,在為極端嗜鹽菌的情況下,由于即使在作為其他微生物不可能生長(zhǎng)的條件的NaCl濃度條件下也可以生長(zhǎng),所以也可以省略殺菌工序。在進(jìn)行液體培養(yǎng)的情況下,只要利用振蕩培養(yǎng)、通氣攪拌培養(yǎng)等進(jìn)行即可。此時(shí)的培養(yǎng)溫度為2550°C,優(yōu)選為3045。C。另外,培養(yǎng)基的pH可以利用氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨、鹽酸、硫酸或它們的水溶液等來(lái)調(diào)整,只要能夠進(jìn)行pH調(diào)整即可,沒(méi)有限定。培養(yǎng)pH為pH5.0—9.0,優(yōu)選以pH6.0—8.5培養(yǎng)即可。另外,培養(yǎng)期間通常為24天左右即可,但只要能夠生產(chǎn)聚一Y—L一谷氨酸即可,沒(méi)有任何限定。另外,也可以根據(jù)微生物或其變異株的生長(zhǎng)特性,在培養(yǎng)時(shí)添加鹽。培養(yǎng)時(shí)的鹽濃度為1030%,優(yōu)選以1525%培養(yǎng)即可。如果這樣地進(jìn)行培養(yǎng),則聚一Y—L一谷氨酸主要被蓄積于菌體外。在從該培養(yǎng)物分離、提取聚一Y—L一谷氨酸時(shí),可以采用公知的方法(1)利用20%以下的鹽水從固體培養(yǎng)物中萃取分離的方法(特開(kāi)平3—30648號(hào)公報(bào))、(2)利用硫酸銅的沉淀法(Throne.B.C.,C.C.Gomez,N.E.NouseandR.D.Housevright:J.Bacterio1.,68巻,307頁(yè),1954年)、(3)醇沉淀法(R.M.Vard,R.F.AndersonandRK.Dean:BiotechnologyandBioengineering,5巻,41頁(yè),1963年)、(4)將交聯(lián)化殼聚糖成形物作為吸附劑的色譜法(特開(kāi)平3—244392號(hào)公報(bào)等)、(5)使用分子超濾膜的分子超濾法、(6)適當(dāng)?shù)亟M合所述(1)(5)的方法等。也可以將這樣地進(jìn)行分離、提取而成的產(chǎn)物作為聚一y—l—谷氨酸的含有液。根據(jù)需要,也可以利用公知的方法實(shí)施噴霧干燥、凍干等操作,形成粉末。以下舉出微生物尤其是Natrialbaaegyptiaca的例子,詳細(xì)記述,但本發(fā)明不被其所限定。以下說(shuō)明的是誘變處理嗜鹽菌尤其是Natrialbaaegyptiaca,從而獲得在液體培養(yǎng)條件下顯著地生產(chǎn)高分子量的聚一Y—L—谷氨酸的微生物或其變異株的方法,使用該微生物或其變異株的聚一Y—L—谷氨酸的制造方法以及高分子量的聚一Y—L—谷氨酸的獲取方法。Natrialbaaegyptiaca被報(bào)道為在固體培養(yǎng)下只生產(chǎn)分子量為10100萬(wàn)左右的聚一Y—L—谷氨酸。另一方面,Natrialbaaegyptiaca在液體培養(yǎng)條件下只能生產(chǎn)少量的聚一r"L一谷氨酸,不容易大量生產(chǎn),同時(shí)得到的聚一Y—L一谷氨酸的分子量也僅為10萬(wàn)(特表2002—517204號(hào)公報(bào)以及F.RHezayen,B.H.A.Rehm,B丄TindallandSteinbuchel,Int丄Syst.E.,51,1133(2001))。即使篩選出能夠在液體培養(yǎng)條件下生產(chǎn)聚一Y—L—谷氨酸的菌株,由于Natrialbaaegyptiaca在固體培養(yǎng)基表面形成粘液狀的菌落,所以菌落與菌落融合,難以分離出單菌落。即使分離出了單菌落,也不得不對(duì)每一株進(jìn)行液體培養(yǎng),以便確認(rèn)聚一Y—L—谷氨酸的有無(wú),這需要龐大的時(shí)間和勞力,直至本發(fā)明都是不可能的。Natrialbaaegyptiaca可以在內(nèi)含10%(w/v)以上的鹽的培養(yǎng)基上生長(zhǎng),但僅限于為了生產(chǎn)聚一Y—L一谷氨酸而添加20X(w/v)以上的鹽的情況。另外,在NaCl濃度為10X(w/v)的固體培養(yǎng)條件下不呈粘液狀。進(jìn)而,與液體培養(yǎng)相比,固體培養(yǎng)的每個(gè)菌體的聚一Y—L—谷氨酸生產(chǎn)量高達(dá)10倍以上。就是說(shuō),本古細(xì)菌為了巧妙地保護(hù)自己不在高溫環(huán)境下發(fā)生脫水現(xiàn)象而生產(chǎn)聚一Y—L—谷氨酸(Appl.Microbiol.Biotechnol"54,319(2000))。本發(fā)明人等進(jìn)行了潛心努力,結(jié)果發(fā)現(xiàn),利用本發(fā)明改良的Natrialbaaegyptiaca在母株幾乎不生產(chǎn)聚一L—谷氨酸的條件,即NaCl濃度為10%(w/v)的液體培養(yǎng)條件下呈粘液狀,在液體培養(yǎng)條件下,比母株更加顯著地生產(chǎn)聚一Y—L—谷氨酸。進(jìn)而,還發(fā)現(xiàn)即使該變異株在液體培養(yǎng)條件下,也會(huì)大量生產(chǎn)高分子量的聚一Y—L一谷氨酸。本發(fā)明不限定于Natrialbaaegyptiaca。g卩,本發(fā)明公開(kāi)了,如果在生產(chǎn)聚一Y—L—谷氨酸的全部嗜鹽菌中,采用與上述相同的篩選方法,則均可以獲得在液體培養(yǎng)條件下比母株更加顯著地生產(chǎn)聚一Y—L—谷氨酸的變異株。利用本發(fā)明,可以獲取過(guò)去不能獲得的變異株。另外,由于嗜鹽菌可以在高鹽條件下生長(zhǎng),所以可以不在無(wú)菌操作下進(jìn)行培養(yǎng)。這有助于培養(yǎng)工序的成本削減,所以是有希望的物質(zhì)生產(chǎn)系統(tǒng)。利用本發(fā)明,由于可以大量地生產(chǎn)聚一Y—L—谷氨酸,所以能夠?qū)Ξa(chǎn)業(yè)的發(fā)展作出很大貢獻(xiàn)。在將這些微生物作為母株,形成提高聚一Y—L—谷氨酸生產(chǎn)量的微生物時(shí),采用的是通常進(jìn)行的誘變處理方法。作為該誘變處理方法,可以舉出例如利用基因重組的方法、使細(xì)胞或芽孢與具有變異原性的藥劑接觸的方法、另外還有照射X射線或Y射線之類的放射線、紫外線等的方法等。作為在使其接觸所述藥劑的方法中使用的藥劑,例如可以舉出N—甲基一N,一硝基一N—亞硝基胍(NTG)、乙基甲烷磺酸(EMS)等烷基化劑。在實(shí)施這些誘變處理的情況下,優(yōu)選誘變處理后的微生物的生存率成為1%以下左右的強(qiáng)度,但沒(méi)有特別限定。例如,用鉑接種環(huán)刮取一鉑接種環(huán)N.aegyptiaca(JCM11194)的單菌落,接菌于3ml的PGA生產(chǎn)液體培養(yǎng)基—1(22.5%NaCl、2%MgS04.7H20、0.20%KC1、3%擰檬酸三鈉(TrisodiumCitrate)、1%酵母提取物(YeastExtract)、0.75%酪蛋白氨基酸(Casami腿cid))/18ml容積試管,在37°C、300rpm下培養(yǎng)3天。將得到的培養(yǎng)液0.5ml接菌于50ml的PGA生產(chǎn)液體培養(yǎng)基一l/500ml容積坂口燒瓶,在37"、180rpm下培養(yǎng)5天。以3000rpm離心得到的培養(yǎng)液5分鐘,收集菌體。向收集得到的菌體中加入lOOmM檸檬酸緩沖液(pH6.0),再次懸浮。反復(fù)進(jìn)行3次該操作。分別加入將已懸浮的溶液的1/10量的飽和NTG溶液(東京化成株式會(huì)社)用滅菌水稀釋成70%、50%、20%、10%而成的溶液,在42。C、150rpm下培養(yǎng)1小時(shí)。處理后,接種于PGA生產(chǎn)瓊脂一1(10%NaCl、2%MgS04'7H20、0.2%KC1、3%擰檬酸三鈉、1%酵母提取物、0.75%酪蛋白氨基酸、2%瓊脂),在37"下培養(yǎng)5天。通過(guò)將條件設(shè)定為生存率在1%以下來(lái)獲得。作為聚一Y—L一谷氨酸高生產(chǎn)株獲得方法,用通常公知的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基例如內(nèi)含肉汁、蛋白胨、大豆粉、酵母提取物、酪蛋白氨基酸或它們的混合物等的培養(yǎng)基或者內(nèi)含必要的營(yíng)養(yǎng)素類的無(wú)機(jī)合成培養(yǎng)基等瓊脂平板培養(yǎng)基,優(yōu)選用PGA生產(chǎn)瓊脂一l培養(yǎng)24天。之后,將在PGA生產(chǎn)瓊脂培養(yǎng)基一1中出現(xiàn)的菌落,分別一一地取到PGA生產(chǎn)瓊脂培養(yǎng)基一1及PGA生產(chǎn)瓊脂培養(yǎng)基—2(22.5%NaCl、2%MgS047H20、0.2%KC1、3%檸檬酸三鈉、1%酵母提取物、0.75%酪蛋白氨基酸、2%瓊脂)這兩個(gè)瓊脂平板培養(yǎng)基,靜置培養(yǎng)24天。可以舉出下述方法在PGA生產(chǎn)瓊脂培養(yǎng)基一l上篩選形成粘液狀菌落的變異株,接著接菌于PGA生產(chǎn)液體培養(yǎng)基一l(22.5%NaCl、2%MgS04'7H20、0.2%KC1、3%檸檬酸三鈉、1%酵母提取物、0.75%酪蛋白氨基酸),在37。C、180rpm下培養(yǎng)4天,對(duì)培養(yǎng)基中的聚一y—L一谷氨酸進(jìn)行定量,由此獲得與野生株相比聚一Y—L一谷氨酸的生產(chǎn)率提高的變異株的方法等。上述方式得到的菌株,作為Natrialbaaegyptiaca0830—82株(保藏機(jī)構(gòu)名獨(dú)立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所專利生物保藏中心,保藏日2006年4月4日,保藏編號(hào)FERMBP—10747)、Natrialbaaegyptiaca0830—243株(保藏機(jī)構(gòu)名獨(dú)立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所專利生物保藏中心,保藏日2006年4月4日,保藏編號(hào)FERMBP—10748)及Natrialbaaegyptiaca0831—264株(保藏機(jī)構(gòu)名獨(dú)立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所專利生物保藏中心,保藏日2006年4月4日,保藏編號(hào)FERMBP一10749),被保藏于獨(dú)立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所專利生物保藏中22心。利用所述的培養(yǎng)基培養(yǎng)聚—Y—L—谷氨酸的生產(chǎn)率提高的變異株時(shí),省略無(wú)菌操作,向培養(yǎng)基中添加變異株。在進(jìn)行液體培養(yǎng)的情況下,優(yōu)選利用振蕩培養(yǎng)、通氣攪拌培養(yǎng)等在好氧條件等下進(jìn)行。此時(shí)的培養(yǎng)溫度為3050°C,優(yōu)選為3045。C。另夕卜,培養(yǎng)基的pH可以利用氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨、鹽酸、硫酸或它們的水溶液等來(lái)調(diào)整,只要能夠進(jìn)行pH調(diào)整即可,沒(méi)有限定。培養(yǎng)pH為5.0—9.0,優(yōu)選以pH6.0—8.5培養(yǎng)。另外,培養(yǎng)期間通常為24天左右即可。另外,培養(yǎng)時(shí)的NaCl濃度為1030%,優(yōu)選以1525%培養(yǎng)。另外,最好在酵母提取物濃度為0.110%、優(yōu)選為0.55.0%濃度下培養(yǎng)。另外,即使在固體培養(yǎng)的情況下,與前期液體培養(yǎng)的情況相同,采用的是培養(yǎng)溫度為305(TC,優(yōu)選為3545°C,培養(yǎng)時(shí)的pH為5.0—9.0,優(yōu)選為pH6.0—8.5,培養(yǎng)時(shí)的NaCl濃度為10一30%,優(yōu)選為15—25%,酵母提取物濃度為0.1—10%,優(yōu)選為0.55%濃度。作為培養(yǎng)液中的聚一Y—L—谷氨酸的定量方法,已知有使用硫酸銅或乙醇使其從內(nèi)含聚一Y—L一谷氨酸的樣品中沉淀,進(jìn)行該沉淀物的重量測(cè)定及利用Kijerder法的總氮的測(cè)定的方法(M.Bovarnick,J.Biol.Chem.,145巻,415頁(yè)(page),1942年);測(cè)定鹽酸水解之后的谷氨酸量的方法(R.D.Housewrigt,C.B.Thorne,J.Bacterio1.,60巻,89頁(yè),1950年);以及利用與堿性色素的定量結(jié)合的比色法(M.Bovamickeral.,J.Biol.Chem.,207巻,593頁(yè),1954年),優(yōu)選利用與堿性色素的定量結(jié)合的比色法。作為堿性染料,可以舉出結(jié)晶紫(crystalviolet)、苯胺藍(lán)(anilinblue)、藏紅(safranine)O、亞甲藍(lán)、甲基紫(methylviolet)、甲苯胺藍(lán)(toluidineblue)、剛果紅(congored)、偶氮卡紅(azocarmine)、硫堇(thionine)、蘇木精(hematoxylin)等,優(yōu)選藏紅O。在從該培養(yǎng)物中分離、提取聚一Y—L一谷氨酸時(shí),只要使用所述的公知的方法即可。例如,離心分離培養(yǎng)液,去除菌體。接著,向得到的上清液中加入3倍量的水進(jìn)行稀釋,然后將pH調(diào)整至3.0。調(diào)整pH之后,在室溫下攪拌5小時(shí)。然后,加入3倍量的乙醇,將聚一Y—L一谷氨酸作為沉淀物收集。使沉淀物溶解于0.1mMTris—HC1緩沖液(pH8.0)中,利用透析除去低分子物質(zhì)。透析后,為了對(duì)得到的液體進(jìn)行核酸除去,進(jìn)行DNase、RNase處理,接著,為了除去蛋白質(zhì),進(jìn)行蛋白酶處理。在蛋白酶處理之后,利用透析除去低分子物質(zhì)。透析后,利用凍干等,得到干燥聚一Y—L—谷氨酸即可。另外,根據(jù)需要,也可以進(jìn)行使用陰離子交換樹(shù)脂來(lái)純化,但也可以在普通的條件下純化。本發(fā)明的最重要的另一個(gè)公開(kāi)內(nèi)容之一是高分子量的聚一Y—L—谷氨酸和其取得方法。可以使用Natrialbaaegyptiaca0830—82株(保藏編號(hào)FERMBP—10747)、Natrialbaaegyptiaca0830—243株(保藏編號(hào)FERMBP—10748)、或者Natrialbaaegyptiaca0831—264株(保藏編號(hào)FERMBP一10749),取得高分子量的聚一Y—L一谷氨酸。可以通過(guò)用所述的方法培養(yǎng)上述3種菌株,純化聚—y—L—谷氨酸,獲得數(shù)均分子量=1,300,000以上的高分子量的聚一L—谷氨酸。這樣的高分子量聚一Y—L—谷氨酸是利用本發(fā)明首次能夠生產(chǎn)的。進(jìn)而,還可以生產(chǎn)200萬(wàn)以上、尤其是350萬(wàn)以上的聚一Y—L—谷氨酸。得到的聚一L—谷氨酸為均一的光學(xué)純度且高分子量的聚一Y—L一谷氨酸,所以也可以優(yōu)選用于化妝品用途等中。<2;聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體、其制造方法以及內(nèi)含其而成的水凝膠>本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體只要具有L一PGA分子之間的交聯(lián)結(jié)構(gòu)即可,對(duì)其他具體結(jié)構(gòu)沒(méi)有特別限定。由于L一PGA只由L一谷氨酸構(gòu)成,所以光學(xué)活性均一,而且每一分子的性質(zhì)也均一。因此,可以穩(wěn)定地得到具有需要質(zhì)量的L一PGA交聯(lián)體。就是說(shuō),本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體是只由L一谷氨酸構(gòu)成的均聚物,其結(jié)構(gòu)具有所述式(1)所示的結(jié)構(gòu)。在本說(shuō)明書中,"交聯(lián)結(jié)構(gòu)"是指直鏈狀的高分子化合物的分子之間利用物理或化學(xué)方法連接而成的結(jié)構(gòu)。另外,在本說(shuō)明書中,"交聯(lián)體"是指通過(guò)具有交聯(lián)結(jié)構(gòu)而物理、化學(xué)性質(zhì)改變的高分子化合物。在本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體中,L—PGA的分子之間利用共價(jià)鍵連接成3維狀。具體而言,在L一PGA的分子之間,通過(guò)所述式(1)中的H以外的任意一個(gè)元素之間共價(jià)鍵合,L一PGA分子之間被連接成3維狀。換言之,本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體為L(zhǎng)一PGA分子之間連成3維狀的聚合物,即,將L一PGA作為構(gòu)成分子的網(wǎng)狀聚合物。此外,在L一PGA的分子之間,一個(gè)L一PGA分子中的所述式(1)所示的N與另一個(gè)L一PGA的分子中的所述式(1)的最右端所示的C進(jìn)行鍵合而成的是L一PGA分子之間的聚合,而不是指"交聯(lián)結(jié)構(gòu)"。本發(fā)明中的構(gòu)成L一PGA交聯(lián)體的L—PGA的平均分子量只要該分子之間交聯(lián)即可,沒(méi)有限定,優(yōu)選為100萬(wàn)以上,進(jìn)而優(yōu)選為200萬(wàn)以上,更優(yōu)選為350萬(wàn)以上。如果分子量為100萬(wàn)以上,則從作為原料的L一PGA制造水凝膠時(shí)的凝膠化率提高,所以可以提高水凝膠的收率。L—PGA的平均分子量越高,則得到的L—PGA交聯(lián)體的吸水倍率越提高。所以,對(duì)本發(fā)明中的構(gòu)成L一PGA交聯(lián)體的L一PGA的平均分子量的上限值沒(méi)有特別限定。其中,如果利用后述的L—PGA的制造方法,則可以得到例如平均分子量600萬(wàn)、最大1500萬(wàn)的L一PGA。此外,在本說(shuō)明書中,"平均分子量"是指用支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的分子量換算算出的數(shù)均分子量(Mn)。對(duì)本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體的吸水倍率沒(méi)有特別限定,而如果利用后述的本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體的制造方法,則可以很好地得到例如IO倍以上、5000倍以下,特別是1900倍以上、4400倍以下的吸水倍率。尤其作為將PGA作為材料的吸水性樹(shù)脂,吸水倍率大于3300倍的吸水性樹(shù)脂是在上述專利文獻(xiàn)1中即使使用DL—PGA也不能得到的劃時(shí)代的PGA性的生物降解性吸水性樹(shù)脂。此外,在本說(shuō)明書中,"吸水倍率"是指物質(zhì)含有水等親水性液體而溶脹引起的重量的增加率。例如如下所述地算出本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體的吸水倍率即可。SP,可以將L—PGA交聯(lián)體的粉末加入足以溶脹該L一PGA交聯(lián)體的量的水中,在4'C下靜置1周,使其充分地溶脹,然后用80目的金網(wǎng)甩去水,之后用L一PGA的濕重量減去該L一PGA交聯(lián)體的粉末的干燥重量,用該L—PGA交聯(lián)體的粉末的干燥重量除所得的值,由此算出吸水倍率。另外,本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體優(yōu)選為僅由L一PGA構(gòu)成的交聯(lián)體,但也可以含有DL—PGA分子或D—PGA分子。其中,為了使制造的每個(gè)L一PGA交聯(lián)體的質(zhì)量穩(wěn)定,其含量?jī)?yōu)選為0重量%以上、20重量%以下。本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體的制造方法只要包括使L—PGA的分子之間交聯(lián)的交聯(lián)工序即可。將僅由L一谷氨酸構(gòu)成的旋光性均一的L一PGA作為原料,通過(guò)使其交聯(lián),可以使L一PGA交聯(lián)體的每個(gè)分子的性質(zhì)成為均一。因而,可以穩(wěn)定地制造具有需要質(zhì)量的L一PGA交聯(lián)體。只要在使L一PGA溶解于溶劑中制作L一PGA的溶液的基礎(chǔ)上,將其提供到交聯(lián)反應(yīng)即可。作為使L一PGA溶解的溶劑,只要能夠溶解L—PGA即可,沒(méi)有限定,但例如可以舉出水、醇、丙酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯等,其中,優(yōu)選水、甲醇、乙醇,進(jìn)而優(yōu)選水。對(duì)在這些溶劑中溶解時(shí)的L一PGA的濃度沒(méi)有特別限定,優(yōu)選為1重量%以上、10重量%以下,進(jìn)而優(yōu)選為2重量%以上、8重量%以下,特別優(yōu)選為2重量%以上、7重量%以下。另外,對(duì)L一PGA的溶液的pH沒(méi)有特別限定,優(yōu)選為5.0以上、9.0以下,進(jìn)而優(yōu)選為pH6.0以上、8.0以下。如果向L一PGA的溶液實(shí)施交聯(lián)反應(yīng),則在該溶液中形成L一PGA的交聯(lián)體,通過(guò)該L一PHA交聯(lián)體含有該溶劑而溶脹,可以得到水凝膠。這是后述的本發(fā)明中的水凝膠的方式之一。進(jìn)而,通過(guò)凍干該水凝膠等,通過(guò)除去溶劑成分,可以得到不含有該溶劑成分的L—PGA交聯(lián)體。此外,本發(fā)明中的水凝膠如后所述。如果利用本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體的制造方法,在所述的交聯(lián)反應(yīng)中,例如可以以50%以上、100%以下,尤其是70%以上、100%以下的凝膠化率得到L一PGA。此外,在本說(shuō)明書中,"凝膠化率"是指利用交聯(lián)反應(yīng)形成交聯(lián)體的L一PGA的重量相對(duì)作為原料使用的L一PGA的重量的百分率。換言之,"凝膠化率"表示得到的L—PGA交聯(lián)體以至于水凝膠相對(duì)于作為原料而使用的L一PGA的收率。具體而言,用提供于該交聯(lián)反應(yīng)的L一PGA的干燥重量除利用交聯(lián)反應(yīng)而得到的水凝膠的干燥重量所得的數(shù)值乘以一百,由此,算出凝膠化率。L一PGA的交聯(lián)反應(yīng)的方法只要能夠使L一PGA的分子之間交聯(lián)即可,沒(méi)有特別限定,只要用過(guò)去公知的方法進(jìn)行即可。例如,可以使用交聯(lián)劑,也可以使用放射線,但其中,優(yōu)選使用放射線。如果使用放射線,則在交聯(lián)反應(yīng)之后,不需要除去交聯(lián)劑的操作,可以制造高純度的L—PGA交聯(lián)體。作為在本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體的制造方法中可以使用的放射線,沒(méi)有特別限定,只要使用(x射線、(3射線、y射線、電子射線、中子射線、X射線等即可。其中,優(yōu)選Y射線。Y射線只要使用例如將鈷60作為線源的照射裝置等過(guò)去公知的方法、儀器使其發(fā)生即可。另外,向L一PGA照射的放射線的照射線量?jī)?yōu)選為0.5kGy以上、20kGy以下,進(jìn)而優(yōu)選為2kGy以上、10kGy以下,特別優(yōu)選為3kGy以上、7kGy以下,但也可以根據(jù)制造的L一PGA交聯(lián)體的用途等適當(dāng)?shù)卦O(shè)定。通常照射線量越多,則越可以得到硬質(zhì)的水凝膠,照射線量越少,則越可以得到軟質(zhì)的水凝膠。例如,在照射線量為lkGy、3kGy的情況下,可以得到即使放置于平板上也可以自然地向水平方向擴(kuò)展的流動(dòng)性高的水凝膠,在照射線量為5kGy、7kGy時(shí),可以得到即使放置于平板上也不會(huì)向水平方向擴(kuò)展的可以靜置的流動(dòng)性低的水凝膠。另外,在L一PGA的交聯(lián)中使用放射線的情況下,只要將L一PGA的溶液放入放射線透過(guò)性容器中使用即可。作為放射線透過(guò)性容器,沒(méi)有特別限定,例如可以使用玻璃制微量瓶(vial)等玻璃制容器等。在將L一PGA的溶液放入放射線透過(guò)性容器之后,也可以直接照射放射線,但優(yōu)選預(yù)先對(duì)該溶液使用氮鼓泡(nitrogenbubbling)。通過(guò)除去在該溶液中含有的氧,可以防止妨礙交聯(lián)反應(yīng)。此外,在L—PGA的交聯(lián)中使用交聯(lián)劑的情況下,只要使用環(huán)氧化合物、含羧酸基及/或羧酸酯基的多糖、氨基酸等過(guò)去公知的交聯(lián)劑即可,沒(méi)有特別限定。例如,作為環(huán)氧化合物,可以舉出甘油三縮水甘油基醚、二一甘油聚縮水甘油基醚、聚一甘油聚縮水甘油基醚、聚氧乙烯山梨糖醇聚縮水甘油基醚,作為多糖類,可以舉出葡萄糖、果糖、半乳糖及葡萄糖醛酸構(gòu)成的混合物、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖及葡萄糖醛酸構(gòu)成的混合物、以及以透明質(zhì)酸為主要成分的多聚羧酸,作為氨基酸,可以舉出聚天冬氨酸、聚賴氨酸、天冬氨酸、賴氨酸、精氨酸以及它們的混合物。它們可以單獨(dú)使用,也可以適當(dāng)?shù)鼗旌鲜褂?種以上。作為在本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體的制造方法中使用的L一PGA,只要L一PGA分子之間能夠交聯(lián),則沒(méi)有限定,但如上所述,優(yōu)選為平均分子量大的L一PGA。另外,在本發(fā)明中的L—PGA交聯(lián)體的制造方法中使用的L一PGA也可以為鹽的狀態(tài),例如可以使用鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽等。其中,優(yōu)選鈉鹽。作為在本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體的制造方法中使用的L—PGA,只要使用利用過(guò)去公知的各種方法得到的L一PGA即可,例如只要使用利用生產(chǎn)L一PGA的微生物而得到的L—PGA即可。作為生產(chǎn)L一PGA的微生物,只要是合成L一PGA的微生物即可,沒(méi)有限定,只要使用生產(chǎn)L—PGA的微生物的野生型、其變異株或利用基因重組技術(shù)賦予或強(qiáng)化了L一PGA的生產(chǎn)能力的微生物即可。其中,使用在嗜鹽菌、優(yōu)選在嗜鹽古細(xì)菌、進(jìn)而優(yōu)選在極端嗜鹽古細(xì)菌中具有L—PGA的生產(chǎn)能力的微生物。另外,作為極端嗜鹽古細(xì)菌,例如可以舉出極嗜鹽菌屬(Halobacterium屬)、親鹽桿菌屬(Haloarcula屬)、富鹽桿菌屬(Haloferax屬)、鹽球?qū)?Halococcus屬)、鹽紅菌屬(Halorubrum屬)、鹽棒菌屬(Halobaculum屬)、鹽無(wú)色菌屬(Natrialba屬)、鹽堿古菌屬(Natronomonas屬)、嗜鹽堿桿菌屬(Natronobacterium屬)、鹽堿球菌屬(Natronococcus屬)等,優(yōu)選鹽無(wú)色菌屬(Natrialba屬),進(jìn)而優(yōu)選Natrialbaaegyptiaca,進(jìn)而優(yōu)選使用由Natrialbaaegyptiaca0830—82株(保藏編號(hào)FERMBP—10747)、Natrialbaaegyptiaca0830—243株(保藏編號(hào)FERMBP—10748)、或者Natrialbaaegyptiaca0831—264株(保藏編號(hào)FERMBP—10749)構(gòu)成的組中選擇的至少一種菌株。如果使用N.aegyptiaca,則可以得到分子量更大的L—PGA。尤其N.aegyptiacaFERMBP—10747、N.aegyptiacaFERMBP—10748、N.aegyptiacaFERMBP—10749的任意一種菌株均可以在液體培養(yǎng)條件下合成平均分子量100萬(wàn)以上的L一PGA。因而,L一PGA的交聯(lián)體的收率好,另外,L一PGA的制造效率也好。此外,N.aegyptiacaFERMBP—10747、N.aegyptiacaFE畫BP—10748以及N.aegyptiacaFERMBP—10749是本發(fā)明人等基于后述的實(shí)施例2中記載的篩選方法及誘變處理方法,獨(dú)自發(fā)現(xiàn)的N.aegyptiaca的變異株。這樣,在本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體的制造方法中,也可以基于所述篩選方法及/或誘變處理方法,篩選并使用生產(chǎn)平均分子量大的L一PGA的N.aegyptiaca。其中,在本說(shuō)明書中,在簡(jiǎn)單地記載成"N.aegyptiaca"時(shí),其意義也包括N.aegyptiaca的變異株。以下對(duì)使用N.aegyptiaca作為L(zhǎng)—PGA的制造方法的一個(gè)實(shí)施方式的情況進(jìn)行說(shuō)明,但不限定于此。培養(yǎng)N.aegyptiaca的培養(yǎng)基可以生長(zhǎng)該N.aegyptiaca,而且只要是可以合成L一PGA的培養(yǎng)基即可,沒(méi)有特別限定,優(yōu)選為液體培養(yǎng)基。如果使用液體培養(yǎng)基,貝抽于可以大量地培養(yǎng)N.aegyptiaca,所以極大地提高了L一PGA的制造效率。在N.aegyptiaca的培養(yǎng)中使用的培養(yǎng)基的成分只要含有N.aegyptiaca可以攝取的碳源及無(wú)機(jī)鹽類即可,只要根據(jù)需要添加酵母提取物等其他營(yíng)養(yǎng)物即可。例如,在后述的實(shí)施例中,本發(fā)明人等使用22.5%NaCl、2%MgS04'7H20、0.2%KC1、3%檸檬酸三鈉、1%酵母提取物、0.75%酪蛋白氨基酸的培養(yǎng)基,培養(yǎng)N.aegyptiacaFERMBP—10749。此外,在向培養(yǎng)基中添加酵母提取物的情況下,其濃度優(yōu)選為0.1重量%以上、10重量%以下,進(jìn)而優(yōu)選為0.5重量%以上、5.0重量%以下。由于N.aegyptiaca是極端嗜鹽菌,所以也可以與在L一PGA的制造中使用的N.aegyptiaca的生長(zhǎng)特性相對(duì)應(yīng),向培養(yǎng)基中添加鹽。只要以培養(yǎng)時(shí)的鹽濃度為10重量%以上、30重量%以下,優(yōu)選為15重量%以上、25重量%以下培養(yǎng)即可。對(duì)N.aegyptiaca的培養(yǎng)中使用的培養(yǎng)基的pH沒(méi)有特別限定,但優(yōu)選為5.0以上、10以下,進(jìn)而優(yōu)選為6.0以上、8.5以下。此外,pH的調(diào)整中只要使用氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨、鹽酸、硫酸、它們的水溶液即可,只要能夠調(diào)整pH即可,沒(méi)有限定。在制作培養(yǎng)基之后,只要在用通常的方法殺菌之后,添加用于生產(chǎn)L一PGA的N.aegyptiaca來(lái)培養(yǎng)即可。此外,培養(yǎng)基的殺菌只要用過(guò)去公知的方法進(jìn)行即可,例如在11014(TC下進(jìn)行820分鐘即可。此外,通過(guò)使培養(yǎng)基的NaCl濃度成為飽和濃度,也可以省略殺菌工序。這是因?yàn)椋缟纤?,由于N.aegyptiaca為極端嗜鹽菌,所以即使在飽和濃度的NaCl存在下也可以生長(zhǎng),而其他微生物則不可能生長(zhǎng)。在液體培養(yǎng)N.aegyptiaca的情況下,優(yōu)選進(jìn)行振蕩培養(yǎng)、通氣攪拌培養(yǎng)。另外,對(duì)培養(yǎng)溫度沒(méi)有特別限定,優(yōu)選為25"以上、5(TC以下,進(jìn)而優(yōu)選為30。C以上、45'C以下。N.aegyptiaca的培養(yǎng)期間只要對(duì)應(yīng)于其他培養(yǎng)條件、目標(biāo)L一PGA生產(chǎn)量來(lái)適當(dāng)?shù)卦O(shè)定即可,沒(méi)有特別限定,例如為24天左右即可。如果基于所述的培養(yǎng)條件等進(jìn)行N.aegyptiaca的培養(yǎng),則L一PGA主要被蓄積于菌體外。對(duì)從培養(yǎng)N.aegyptiaca之后的培養(yǎng)基分離、收集L一PGA的方法沒(méi)有特別限定,只要使用過(guò)去公知的方法即可。具體而言,可以使用在所述<1>欄中記載的(1)(6)的方法。以下對(duì)從培養(yǎng)N.aegyptiaca之后的培養(yǎng)基分離、收集L一PGA的方法的一例進(jìn)行說(shuō)明,但不限定于此。首先,利用離心分離等,從培養(yǎng)N.aegyptiaca之后的培養(yǎng)液去除菌體,接著,多所得到的上清,加入乙醇等低級(jí)醇,使L—PGA沉淀即可。該沉淀物優(yōu)選在使其適當(dāng)?shù)厝芙庥诰彌_液中的基礎(chǔ)上利用透析等除去雜質(zhì)。此外,如后述的實(shí)施例所示,本發(fā)明人等向收集菌體后的上清中加入3倍量的水,進(jìn)行稀釋,迸而將pH調(diào)整成3.0,之后在室溫下攪拌5小時(shí),在此基礎(chǔ)上通過(guò)加入3倍量的乙醇收集沉淀物。另外,使該沉淀物溶解于O.lmMTris—HCl緩沖液(pH8.0),通過(guò)對(duì)其進(jìn)行透析,除去雜質(zhì)。認(rèn)為由于即使進(jìn)行了透析,也混入了核酸或蛋白質(zhì),所以優(yōu)選進(jìn)行DNase.、RNase處理、蛋白酶處理等。另外,在這些處理之后,通過(guò)進(jìn)一步進(jìn)行透析等純化處理,可以得到純度更高的L一PGA。利用以上,可以得到內(nèi)含L一PGA的溶液。進(jìn)而,對(duì)得到的溶液進(jìn)行凍干等,可以得到粉末狀的L一PGA交聯(lián)體。另外,根據(jù)需要,也可以進(jìn)行該溶液的純化。純化可以利用過(guò)去公知的方法進(jìn)行,例如可以進(jìn)行所述的透析,只要使用陰離子交換樹(shù)脂即可。30此外,在制造內(nèi)含DL—PGA分子或D—PGA分子的L一PGA交聯(lián)體的情況下,在所述的L一PGA的溶液中混合DL—PGA分子及/或D—PGA分子的基礎(chǔ)上,向所述的交聯(lián)反應(yīng)中提供該溶液即可。本發(fā)明中的水凝膠含有所述的本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體而成。本發(fā)明中的水凝膠由于內(nèi)含L—PGA交聯(lián)體而成,所以為無(wú)色透明,還具有生物降解性。此外,在本說(shuō)明書中,"水凝膠"是指通過(guò)聚合物內(nèi)含水等溶劑進(jìn)行溶脹形成的凝膠。換言之,是以聚合物和溶劑等水分作為主要成分的聚合物的溶劑溶脹體。水凝膠是含有大量的水、處于液體與固體的中間狀態(tài)的物質(zhì),在流動(dòng)性方面與液體不同。另外,即使進(jìn)行擠壓等加壓,水凝膠中的溶劑也不會(huì)滲出。就是說(shuō),本發(fā)明中的水凝膠可以說(shuō)是以L—PGA交聯(lián)體與溶劑為主要成分的溶劑溶脹體。如本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體的制造方法中所述,本發(fā)明中的水凝膠可以通過(guò)向在水等溶劑中溶解L一PGA所得的溶液實(shí)施交聯(lián)反應(yīng)而得到。另外,通過(guò)向所述的粉末狀的L一PGA交聯(lián)體中加入水等溶劑,可以得到本發(fā)明中的水凝膠。此時(shí),只要在使該溶劑的量為少量的基礎(chǔ)上得到水凝膠,就能夠得到可以進(jìn)一步吸收水等溶劑的吸水性出色的水凝膠。另外,在本發(fā)明中的構(gòu)成水凝膠的L一PGA交聯(lián)體中吸收的溶劑由于不從該水凝膠滲出,所以本發(fā)明中的水凝膠的保濕性出色。本發(fā)明中的水凝膠也可以均一地造粒成規(guī)定的形狀,另外,也可以為不定形破碎狀、球狀等。另外,不僅可以在衛(wèi)生領(lǐng)域,而且還可以用于多種多樣的領(lǐng)域。例如,可以用作作為保濕劑的化妝品、紙尿片等衛(wèi)生用品、體液吸收體等醫(yī)療品等,還可以用作土壤改良劑。作為保濕劑的化妝品,可以舉出面部護(hù)理制品、手部護(hù)理制品、身體護(hù)理制品、頭部護(hù)理制品以及頭發(fā)護(hù)理制品、指甲護(hù)理制品或嘴部護(hù)理制叩寺o以下顯示實(shí)施例,進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式。當(dāng)然,本發(fā)明不限定于以下實(shí)施例,具體細(xì)節(jié)可以為各種方式。進(jìn)而,本發(fā)明不限定于31所述的實(shí)施方式,可以在發(fā)明范圍內(nèi)進(jìn)行各種變更,本發(fā)明的技術(shù)范圍也包括適當(dāng)?shù)亟M合公開(kāi)的各技術(shù)手段得到的實(shí)施方式。<3;皮膚外用劑>本發(fā)明中的皮膚外用劑只要含有L—PGA及L一PGA交聯(lián)體中的至少一種即可,其他具體結(jié)構(gòu)不被特別限定。L一PGA由于是L一谷氨酸結(jié)合而成的,所以旋光性均一,每個(gè)分子的性質(zhì)也均一。因而,也能以理想的質(zhì)量穩(wěn)定地制造從L一PGA得到的L一PGA交聯(lián)體。因此,通過(guò)使用L一PGA及L一PGA交聯(lián)體中的至少一種,可以穩(wěn)定地提供具有理想質(zhì)量的皮膚外用劑。進(jìn)而,由于L一PGA及L一PGA交聯(lián)體的保濕性出色,所以本發(fā)明中的皮膚外用劑可以優(yōu)選用作保濕劑及/或化妝品。在將本發(fā)明中的皮膚外用劑用作保濕劑的情況下,具體而言,可以優(yōu)選用作面部護(hù)理制品、手部護(hù)理制品、體部護(hù)理制品、頭部護(hù)理制品以及頭發(fā)護(hù)理制品、指甲護(hù)理制品或嘴部護(hù)理制品等。另外,將本發(fā)明中的皮膚外用劑用作化妝品的情況下,具體而言,可以優(yōu)選用作乳液、美容液、霜、化妝水、洗面品、卸妝品等臉部護(hù)理制品,手部護(hù)理制品,除此以外,還有身體護(hù)理制品、足部護(hù)理制品、頭部護(hù)理制品以及頭發(fā)護(hù)理制品、指甲護(hù)理制品或嘴部護(hù)理制品等。此外,在本說(shuō)明書中,"皮膚"是指臉、頸、胸、背、手臂、腳、手及頭皮的皮膚。另外,在本說(shuō)明書中,"皮膚外用劑"是指為了改善干燥、粗糙皮膚等皮膚狀態(tài)或者抑制皮膚狀態(tài)的惡化而使用的物質(zhì)。(L—PGA)本發(fā)明中的皮膚外用劑中內(nèi)含的L一PGA是結(jié)合有L一谷氨酸而成的均聚物,其結(jié)構(gòu)具有所述式(1)所示的結(jié)構(gòu)。作為本發(fā)明中的皮膚外用劑中內(nèi)含的L一PGA的平均分子量,只要對(duì)應(yīng)皮膚外用劑的用途等適當(dāng)?shù)剡x擇即可,優(yōu)選為130萬(wàn)以上,更優(yōu)選為200萬(wàn)以上,進(jìn)而優(yōu)選為350萬(wàn)以上。L一PGA的平均分子量越高,則內(nèi)含該L一PGA的皮膚外用劑的保濕性越提高。因此,對(duì)L一PGA的平均分子量的上限值沒(méi)有特別限定。此外,如果利用后述的L—PGA的制造方法,則可以得到平均分子量600萬(wàn)、最大1500萬(wàn)的L一PGA。此外,所述"平均分子量"如上述<1>欄的定義所述。作為本發(fā)明中的皮膚外用劑中內(nèi)含的L一PGA,只要使用利用過(guò)去公知的各種方法得到的L一PGA即可,例如只要使用生產(chǎn)L一PGA的微生物(以下簡(jiǎn)單地記載成"L一PGA生產(chǎn)微生物")得到的L一PGA即可。(L一PGA生產(chǎn)微生物)作為L(zhǎng)一PGA生產(chǎn)微生物,只要是合成L一PGA的微生物即可,沒(méi)有限定,只要使用L一PGA生產(chǎn)微生物的野生型、其變異株或利用基因重組技術(shù)賦予或強(qiáng)化了L一PGA的生產(chǎn)能力的微生物即可。具體而言,可以很好地使用所述<1>、<2>欄中記載的L一PGA生產(chǎn)微生物。此外,過(guò)去在液體培養(yǎng)條件下難以篩選PGA生產(chǎn)微生物。這是因?yàn)?,如果N.aegyptiaca在固體培養(yǎng)基表面形成粘液狀的菌落,則由于菌落之間融合,所以難以分離單菌落。進(jìn)而,即使可以分離單菌落,也不得不對(duì)每一株進(jìn)行液體培養(yǎng),來(lái)確認(rèn)L一PGA的有無(wú),所以需要龐大的時(shí)間和勞力。就是說(shuō),本發(fā)明中的皮膚外用劑是通過(guò)使用利用本發(fā)明人等獨(dú)自發(fā)現(xiàn)的篩選方法得到的高分子量的L一PGA生產(chǎn)菌才開(kāi)始成為可能的全新的皮膚外用劑。(L一PGA的制造方法)L一PGA的制造方法可以優(yōu)選使用上述<1>、<2>欄中記載的方法,因此在此省略對(duì)其說(shuō)明??梢岳靡陨戏绞降玫絻?nèi)含L一PGA的溶液。進(jìn)而,如果對(duì)得到的溶液進(jìn)行凍干等,則可以得到粉末狀的L一PGA交聯(lián)體。另外,根據(jù)需要,也可以進(jìn)一步進(jìn)行該溶液的純化。純化只要用過(guò)去公知的方法進(jìn)行即可,例如可以進(jìn)行上述的透析,只要使用陰離子交換樹(shù)脂即可。(L一PGA交聯(lián)體)本發(fā)明中的皮膚外用劑中內(nèi)含的L一PGA交聯(lián)體只要具有L—PGA分子之間的交聯(lián)結(jié)構(gòu)即可,對(duì)其他具體結(jié)構(gòu)沒(méi)有特別限定。對(duì)所述"交聯(lián)結(jié)構(gòu)"及"交聯(lián)體"的定義與上述<2>欄相同。構(gòu)成本發(fā)明中的皮膚外用劑中內(nèi)含的L一PGA交聯(lián)體的L一PGA的平均分子量只要其分子之間交聯(lián)即可,沒(méi)有限定,優(yōu)選為100萬(wàn)以上,更優(yōu)選為200萬(wàn)以上,進(jìn)而優(yōu)選為350萬(wàn)以上。如果分子量為IOO萬(wàn)以上,則從作為原料的L一PGA制造水凝膠時(shí)的凝膠化率提高,所以可以提高水凝膠的收率。L一PGA的平均分子量越高,則得到的L一PGA交聯(lián)體的吸水倍率越提高。因此,對(duì)構(gòu)成本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體的平均分子量的上限值沒(méi)有特別限定。對(duì)本發(fā)明中的皮膚外用劑中內(nèi)含的L一PGA交聯(lián)體的吸水倍率沒(méi)有特別限定,而如果利用后述的本發(fā)明中的L—PGA交聯(lián)體的制造方法,則可以很好地得到例如IO倍以上、5000倍以下,特別是1900倍以上、4400倍以下的吸水倍率。尤其作為將PGA作為材料的吸水性樹(shù)脂,吸水倍率大于3300倍的吸水性樹(shù)脂是在所述專利文獻(xiàn)2中即使使用DL—PGA也不能得到的劃時(shí)代的PGA性的生物降解性吸水性樹(shù)脂。所述"吸水倍率"如上述<2>欄所述。此外,作為本發(fā)明中的皮膚外用劑中內(nèi)含的L一PGA交聯(lián)體,優(yōu)選為只由L一PGA構(gòu)成的交聯(lián)體,但也可以含有DL—PGA分子或D—PGA分子。其中,為了使制造的每個(gè)L一PGA交聯(lián)體的質(zhì)量穩(wěn)定,其含量?jī)?yōu)選為0重量%以上、20重量0/^以下。本發(fā)明中的皮膚外用劑中內(nèi)含的L一PGA交聯(lián)體的制造方法只要包括使L—PGA的分子之間交聯(lián)的交聯(lián)工序即可,具體而言,與所述<2>欄的說(shuō)明相同。作為為了制造本發(fā)明中的皮膚外用劑中內(nèi)含的L一PGA交聯(lián)體而使用的L一PGA,只要使用利用過(guò)去公知的各種方法得到的L一PGA即可,例如只要使用所述的L一PGA即可。此外,在制造內(nèi)含DL—PGA分子或D—PGA分子的L一PGA交聯(lián)體的情況下,在所述的L一PGA的溶液中混合DL—PGA分子及/或D—PGA分子的基礎(chǔ)上,向所述的交聯(lián)反應(yīng)中提供該溶液即可。作為本發(fā)明中的皮膚外用劑中內(nèi)含的L一PGA交聯(lián)體,也可以使用內(nèi)含L一PGA交聯(lián)體而形成的水凝膠。具體而言,例如可以使用上述<2>欄34記載的內(nèi)容。(皮膚外用劑的組成)對(duì)本發(fā)明中的皮膚外用劑中內(nèi)含的L—PGA及L一PGA交聯(lián)體中的至少一種的濃度沒(méi)有特別限定,在只含有L一PGA的情況下,優(yōu)選為0.0000130重量%,進(jìn)而優(yōu)選為0.000120重量%,在只含有L一PGA交聯(lián)體的情況下,優(yōu)選為0.0000130重量%,進(jìn)而優(yōu)選為0.000120重量%,在含有L一PGA及L一PGA交聯(lián)體的情況下,其總量?jī)?yōu)選為0.0000130重量%,進(jìn)而優(yōu)選為0.000120重量%。如果在該范圍內(nèi),則臭味少,色調(diào)也好。進(jìn)而,還由于發(fā)揮高保濕性,所以作為保濕劑及/或化妝品,可以得到更有用的皮膚外用劑。本發(fā)明中的皮膚外用劑只要將L—PGA及L一PGA交聯(lián)體中的至少一種溶解于過(guò)去公知的溶劑來(lái)制作即可。作為在本發(fā)明中的皮膚外用劑的制作中使用的溶劑,沒(méi)有特別限定,只要使用水等即可。另外,也可以根據(jù)使用目的等,在不破壞本發(fā)明的效果的范圍內(nèi),適當(dāng)?shù)叵虮景l(fā)明中的皮膚外用劑中添加通常在化妝品、醫(yī)藥輔助品、醫(yī)藥品等皮膚外用劑中通常使用的添加劑,例如烴類、油脂類等油性成分,蠟類、硅酮類、醇類、脂肪酸、抗氧劑、抗菌劑、紫外線吸收劑、藥劑、凈化水等水性成分,植物的提取物、中和劑、L一PGA及L一PGA交聯(lián)體以外的保濕劑,增稠劑、防腐劑、表面活性劑、香料、著色劑、各種皮膚營(yíng)養(yǎng)劑等添加物。以下舉出這些添加物的具體例,但不限定于此。另外,這些添加物可以單獨(dú)使用,也可以混合使用2種以上。作為上述烴類,例如可以舉出液體石蠟、三十碳垸、微晶蠟、地蠟(ceresinewax)、石蠟、凡士林等。作為上述油脂類,例如可以舉出鱷梨油(avocadooil)、山茶油、澳洲堅(jiān)果(macadamianut)油、橄欖油、羊毛脂、蓖麻油、橄欖油、葡萄籽油、可可油、椰子油、樹(shù)蠟、荷荷巴油等植物油脂類。作為上述蠟類,例如可以舉出荷荷巴油、巴西棕櫚蠟、小燭樹(shù)蠟(candelillawax)、蜂蠟、鯨蠟等。作為上述硅酮類,例如可以舉出二甲基聚硅氧烷、甲基苯基硅氧烷等。作為上述醇類,例如可以舉出辛醇、月桂醇、肉豆蔻醇、鯨蠟醇、膽固醇、植物甾醇、鯨蠟醇(cetanol)、硬脂醇、己基肉桂醛(hexyld函ol)、辛基十二烷醇等高級(jí)醇類,乙醇等低級(jí)醇類。作為上述脂肪酸,例如可以舉出癸酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、山崳酸、羊毛脂脂肪酸、亞油酸、亞麻酸、月桂酸、油酸、異硬脂酸等高級(jí)脂肪酸等。作為上述抗氧劑,例如可以舉出丁基羥基甲苯、生長(zhǎng)酚、非丁等。作為上述抗菌劑,例如可以舉出上述苯甲酸、水楊酸、山梨酸、對(duì)羥基苯甲酸烷基酯、六氯雙酚基甲烷等。作為上述紫外線吸收劑,例如可以舉出對(duì)氨基苯甲酸系紫外線吸收劑、氨茴酸系紫外線吸收劑、水楊酸系紫外線吸收劑、桂皮酸系紫外線吸收劑、二苯甲酮系紫外線吸收劑、糖系紫外線吸收劑、3—(4'一甲基亞芐基)一d—樟腦、3—亞芐基一d、l一樟腦、尿刊酸、尿刊酸乙酯、2—苯基一5一甲基苯并噁唑、2,2'—羥基—5—甲基苯基苯并三唑、2—(2,一羥基一5,一叔辛基苯基)苯并三唑、2—(2,一羥基一5'—甲基苯基)苯并三唑、i^Oif,-y、聯(lián)茴香酰甲烷、4一甲氧基一4'一叔丁基苯甲?;综?、5—(3,3—二甲基一2—降冰片烯基)—3—戊垸一2—酮等。作為藥劑,例如可以舉出甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、天門冬氨酸、天門冬酰胺、谷氨酰胺、?;撬?、精氨酸、組氨酸等氨基酸,或者,它們的堿金屬鹽和鹽酸鹽;酰替肌氨酸(例如月桂酰肌氨酸)、谷胱甘肽、檸檬酸、蘋果酸、酒石酸、乳酸等有機(jī)酸;煙酰胺,煙酸芐基酯,Y一谷維素,尿囊素,干草酸(鹽),干草次酸及其衍生物,目柏醇,沒(méi)藥醇,桉樹(shù)腦醇(二一力/K/卜一y),百里酚,肌醇,柴胡皂苷、胡蘿卜皂角苷、絲瓜皂角苷、無(wú)患子皂角苷等皂角苷類,泛酰乙醚、乙炔雌二醇、凝血酸、熊果苷、千金藤素、胎盤萃取物等。作為上述各種皮膚營(yíng)養(yǎng)劑,可以舉出維生素A及其衍生物、維生素B2、泛酸及其衍生物、煙酸、生物素及它們的混合物。作為上述中和劑,沒(méi)有特別限定,例如可以舉出氫氧化鉀、氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸氫二鈉、乙酸鈉、2—氨基一2—甲基一1一丙醇、2—氨基一2—甲基一l,3—丙二醇、三乙醇胺等。作為上述表面活性劑,例如可以舉出聚環(huán)氧乙垸月桂基醚、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯鯨蠟醚、聚氧乙烯硬脂酰醚、聚氧乙烯油?;?、聚氧乙烯高級(jí)醇醚、聚氧烷基烯丙基醚、聚氧乙烯二苯乙烯化苯基醚、聚環(huán)氧乙垸衍生物、山梨糖醇酐單月桂酸酯、山梨糖醇酐單油酸酯、山梨糖醇酐倍半油酸酯、山梨糖醇酐單月桂酸酯、聚氧乙烯單月桂酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單月桂酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單硬脂酰酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯、l一聚氧乙烯山梨糖醇酐單月桂酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯、四油酸聚氧乙烯山梨糖醇酐、聚乙二醇單月桂酸酯、聚乙二醇單油酸酯、聚氧乙烯固化蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯羊毛脂等非離子系表面活性劑,或甘油型、烷基氨基甜菜堿型、咪唑啉型、L一藻蛋白寧型、L一蓖麻蛋白型等雙性表面活性劑。作為所述L一PGA及L一PGA交聯(lián)體以外的保濕劑,例如可以舉出甘油、丙二醇、1,3—丁二醇、聚乙二醇等多元醇,葡萄糖、山梨糖醇、糊精、海藻糖、乳糖等糖類及其衍生物,谷氨酸鈉、角蛋白衍生物、膠原衍生物、三甲基甘氨酸等氨基酸類及其衍生物,羧基乙烯基聚合物、硫酸軟骨素鈉、透明質(zhì)酸鈉、吡咯烷酮羧酸鈉、乳酸鈉等水溶性高分子,海藻萃取物、酵母萃取物、具有保濕作用的各種植物萃取物以及它們的混合物等,棕櫚酸異丙基酯、肉豆蔻酸異丙基酯、肉豆蔻酸辛基十二垸基酯、油酸辛基十二烷基酯、油酸膽固醇基酯等酯類,聚丙烯酸鈉、結(jié)晶性纖維素、各種植物精油以及它們的混合物。另外,還可以將所述的植物油脂類、蠟類、脂肪酸類、高級(jí)醇類用作保濕劑。作為上述增稠劑,例如可以舉出蒼耳垸等水溶性多糖類,羥甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥乙基纖維素等水溶性纖維素類,支鏈淀粉、聚丙烯酸鈉等水溶性高分子等。作為上述防腐劑,例如可以舉出對(duì)羥基苯甲酸酯、水楊酸、苯甲酸、苯氧基乙醇、葡糖酸氯已定等。作為上述香料,例如可以舉出香草醛、橙香精(omngeflavor)、檸檬香精(lemonflavor)、牛奶香精(milkflavor)、香茅醇、沉香醇等。作為上述著色料,可以舉出水溶性的焦油系色素、水不溶性的焦油系色素、梔子系色素、染料紅花系色素、糖醛酸內(nèi)酯系色素、辣椒粉色素、胭脂樹(shù)橙、胭脂蟲紅色素等天然色素,酸性、堿性色素。還可以添加例如羊蹄、夕,,、日本萍蓬草、香橙、鼠尾草、歐蓍草、錦葵、當(dāng)藥、百里香、當(dāng)歸、干橙皮、A—于、筆頭菜、絲瓜、歐洲七葉樹(shù)、虎耳草、山金車花、百合、艾蒿、芍藥、蘆薈、梔子、花柏、白百合等植物的萃取物等。以下顯示實(shí)施例,進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式。當(dāng)然,本發(fā)明不限定于以下實(shí)施例,具體細(xì)節(jié)可以為各種方式。進(jìn)而,本發(fā)明不限定于所述的實(shí)施方式,可以在發(fā)明所示的范圍內(nèi)進(jìn)行各種變更,本發(fā)明的技術(shù)范圍也包括適當(dāng)?shù)亟M合公開(kāi)的各技術(shù)手段得到的實(shí)施方式。另外,在本說(shuō)明書中記載的全部學(xué)術(shù)文獻(xiàn)及專利文獻(xiàn)在本說(shuō)明書中作為參考引用。此外,以下實(shí)施例所示的"%"全部為"重量%"。實(shí)施例以下顯示實(shí)施例具體說(shuō)明本發(fā)明,但本發(fā)明不限定于實(shí)施例。(實(shí)施例l;NTG誘變處理方法)用鉑接種環(huán)刮取一鉑接種環(huán)N.aegyptiaca(JCM11194,從獨(dú)立行政法人理化學(xué)研究所購(gòu)入)的單菌落,接菌于3ml的PGA生產(chǎn)液體培養(yǎng)基一l(22.5%NaCl、2%MgS047H20、0.2%KC1、3%擰檬酸三鈉、1%酵母提取物、0.75%酪蛋白氨基酸,pH7.2)/18ml容積試管,在37。C、300rpm下培養(yǎng)3天。將得到的培養(yǎng)液0.5ml接菌于50ml的PGA生產(chǎn)液體培養(yǎng)基一l/500ml容積坂口燒瓶,在37"、180rpm下培養(yǎng)5天。將得到的培養(yǎng)液以3000rpm離心5分鐘,收集菌體。向收集的菌體中加入100mM檸檬酸緩沖液(pH6.0),再次懸浮。反復(fù)進(jìn)行該操作3次。分別加入用滅菌水將已懸浮的溶液的1/10量的飽和NTG溶液(東京化成株式會(huì)社)稀釋為70%、50%、20%、10%而形成的溶液,在42。C、150rpm下培養(yǎng)1小時(shí)。處理后,接種于PGA生產(chǎn)瓊脂培養(yǎng)基一1(10%NaCl、2%MgS04*7H20、0.2%KC1、3%檸檬酸三鈉、1%酵母提取物、0.75%酪蛋白氨基酸、2%瓊脂),在37'C下培養(yǎng)5天。將條件設(shè)定成生存率為1%以下(飽和NTG溶液為70X的條件)。(實(shí)施例2;聚一Y—L一谷氨酸高生產(chǎn)菌篩選)將利用生存率為lQ/^以下的條件得到的菌落接種于PGA生產(chǎn)瓊脂培養(yǎng)基—1(腦NaCl、2%MgS047H20、0.2%KC1、3%檸檬酸三鈉、1%酵母提取物、0.75%酪蛋白氨基酸、2%瓊脂)以及PGA生產(chǎn)瓊脂培養(yǎng)基—2(22.5%NaCl、2%MgS047H20、0.2%KC1、3%擰檬酸三鈉、1%酵母提取物、0.75%酪蛋白氨基酸、2%瓊脂),37t:下培養(yǎng)6天。培養(yǎng)后,選擇即使在PGA生產(chǎn)液體培養(yǎng)基一1的培養(yǎng)條件下也能生產(chǎn)聚一Y—L—谷氨酸的變異株,再次將得到的變異株接種于PGA生產(chǎn)瓊脂培養(yǎng)基—1上,確認(rèn)重現(xiàn)性。用鉑接種環(huán)刮取一鉑接種環(huán)確認(rèn)過(guò)再現(xiàn)性的變異株的單菌落,接菌于3ml的PGA生產(chǎn)液體培養(yǎng)基—1/18ml容積試管,在37°C、300rpm下培養(yǎng)3天。將得到的培養(yǎng)液0.5ml接菌于50ml的PGA生產(chǎn)液體培養(yǎng)基一1/500ml容積坂口燒瓶,在37t:、180rpm下培養(yǎng)3天,將培養(yǎng)基中的聚一Y—L一谷氨酸進(jìn)行1/5倍稀釋,利用safmnine法測(cè)定。篩選與母株相比聚一y—L一谷氨酸的生產(chǎn)率提高的變異株。利用上述方法篩選30,000株,結(jié)果,獲得3株聚一y—L—谷氨酸高生產(chǎn)變異株。這樣地進(jìn)行得到的菌株作為Natrialbaaegyptiaca0830—82株(保藏編號(hào)FERMBP—10747)、Natrialbaaegyptiaca0830—243株(保藏編號(hào)FERMBP—10748)、或者Natrialbaaegyptiaca0831—264株(保藏編號(hào)FERMBP—10749),被保藏于獨(dú)立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所專利生物保藏中心中。(實(shí)施例3;變異株的聚一y—l一谷氨酸生產(chǎn)率比較)利用實(shí)施例2的培養(yǎng)條件培養(yǎng)在實(shí)施例2中得到的0831_264株(保藏編號(hào)FERMBP—10749)與母株(JCM11194)。如圖1所示,F(xiàn)ERMBP一10749在培養(yǎng)液中顯示出4.99g/L的聚一y—L一谷氨酸的生產(chǎn)率。與此相對(duì),母株為0.61g/L的生產(chǎn)率。(實(shí)施例4;聚一y—l—谷氨酸的純化)用鉑接種環(huán)刮取一鉑接種環(huán)按照上述實(shí)施例得到的保藏編號(hào)FERMBP—10749的單菌落,接菌于3ml的PGA生產(chǎn)液體培養(yǎng)基一l(22.5%NaCl、2%MgS047H20、0.2%KC1、3%檸檬酸三鈉、1%酵母提取物、0.75%酪蛋白氨基酸)/18ml容積試管X5支,在37"、300rpm下培養(yǎng)3天。將得到的培養(yǎng)液0.5ml接菌于50ml的PGA生產(chǎn)液體培養(yǎng)基一1/500ml容積坂口燒瓶X10支,在37i:下培養(yǎng)5天。將得到的培養(yǎng)液離心,除去菌體。接著,向得到的上清液中加入3倍量的水稀釋,然后將pH調(diào)整至3.0。在pH調(diào)整之后,在室溫下攪拌5小時(shí)。然后,加入3倍量的乙醇,進(jìn)行離心分離,將聚一Y—L—谷氨酸作為沉淀物收集。使沉淀物溶解于O.lmMTris—HCl緩沖液(pH8.0)中,為了除去高分子物質(zhì)而進(jìn)行透析。透析之后,為了從得到的液體中出除去核酸,按照MgCl2為lmM、DNasel(TAKARA公司制)為10U/ml、RNaseKNIPPONGENE公司制)為20嗎/ml的方式加入相應(yīng)物質(zhì),在37'c下培養(yǎng)2小時(shí)。接著,為了除去蛋白質(zhì),在37。c下培養(yǎng)5小時(shí)進(jìn)行3U/ml蛋白酶K(TAKARA公司制)處理。在蛋白酶K處理后,用MilliQ水透析除去低分子物質(zhì)。透析之后,使聚一y—L—谷氨酸吸附于陰離子交換樹(shù)脂、QsepharoseFastFlow(AmershamBiosciences公司制),洗滌之后,用1MNaCl洗脫。用MilliQ水透析所得到的溶液,并凍干透析后的溶液,由此,得到聚一Y—L一谷氨酸'Na鹽。(實(shí)施例5;聚一y—L—谷氨酸'Na鹽的GPC分析)利用GPC分析測(cè)定得到的聚一Y—L一谷氨酸Na鹽的平均分子量。另外,還進(jìn)行IR分析。GPC分析的結(jié)果,確認(rèn)為Mw=7,522,000、Mn=3,704,000、Mw/Mn=2.031(支鏈淀粉換算)。其中,所述GPC的分析條件如下所述。裝置HLC—8220GPC(東曹公司制)柱TSKgela—M(東曹公司制)流速0.6ml/min洗脫液0.15MNaCl水溶液柱溫度40°c注入量lOpl檢測(cè)器差示折射計(jì)IR分析的結(jié)果顯示為Na鹽(圖2)。(實(shí)施例6;聚一Y—L一谷氨酸的游離體的GPC分析及IR分析)在實(shí)施例4的聚一y—l—谷氨酸純化工序中,使其吸附于陰離子交換樹(shù)月旨、QsepharoseFastFlow(AmershamBiosciences公司制),洗滌之后用1MNaCl洗脫,然后利用lNHCl將聚一Y—L一谷氨酸含有液的pH調(diào)整成pH2.0。然后,用MilliQ水透析并凍干,由此,得到聚一y—L—谷氨酸游離體。利用GPC分析測(cè)定所得到的聚l一L一谷氨酸游離體的平均分子量。另外,還進(jìn)行IR分析。GPC分析的結(jié)果,確認(rèn)為Mw=2,888,000、Mn=1,327,000、Mw/Mn二2.176(支鏈淀粉換算)。其中,所述GPC的分析條件如實(shí)施例5所述。IR分析的結(jié)果顯示為游離體(圖3)。(實(shí)施例7;聚一Y—L一谷氨酸的結(jié)構(gòu)確認(rèn))圖4是在實(shí)施例4中得到的聚一Y—L一谷氨酸的H—NMR的光譜(500MHz)。使用重水進(jìn)行測(cè)定。(實(shí)施例8;聚一Y—L一谷氨酸的制造)在Natrialbaaegyptiaca(保藏編號(hào)FERMBP—10749)的L干燥安瓿中,加入0.4ml的PGA生產(chǎn)液體培養(yǎng)基(22.5XNaCl、2%MgS04'71120、0.2%KC1、3%檸檬酸三鈉、1%酵母提取物、0.75%酪蛋白氨基酸),得到懸浮液。將0.2ml的該懸浮液接種于PGA瓊脂培養(yǎng)基(10%NaCl、2%MgS04'7H20、0.2%KC1、3%擰檬酸三鈉、1%酵母提取物、0.75%酪蛋白氨基酸、2%瓊脂),在37"C下培養(yǎng)3天,得到單菌落。接著,分別向5支18ml容積試管中,加入3ml的PGA生產(chǎn)液體培養(yǎng)基(22.5%NaCl、2%MgS047H20、0.2%KC1、3%擰檬酸三鈉、1%酵母提取物、0.75%酪蛋白氨基酸,pH7.2),接著,用鉑接種環(huán)刮取一鉑接種環(huán)上述單菌落,接菌。接菌后的試管在37。C、300rpm下培養(yǎng)3天,進(jìn)而將得到的培養(yǎng)液0.5ml接菌于IO支已加入了50mlPGA生產(chǎn)液體培養(yǎng)基的500ml容積坂口燒瓶中,在37"C下培養(yǎng)5天。培養(yǎng)后,離心所得到的培養(yǎng)液,除去菌體,收集上清。接著,向收集的上清中加入3倍量的水稀釋,然后用1N硫酸將pH調(diào)整至3.0。在pH調(diào)整之后,在室溫下攪拌5小時(shí)。然后,加入3倍量的乙醇,進(jìn)行離心分離,收集沉淀物。該沉淀物為L(zhǎng)一PGA。使收集的L一PGA溶解于0.1mMTris—HC1緩沖液(pH8.0)中,為了除去低分子物質(zhì)等雜質(zhì)而進(jìn)行透析。接著,為了除去透析后的液體中含有的核酸,向該液體中按照MgCl2為lmM、DNaseI(TAKARA公司帝U)為10U/ml、RNaseI(NIPPONGENE公司制)為20嗎/ml的方式添加相應(yīng)物質(zhì),在37"C下培養(yǎng)2小時(shí)。接著,為了除去蛋白質(zhì),向除去核酸之后的液體中加入3U/ml蛋白酶K(TAKARA公司制),在37'C下培養(yǎng)5小時(shí),進(jìn)行蛋白酶K處理。在蛋白酶K處理后,用超純水透析,除去低分子物質(zhì)。接著,使L一PGA吸附于陰離子交換樹(shù)脂(QsepharoseFastFlow,GEHealthcareBioscience公司制),用0.5M的NaCl水溶液洗滌之后,用1MNaCl水溶液洗脫。進(jìn)一步用超純水透析得到的溶液,并凍干透析后的溶液,由此,得到L—PGA的鈉鹽(以下記載為"L一PGA.Na鹽")。其中,超純水用MilliQ(Millipore公司制的純水制造裝置)制作。(實(shí)施例9;聚一y—L—谷氨酸的分子量分析—1)利用GPC分析測(cè)定在實(shí)施例8中得到的L—PGANa鹽的平均分子量。結(jié)果,確認(rèn)為Mw=7,522,000、Mn二3,704,000、Mw/Mn=2.031(支鏈淀粉換算)。其中,所述GPC的分析條件如下所述。裝置HLC—8220GPC(東曹公司制)柱TSKgela—M(東曹公司制)流速0.6ml/min洗脫液0.15MNaCl水溶液柱溫度40°C注入量lO^ll檢測(cè)器差示折射計(jì)(實(shí)施例10;聚一Y—L一谷氨酸的分子量分析一2)在實(shí)施例8中,吸附于陰離子交換樹(shù)脂的L一PGA的洗脫是用0.7M、0.8M、l.OM的NaCl水溶液的逐級(jí)洗脫,除此以外,利用GPC分析測(cè)定進(jìn)行與實(shí)施例8相同的操作得到的L一PGANa鹽的平均分子量。結(jié)果確認(rèn)為利用0.7MNaCl水溶液的洗脫得到的L一PGANa鹽為Mw=2,135,000、Mn=l,021,000、Mw/Mn=2.091;利用l.OMNaCl水溶液的洗脫得到的L—PGANa鹽為Mw=7,522,000、Mn=3,704,000、Mw/Mn=2.031(支鏈淀粉換算)。其中,本實(shí)施例中的GPC分析利用與實(shí)施例9相同的操作進(jìn)行。(實(shí)施例ll;聚一Y—L—谷氨酸的結(jié)構(gòu)確認(rèn))將在實(shí)施例8中得到的L—PGANa鹽提供到H—NMR,分析其結(jié)構(gòu)。將其結(jié)果示于圖5。其中,利用H—NMR的分析利用以下條件進(jìn)行。裝置傅立葉轉(zhuǎn)換核磁共振裝置(BRUKER制AVENCE500),測(cè)定溶劑重水,樣品溶液濃度0.51.0%,共振頻率500MHz,化學(xué)位移基準(zhǔn)TSP(三甲基甲硅烷基丙酸鈉一2,2,3,3—d4),S=0.0ppm。(實(shí)施例12;水凝膠的制作和吸水倍率的評(píng)價(jià))在本實(shí)施例中,使用在實(shí)施例8及實(shí)施例10中得到的L—PGANa鹽這2種來(lái)探討用于使L一PGA交聯(lián)的Y射線的照射線量、照射y射線的L—PGAWa鹽水溶液的濃度和所得到的L—PGA交聯(lián)體的吸水倍率之間的關(guān)系。首先,對(duì)這2種L—PGANa鹽,分別制作成2重量%水溶液及2重量%水溶液,得到共4種L一PGA'Na鹽水溶液。接著,使用氮對(duì)各L一PGA'Na鹽水溶液進(jìn)行3分鐘鼓泡,然后分別取2ml裝于帶蓋的10ml樣品瓶中,蓋上蓋子。如后所述,在本實(shí)施例中,為了對(duì)6種Y射線照射線量進(jìn)行探討,對(duì)該4種L一PGANa鹽水溶液分別制作6只該樣品瓶,共制作24只。接著,使用線源為鈷60的Y射線照射裝置,向各樣品瓶照射Y射線。對(duì)于該6只樣品瓶,照射線量分別為照射lkGy、3kGy、5kGy、7kGy、10kGy、20kGy。從樣品瓶中取出經(jīng)y射線照射后得到的生成物,用80目的金網(wǎng)甩去多余的水分,并凍干,由此,得到L—PGA交聯(lián)體粉末。其中,上述多余的水分中含有未交聯(lián)的L一PGA,該甩去水分的主要目的是為了除去未交聯(lián)的L—PGA。接著,為了使該L一PGA交聯(lián)體粉末溶脹而向足夠量的水中加入得到的L一PGA交聯(lián)體粉末,靜置1周。靜置后,通過(guò)用80目的金網(wǎng)過(guò)濾,除去未交聯(lián)的L一PGA,得到水凝膠。用本實(shí)施例得到的水凝膠的濕重量減去在該水凝膠的制作中使用的L一PGA交聯(lián)體粉末的干燥重量得到一個(gè)值,并用該L一PGA交聯(lián)體的粉末的干燥重量除所得的值,由此,算出利用本實(shí)施例得到的L一PGA交聯(lián)將算出的L一PGA的吸水倍率與在L一PGA交聯(lián)體的制作中照射的y射線的照射線量之間的關(guān)系的比較結(jié)果示于表l、表2、圖6及圖7。表l及圖6是在制作L一PGA交聯(lián)體時(shí)使用2重量%的L一PGANa鹽水溶液的情況,圖6是將表1所示的數(shù)值繪成曲線圖而成的結(jié)果。表2及圖7是在制作L一PGA交聯(lián)體時(shí)使用5重量%的L—PGANa鹽水溶液的情況,圖7是將表2所示的數(shù)值繪成曲線圖而成的結(jié)果。另外,表1及表2所示的數(shù)值是從上述2種L一PGANa鹽得到的L一PGA交聯(lián)體的吸水倍率的平均值。其中,在圖6及圖7中,縱軸表示吸水倍率,橫軸表示Y射線的照射線量。__<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>如表l、表2、圖6及圖7所示,可以確認(rèn)在本實(shí)施例中得到的L—PGA交聯(lián)體的吸水倍率為10倍4400倍。(實(shí)施例13;凝膠化率的評(píng)價(jià))在本實(shí)施例中,探討為了使L—PGA交聯(lián)而使用的y射線的照射線量與從L一PGA制作水凝膠時(shí)的凝膠化率的關(guān)系。首先,測(cè)定在實(shí)施例12中使用的Y射線照射前的L一PGA'Na鹽的干燥重量(將該干燥重量作為"投入的L一PGA重量")。接著,測(cè)定在實(shí)施例12中得到的L—PGA交聯(lián)體的粉末的干燥重量(將該重量作為"交聯(lián)L一PGA重量")。接著,算出交聯(lián)L一PGA重量相對(duì)加入L一PGA重量的比例(%),將其作為凝膠化率。表3所示的值為使用上述4種L一PGANa鹽水溶液而制作的水凝膠的凝膠化率的、向該L一PGA鹽水溶液照射的Y射線的每一種照射線量的平均值。表3]<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>[實(shí)施例14;根據(jù)聚一Y—L一谷氨酸水凝膠的批間差得出的吸水倍率]利用與實(shí)施例8記載的方法相同的方法,進(jìn)行3次L一PGA(將得到的L一PGA分別作為批次A、批次B、批次C)的制造。利用與實(shí)施例12所述的方法相同的方法,將Y射線的照射線量設(shè)為5kGy,由批次AC的L一PGA,制作水凝膠。進(jìn)而,利用與實(shí)施例12記載的方法相同的方法,算出由批次AC的L一PGA得到的水凝膠的吸水倍率。將其結(jié)果示于表4。__<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>如表4所示,確認(rèn)了重復(fù)性高,即使使用不同批次的L—PGA也可以穩(wěn)定地制造一定性質(zhì)的水凝膠。(比較例1;使用聚一Y—DL—谷氨酸的水凝膠的制作)使用平均分子量為150萬(wàn)250萬(wàn)及400萬(wàn)600萬(wàn)這2種DL—PGA鈉鹽(和光純藥制),除此以外,進(jìn)行與實(shí)施例12相同的操作,嘗試制造DL—PGA水凝膠。但是,所有DL—PGA鈉鹽均不能得到DL—PGA的水凝膠。因而,在從DL—PGL獲得DL—PGA的水凝膠時(shí)的凝膠化率如表5所示,全部為零。此外,由于不能獲得DL—PGA交聯(lián)體,所以不能算出吸水倍率。__<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>(實(shí)施例15;聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體的制作)制作在實(shí)施例8中得到的L—PGANa鹽的5%水溶液。接著,使用氮對(duì)各L—PGANa鹽水溶液進(jìn)行3分鐘鼓泡,然后分別取2ml裝于帶蓋的10ml樣品瓶中,蓋上蓋子。接著,使用線源為鈷60的Y射線照射裝置,向樣品瓶照射Y射線。以照射線量為5kGy的方式進(jìn)行照射。從樣品瓶中取出經(jīng)Y射線照射后得到的生成物,用80目的金網(wǎng)甩去多余的水分,之后通過(guò)凍干,得到L一PGA交聯(lián)體粉末。其中,所述多余的水分中含有未交聯(lián)的L一PGA,該甩去水分的主要目的是除去未交聯(lián)的L—PGA。(實(shí)施例16;利用干燥皮膚粗糙模型對(duì)聚一Y—L—谷氨酸的保濕性進(jìn)行評(píng)價(jià))按照試驗(yàn)皮膚(東洋紡織株式會(huì)社制CodeNo丄SE—002)配套部件隨帶的操作說(shuō)明,取出LSE(LivingSkinEquivalent)組織。接著,將該LSE組織置于分析盤(所述試驗(yàn)皮膚附帶)內(nèi),在干燥狀態(tài)(在調(diào)整成溫度為37。C、相對(duì)濕度為15XRH的C02培養(yǎng)箱內(nèi))下靜置7小時(shí)。由此,獲得角質(zhì)層的水分蒸發(fā)后的干燥皮膚粗糙模型(以下記載為"干燥L(fēng)SE組織")。接著,分別利用微量移液器向各干燥L(fēng)SE組織的表面各滴注70|il的0.5%DL—PGA水溶液、2.5%DL—PGA水溶液、0.5%L—PGA、2.5%L—PDA水溶液。其中,作為L(zhǎng)一PGA,使用在實(shí)施例8中得到的L一PGAWa鹽。另外,作為DL—PGA,使用和光純藥制的DL—PGA'Na鹽。接著,在置有干燥L(fēng)SE組織的分析盤下部,添加分析培養(yǎng)基(附帶于所述試驗(yàn)皮膚配套部件)600pl,然后靜置于調(diào)整成溫度37°C、相對(duì)濕度15XRH的C02培養(yǎng)箱內(nèi),培養(yǎng)24小時(shí)。然后,從C02培養(yǎng)箱中取出干燥L(fēng)SE組織,按照上述試驗(yàn)皮膚配套部件附帶的操作說(shuō)明,將內(nèi)含四氮唑鹽(MTT)試藥0.333g/ml的分析培養(yǎng)基(附帶于上述試驗(yàn)皮膚配套部件)的混合液600pl放入分析盤,通過(guò)在調(diào)整成溫度37°C、相對(duì)濕度15%RH的C02培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3小時(shí),向該干燥L(fēng)SE組織實(shí)施MTT處理。在MTT處理之后,使用BiopsyPunch(東洋紡織公司制;直徑8mm),將干燥L(fēng)SE組織的中央部連同該干燥L(fēng)SE組織的下部的聚碳酸酯膜一起打穿。接著,將打穿的切片移至試管,加入300^d0.04N鹽酸一異丙醇,46在暗處?kù)o置2小時(shí)。接著,攪拌該試管中的溶液,充分地使其混合,然后3,000rpm下離心5分鐘,得到上清。接著,通過(guò)測(cè)定572nm的吸光度算出在該上清200iil中含有的藍(lán)紫色甲暨(formazan)的量。結(jié)果示于圖8。圖8是保濕性評(píng)價(jià)結(jié)果的圖,縱軸表示當(dāng)將未實(shí)施干燥處理的LSE組織中提取的甲暨的量設(shè)為100%時(shí)的甲暨的量(吸光度),橫軸表示各樣品的種類。其中,在圖8中,"干燥未處理"表示沒(méi)有實(shí)施干燥處理的LSE組織,"無(wú)試劑"是指沒(méi)有對(duì)實(shí)施了干燥處理的LSE組織滴注純水、DL—PGA水溶液及L一PGA水溶液的任意一種。g卩,圖8表示對(duì)干燥未處理的樣品直接實(shí)施MTT處理并測(cè)定甲暨的量的結(jié)果、以及對(duì)所述的干燥L(fēng)SE組織直接實(shí)施MTT處理并測(cè)定甲暨的量的結(jié)果。需要說(shuō)明的是,利用在本實(shí)施例中記載的方法得到的吸光度(甲暨的量)與皮膚粗糙改善效果有密切的關(guān)系,是可以定量地、簡(jiǎn)易且經(jīng)濟(jì)地實(shí)施人的干燥皮膚粗糙的狀態(tài)評(píng)價(jià)的有效的干燥皮膚粗糙改善評(píng)價(jià)方法。從圖8可知,在滴注過(guò)去被用作保濕劑的市售的DL—PGA的2.5。%水溶液時(shí),結(jié)果甲暨的量即皮膚粗糙的恢復(fù)率為30%,與此相對(duì),滴注L—PGA的2.5X水溶液,結(jié)果顯示60%的皮膚粗糙恢復(fù)率。這樣,與過(guò)去的市售品相比,L一PGA顯示出約2倍的皮膚粗糙恢復(fù)率,顯示具有高保濕性。(實(shí)施例17;利用人皮膚粗糙試驗(yàn)的聚一Y—L—谷氨酸交聯(lián)體水凝膠的保濕效果)通過(guò)使0.5XSDS溶液接觸人上臂內(nèi)部IO分鐘,進(jìn)行SDS處理,形成皮膚粗糙的狀態(tài)。另一方面,將在實(shí)施例16中得到的L一PGA交聯(lián)體粉末混合于水中,成為0.15%,得到水凝膠。接著,將該水凝膠涂布于上述皮膚粗糙的狀態(tài)的人上臂內(nèi)部,在室溫(23°C)、濕度45%的恒溫恒濕房間內(nèi)靜置1小時(shí)。接著,用角質(zhì)層水分量測(cè)定器(IBS株式會(huì)社制,商品名7年ny)測(cè)定靜置后的人上臂內(nèi)部(樣品D)的皮膚角質(zhì)層水分量。對(duì)SDS處理前的人上臂內(nèi)部(樣品A)實(shí)施SDS處理之后、對(duì)該水凝膠涂布前的人上臂內(nèi)部(樣品B)實(shí)施SDS處理之后,涂布水來(lái)代替該水凝膠,并在上述恒溫恒濕房間中,對(duì)在與上述條件相同的條件下靜置之后的人上臂內(nèi)部(樣品C)進(jìn)行同樣的皮膚角質(zhì)層水分量測(cè)定。結(jié)果示于圖9。圖9是表示人皮膚粗糙試驗(yàn)的結(jié)果的圖,縱軸表示皮膚角質(zhì)層水分量,橫軸表示樣品的種類。在圖9中,AD分別對(duì)應(yīng)上述樣品AD。如圖9所示,對(duì)于樣品D,得到了高皮膚角質(zhì)層水分量,顯示角質(zhì)層水分量得到恢復(fù)。此外,在用于實(shí)施發(fā)明的最佳方式的項(xiàng)中完成的具體的實(shí)施方式或?qū)嵤├皇菫榱嗣鞔_本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容,不應(yīng)該限定于這樣的具體例而被狹義地解釋,在本發(fā)明的精神和后面記載的發(fā)明范圍內(nèi),可以實(shí)施各種變更。產(chǎn)業(yè)上的可利用性通過(guò)本發(fā)明,利用液體培養(yǎng)等可大量地配制均一的光學(xué)純度且高分子量的聚一Y—L一谷氨酸。更具體而言,利用本發(fā)明,可以在每1L培養(yǎng)液中以高達(dá)4.99g以上的生產(chǎn)率取得數(shù)均分子量為130萬(wàn)以上而且均一光學(xué)純度的聚一Y—L一谷氨酸。如上所述,本發(fā)明中的L—PGA交聯(lián)體具有L—PGA分子之間的交聯(lián)結(jié)構(gòu)。因此,具有能夠以理想質(zhì)量穩(wěn)定地提供生物降解性及吸水性出色的L一PGA交聯(lián)體的效果。另外,如果利用本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體的制造方法,則包括使L一PGA分子之間交聯(lián)的交聯(lián)工序。因此,具有能夠以理想質(zhì)量穩(wěn)定地提供生物降解性及吸水性出色的L一PGA交聯(lián)體的效果。進(jìn)而,由于由L一PGA得到L一PGA交聯(lián)體時(shí)的凝膠化率高,所以具有能夠以高制造效率制造L一PGA交聯(lián)體的效果。另外,本發(fā)明中的水凝膠含有本發(fā)明中的L一PGA而成。因此,具有能夠穩(wěn)定地制造具有理想質(zhì)量的水凝膠的效果。如上所述,本發(fā)明中的皮膚外用劑含有L—PGA及L一PGA交聯(lián)體中的至少一種。因此,具有能夠穩(wěn)定地提供具有理想質(zhì)量的皮膚外用劑的效果。即,所述L一PGA只由L一谷氨酸結(jié)合而成,所以旋光性均一而且分子量高,具有出色的保濕性,可以通過(guò)在皮膚外用劑中含有L一PGA及/或L一PGA的交聯(lián)體,穩(wěn)定地提供具有理想質(zhì)量的皮膚外用劑。另夕卜,L一PGA及L一PGA交聯(lián)體具有出色的保濕性,所以尤其具有可以提供用作化妝品、保濕劑的皮膚外用劑的效果。根據(jù)本發(fā)明,用液體培養(yǎng)等可大量地配制均一的旋光性且高分子量的聚一y—L—谷氨酸,培養(yǎng)也非常容易,所以會(huì)給產(chǎn)業(yè)界帶來(lái)極大的幫助。另外,本發(fā)明中的L一PGA交聯(lián)體及本發(fā)明中的水凝膠可以應(yīng)用于紙尿片等衛(wèi)生領(lǐng)域、醫(yī)療領(lǐng)域、建筑領(lǐng)域、食品領(lǐng)域、農(nóng)業(yè)園藝領(lǐng)域等廣泛的領(lǐng)域。進(jìn)而,根據(jù)本發(fā)明,利用均一的旋光性且高分子量的聚一y—l—谷氨酸、聚一y—L—谷氨酸的交聯(lián)體,可提供具有保濕性高于現(xiàn)有制品的皮膚外用劑,尤其會(huì)為化妝品業(yè)界帶來(lái)極大的幫助。權(quán)利要求1.一種微生物,其特征在于,在液體培養(yǎng)條件下,生產(chǎn)分子量為130萬(wàn)以上的聚—γ—L—谷氨酸。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的微生物,其特征在于,聚一r"L一谷氨酸的分子量為200萬(wàn)以上。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物,其特征在于,聚一Y—L—谷氨酸的分子量為350萬(wàn)以上。4.根據(jù)權(quán)利要求13中任意一項(xiàng)所述的微生物,其特征在于,誘變處理具有聚一Y—L一谷氨酸的生產(chǎn)能力的微生物而得到。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的微生物,其特征在于,在NaCl濃度為10X(w/v)以下的固體培養(yǎng)條件下呈粘液狀。6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的微生物,其特征在于,微生物為嗜鹽菌。7.根據(jù)權(quán)利要求46中任意一項(xiàng)所述的微生物,其特征在于,嗜鹽菌為極端嗜鹽菌。8.根據(jù)權(quán)利要求47中任意一項(xiàng)所述的微生物,其特征在于,極端嗜鹽菌為古細(xì)菌。9.根據(jù)權(quán)利要求38中任意一項(xiàng)所述的微生物,其特征在于,極端嗜鹽性古細(xì)菌為Natrialbaaegyptiaca。10.根據(jù)權(quán)利要求19中任意一項(xiàng)所述的微生物,其特征在于,微生物為Natrialbaaegyptiaca0830—82株(保藏編號(hào)FERMBP—10747)、Natrialbaaegyptiaca0830—243株(保藏編號(hào)FERMBP—10748)、或者Natrialbaaegyptiaca0831—264株(保藏編號(hào)FERMBP—10749)。11.一種高分子量聚—Y—L一谷氨酸的制造方法,其特征在于,培養(yǎng)權(quán)利要求110中任意一項(xiàng)所述的微生物,利用其培養(yǎng)液回收高分子量的聚一Y—L—谷氨酸。12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的高分子量聚一Y—L一谷氨酸的制造方法,其特征在于,培養(yǎng)液中的鹽濃度為530W/V%。13.—種高分子量的聚—Y—L一谷氨酸,其是利用權(quán)利要求11或12所述的制造方法而得到的。14.一種聚一Y—L一谷氨酸,其平均分子量為130萬(wàn)以上。15.—種聚一Y—L一谷氨酸,其平均分子量為200萬(wàn)以上。16.—種聚—y—L一谷氨酸,其平均分子量為350萬(wàn)以上。17.—種微生物,其特征在于,微生物為Natrialbaaegyptiaca0830—82株(保藏編號(hào)FERMBP—10747)、Natrialbaaegyptiaca0830—243株(保藏編號(hào)FERMBP_10748)、或者Natrialbaaegyptiaca0831—264株(保藏編號(hào)FERMBP—10749)。18.—種聚一Y—L一谷氨酸生產(chǎn)變異株的篩選方法,其特征在于,至少包括下述(a)(c)的各工序(a)誘變處理具有聚一Y—L一谷氨酸的生產(chǎn)能力的微生物的工序,(b)在母株不形成粘液狀菌落的條件的固體培養(yǎng)條件下培養(yǎng)誘變處理后的該微生物,篩選呈粘液狀的變異株的工序,(c)在液體培養(yǎng)條件下培養(yǎng)在(b)中篩選出的變異株,進(jìn)一步篩選出與母株相比能更顯著地生產(chǎn)聚一Y—L一谷氨酸的變異株的工序。19.一種聚一Y—L—谷氨酸生產(chǎn)變異株的篩選方法,其特征在于,至少包括下述(a)(c)的各工序(a)誘變處理具有聚一Y—L—谷氨酸的生產(chǎn)能力的微生物的工序,(b)在NaCl濃度為15%(w/v)以下的固體培養(yǎng)條件下培養(yǎng)誘變處理后的該微生物,篩選呈粘液狀的變異株的工序,(c)在液體培養(yǎng)條件下培養(yǎng)在(b)中篩選出的變異株,進(jìn)一步篩選出與母株相比能更顯著地生產(chǎn)聚一Y—L—谷氨酸的變異株的工序。20.—種聚—Y—L一谷氨酸交聯(lián)體,其特征在于,具有聚一Y—L一谷氨酸分子之間的交聯(lián)結(jié)構(gòu)。21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體,其特征在于,所述聚一Y—L一谷氨酸的平均分子量為100萬(wàn)以上。22.根據(jù)權(quán)利要求20所述的聚一Y—L—谷氨酸交聯(lián)體,其特征在于,所述聚一Y—L一谷氨酸的平均分子量為200萬(wàn)以上。23.根據(jù)權(quán)利要求20所述的聚一Y—L—谷氨酸交聯(lián)體,其特征在于,所述聚一Y—L一谷氨酸的平均分子量為350萬(wàn)以上。24.根據(jù)權(quán)利要求20所述的聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體,其特征在于,吸水倍率為IO倍以上、5000倍以下。25.—種水凝膠,其特征在于,含有權(quán)利要求2024中任意一項(xiàng)所述的聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體。26.—種聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體的制造方法,其特征在于,包括使聚一Y—L—谷氨酸的分子之間交聯(lián)的交聯(lián)工序。27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的聚一y—l—谷氨酸交聯(lián)體的制造方法,其特征在于,在所述交聯(lián)工序中,通過(guò)照射放射線使聚一Y—L—谷氨酸的分子之間交聯(lián)。28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的聚一Y—l一谷氨酸交聯(lián)體的制造方法,其特征在于,所述放射線為Y射線。29.根據(jù)權(quán)利要求26所述的聚一y—L—谷氨酸交聯(lián)體的制造方法,其特征在于,所述交聯(lián)工序中的凝膠化率為50%以上、100%以下。30.根據(jù)權(quán)利要求26所述的聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體的制造方法,其特征在于,還包括使用Natrialbaaegyptiaca合成所述聚一Y—L一谷氨酸的聚一Y—L一谷氨酸合成工序。31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的聚一y—L—谷氨酸交聯(lián)體的制造方法,其特征在于,所述Natrialbaaegyptiaca為從Natrialbaaegyptiaca0830—82株(保藏編號(hào)FERMBP—10747)、Natrialbaaegyptiaca0830—243株(保藏編號(hào)FERMBP—10748)以及Natrialbaaegyptiaca0831—264株(保藏編號(hào)FERMBP—10749)構(gòu)成的組中選擇的至少一種菌株。32.—種皮膚外用劑,其特征在于,含有聚一Y—L—谷氨酸及聚一Y—L一谷氨酸交聯(lián)體中的至少一種。33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的皮膚外用劑,其特征在于,所述皮膚外用劑為化妝品。34.根據(jù)權(quán)利要求32所述的皮膚外用劑,其特征在于,所述皮膚外用劑為保濕劑。全文摘要本發(fā)明提供一種微生物,其特征在于,在液體培養(yǎng)條件下生產(chǎn)分子量為130萬(wàn)以上的光學(xué)純度均一的聚-γ-L-谷氨酸,還提供該微生物的篩選方法、使用該微生物生產(chǎn)高分子量的聚-γ-L-谷氨酸的方法及平均分子量為130萬(wàn)以上的聚-γ-L-谷氨酸。另外,還提供它們的利用法。文檔編號(hào)C12N1/20GK101448931SQ200780018580公開(kāi)日2009年6月3日申請(qǐng)日期2007年3月12日優(yōu)先權(quán)日2006年5月23日發(fā)明者北川優(yōu),山本周平,曾我部敦,蘆內(nèi)誠(chéng),鈴木道子申請(qǐng)人:東洋紡織株式會(huì)社