一種液態(tài)復(fù)合微生物菌劑及其生產(chǎn)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生態(tài)水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域,尤其涉及一種液態(tài)復(fù)合微生物菌劑及其生產(chǎn)方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 近幾年,隨著我國水產(chǎn)養(yǎng)殖的迅速發(fā)展和集約化養(yǎng)殖程度的不斷加深,導(dǎo)致了養(yǎng) 殖海域富營養(yǎng)化,近海水域生態(tài)系統(tǒng)退化,各種病害頻繁的發(fā)生,為了防病治病和改良水 質(zhì),在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中往往會(huì)使用大量的消毒劑、抗生素及化學(xué)改底類藥物,在使用這些藥 物的同時(shí),也抑制了水體中的浮游生物和有益細(xì)菌的生長,甚至死亡。也影響了海參、魚類、 蝦類、蟹類等的正常生長。還造成微生態(tài)失衡,而長期重復(fù)使用某種藥物,會(huì)使部分病原生 物產(chǎn)生抗藥性,造成生態(tài)環(huán)境的退化,外源抗生素的存在會(huì)抑制水體中有益微生物的生長, 削弱養(yǎng)殖水體降解有機(jī)碳的能力。
[0003] 當(dāng)前我國菌劑廠生產(chǎn)的微生物菌劑,所用的菌種主要為枯草桿菌等,菌種單一,由 于生產(chǎn)工藝落后,菌種培養(yǎng)基或載體的選用不合理,其菌數(shù)及分解能力較低,且受到環(huán)境因 素的影響波動(dòng)較大,環(huán)境適應(yīng)能力差。同時(shí)固體菌劑在使用時(shí),需要溶解,使用比較繁瑣,成 本也高,養(yǎng)殖戶迫切要求液體型菌劑上市。而當(dāng)前國內(nèi)液體菌多為光合菌、酵母菌,多采用 發(fā)酵液直接灌裝、礦物油封面技術(shù)生產(chǎn),產(chǎn)品保質(zhì)期短(一般為3個(gè)月左右,農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)為6 個(gè)月),質(zhì)量不穩(wěn)定,產(chǎn)品中僅含有一種有效菌,當(dāng)外界環(huán)境發(fā)生變化時(shí),菌體活力下降無法 發(fā)揮作用等問題。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足,本發(fā)明提出了一種液態(tài)復(fù)合微生物菌劑及其生產(chǎn)方 法,以便能夠降低成本,抑制青苔以及凈化水環(huán)境。
[0005] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明的一方面提出了一種液態(tài)復(fù)合微生物菌劑,所述復(fù)合 微生物菌劑包括活性菌株和培養(yǎng)基,其中所述培養(yǎng)基包括重量比為90~95%的無菌水,重量 比為1. 0~2. 5%的玉米粉,重量比為1. 0~2. 5%的豆餅粉,重量比為0. 1~1. 5%的魚粉,重量比 為0. 02~0. 5%的玉米淀粉,重量比為0. 005~0. 07%的硫酸鎂,重量比為0. 03~0. 05%的磷酸 二氫鉀,重量比為0. 02~0. 5%的輕質(zhì)碳酸f丐以及重量比為0. 002~0. 1%的氫氧化鈉;所述活 性菌株包括解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌;在液體培養(yǎng)時(shí),所述每種活性 菌株分別接種至培養(yǎng)基時(shí),每種活性菌株的體積占培養(yǎng)基體積的1~5% ;將發(fā)酵后的三種菌 液復(fù)合形成菌劑時(shí),所述解淀粉芽孢桿菌菌液的體積比為60~80%,所述枯草芽孢桿菌菌液 的體積比為10~20%,所述地衣芽孢桿菌菌液的體積比為10~20%。
[0006] 本發(fā)明的該方案的有益效果在于上述液態(tài)復(fù)合微生物菌劑比干劑型菌劑減少后 序的加工成本、載體成本,產(chǎn)品價(jià)格能夠下降10-20% ;能夠清除長時(shí)間殘留于養(yǎng)殖水域底 部的廢物,尤其是老池底部積累的大量殘余餌料、排泄廢物、動(dòng)植物殘?bào)w等;能夠降解水體 中氨氮、亞硝酸鹽、硫化氫的濃度,凈化水環(huán)境;還能夠?qū)η嗵哂辛己玫囊种菩Ч?br>[0007] 本發(fā)明的另一方面提出了 一種上述液態(tài)復(fù)合微生物菌劑的生產(chǎn)方法,所述方法包 括以下步驟:步驟1 :將解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌三種活性菌株復(fù) 合;步驟2 :將上述復(fù)合菌株接入海水養(yǎng)殖池內(nèi),經(jīng)20~30天后,對海水進(jìn)行取樣以及處 理,所述處理指對取樣的海水進(jìn)行分離、復(fù)壯、紫外線處理、平板分離、搖瓶培養(yǎng)、活力測定、 誘變處理;步驟3 :在壓強(qiáng)不低于0.IMPa,溫度不低于121 °C的條件下,將培養(yǎng)基進(jìn)行消毒 處理25~35min;步驟4 :將步驟2中處理得到的三種菌株分別接種至培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)以 及發(fā)酵;步驟5 :將上述發(fā)酵后的三種菌液按照比例進(jìn)行均勻混合,其中所述解淀粉芽孢 桿菌菌液的體積比為60~80%,所述枯草芽孢桿菌菌液的體積比為10~20%,所述地衣芽孢桿 菌菌液的體積比為1 〇~20%。
[0008] 優(yōu)選的是,所述步驟3中的培養(yǎng)基包括重量比為90~95%的無菌水,重量比為 1. 0~2. 5%的玉米粉,重量比為1. 0~2. 5%的豆餅粉,重量比為0. 1~1. 5%的魚粉,重量比為 0. 02~0. 5%的玉米淀粉,重量比為0. 005~0. 07%的硫酸鎂,重量比為0. 03~0. 05%的磷酸二 氫鉀,重量比為0. 02~0. 5%的輕質(zhì)碳酸f丐以及重量比為0. 002~0. 1%的氫氧化鈉。
[0009] 優(yōu)選的是,試管斜面上、茄形瓶斜面上、三角燒瓶中、種子罐中以及發(fā)酵罐中分別 設(shè)有所述步驟3中的培養(yǎng)基,所述步驟4包括以下步驟:步驟41 :將所述步驟2中處理得 到的三種菌株分別接種至試管斜面上的培養(yǎng)基中,在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)40~56小時(shí),溫度 控制在35~37°C;步驟42 :將步驟41中處理得到的三種菌株分別接種至茄形瓶斜面上的 培養(yǎng)基中,在恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)40~56小時(shí),溫度控制在35~37°C;步驟43 :將步驟42中處 理得到的三種菌株分別接種至三角燒瓶中的培養(yǎng)基中,在搖床培養(yǎng)14~20小時(shí),溫度控制 在35~37°C;步驟44 :將步驟43中處理得到的三種菌株分別接種至種子罐中的培養(yǎng)基中, 培養(yǎng)8~16小時(shí),溫度控制在35~37°C;步驟45 :將步驟44中處理得到的三種菌株分別接 種至發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基中,發(fā)酵22~26小時(shí),上述發(fā)酵過程中溫度控制在35~37°C。
[0010] 優(yōu)選的是,所述步驟43至步驟45中,將三種菌株分別接種至培養(yǎng)基中時(shí),所述 解淀粉芽孢桿菌的體積占培養(yǎng)基體積的1~5%,所述枯草芽孢桿菌的體積占培養(yǎng)基體積的 1~5%,所述地衣芽孢桿菌的體積占培養(yǎng)基體積的1~5%。
[0011] 優(yōu)選的是,所述步驟45中,接種所述解淀粉芽孢桿菌的培養(yǎng)基在發(fā)酵時(shí),向發(fā)酵 罐中通入無菌空氣的通風(fēng)量為280~320m3/h;接種所述枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)基在發(fā)酵時(shí),向 發(fā)酵罐中通入無菌空氣的通風(fēng)量為280~320m3/h;接種所述地衣芽孢桿菌的培養(yǎng)基在發(fā)酵 時(shí),向發(fā)酵罐中通入無菌空氣的通風(fēng)量為220~280m3/h。
[0012] 優(yōu)選的是,所述步驟45中,發(fā)酵后的每種菌液的有效活菌濃度為80~100億個(gè)/ml。
[0013] 本發(fā)明的該方案的有益效果在于上述生產(chǎn)方法能夠使菌株對海水環(huán)境具有較好 的適應(yīng)能力,還能夠縮短發(fā)酵周期,原來的發(fā)酵周期大約30~36小時(shí),而上述生產(chǎn)方法通過 對培養(yǎng)基、通風(fēng)量、溫度等進(jìn)行調(diào)整,發(fā)酵周期為22~26小時(shí),使得發(fā)酵周期縮短了 8~10小 時(shí);通過縮短發(fā)酵周期,還降低了成本以及提高了設(shè)備的利用率。
【附圖說明】
[0014] 圖1示出了本發(fā)明所涉及的液態(tài)復(fù)合微生物菌劑的生產(chǎn)方法流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步的說明。
[0016] 本發(fā)明所涉及的液態(tài)復(fù)合微生物菌劑包括活性菌株和培養(yǎng)基,其中所述培養(yǎng)基包 括重量比為90~95%的無菌水,重量比為1. 0~2. 5%的玉米粉,重量比為1. 0~2. 5%的豆餅粉, 重量比為0. 1~1. 5%的魚粉,重量比為0. 02~0. 5%的玉米淀粉,重量比為0. 005~0. 07%的硫 酸鎂,重量比為0. 03~0. 05%的磷酸二氫鉀,重量比為0. 02~0. 5%的輕質(zhì)碳酸鈣以及重量比 為0. 002~0. 1%的氫氧化鈉;所述活性菌株包括解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和地衣芽孢 桿菌;在液體培養(yǎng)時(shí),所述每種活性菌株分別接種至培養(yǎng)基時(shí),每種活性菌株的體積占培養(yǎng) 基體積的1~5% ;將發(fā)酵后的三種菌液復(fù)合形成菌劑時(shí),所述解淀粉芽孢桿菌菌液的體積比 為60~80%,所述枯草芽孢桿菌菌液的體積比為10~20%,所述地衣芽孢桿菌菌液的體積比為 10?20%。
[0017] 如圖1所示,本發(fā)明所涉及的液態(tài)復(fù)合微生物菌劑的生產(chǎn)方法包括以下步驟: 步驟S1 :將解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌三種活性菌株復(fù)合。
[0018] 步驟S2:將上述復(fù)合菌株接入海水養(yǎng)殖池內(nèi),經(jīng)20~30天后,對海水進(jìn)行取樣以及 處理,所述處理指對取樣的海水進(jìn)行分離、復(fù)壯、紫外線處理、平板分離、搖瓶培養(yǎng)、活力測 定、誘變處理,經(jīng)過上述處理便可以培育出具有耐高滲透壓、耐鹽環(huán)境、并且對青苔具有較 高抑制能力的三種菌株。
[0019] 將復(fù)合菌株接入海水養(yǎng)殖池內(nèi)是為了使解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽 孢桿菌對海水環(huán)境具有較好的適應(yīng)能力,經(jīng)過25天后,對海水進(jìn)行取樣,此時(shí)的菌株無論 是從分裂的角度,還是從對海水環(huán)境的適應(yīng)能力的角度均達(dá)到最佳狀態(tài);在上述的處理過 程中,紫外線處理的時(shí)間為5~7min最佳。
[0020] 步驟S3 :在壓強(qiáng)不低于0.IMPa,溫度不低于121°C的條件下,將培養(yǎng)基進(jìn)行消毒 處理25~35min,具體的消毒時(shí)間以30min為最佳,其中試管斜面上、茄形瓶斜面上、三角燒 瓶中、種子罐中以及發(fā)酵罐中分別設(shè)有所述培養(yǎng)基,所述培養(yǎng)基包括重量比為90~95%的 無菌水,重量比為1. 0~2. 5%的玉米粉,重量比為1. 0~2. 5%的豆餅粉,重量比為0. 1~1. 5% 的魚粉,重量比為0. 02~0. 5%的玉米淀粉,重量比為0. 005~0. 07%的硫酸鎂,重量比為 0. 03~0. 05%的磷酸二氫鉀,重量比為0. 02~0. 5%的輕質(zhì)碳酸鈣以及重量比為0. 002~0. 1% 的氫氧化鈉。
[0021] 步驟S4 :將步驟S2中處理得到的三種菌株分別接種至試管斜面上的培養(yǎng)基中,在 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)40~56小時(shí),溫度控