專利名稱：微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用在微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室作質(zhì)量控制對(duì)照，指示微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中檢測(cè)質(zhì)量的，定量的微生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及其制備方法。
背景技術(shù)：
產(chǎn)品(食品、飲用水、化妝品、醫(yī)療用品、生活用品、衛(wèi)生用品等)和環(huán)境中存在大量的微生物(非致病微生物、致病微生物、條件致病微生物、弱毒性致病微生物和強(qiáng)毒性致病微生物等)，由于產(chǎn)品中存在大量的微生物極大多數(shù)是繁殖體(正在大量繁殖的微生物)，產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督監(jiān)測(cè)部門和企業(yè)內(nèi)部的實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行檢測(cè)檢測(cè)，檢測(cè)的數(shù)據(jù)只能表示檢測(cè)當(dāng)時(shí)的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。同一產(chǎn)品，不同時(shí)間檢測(cè)，檢測(cè)的微生物數(shù)據(jù)均為不一致，有時(shí)差異會(huì)很大。因此，微生物檢測(cè)有一個(gè)不成文的規(guī)定微生物檢測(cè)不復(fù)檢。由于沒(méi)有一個(gè)統(tǒng)一的微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，使各系統(tǒng)、各單位的微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)產(chǎn)品等微生物檢測(cè)時(shí)，沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作同步檢測(cè)對(duì)照，使檢測(cè)結(jié)果成為不確定性。
為了能證明檢測(cè)質(zhì)量的準(zhǔn)確，只有在微生物檢測(cè)時(shí)，同步進(jìn)行“微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)樣”檢測(cè)，當(dāng)檢測(cè)的數(shù)據(jù)符合標(biāo)定的“微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”數(shù)據(jù)時(shí)，才能證明本次微生物檢測(cè)過(guò)程中的各方面的影響因素(技術(shù)人員的技能、生物試劑的質(zhì)量、實(shí)驗(yàn)檢測(cè)環(huán)境條件等)得到控制，檢測(cè)的數(shù)據(jù)是準(zhǔn)確的。同時(shí)，每周采用“微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”進(jìn)行檢測(cè)，繪制質(zhì)量控制曲線圖進(jìn)行分析、總結(jié)，分析微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證體系運(yùn)行情況，提出整改措施。才能保證該微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量體系正常運(yùn)行。

發(fā)明內(nèi)容
為提供一種微生物檢測(cè)質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案。
微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備方法，包括以下步驟
a.選擇性狀穩(wěn)定、形成集落能識(shí)別的、容易保存的、對(duì)人和動(dòng)、植物無(wú)毒害的微生物，利用芽孢形成培養(yǎng)基或真菌孢子形成培養(yǎng)基制備細(xì)菌芽胞或真菌孢子，b.用滅菌蒸餾水洗下細(xì)菌芽孢或真菌孢子，染色，用滅菌蒸餾水稀釋至應(yīng)用濃度，即內(nèi)含指示微生物含量為102～109CFU/0.01G(或片、支、粒)，c.將定量的己稀釋至應(yīng)用濃度的細(xì)菌芽孢或真菌孢子加入到已經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌處理，并已達(dá)到無(wú)菌要求的定量載體中，均質(zhì)，達(dá)到定量數(shù)值的細(xì)菌芽胞或真菌孢子均勻結(jié)合在載體上，d.將滅菌后的吸附有定量數(shù)值細(xì)菌芽胞或真菌孢子的定量載體置于已經(jīng)滅菌的尖底2ml具塞塑料管中。
步驟a中優(yōu)選的微生物為嗜熱脂肪桿菌芽胞、枯草桿菌黑色變種芽胞、短小桿菌芽胞、蠟樣芽胞或白色念珠菌、酵母。
優(yōu)選步驟a中芽孢形成培養(yǎng)基的配方如下蛋白胨1.0％、牛肉浸膏粉0.3％、氯化鈉0.5％、葡萄糖0.1％、碳酸氫鈉0.08％、瓊脂粉1.2％。
優(yōu)選步驟a中真菌孢子形成培養(yǎng)基的配方如下蛋白胨0.5％、葡萄糖4.0％、玉米淀粉4.0％、吐溫80 0.1％、瓊脂粉1.0％、碳酸氫鈉0.01％。
優(yōu)選的方案中步驟c中載體可以是不溶性淀粉或可溶性淀粉、磁珠、直徑為1～6mm的塑料圓珠、瓊脂顆粒、明膠片、50％明膠溶液、直徑為6mm的厚濾紙片、葡萄糖、蔗糖、乳糖。
用上述任一種方法制備的微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，其特征在于載體上均勻地分布有細(xì)菌芽胞或真菌孢子，載體內(nèi)含指示微生物含量為102～109CFU/0.01G(或片、支、粒)。
用上述任一種方法制備的微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，可用于樣品或產(chǎn)品等菌落計(jì)數(shù)項(xiàng)目檢測(cè)過(guò)程中同步陽(yáng)性對(duì)照。培養(yǎng)基的質(zhì)量檢定。滅菌器滅菌工藝制訂及滅菌效果考核、繪制微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制曲線圖及微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)、室間盲樣(技術(shù)人員技能)考核。
1、樣品(或產(chǎn)品)等菌落計(jì)數(shù)項(xiàng)目檢測(cè)過(guò)程中同步陽(yáng)性對(duì)照。
在每批(每天)進(jìn)行樣品(產(chǎn)品)等菌落計(jì)數(shù)檢測(cè)時(shí)，采用“微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”進(jìn)行同步檢測(cè)，作為陽(yáng)性對(duì)照，判定本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否準(zhǔn)確和實(shí)驗(yàn)過(guò)程中存在引起誤差的原因。
2、繪制微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制曲線圖。
為了保證微生物實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)質(zhì)量，每周用“微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”進(jìn)行檢測(cè)，將檢測(cè)結(jié)果標(biāo)入質(zhì)量控制圖內(nèi)，對(duì)本微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)存在的影響檢測(cè)質(zhì)量的因素進(jìn)行系統(tǒng)分析，并提出整改意見(jiàn)。
3、用于培養(yǎng)基(營(yíng)養(yǎng)瓊脂)質(zhì)量檢定。
樣品(產(chǎn)品)等菌落計(jì)數(shù)檢測(cè)時(shí)，培養(yǎng)基(營(yíng)養(yǎng)瓊脂)的質(zhì)量是保證微生物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)質(zhì)量的關(guān)鍵因素之一，為了保證微生物實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)質(zhì)量，必須對(duì)本實(shí)驗(yàn)室使用的培養(yǎng)基(營(yíng)養(yǎng)瓊脂)進(jìn)行質(zhì)量檢定，選擇適用于本微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室使用的培養(yǎng)基，并對(duì)培養(yǎng)基(營(yíng)養(yǎng)瓊脂)存在的不足之處提出建設(shè)性意見(jiàn)。
4、用于微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)、室間盲樣考核。
為了保證各微生物實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)質(zhì)量和檢測(cè)數(shù)據(jù)具有可比性，經(jīng)常性地用“微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”開(kāi)展微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)、室間盲樣考核，保證微生物實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)質(zhì)量。
5、用于滅菌器進(jìn)行產(chǎn)品滅菌時(shí)的工藝制訂、確認(rèn)和滅菌效果考核。
由于產(chǎn)品的規(guī)格、包裝和性質(zhì)均不相同，產(chǎn)品滅菌滅菌時(shí)的各種技術(shù)數(shù)據(jù)均不一樣，為了保證產(chǎn)品的滅菌質(zhì)量，對(duì)各類產(chǎn)品滅菌滅菌時(shí)，必須制訂滅菌工藝和工藝確認(rèn)?！拔⑸餀z測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”適用于滅菌工藝、工藝確認(rèn)滅菌效果考核，保證產(chǎn)品的滅菌質(zhì)量。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1微生物在細(xì)菌芽胞形成培養(yǎng)基或真菌孢子形成培養(yǎng)基上經(jīng)過(guò)2～4小時(shí)適應(yīng)(枯草桿菌黑色變種芽胞、短小桿菌芽胞和蠟樣芽胞桿菌等的培養(yǎng)溫度為35℃～37℃，嗜熱脂肪桿菌芽胞的培養(yǎng)溫度為54℃～56℃，白色念珠菌培養(yǎng)溫度為25℃)，微生物進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，微生物數(shù)量大量增加，微生物生長(zhǎng)旺盛，將培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)耗盡，培養(yǎng)基可利用成分大量減少，產(chǎn)生的有害物質(zhì)大量增加。微生物在營(yíng)養(yǎng)成分不足、有害物質(zhì)存在的這種惡劣環(huán)境中經(jīng)過(guò)10天以上的培養(yǎng)，90％以上的微生物形成芽胞和孢子，進(jìn)入休眠狀態(tài)。
用滅菌蒸餾水將培養(yǎng)基上的菌苔洗下，充分混勻，形成2.0×109cfu/ml細(xì)菌懸液，置于盛有玻璃珠的滅菌三角洗瓶中將三角燒瓶置于80℃的水浴中，水浴的液面高于三角燒瓶中菌懸液的液面，搖動(dòng)三角燒瓶，作用10分鐘，殺滅未形成芽胞的繁殖體和未形成孢子的真菌，保留具有活性、能復(fù)蘇的芽胞和孢子，并將形成鏈狀的芽胞菌體和真菌孢子分離成單個(gè)菌體。
無(wú)菌操作，將菌懸液置于滅菌的沉淀管中，置于離心機(jī)中，4000轉(zhuǎn)/分鐘，離心30分鐘，傾棄上清液，加入沉淀物10倍量的滅菌蒸餾水，置于混和器中，充分混勻。再進(jìn)行4000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，傾棄上清液。重復(fù)操作3次。
用50倍量的滅菌蒸餾水，將沉淀管中的芽胞菌體和真菌孢子洗下，置于滅菌的玻璃容器內(nèi)，充分混勻。殺滅非細(xì)菌芽胞和非真菌孢子的微生物。
取菌懸液一滴，置于潔凈的載玻片上，涂布均勻，自然干燥，在酒精燈上過(guò)火焰固定；在菌膜上滴加足量的5.0％孔雀綠水溶液；取平皿一只，內(nèi)放置二張濾紙，在濾紙上滴加蒸餾水，使濾紙吸足蒸餾水，無(wú)多余的蒸餾水外溢，將載玻片置于平皿中，蓋好平皿蓋，將平皿置于54℃~56℃培養(yǎng)箱，烘30分鐘。將載玻片取出，用自來(lái)水水洗，將孔雀綠殘留洗凈。加入0.6％沙黃水溶液，復(fù)染2分鐘，用自來(lái)水水洗，將沙黃殘留洗凈，待干。完成芽胞染色。將載玻片置于顯微鏡載物臺(tái)上，用油鏡觀察，芽胞呈綠色，菌體成紅色，計(jì)算芽胞形成率。芽胞形成率達(dá)95％以上即可。用滅菌蒸餾水稀釋至應(yīng)用濃度。即內(nèi)含指示微生物含量為102～109CFU/0.01G(或片、支、粒)，(1)、定量菌懸液的制備①、取已處理的細(xì)菌芽胞和真菌孢子懸液，②、用滅菌蒸餾水作10-1～10-9稀釋。
③、取各稀釋度的菌懸液1ml，分別置于滅菌平皿中，傾注入已熔化、并已冷卻至50～60℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂或真菌培養(yǎng)基。凝固后，置于36±1℃(細(xì)菌芽胞)或26±1℃(真菌孢子)的培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24小時(shí)。
④、計(jì)數(shù)。
⑤、用滅菌蒸餾水稀釋至應(yīng)用濃度的定量菌懸液。
其中菌量計(jì)數(shù)的方法
①、取一支菌落計(jì)數(shù)質(zhì)量控制標(biāo)樣，(管上標(biāo)明的重量為內(nèi)容物重量)。在微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室(P1級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室)內(nèi)。打開(kāi)塑料管(或安瓿瓶)。
②、取一支移液管，吸取1.0ml滅菌蒸餾水，加入塑料管中，充分混勻。
③、另取一支移液管，將塑料管中的液體吸出，加入滅菌試管中。
④、繼續(xù)吸取1.0ml滅菌蒸餾水，加入塑料管中，充分混勻，然后將混和樣液吸出，置于上述中試管中。按此方法再重復(fù)5次，將塑料管中的樣品充分洗凈，置于中試管內(nèi)。
⑤、繼續(xù)在中試管內(nèi)加入5.0ml滅菌蒸餾水，總量為10.0ml，為1號(hào)中試管。
⑥、另取二支中試管，分別加入9.0ml滅菌蒸餾水。
⑦、用1.0ml移液管將1號(hào)中試管內(nèi)的樣液吹打均勻，靜止20min。吸取1.0ml樣液置于2號(hào)中試管內(nèi)，將移液棄掉。
⑧、另取1支1.0ml移液管吹打2號(hào)中試管內(nèi)的液體，充分混勻，吸取1.0ml溶液置于滅菌平皿中(共四只平皿)。
⑨、在平皿中加入已融化并冷卻至45℃～50℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂20ml/皿。凝固后置于36±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24h，計(jì)數(shù)。
計(jì)算 注N1-N410-2稀釋度的四只平皿中的菌落數(shù)。
(2)、吸附①、載體吸附前處理A、不溶性淀粉、糖(葡萄糖、蔗糖、乳糖等)、奶粉a、將不溶性淀粉、(糖類、奶粉)置于自封式塑料袋中，排除氣體，封口，再用一只自封式塑料袋封口包裝，平攤成為厚1cm的包裝，每袋250g。
b、在其中一袋不溶性淀粉、(糖類、奶粉)包裝袋中，同時(shí)放入一支“微生物檢測(cè)標(biāo)樣”。
c、采用環(huán)氧乙烷滅菌。
d、滅菌后在通風(fēng)的環(huán)境中放置15天。
e、在生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，從包裝袋中取出一支“微生物檢測(cè)標(biāo)樣”。進(jìn)行滅菌效果檢測(cè)。
B、磁珠、塑料珠、a、用蒸餾水將磁珠清洗。涼燥。
b、將磁珠置于自封式塑料袋中，排除氣體，封口，再用一只自封式塑料袋封口包裝，平攤成為厚1cm的包裝，每袋100g。
c、在其中一袋磁珠包裝袋中，同時(shí)放入一支“微生物檢測(cè)標(biāo)樣”。
d、采用環(huán)氧乙烷滅菌。
e、滅菌后在通風(fēng)的環(huán)境中放置15天。
f、在生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，從包裝袋中取出一支“微生物檢測(cè)標(biāo)樣”。進(jìn)行滅菌效果檢測(cè)。
C、瓊脂顆粒a、用200目的銅絲網(wǎng)過(guò)篩。
b、將瓊脂粉置于自封式塑料袋中，排除氣體，封口，再用一只自封式塑料袋封口包裝，平攤成為厚1cm的包裝，每袋250g。
c、在其中一袋瓊脂粉包裝袋中，同時(shí)放入一支“微生物檢測(cè)標(biāo)樣”。
d、采用環(huán)氧乙烷滅菌。
e、滅菌后在通風(fēng)的環(huán)境中放置15天。
f、在生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，從包裝袋中取出一支“微生物檢測(cè)標(biāo)樣”。進(jìn)行滅菌效果檢測(cè)。
D、濾紙片a、將直徑為6mm的厚紙片置于自封式塑料袋中，排除氣體，封口，再用一只自封式塑料袋封口包裝，每袋5000片。
b、在其中一袋濾紙片包裝袋中，同時(shí)放入一支“微生物檢測(cè)標(biāo)樣”。
c、采用環(huán)氧乙烷滅菌。
d、滅菌后在通風(fēng)的環(huán)境中放置15天。
e、在生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，從包裝袋中取出一支“微生物檢測(cè)標(biāo)樣”。進(jìn)行滅菌效果檢測(cè)。
②、吸附a、磁珠、塑料珠、濾紙片將已滅菌的載體置于已滅菌的燒瓶?jī)?nèi)。
根據(jù)載體的吸水量，加入已定量的菌懸液。充分混勻。
烘干。
定量分裝于已滅菌的尖底2ml具塞塑料管內(nèi)。
b、不溶性淀粉、糖(葡萄糖、蔗糖、乳糖等)、奶粉、瓊脂顆粒將已滅菌的載體置于已滅菌的燒瓶?jī)?nèi)。
根據(jù)載體的吸水量，加入已定量的菌懸液。充分混勻。
將已加入微生物菌懸液的載體置于已滅菌的球磨機(jī)內(nèi)，滾動(dòng)混勻。
定量分裝于已滅菌的尖底2ml具塞塑料管內(nèi)。
c、明膠片取15g明膠，置于100ml蒸餾水內(nèi)，121℃滅菌20min。
待冷卻至45～50℃時(shí)，加入1倍量的菌懸液，置于混勻器內(nèi)，充分混勻。
用滅菌的200ul移液器，分裝于已滅菌的尖底2ml具塞塑料管內(nèi)。
實(shí)施例2用于菌落計(jì)數(shù)項(xiàng)目檢測(cè)過(guò)程中同步陽(yáng)性對(duì)照a，取一支“微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”。
b，在微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室(生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室)內(nèi)。打開(kāi)塑料管。
c，取一支移液管，吸取1.0ml滅菌蒸餾水，加入塑料管中，充分混勻。
d，另取一支移液管，將塑料管中的液體吸出，加入滅菌中試管中(1號(hào)管)。
e，繼續(xù)吸取1.0ml滅菌蒸餾水，加入塑料管中，沖洗塑料管，然后將樣液吸出，置于上述中試管中。按此方法再重復(fù)2次，將塑料管中的樣品充分洗凈，置于中試管內(nèi)。
f，繼續(xù)在中試管內(nèi)加入滅菌蒸餾水，總量為5.0ml。
g，另取滅菌中試管，加入4.0ml滅菌蒸餾水(2號(hào)管)，另取一支移液管，從1號(hào)中試管中吸取1.0ml混和樣液，加入2號(hào)中試管中，充分混勻。
h，用1.0ml移液管，將2號(hào)中試管內(nèi)的樣液吹打(或用混和器)均勻，靜止20min。
i，吸取1.0ml上清樣液，置于滅菌平皿中(共二只平皿)，加入已融化并冷卻至45℃～50℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂20ml/皿。充分混勻，凝固后置于36±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24h，計(jì)數(shù)。
計(jì)算 注N1和N2二只平皿中的菌落數(shù)。
凈重量在塑料管上標(biāo)明。
實(shí)施例3 培養(yǎng)基(營(yíng)養(yǎng)瓊脂)質(zhì)量檢定a、取一支“微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”。
b、在微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室(生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室)內(nèi)。打開(kāi)塑料管。
c、取一支移液管，吸取1.0ml滅菌蒸餾水，加入塑料管中，充分混勻。
d、另取一支移液管，將塑料管中的液體吸出，加入滅菌中試管中。
e、繼續(xù)吸取1.0ml滅菌蒸餾水，加入塑料管中，沖洗塑料管，然后將樣液吸出，置于上述中試管中。按此方法再重復(fù)2次，將塑料管中的樣品充分洗凈，置于中試管內(nèi)。
f、繼續(xù)在中試管內(nèi)加入滅菌蒸餾水，總量為5.0ml，用lml移液管(或用混和器)充分混勻。
g、用100ul移液器吸取混勻樣液，置于被檢定培養(yǎng)基(四只)和對(duì)照1號(hào)培養(yǎng)基(四只)上。每只培養(yǎng)基100ul。
h、用滅菌L棒將培養(yǎng)基表面的混勻樣液涂布均勻，并涂布至干燥。
i、將八只培養(yǎng)基置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24h。
j、計(jì)算菌落數(shù)和用數(shù)顯式游標(biāo)卡尺測(cè)量菌落直徑。
計(jì)算①、菌落平均數(shù)計(jì)算
②、菌落平均直徑計(jì)算 ③、生長(zhǎng)率計(jì)算 ④、總分值計(jì)算總分值＝菌落直徑分值+菌落差分值+生長(zhǎng)率分值 菌落差分值＝(X-Y+1)×5 注X為被檢定培養(yǎng)基菌落直徑平均數(shù)Y為對(duì)照1號(hào)培養(yǎng)基菌落直徑平均數(shù)ρ為生長(zhǎng)率被檢定培養(yǎng)基質(zhì)量判定總分值≥20.00為合格。≤19.99為不合格；其中≤12.08為促生長(zhǎng)能力偏弱；≤3.16為促生長(zhǎng)能力不良。
菌落直徑分值≥10.00為合格，≤9.99為不合格；其中≤5.00為促生長(zhǎng)能力偏弱；≤0.00為促生長(zhǎng)能力不良。
菌落差分值≥5.00為合格，≤4.99為不合格；其中≤4.08為促生長(zhǎng)能力偏弱；≤3.16為促生長(zhǎng)能力不良。
生長(zhǎng)率分值≥5.00為合格，≤4.99為不合格；其中≤3.00為促生長(zhǎng)能力偏弱；≤0.00為促生長(zhǎng)能力不良。
權(quán)利要求
1.微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備方法，包括以下步驟a.選擇性狀穩(wěn)定、形成集落能識(shí)別的、容易保存的、對(duì)人和動(dòng)、植物無(wú)毒害的微生物，利用芽孢形成培養(yǎng)基或真菌孢子形成培養(yǎng)基制備細(xì)菌芽胞或真菌孢子，b.用滅菌蒸餾水洗下細(xì)菌芽孢或真菌孢子，染色，用滅菌蒸餾水稀釋至應(yīng)用濃度，即內(nèi)含指示微生物含量為102～109CFU/0.01G(或片、支、粒)，c.將定量的已稀釋至應(yīng)用濃度的細(xì)菌芽孢或真菌孢子加入到已經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌處理，并已達(dá)到無(wú)菌要求的定量載體中，均質(zhì)，達(dá)到定量數(shù)值的細(xì)菌芽胞或真菌孢子均勻結(jié)合在載體上，d.將滅菌后的吸附有定量數(shù)值細(xì)菌芽胞或真菌孢子的定量載體置于已經(jīng)滅菌的尖底2ml具塞塑料管中。
2.如權(quán)利要求1所述的微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備方法，其特征在于選擇的微生物為嗜熱脂肪桿菌芽胞、枯草桿菌黑色變種芽胞、短小桿菌芽胞、蠟樣芽胞或白色念珠菌、酵母。
3.如權(quán)利要求1所述的微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備方法，其特征在于步驟a中芽孢形成培養(yǎng)基的配方如下蛋白胨1.0％、牛肉浸膏粉0.3％、氯化鈉0.5％、葡萄糖0.1％、碳酸氫鈉0.08％、瓊脂粉1.2％。
4.如權(quán)利要求1所述的微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備方法，其特征在于步驟a中真菌孢子形成培養(yǎng)基的配方如下蛋白胨0.5％、葡萄糖4.0％、玉米淀粉4.0％、吐溫80 0.1％、瓊脂粉1.0％、碳酸氫鈉0.01％。
5.如權(quán)利要求1所述的微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備方法，其特征在于步驟c中載體可以是不溶性淀粉或可溶性淀粉、磁珠、直徑為1～6mm的塑料圓珠、瓊脂顆粒、明膠片、50％明膠溶液、直徑為6mm的厚濾紙片、葡萄糖、蔗糖、乳糖。
6.以權(quán)利要求1至5的任一種方法制備的微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，其特征在于載體上均勻地分布有細(xì)菌芽胞或真菌孢子，載體內(nèi)含指示微生物含量為102～109CFU/0.01G(或片、支、粒)。
7.以權(quán)利要求1至5的任一種方法制備的微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用于樣品或產(chǎn)品等菌落計(jì)數(shù)項(xiàng)目檢測(cè)過(guò)程中同步陽(yáng)性對(duì)照。
8.以權(quán)利要求1至5的任一種方法制備的微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用于培養(yǎng)基的質(zhì)量檢定。
9.以權(quán)利要求1至5的任一種方法制備的微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用于滅菌器滅菌工藝制訂及滅菌效果考核、繪制微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制曲線圖及微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)、室間盲樣(技術(shù)人員技能)考核。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用在微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室作質(zhì)量控制對(duì)照，指示微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中檢測(cè)質(zhì)量的，定量的微生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及其制備方法。其主要方法是將定量的已稀釋至應(yīng)用濃度的細(xì)菌芽孢或真菌孢子加入到已經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌處理，并已達(dá)到無(wú)菌要求的定量載體中，均質(zhì)，達(dá)到定量數(shù)值的細(xì)菌芽胞或真菌孢子均勻結(jié)合在載體上，將滅菌后的吸附有定量數(shù)值細(xì)菌芽胞或真菌孢子的定量載體置于已經(jīng)滅菌的尖底2ml具塞塑料管中。制成微生物檢測(cè)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。
文檔編號(hào)C12R1/01GK101086008SQ20071006905
公開(kāi)日2007年12月12日 申請(qǐng)日期2007年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月4日
發(fā)明者楊寧敏 申請(qǐng)人:杭州致遠(yuǎn)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司