專利名稱：一種環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的產(chǎn)生菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)是一種環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶 的產(chǎn)生菌。
技術(shù)背景環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(Cyclodextrin Glucanotransferase EC 2.4.1.19， 簡(jiǎn)稱CGTase)，是催化淀粉合成環(huán)狀糊精的酶。環(huán)狀糊精(cyclodextrin,簡(jiǎn)稱 CD)是由D-吡喃葡萄糖基以"-l， 4葡萄糖苷鍵連接成環(huán)構(gòu)成的環(huán)形低聚糖, 根據(jù)組成葡萄糖基個(gè)數(shù)的不同，分別叫做"、々、7-環(huán)糊精(葡萄糖基個(gè)數(shù) 分別為6、 7、 8個(gè))。作為生物工程的領(lǐng)域之一，以環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶 作用于淀粉制成的環(huán)狀糊精，具有中空的圓筒狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)部疏水，外部親水， 可同分子空隙中的包蔽物質(zhì)絡(luò)合成為分子包接物，能包接氣體、鹵素、染料、 香料、農(nóng)藥、食品等，被譽(yù)為"分子膠囊"和"皇冠化合物"，因而在食品、 醫(yī)藥、化學(xué)、農(nóng)業(yè)、分析化學(xué)以及環(huán)保等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。1998年全球 共消耗環(huán)糊精6000噸，價(jià)值達(dá)l億美元，2002年環(huán)糊精市場(chǎng)達(dá)2.5億美元。雖然環(huán)狀糊精也可以通過(guò)化學(xué)合成的方法得到，但是化學(xué)合成方法的環(huán) 糊精產(chǎn)率極低，只適合于科學(xué)研究的目的。因此，現(xiàn)有的工業(yè)化生產(chǎn)都是采 用酶法合成環(huán)狀糊精，即在環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶催化作用下，轉(zhuǎn)化淀粉及 相關(guān)基質(zhì)合成環(huán)狀糊精。對(duì)環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的基礎(chǔ)研究早在上世紀(jì)30年代就已開(kāi)始， 1973年以來(lái)相繼報(bào)導(dǎo)的各種資料表明，芽孢桿菌屬的多種細(xì)菌都能產(chǎn)生 CGTase，例如軟化芽孢桿菌(及macerara 1904年)、巨大芽孢桿菌(漢 mega&Www 1972年)、環(huán)狀芽孢桿菌(及"Vrw/ara 1973年)、嗜熱脂肪芽孢桿 菌(及WearaAerwop/n'/ws 1973年)、嗜堿性芽孢桿菌(J汰a/op/n7/c 5ac/〃ws 1982 年)和肺炎克氏桿菌(K/e^W/a/ wewwo"z'ael977年)等，其中以嗜熱脂肪芽 孢桿菌的酶熱穩(wěn)定性高，巨大芽孢桿菌產(chǎn)酶量大。此外，據(jù)報(bào)道我國(guó)淡 家林 發(fā)現(xiàn)不生芽孢的嗜堿細(xì)菌(1985年)也能產(chǎn)生CGTase，是我國(guó)特有的菌種。 現(xiàn)已經(jīng)證明，能產(chǎn)生CGTase的細(xì)菌主要可分為兩大類 一類以生成a-CD為 主， 一般多用的是軟化芽孢桿菌、嗜熱脂肪芽孢桿菌和肺炎克氏桿菌；另一 類以生成P-CD為主， 一般多用巨大芽孢桿菌、環(huán)狀芽孢桿菌和嗜堿芽孢桿
菌，其酶學(xué)性質(zhì)有所差異。國(guó)際上對(duì)環(huán)狀糊精的生產(chǎn)和應(yīng)用研究始于上世紀(jì)70年代，日本是世界上 率先實(shí)現(xiàn)環(huán)狀糊精工業(yè)化生產(chǎn)的國(guó)家，國(guó)際市場(chǎng)上環(huán)糊精的主要生產(chǎn)商有法 國(guó)Cerestar、德國(guó)Wacker Biochem和日本Ensuiko Sugar等，日本在環(huán)糊精的 生產(chǎn)與應(yīng)用研究方面處于世界領(lǐng)先地位。我國(guó)于上世紀(jì)70年代末和80年代 初開(kāi)始對(duì)環(huán)狀糊精的生產(chǎn)和應(yīng)用進(jìn)行探索性研究，由于嗜堿性芽孢桿菌的發(fā) 酵條件較為粗放，易于控制和操作，生產(chǎn)成本相對(duì)較低，因此我國(guó)工業(yè)上基 本都采用嗜堿性芽孢桿菌來(lái)生產(chǎn)環(huán)狀糊精，但是總體上我國(guó)環(huán)狀糊精的產(chǎn)量 低、價(jià)格較貴且純度不高，因此對(duì)環(huán)糊精生產(chǎn)的研究有著重要的意義。由此可見(jiàn)，環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶是工業(yè)化生產(chǎn)環(huán)狀糊精的關(guān)鍵酶， 然而在使用CGTase由淀粉工業(yè)化生產(chǎn)環(huán)狀糊精的過(guò)程中，由于高溫(85°C 90°C)和強(qiáng)堿(pH8.5)是不可缺少的反應(yīng)條件，因此耐熱、耐堿的環(huán)狀糊精 葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶才具有商業(yè)化價(jià)值。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的產(chǎn)生菌，該菌產(chǎn)生 的環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶酶活性好，極為穩(wěn)定，具有很好的熱穩(wěn)定性。本發(fā)明利用云南省微生物資源豐富的優(yōu)勢(shì)，從淀粉含量高的麥地、淀粉 廠、糧庫(kù)等周圍篩選到一株產(chǎn)環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的芽孢桿菌屬 (fecLL/"s印)菌株，自命名LZ-10，保藏編號(hào)為CGMCCNo.2096，保藏日 期為2007年6月22日，保藏單位中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微 生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC)。其粗酶的最適反應(yīng)pH為9.0，最適反應(yīng)溫度為65 °C，熱穩(wěn)定性較好，在6(TC-65X:下保溫30分鐘仍保持9596以上的殘余酶活， 在pH8. 5-9. 5條件下保溫30分鐘時(shí)仍保持90%以上的殘余酶活。該菌株的制備方法為1)菌株的分離和篩選從富含淀粉的麥地、淀粉廠、糧庫(kù)等周圍采集土 樣，稱取土樣5g至45ml生理鹽水中，加入玻璃珠充分震蕩后置于沸水浴中5 分鐘，靜置1小時(shí)。取土樣上清液100W于試管中，做梯度稀釋，取適宜稀釋 度涂布篩選平板，于電熱恒溫培養(yǎng)箱中37t:培養(yǎng)48hr。培養(yǎng)數(shù)天后(1、 3、 5 天，分別)觀察菌落形成與形成變色透明圈的大小，挑取有黃色透明圈者， 劃線分離純化。將純化后的菌株接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶發(fā)酵，通過(guò) 酶活測(cè)定最終分離篩選到產(chǎn)環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶酶活高且穩(wěn)定性好的菌 株LZ-10。2)所用篩選培養(yǎng)基可溶性淀粉1%，無(wú)水碳酸鈉1%，蛋白胨1%，酵母膏0. 5%， K2HP04. 3H20 0. 13%， MgS04. 7H20 0. 02%，酚酞0. 03%，瓊脂2% (pH9. 0)。 3)所用發(fā)酵培養(yǎng)基玉米淀粉1%，酵母膏0. 1%， Na2C03 0 . 5% ， K2HP04. 3H200. 13%， MgS04. 7H20 0. 02%。 菌株的初步鑒定(1) 根據(jù)形態(tài)、培養(yǎng)特征和生理生化測(cè)定的鑒定，菌株LZ-IO為革蘭氏 陽(yáng)性芽孢桿菌，芽孢卵圓形。能在10 7(TC溫度范圍內(nèi)生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度為 28 37。C，生長(zhǎng)pH是7.0-10.0，最適生長(zhǎng)pH為8.0-9.0。過(guò)氧化氫酶反應(yīng)陽(yáng)性， 好氧生長(zhǎng)，V.P.反應(yīng)陽(yáng)性，水解淀粉和明膠，不利用檸檬酸鹽，不還原硝酸 鹽，不形成吲哚和二羥基丙酮等。(2) 根據(jù)16S rDNA序列相似性比對(duì)，LZ-10的16S rDNA與^acii〗^ sp. DSM 8714有99%的同源性，與Sacj'W〃s pate卵m'e/7^'s PAT 05 有99%的 同源性，與AacL^wssp.麗3-SN6有97。/。的同源性。菌株的16S rDNA基因 為(GenBank登陸號(hào)為DQ400103): >LZ-10CCGTTGCCAGTATGGCTACCATGGTTGCATTCCGAAGTCGAGCGGACAGAAGGGAGGTTGGTGCCG GAAGTGAGCGGGGGACGGGTGAGTAACACGTGGGCAACCTGCCCCTTAGACTGGGATAACTTCGGG AAACCGAAGCTAATACGGGATAACACTTTTTCCTACCTGGGAGAAAGTTAAAAGATGGCCTTTGTG CTATCACTAGGGGATGGGCCCGCGGCGCATTAGGTAGTTGGTAAGGTAATGGGTTACGAAGGGGAC GATGCGTAGCGGACCTGAGAGGGTGATCGGCGACACTGGGAGTGAAACAGGGCCCAGACTGCTACG GGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAATGCCGCGTGAGTGAG GAAGGCCTTCGGGTCGTAAAGCTGTGTTGTGAGGGAAGAACAAGTATCGGTTGAATAAGCCGGTAC CTTGAGGGTACCTGACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCGAGCAGGCGCGGTAATACGTAGGTG GCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCCGTAAAGGGGGGGGAGGCGGCTTCTTAAAGTCTGATGTGA AATCTCGGGGCTCACCCCCGAGCGGCCATTGGAAAGTGGGAAGCTTGAGTGGAGAAGAGGAGAGTG GAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAAGATATGTGGAGGAACACCAGTGGGGAAGGCGAGTCT CTGGTCTGTAACTGACGGTGAGGCGGGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGT CCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTAGGGGTTTCGATGGCGGTAGTGCGGAAGTAAAGAGA TTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTAGGACCGCAAGGTTGAAAGTCAAAGGAATTGACGGGGAGCCGCA CAAGCAGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACGTTAGCAGGTCTTGACATCCTT TGACCACTCTGGAGACAGAGCTTCGCCTTCGGGGGCAAAGTGACAGGTGGTGGATGGTTGTCGTCA GGTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCGCGGAAGGAGCGCAAGCGTTGATGTTAGTTGGCAGCA TTTAGTTGGGCACTGTAAGGTGACTGCGGGTGACAAACGGGAGGAAGGTGGGGACGACGTGAAATG ATCATGCCCGTTATGACCTGGGCTACAGACGTGCTACAATGGATGGTAGAAAGGGTTGCGAAGCGG CGAGGTGAAGCGAATCCCATAAAGCCATTGTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTGGGCTACATGA AGCCGGAATTGGTAGTAATCGCGGATGAGGATGGCGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACA CCGGCCGTCAGACCACGAGAGTTTGTAACACGGGAAGTCGGTGAGGTAAGCTTTTGGAGCGAGCCG GCTAAGGTGGGACAAATGATTGGGGTGAAGTGGTAACAAGGTAGCCT結(jié)合菌株的菌落特征、生理生化特性、16SrDNA同源性分析等方面的區(qū) 別性特征，初步鑒定菌株LZ-10為芽孢桿菌屬(5aw7^As sp)。菌株的發(fā)酵將種子培養(yǎng)液接入裝有30ml發(fā)酵培養(yǎng)基的三角瓶中，置于回轉(zhuǎn)式恒溫調(diào) 速搖瓶柜中進(jìn)行好氧發(fā)酵，轉(zhuǎn)速為200rpm/min， 37'C發(fā)酵4天。發(fā)酵液離心， 取上清液(含環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶)，置于4'C保存。所用發(fā)酵培養(yǎng)基 玉米淀粉1%,酵母膏0. 1%， Na2C03 0. 5% ， K2HP04. 3H20 0. 13%, MgS04. 7H20 0. 02%。酶活測(cè)定方法和粗酶酶學(xué)性質(zhì) (1 )酶活觀!j定方》去(見(jiàn)H. J. Fuwa. A new method for microdetermination of amylase activity by the use of amylase as the substrate [J]. Biochemistry, 1954(41): 583-603)① 原理馬鈴薯淀粉與碘溶液作用后顯出藍(lán)色，當(dāng)?shù)矸郾籔-CGTase 水解成P -CD后使得碘溶液引起的顏色變化變?nèi)酢＂?測(cè)定步驟取0.01ml適當(dāng)稀釋的酶液，加0.2ml 0.2M的Gly-NaOH 緩沖液(pH9.0)，再加溶解的0.2%馬鈴薯淀粉溶液0.2ml， 40。C反應(yīng)10分鐘， 加0.5M冰醋酸0.5ml終止反應(yīng)，力n 3ml 0.005%碘溶液顯色，以不加淀粉溶液 的反應(yīng)液作空白，以不加酶液為對(duì)照，在700nm測(cè)定吸光度(OD值)。③ 酶活定義 一個(gè)活力單位定義為藍(lán)值下降10%所需的酶量。 酶活計(jì)算公式酶活(U/ml) =^"000><稀釋倍數(shù)a其中，a為對(duì)照組OD值，b為樣品OD值。 (2)粗酶酶學(xué)性質(zhì)(見(jiàn)附圖) 本發(fā)明分離得到產(chǎn)環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的優(yōu)良菌株LZ-IO，其所產(chǎn)環(huán) 狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶粗酶的最適反應(yīng)pH為9.0，最適反應(yīng)溫度為65"C，熱 穩(wěn)定性較好，在60°C-65。C下保溫30分鐘仍保持95%以上的殘余酶活，在 pH8. 5-9. 5條件下保溫30分鐘時(shí)仍保持90%以上的殘余酶活。同已報(bào)道的環(huán) 狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶相比較，該酶兼具耐熱和耐堿特性，適合應(yīng)用于環(huán)狀 糊精的酶法工業(yè)化生產(chǎn)過(guò)程。


圖1為本發(fā)明的粗酶酶學(xué)性質(zhì)檢測(cè)中的最適溫度曲線。圖2為本發(fā)明的粗酶酶學(xué)性質(zhì)檢測(cè)中的最適pH曲線。圖3為本發(fā)明的粗酶酶學(xué)性質(zhì)檢測(cè)中的溫度對(duì)酶穩(wěn)定性的影響。圖4為本發(fā)明的粗酶酶學(xué)性質(zhì)檢測(cè)中的pH對(duì)酶穩(wěn)定性的影響。本發(fā)明的微生物保藏日期為2007年6月22日，保藏單位簡(jiǎn)稱CGMCC，地址北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號(hào)，保藏編號(hào)CGMCCNo. 2096，分類命名芽孢桿菌^acj'J^s邵.。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1、 菌株的分離和篩選從富含淀粉的麥地、淀粉廠、糧庫(kù)等周圍采集土樣，稱取土樣5g至45ml 生理鹽水中，加入玻璃珠充分震蕩后置于沸水浴中5分鐘，靜置l小時(shí)；取 土樣上清液100pl于試管中，做梯度稀釋，取適宜稀釋度涂布篩選平板，于電 熱恒溫培養(yǎng)箱中37。C培養(yǎng)48hr。培養(yǎng)5天后(1、 3、 5天分別)觀察菌落形 成與形成變色透明圈的大小，挑取有黃色透明圈者，劃線分離純化；將純化 后的菌株接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶發(fā)酵，通過(guò)酶活測(cè)定最終分離篩選 到產(chǎn)環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶酶活高且穩(wěn)定性好的菌株LZ-10。所用篩選培養(yǎng)基可溶性淀粉1%，無(wú)水碳酸鈉1%，蛋白胨1%，酵母膏 0. 5%， K2HP0" 3H20 0. 13%， MgSO.,. 7H20 0. 02%，酚酞0. 03%，瓊脂2% (pH9. 0)。所用發(fā)酵培養(yǎng)基玉米淀粉1%，酵母膏O. 1%， Nam 0.5%， K異.3H2。 0. 13%， MgS04. 7H20 0. 02%。2、 菌株的初步鑒定-根據(jù)形態(tài)、培養(yǎng)特征和生理生化測(cè)定的鑒定，菌株LZ-10為革蘭氏陽(yáng)性 芽孢桿菌，芽孢卵圓形。能在10 7(TC溫度范圍內(nèi)生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度為28 37 °C，生長(zhǎng)pH是7.0 10.0,最適生長(zhǎng)pH為8.0 9.0。過(guò)氧化氫酶反應(yīng)陽(yáng)性，好 氧生長(zhǎng)，V.P.反應(yīng)陽(yáng)性，水解淀粉和明膠，不利用檸檬酸鹽，不還原硝酸鹽，
不形成吲哚和二羥基丙酮等。根據(jù)16S rDNA序列相似性比對(duì)，LZ-10的16S rDNA與勘C2'"^ sp. DSM 8714有99%的同源性，與萬(wàn)aci"〃s pate卵d'e/^^s PAT 05t有9996的同源性， 與萬(wàn)sc2'""s sp.麗3-SN6有97%的同源性。菌株16S rDNA在GenBank的登 陸號(hào)為DQ400103。結(jié)合菌株的菌落特征、生理生化特性、16SrDNA同源性分 析等方面的區(qū)別性特征，初步鑒定菌株LZ-10為芽孢桿菌屬(Aaw77^ sp)。3、菌株的發(fā)酵將種子培養(yǎng)液接入裝有30ml發(fā)酵培養(yǎng)基的三角瓶中，置于回轉(zhuǎn)式恒溫調(diào) 速搖瓶柜中進(jìn)行好氧發(fā)酵，轉(zhuǎn)速為200 rpm/min， 37'C發(fā)酵4天。發(fā)酵液離心， 取上清液，置于4'C保存。所用發(fā)酵培養(yǎng)基玉米淀粉1%，酵母膏0. 1%， Na2C03 0. 5% ， K2HP04. 3H20 0. 13%, MgS04. 7H20 0. 02%。(:GTase專利—ST25.1xtSEQUENCE LIST[NG〈no>云南師范大學(xué)<120〉 一種環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的產(chǎn)生菌及:1L:制備方法 <130〉 12 <160〉 1<170> Patentln version 3.4<210〉 1<21i> 1499<212〉 腿<213〉 Bacillus sp.<22。〉<221〉 r隨<222> (1)., (1499)<400> 1ccgttgccag tatggctacc atccttgcat tccgaagtcg agcggacaga agggagcttg 60ctcccggaag tcagcggcgg acgggtgagt aacacgtggg c朋cctgccc cttagactgg 120gataacttcg ggaaaccgaa gctaataccg gataacactt tUcctacct gggagaaagt 180taaaagatgg cctttgtgc.t at(:actaggg gatgggcccg cggcgcatta gctagttggt 240aaggtaatgg cttaccaagg cgacgatgcg tagccgacct gagagggtga tcggccacac 300tgggactgaa acacggccca gactcctacg ggaggcagca gtagggaatc ttccgcaatg 360gacgaaagtc tgacggagca atgccgcgtg agtgaggaag gccttcgggt cgtaaagctc 420tgttgtgagg gaagaacaag tatcggttga ataagccggt accttgacgg tacctcacca 480gaaagccacg gctaactacg tgcxagcagc cgcgglaata cgtaggtggc aagcgttgtc 540cggaattatt gggccgtaaa gcgcgcgcag gcggcUctt, aaagtctgat gtgaaatctc 600ggggctcacc cccgagcggc cattgg幼ac tggg犯gctt gagtgcagaa gagg卿gtg 660gaattccacg tgtagcggt.g aaatgcgtaa gatatgtgga ggaacaccag tggggaaggc 720gactctctgg tctgtaactg acgctgaggc gcgaaagcgt ggggagcaaa caggattaga 780taccctggta gtccacgccg taaacgatga gtgctaggtg ttaggggttt cgatgcccgt 840agtgccgaag taaacacatt aagcactccg cctggggagt acgaccgcaa ggttgaaact 900caaaggaatt gacggggacc cgcac犯gca gtggagcatg tggtttaatt cg犯gcaacg 960cgaagaacct taccaggtct tgacatcctt tgaccactct ggagacagag c.U.ccccttc 1020gggggc編g tg織ggtgg tgcatggttg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt 1080aagtcccgca acgagcgcaa cccttgatct tagttgccag catttagttg ggcactctaa 1140ggtgactgcc ggtgac朋ac cggagg朋gg tggggacgac gtcaaatcat catgcccctt 1200atgacctggg ctacacacgt gctacaatgg atggtacaaa gggttgcgaa gccgcgaggt 1260gaagccaatc ccataaagcc attctcagtt cggattgtag gctgcaactc gcctacatga 1320agccggaatt gctagtaatc gcggatcagc atgccgcggt gaatacgttc ccgggtcttg 1380tacacaccgc ccgtcacacc acgagagttt gtaacacccg aagtcggtga ggtaaccttt 1440tggagccagc cgcctaaggt gggacaaatg attggggtga agtcgtaaca aggtagcct 1499
權(quán)利要求
1、一種環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的產(chǎn)生菌，為芽孢桿菌屬(Bacillus sp)，其保藏編號(hào)為CGMCC No.2096。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)生菌，其特征在于 該菌株LZ-10的16S rDNA基因?yàn)镃CGTTGCCAGTATGGGTACCATCGTTGCATTCCGAAGTCGAGGGGACAGAAGGGAGCTTGCTCGGG GAAGTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGGMCCTGGCCCTTAGACTGGGATAACTTGGGG AAAGCGAAGCTAATACGGGATAACACTTTTTGGTACCTGGGAGAAAGTTAAAAGATGGCCTTTGTG GTATCAGTAGGGGATGGGGGCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTAAGGTAATGGGTTACGAAGGCGAC GATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAAACACGGCGCAGAGTCCTACG GGAGGCAGGAGTAGGGAATCTTCCGGAATGGACGAAAGTGTGACGGAGCAATGCGGCGTGAGTGAG GAAGGCCTTCGGGTCGTAAAGCTCTGTTGTGAGGGAAGAACAAGTATCGGTTGMTAAGCCGGTAG CTTGACGGTACCTGACCAGAAAGGCACGGCTAACTAGGTGCCAGCAGCGGCGGTAATACGTAGGTG GCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGCTTCTTAAAGTGTGATGTGA AATCTCGGGGCTCACGCCCGAGCGGGGATTGGAAACTGGGAAGCTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTG GAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGGGTAAGATATGTGGAGGAACAGGAGTGGGGAAGGCGACTCT CTGGTGTGTAAGTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGGAAAGAGGATTAGATACCCTGGTAGT CCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTAGGGGTTTCGATGCCCGTAGTGCCGAAGTAAACACA TTAAGCACTGGGCGTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAAGTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCA CAAGGAGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAAGGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATGCTT TGACCACTCTGGAGACAGAGCTTCGCCTTCGGGGGGAAAGTGAGAGGTGGTGGATGGTTGTCGTCA GCTCGTGTGGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCGGCAACGAGCGCAAGCCTTGATCTTAGTTGCCAGCA TTTAGTTGGGGACTGTAAGGTGACTGGCGGTGACAAACGGGAGGAAGGTGGGGAGGAGGTGAMTC ATCATGCGGGTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAAAGGGTTGCGAAGCCG CGAGGTGAAGGCAATCCCATAAAGCCATTCTCAGTTGGGATTGTAGGCTGCAAGTGGCGTACATGA AGCGGGAATTGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATAGGTTCCCGGGTGTTGTACAGA CCGCCGGTGACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTGGAGCCAGGGG CCTAAGGTGGGACAAATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCGT
全文摘要
本發(fā)明是一種環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的產(chǎn)生菌。本發(fā)明分離得到的菌株LZ-10，經(jīng)鑒定為芽孢桿菌屬(Bacillus sp)，其保藏編號(hào)為CGMCC No.2096。其所產(chǎn)環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶粗酶的最適反應(yīng)pH為9.0，最適反應(yīng)溫度為65℃，熱穩(wěn)定性較好，在60℃-65℃下保溫30分鐘仍保持95％以上的殘余酶活，在pH8.5-9.5條件下保溫30分鐘時(shí)仍保持90％以上的殘余酶活。同已報(bào)道的環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶相比較，該酶兼具耐熱和耐堿特性，適合應(yīng)用于環(huán)狀糊精的酶法工業(yè)化生產(chǎn)過(guò)程。
文檔編號(hào)C12R1/07GK101130761SQ20071006603
公開(kāi)日2008年2月27日 申請(qǐng)日期2007年7月13日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月13日
發(fā)明者唐湘華, 孟艷芬, 波 許, 黃遵錫 申請(qǐng)人:云南師范大學(xué)