專利名稱：一種插核后珍珠囊輔助成型方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及珍珠培育技術(shù)領(lǐng)域，具體來說是指一種珍珠插核后珍珠囊輔助成型方法。
背景技術(shù)：
淡水珍珠的培育一般為無核珍珠，采用的方法為在河蚌的外套膜位置插入細(xì)胞小片，該方法生產(chǎn)出來的珍珠稱為無核珍珠。無核珍珠養(yǎng)殖周期長，生產(chǎn)珍珠直徑較小，經(jīng)濟效益也較低。
目前，現(xiàn)有的淡水有核珍珠培育借鑒了海水珍珠培育方法，采用的方法是將珍珠核直接送入河蚌外套膜內(nèi)育珠的方法。由于插核部位傷口難以較好的愈合，而形成的珍珠多為尾巴珠、烏珠等劣珠，極少成為優(yōu)質(zhì)珠從而無法進行大面積推廣作業(yè)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種可大大提高定向培育大顆粒正圓有核珍珠的成珠率與成珠質(zhì)量的插核后珍珠囊輔助成型方法。
一種插核后珍珠囊輔助成型方法，包括以下步驟(1)切取珠蚌的前段外套膜組織；(2)在20-25℃溫度，PH值為6.9-8.3下，用蛋白酶酶解切取的外套膜組織，進行離散，得到細(xì)胞組織；(3)采用高速離心設(shè)備對步驟(2)中得到的細(xì)胞組織進行分離，制得細(xì)胞液；(4)對所得細(xì)胞液進行中和處理；(5)將中和后的細(xì)胞液浸泡于保護液中備用；(6)取適量步驟(5)得到的細(xì)胞液，滴于進行插核手術(shù)后的珠蚌術(shù)后傷口，細(xì)胞液與外套膜、珠核融合生長，形成珍珠囊。
所述的珠蚌選用體格健壯的3齡優(yōu)質(zhì)雜交三角帆蚌。
步驟(2)中蛋白酶選用胰酶，酶解時間為20-40分鐘。
所述的保護液由葡萄糖、單唾液四己酸糖神經(jīng)節(jié)苷脂、諾氟沙星組成，以每升溶液計，葡萄糖含量為40-60g，單唾液四己酸糖神經(jīng)節(jié)苷脂含量為10-15g，諾氟沙星含量為0.8-1.2g。
步驟(5)中的浸泡時間為20-25分鐘。
步驟(6)中細(xì)胞液的用量為0.1-0.2ml。
本發(fā)明在對體外培養(yǎng)的三角帆蚌外套膜外表皮細(xì)胞研究的基礎(chǔ)上，獲得了具有一定的增殖能力且能分泌珍珠質(zhì)的外套膜外表皮細(xì)胞液，并將該細(xì)胞液，與細(xì)胞小片以及人工核形成珍珠囊，改變了傳統(tǒng)淡水河蚌外套膜小片插核育珠法，成功地將細(xì)胞工程方法運用于珍珠培育。與常規(guī)育珠法相比，細(xì)胞囊形成時間可縮短10天，珠質(zhì)明顯提高，大大降低了畸形珠和無珍珠層的素珠的形成率。
整個工藝中，對制備外套膜外表皮細(xì)胞液過程的環(huán)境條件進行了嚴(yán)格的控制，使外套膜組織酶解較為完全，并能保持酶解細(xì)胞的活性，同時，采用高速離心機對其進行離心，將雜質(zhì)與有效成分盡量分離，大大提高了定向培育大顆粒正圓有核珍珠的成珠率與成珠質(zhì)量。
具體實施例方式
實施例1(1)切取體格健壯的3齡優(yōu)質(zhì)雜交三角帆蚌的前端外套膜組織；(2)在溫度為20度，PH值為6.9條件下，用胰酶酶解外套膜組織40分鐘，進行離散，得到細(xì)胞組織；(3)采用高速離心設(shè)備對步驟(2)中得到的細(xì)胞組織進行分離，制得細(xì)胞液；(4)對所得細(xì)胞液進行中和處理；(5)稱取葡萄糖40g、單唾液四己酸糖神經(jīng)節(jié)苷脂10g、諾氟沙星0.8g制備1L保護液，將中和后的細(xì)胞液浸泡于所得保護液中20分鐘備用；(6)取0.1ml步驟(5)得到的細(xì)胞液，滴于插核手術(shù)后的珠蚌術(shù)后傷口，細(xì)胞液與細(xì)胞小片、珠核融合生長，形成珍珠囊。
實施例2
珍珠囊輔助成型步驟同實施例1，環(huán)境參數(shù)、保護液的原料成分以及細(xì)胞液的用量分別如下溫度21度PH7.1葡萄糖60g單唾液四己酸糖神經(jīng)節(jié)苷脂15g諾氟沙星1.2g酶解時間38分鐘浸泡時間22分鐘細(xì)胞液的用量0.1ml。
實施例3珍珠囊輔助成型步驟同實施例1，環(huán)境參數(shù)、保護液的組成成分配比以及細(xì)胞液的用量分別如下溫度22度PH7.2葡萄糖40g單唾液四己酸糖神經(jīng)節(jié)苷脂15g諾氟沙星1.2g酶解時間35分鐘浸泡時間22分鐘細(xì)胞液的用量0.15ml。
實施例4珍珠囊輔助成型步驟同實施例1，環(huán)境參數(shù)、保護液的組成成分配比以及細(xì)胞液的用量分別如下溫度22度PH7.3葡萄糖60g單唾液四己酸糖神經(jīng)節(jié)苷脂10g諾氟沙星0.8g
酶解時間32分鐘浸泡時間23分鐘細(xì)胞液的用量0.18ml。
實施例5珍珠囊輔助成型步驟同實施例1，環(huán)境參數(shù)、保護液的組成成分配比以及細(xì)胞液的用量分別如下溫度23度PH7.5葡萄糖50g單唾液四己酸糖神經(jīng)節(jié)苷脂13g諾氟沙星1.0g酶解時間30分鐘浸泡時間23分鐘細(xì)胞液的用量0.12ml。
實施例6珍珠囊輔助成型步驟同實施例1，環(huán)境參數(shù)、保護液的組成成分配比以及細(xì)胞液的用量分別如下溫度24度PH7.7葡萄糖45g單唾液四己酸糖神經(jīng)節(jié)苷脂13g諾氟沙星1.1g酶解時間25分鐘浸泡時間20分鐘細(xì)胞液的用量0.14ml。
實施例7珍珠囊輔助成型步驟同實施例1，環(huán)境參數(shù)、保護液的原料成分以及細(xì)胞液的用量分別如下
溫度24度PH7.9葡萄糖55g單唾液四己酸糖神經(jīng)節(jié)苷脂12g諾氟沙星0.9g酶解時間22分鐘浸泡時間20分鐘細(xì)胞液的用量0.16ml。
實施例8珍珠囊輔助成型步驟同實施例1，環(huán)境參數(shù)、保護液的組成成分配比以及細(xì)胞液的用量分別如下溫度25度PH8.3葡萄糖58g單唾液四己酸糖神經(jīng)節(jié)苷脂11g諾氟沙星1.05g酶解時間28分鐘浸泡時間21分鐘細(xì)胞液的用量0.2ml。
實施例9珍珠囊輔助成型步驟同實施例1，環(huán)境參數(shù)、保護液的組成成分配比以及細(xì)胞液的用量分別如下溫度20度PH7.0葡萄糖44g單唾液四己酸糖神經(jīng)節(jié)苷脂14g諾氟沙星1.15g酶解時間30分鐘浸泡時間22分鐘細(xì)胞液的用量0.18ml。
實施例10珍珠囊輔助成型步驟同實施例1，環(huán)境參數(shù)、保護液的組成成分配比以及細(xì)胞液的用量分別如下溫度28度PH8.0葡萄糖49g單唾液四己酸糖神經(jīng)節(jié)苷脂11g諾氟沙星0.8g酶解時間38分鐘浸泡時間23分鐘細(xì)胞液的用量0.19ml。
權(quán)利要求
1.一種插核后珍珠囊輔助成型方法，其特征在于包括以下步驟(1)切取珠蚌的前段外套膜組織；(2)在20-25℃溫度，PH值為6.9-8.3下，用蛋白酶酶解切取的外套膜組織，進行離散，得到細(xì)胞組織；(3)采用高速離心設(shè)備對步驟(2)中得到的細(xì)胞組織進行分離，制得細(xì)胞液；(4)對所得細(xì)胞液進行中和處理；(5)將中和后的細(xì)胞液浸泡于保護液中備用；(6)取適量步驟(5)得到的細(xì)胞液，滴于進行插核手術(shù)后的珠蚌術(shù)后傷口，細(xì)胞液與外套膜、珠核融合生長，形成珍珠囊。
2.如權(quán)利要求1所述的插核后珍珠囊輔助成型方法，其特征在于所述的珠蚌選用體格健壯的3齡優(yōu)質(zhì)雜交三角帆蚌。
3.如權(quán)利要求1所述的插核后珍珠囊輔助成型方法，其特征在于步驟(2)中蛋白酶選用胰酶。
4.如權(quán)利要求1所述的插核后珍珠囊輔助成型方法，其特征在于步驟(2)中酶解時間為20-40分鐘。
5.如權(quán)利要求1所述的插核后珍珠囊輔助成型方法，其特征在于所述的保護液由葡萄糖、單唾液四己酸糖神經(jīng)節(jié)苷脂、諾氟沙星組成，以每升溶液計，葡萄糖含量為40-60g，單唾液四己酸糖神經(jīng)節(jié)苷脂含量為10-15g，諾氟沙星含量為0.8-1.2g。
6.如權(quán)利要求1所述的插核后珍珠囊輔助成型方法，其特征在于步驟(5)中的浸泡時間為20-25分鐘。
7.如權(quán)利要求1所述的插核后珍珠囊輔助成型方法，其特征在于步驟(6)中細(xì)胞液的用量為0.1-0.2ml。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種插核后珍珠囊輔助成型方法，包括以下步驟(1)切取珠蚌的前段外套膜組織；(2)在20－25℃溫度，pH值為6.9－8.3下，用蛋白酶酶解外套膜組織，進行離散，得到細(xì)胞組織；(3)采用高速離心設(shè)備對步驟(2)中得到的細(xì)胞組織進行分離，制得細(xì)胞液；(4)對所得細(xì)胞液進行中和處理；(5)將中和后的細(xì)胞液浸泡于保護液中備用；(6)取適量步驟(5)得到的細(xì)胞液，滴于插核手術(shù)后的珠蚌術(shù)后傷口，細(xì)胞液與外套膜、珠核融合生長，形成珍珠囊。本發(fā)明成功地將細(xì)胞工程方法運用于珍珠培育，與常規(guī)育珠法相比，細(xì)胞囊形成時間可縮短10天，珠質(zhì)明顯提高，大大降低了畸形珠和無珍珠層的素珠的形成率。
文檔編號C12N5/06GK101036450SQ20071006820
公開日2007年9月19日 申請日期2007年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月24日
發(fā)明者張高亮, 詹偉建, 邱咸, 王堅, 鄭蔣江, 邵偉煥, 張康 申請人:詹偉建