專利名稱：碳納米管作為siRNA載體及其轉(zhuǎn)染方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及利用碳納米管作為siRNA載體及其 轉(zhuǎn)染的方法。
背景技術(shù)：
RNA干擾(RNAinterfering, RNAi)是由與靶基因序列同源的雙鏈RNA引 發(fā)的廣泛存在于生物體內(nèi)的序列特異性基因轉(zhuǎn)錄后的沉默過程。RNAi首先由 Andrew Fire等于1998年首先在秀麗線蟲中發(fā)現(xiàn)，隨后被廣泛發(fā)現(xiàn)于真菌、擬南 芥、水螅、渦蟲、錐蟲、斑馬魚等大多數(shù)真核生物中。ElbashirSM等于2001年 利用人工合成小分子雙鏈RNA在哺乳細(xì)胞中發(fā)揮RNAi作用，自此以后，RNAi 成為分子醫(yī)學(xué)強(qiáng)有力的工具。siRNA不穩(wěn)定，易被酶降解，細(xì)胞吸收率低，因此，高效的轉(zhuǎn)染載體對(duì)于其 效用的發(fā)揮至關(guān)重要。常見的RNAi轉(zhuǎn)染試劑，轉(zhuǎn)染效率不高，且毒性比較大， 在一定程度上限制RNAi在生物醫(yī)藥方面的應(yīng)用(參考文獻(xiàn)Behlke M.A. Progress towards in vivo use of siRNAs, Molecular therapy 13: 644-670.)。因此，本 領(lǐng)域迫切需要一種高效、細(xì)胞毒性低的轉(zhuǎn)染載體。碳納米管是一種生物降解的納米材料，比表面積大，能進(jìn)入細(xì)胞。它與核 酸非共價(jià)相互作用，被用作質(zhì)粒轉(zhuǎn)染載體(參考文獻(xiàn)Rojas-Chapana J, Troszczynska J, Firkowska I, Morsczeck C, Giersig M. ， Multi國(guó)walled carbon nanotubes for plasmid delivery into Escherichia coli cell. Lab Chip. 5: 536-539;Singh R, Pantarotto D, McCarthy D, Chaloin O, Hoebeke J, Partidos CD, Briand JP, Prato M, Bianco A, Kostardos K., Binding and condensation of plasmid DNA onto functionalized carbon nanotubes: toward the construction of nanotube畫based gene delivery vectors. J. Am. Chem. Soc. 127: 4388-4396.)。但是，碳納米管作為siRNA 載體載體，迄今為止，尚未見報(bào)導(dǎo)。己二胺功能化的碳納米管是根據(jù)相關(guān)專利制備的(中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?00610016734.4)。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種siRNA載體及其轉(zhuǎn)染的方法。本發(fā)明提供了一種 高效、低細(xì)胞毒性的轉(zhuǎn)染載體是下述的碳納米管為碳納米管通過疏水和靜電作用，吸附(absorbing)、纏繞(wrapping)和凝聚 (condensing) siRNA，將其轉(zhuǎn)染入細(xì)胞。因此，原始的單壁碳納米管或多壁碳納 米管(pristine MWCNTs or SWCNTs)，在原始的單壁碳納米管或多壁碳納米管基 礎(chǔ)上共價(jià)或非共價(jià)修飾的碳納米管，經(jīng)混酸(3:1 (v/v)的98%濃硫酸和70% 濃硝酸)超聲處理得到的羧基化的單壁碳納米管或多壁碳納米管，在羧基化的 單壁碳納米管或多壁碳納米管的基礎(chǔ)上非共價(jià)修飾的碳納米管，在羧基化的多 壁碳納米管的基礎(chǔ)上共價(jià)修飾的碳納米管和在羧基化的單壁碳納米管基礎(chǔ)上己 二胺共價(jià)修飾的碳納米管也能吸附、纏繞和凝聚siRNA，將其轉(zhuǎn)染入細(xì)胞，是 siRNA轉(zhuǎn)染有效載體。本發(fā)明提供的碳納米管作為siRNA載體轉(zhuǎn)染的方法，其步驟和條件為(1) 、常規(guī)方法制備siRNA;(2) 將碳納米管與siRNA混勻，siRNA與碳納米管按照1: 40 — 1: 200 (w/w)的比例混勻，在室溫15—30。C下放置三十分鐘至一小時(shí)。(3)利用步驟(2)處理后的碳納米管和siRNA混合物作用培養(yǎng)細(xì)胞。本發(fā)明施例所述的siRNA是特異性抑制人類細(xì)胞周期蛋白八2的siRNA，所 述的siRNA對(duì)應(yīng)的靶序列是人類細(xì)胞周期蛋白A2基因的mRNA,所述的siRNA 長(zhǎng)度為16—30bp，含有如下所示的核酸序列 5，- CCAUUG GUC CCU CUU GAU UTT- 3， 5'-AAUCAAGAGGGACCAAUGGTT國(guó)3，(SEQIDNO: 1) 較佳地，所述的siRNA的3'端含有2—4個(gè)dT或2—6個(gè)U的延伸結(jié)構(gòu)；


圖1:人類細(xì)胞周期蛋白A2 siRNA:本發(fā)明所述的siRNA轉(zhuǎn)染碳納米管載體復(fù) 合物的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳圖"),溴化乙啶染色;(Z)),銀染。帶1為0.3嗎 人類細(xì)胞周期蛋白A2 siRNA,其它的帶對(duì)應(yīng)于不同質(zhì)量比率的人類細(xì)胞周期蛋白A2siRNA (0.3貼)碳納米管復(fù)合物帶2， 1: 10;帶3， 1: 20;帶4， 1:40。圖2:本發(fā)明所述的siRNA轉(zhuǎn)染碳納米管載體對(duì)K562細(xì)胞的毒性圖。 40pg/mL的碳納米管加入K562細(xì)胞，48小時(shí)后苔酚藍(lán)拒染法細(xì)胞計(jì)數(shù)，未經(jīng) 處理的對(duì)照組細(xì)胞存活率設(shè)定為100%。圖3: RT-PCR檢測(cè)本發(fā)明所述的轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染人類細(xì)胞周期蛋白A2 siRNA的轉(zhuǎn)染效率圖。圖4:免疫印跡檢測(cè)檢測(cè)本發(fā)明所述的轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染人類細(xì)胞周期蛋白A2 siRNA的轉(zhuǎn)染效率圖。圖5:苔酚藍(lán)拒染細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)本發(fā)明所述的轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染人類細(xì)胞周期蛋白A2 siRNA的轉(zhuǎn)染效率圖。圖6:軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)本發(fā)明所述的轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染人類細(xì)胞周斯蛋白八2 siRNA的轉(zhuǎn)染效率圖。所述的siRNA以己二胺功能化的碳納米管為載體，經(jīng)轉(zhuǎn)染使K562細(xì)胞的人 類細(xì)胞周期蛋白A2的niRNA表達(dá)水平下降60—95X。本發(fā)明之方法有低細(xì)胞毒性、 轉(zhuǎn)染效率高等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1:碳納米管 本發(fā)明的單壁碳納米管，購(gòu)自Adrich(St丄ouis,MO,USA)，直徑l.lnm。羧基化碳納米管，按如下方式制備把單壁碳納米管在3:1 (v/v)的濃硫.酸 (98%)和濃硝酸(70%)的混酸中超聲處理24小時(shí)，然后水洗至pH值接近中性。己二胺功能化的碳納米管是根據(jù)相關(guān)專利技術(shù)(參考文獻(xiàn)中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?00610016734.4)制備的。實(shí)施例2: siRNA:碳納米管復(fù)合物的制備用常規(guī)方法制備siRNA。本發(fā)明施例所述的siRNA是特異性抑制人類細(xì)胞 周期蛋白A2的siRNA，所述的siRNA對(duì)應(yīng)的靶序列是人類細(xì)胞周期蛋白八2基 因的mRNA,所述的siRNA長(zhǎng)度為16 — 30bp，含有如下所示的核酸序列 5'畫CCAUUG GUC CCU CUU GAU UTT- 3， 5，-AAUCAAGAGGGACCAAUGGTT國(guó)3，(SEQIDNO: 1)較佳地，所述的siRNA的3'端含有2—4個(gè)dT或2—6個(gè)U的延伸結(jié)構(gòu)； 陰性對(duì)照siRNA為5，- UUC UCC GAA CGU GUC ACG UTT- 3'5，- ACG UGA CAC GUU CGG AGA ATT- 3,將siRNA與碳納米管按照1: 40—1: 200 (w/w)的比例混勻，在室溫(.15 一30。C)下放置三十分鐘至一小時(shí)。非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳實(shí)驗(yàn)證實(shí)，當(dāng)siRNA與己二胺功能化的碳納米管 的比例達(dá)到1: 40時(shí)，幾乎所有的siRNA被碳納米管吸附、纏繞和凝聚，見圖 1。實(shí)施例3:轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染主要有如下步驟(1) 待轉(zhuǎn)染細(xì)胞的準(zhǔn)備將K562細(xì)胞接種于含10X胎牛血清、2mmol/L谷 胺酰胺的IMDM (Iscove's modified Dulbecco's medium)培養(yǎng)基中，置于37°C ， 5 %C02 (v/v)濃度的飽和濕度培養(yǎng)箱中，于實(shí)驗(yàn)前兩周無藥培養(yǎng)。(2) 用實(shí)施例2的方法制備siRNA:碳納米管復(fù)合物。(3) 轉(zhuǎn)染將細(xì)胞接種于6孔或24孔培養(yǎng)板中，密度為0.5 —1》105 cells/mL， 將siRNA:碳納米管復(fù)合物加入細(xì)胞中，siRNA終濃度為40n mol/L，然后置于 37°C， 5%C02 (v/v)濃度的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。實(shí)施例4:碳納米管的細(xì)胞毒性本發(fā)明施例中，將40pg/mL的羧基化碳納米管或己二胺功能化的碳納米管 (終濃度)加入K562細(xì)胞中培養(yǎng)3天，通過苔酚藍(lán)計(jì)數(shù)顯示碳納米管處理組相對(duì)對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)沒有明顯影響，見圖2。顯微鏡觀察碳納米管處理組細(xì)胞形態(tài) 正常，這說明本發(fā)明所述碳納米管載體沒有明顯的細(xì)胞毒性，即使是在如此高 的濃度下。實(shí)施例5:RT-PCR檢測(cè)本發(fā)明所述的轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染人類細(xì)胞周期蛋白A2siRNA的轉(zhuǎn)染效率 方法如下細(xì)胞中總RNA的提取制備按照Trizol試劑(Invitrogen公司)的說明進(jìn)行。 細(xì)胞離心后，加入lmL Trizol試劑，充分勻漿；加入0.2mL氯仿混勻，室溫放 置5分鐘，4°C， 12， 000Xg離心10分鐘；取上層水相置于新管，加入0.5mL 異丙醇，一20。C放置30分鐘后，4°C， 12， 000Xg離心15分鐘；棄上清，用 75%的乙醇洗滌沉淀，4°C， 12， 000Xg離心10分鐘，棄上清；小心吸取殘留 乙醇，室溫下放置15分鐘干燥；溶解于40uLTE溶液(10mmol/LTris-HCl,lm mol/LEDTA,pH7.0);跑甲醛瓊脂糖凝膠電泳觀察28S和18SrRNA條帶是否清 晰，以確保所提取的RNA的完整性，測(cè)紫外光譜進(jìn)行純度的鑒定和濃度的確定。RT-PCR擴(kuò)增及鑒定將提取的總RNA用RNase-free DNase ((l U/pL Takara; Dalian, China),在37。C下溫育30分鐘，然后在75。C處理5分鐘以滅活DNase。 取0.5嗎細(xì)胞總RNA，按照TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0的說明進(jìn)行PCR擴(kuò)增。人類細(xì)胞周期蛋白A2的上游引物序列如下所示5，- TCC ATG TCA GTG CTG AGA GGA -3'人類細(xì)胞周期蛋白A2的上游引物序列如下所示5，- GAA GGT CCA TGA GAC AAG GC -3,這對(duì)引物跨越3個(gè)內(nèi)含子，因此可能遭受污染基因組DNA不會(huì)被擴(kuò)增。 內(nèi)參glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)上游引物序歹ll如下所示5'-ACC TGA CCT GCC GTC TAG AA-3' 內(nèi)參GAPDH下游引物序列如下所示 5，-TCC ACC ACC CTG TTG CTG TA誦3'每個(gè)樣品加入兩對(duì)引物擴(kuò)增，反應(yīng)參數(shù)94"C30秒，6(TC30秒，72°C 1分 鐘，25個(gè)循環(huán)。人類細(xì)胞周期蛋白A2預(yù)期產(chǎn)物片段大小為451bp, GAPDH期產(chǎn) 物片段大小為247bp。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖電泳分析，溴化乙啶染色 (0.5jig/mL),用UVP生物成像系統(tǒng)(Ultraviolet Products, Upland, CA, USA)'照相，并分析數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，用人類細(xì)胞周期蛋白A2 siRNA:碳納米管復(fù)合物處理的細(xì)胞 組相對(duì)于單獨(dú)人類細(xì)胞周期蛋白A2 siRNA處理組、陰性對(duì)照siRNA:碳納米管復(fù) 合物處理組，人類細(xì)胞周期蛋白A2在mRNA水平明顯受到抑制，抑制率為75 %，見圖3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)本發(fā)明所述的碳納米管載體是一種高效的siRNA載 體。實(shí)施例6:免疫印跡檢測(cè)檢測(cè)本發(fā)明所述的轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染人類細(xì)胞周期蛋白A2siRNA的轉(zhuǎn)染效率方法如下收集轉(zhuǎn)染后40小時(shí)的K562細(xì)胞，PBS溶液洗兩次，用RIPA溶 '液(radio-immunoprecipitation assay buffer: 150 mmol/L氯寸七纟內(nèi)，50 mmol/L Tris-HCl, 0.5%脫氧膽酸鈉，1% NP-40, 0.1% SDS, pH 7.6，含蛋白酶抑制劑混合物) 裂解。用Bradford方法確定蛋白濃度。取20嗎總蛋白，加入等體積的2x還原性的SDS-變性聚丙烯酰胺電泳上樣緩沖液(100 mmol/L Tris, 4% SDS, 25%甘油, 10% P-mercaptoethanol, 0.01%溴酚藍(lán)，pH 6.8), 95。C變性10分鐘，用12%SDS-變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離。隨后將蛋白從膠上轉(zhuǎn)至PVDF膜，轉(zhuǎn)移條件為 使用裝置為Biorad Mini Trans-Blot Electrophoretic Transfer Cell;轉(zhuǎn)移溶液.為 25mmol/LTris-HCl，192mmol/L甘氨酸，pH8.3， 20%甲醇；100V恒壓，1小時(shí)。 室溫封閉(含2% BSATBST溶液)2小時(shí)，以封閉液稀釋的兔抗人類細(xì)胞周期蛋 白A2的單克隆抗體(Lab Vision Corporation, CA, USA)或兔抗人GADPH多克隆 抗體(Santa Cruz, CA,USA)室溫孵育1小時(shí)，以TBST (含0.05%TWeen-20的 TBS)洗8分鐘，5次，以封閉液稀釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔lgG二抗， 室溫孵育1小時(shí)，以TBS (20m mol/L Tris-HC1,150 m mol/L氯化鈉)洗8分鐘， 5次，底物4—CN/DAB (Pierce, IL, USA)顯色檢測(cè)。結(jié)果顯示，用人類細(xì)胞周期蛋白A2 siRNA:碳納米管復(fù)合物處理的細(xì)胞組相 對(duì)于單獨(dú)人類細(xì)胞周期蛋白A2 siRNA處理組、陰性對(duì)照siRNA:碳納米管復(fù)合物 處理組，人類細(xì)胞周期蛋白A2在蛋白水平明顯受到抑制，抑制率為70%，見圖 4。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)本發(fā)明所述的轉(zhuǎn)染方法是一種高效的轉(zhuǎn)染方法。實(shí)施例7:苔酚藍(lán)拒染細(xì)胞計(jì)數(shù)表征本發(fā)明所述的轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染人類細(xì)胞周期 蛋白A2 siRNA的轉(zhuǎn)染效率人類細(xì)胞周期蛋白A2是細(xì)胞周期蛋白家族的一員，參與Gl/S期和G2/M期 轉(zhuǎn)換，在DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用。本施例通 過苔酚藍(lán)拒染細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)人類細(xì)胞周期蛋白A2siRNA對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響來表 征本發(fā)明所述的轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染人類細(xì)胞周期蛋白A2 siRNA的轉(zhuǎn)染效率。細(xì)胞接種于6孔板，每孔10 000個(gè)細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后隔一段時(shí)間取樣，用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行苔酚藍(lán)拒染法細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示(見圖5):碳納米管處理組、陰性對(duì)照siRNA:碳納米管復(fù)合物處 理組相對(duì)于對(duì)照組(細(xì)胞未作任何處理)，細(xì)胞生長(zhǎng)沒有受到明顯影響；而人類 細(xì)胞周期蛋白A2SiRNA:碳納米管復(fù)合物處理組相對(duì)于對(duì)照組，細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受 到抑制，抑制率為60%。該結(jié)果證實(shí)本發(fā)明的人類細(xì)胞周期蛋白A2siRNA可作 為抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的抗腫瘤藥物。該結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了本發(fā)明所述碳納米管載體 是一種優(yōu)良的siRNA載體，能有效將siRNA轉(zhuǎn)入細(xì)胞，使其發(fā)揮生物學(xué)功能。實(shí)施例8:軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)表征本發(fā)明所述的轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染人類細(xì)胞周期 蛋白A2siRNA的轉(zhuǎn)染效率方法如下(1) 按照實(shí)施例4所述的方法轉(zhuǎn)染細(xì)胞。(2) 將24孔板鋪上底層瓊脂糖培養(yǎng)基(含0.7%瓊脂糖的培養(yǎng)基)。(3) 配置瓊脂糖含量為0.35%的頂層培養(yǎng)基，置于37。C水浴。(4) 取轉(zhuǎn)染后40小時(shí)的細(xì)胞，加入頂層培養(yǎng)基中，混勻，鋪于頂層培養(yǎng) 基上，每孔500個(gè)細(xì)胞。(5) 置于37"C， 5%C02 (v/v)濃度的飽和濕度培養(yǎng)箱中。(6) 三周后，顯微鏡下克隆計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示(見圖6):人類細(xì)胞周期蛋白A2siRNA處理組、陰性對(duì)照siRNA: 碳納米管復(fù)合物處理組相對(duì)于對(duì)照組(細(xì)胞未作任何處理)，克隆形成能力沒 有受到明顯影響；而人類細(xì)胞周期蛋白A2 siRNA:碳納米管復(fù)合物處理組相對(duì) 于對(duì)照組，克隆形成能力明顯受到抑制，抑制率為72%。該結(jié)果更進(jìn)一步證實(shí)了本發(fā)明所述的轉(zhuǎn)染方法是一種高效的轉(zhuǎn)染方法，能有效將siRNA轉(zhuǎn)入細(xì)胞，使其發(fā)揮生物學(xué)功能。序列表<110>中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所<120〉碳納米管作為siRNA載體及其轉(zhuǎn)染方法 <130〉 <160> 8<170> Patentln version 3.3<210> 1<211> 21<212〉 DNA<213> 人工序列<220><223> 根據(jù)Elbashir userguider原則設(shè)計(jì)以人類細(xì)胞周期蛋白A2為靶標(biāo)的siRNA正義序列 <400> 1ccauuggucc cucuugauut t 21<210> 2 <211> 21<212> DNA<213〉 人工序列 <220〉<223> 根據(jù)Elbashir userguider原則設(shè)計(jì)以人類細(xì)胞周期蛋白A2為靶標(biāo)的siRNA反義序列<400〉 2aaucaagagg gaccaauggt t 2]<210> 3<211〉 21<212> DNA<213>人工序列<220><223>陰性對(duì)照siRNA正義序列，與人、小鼠、大鼠基因均無任何同源性<400> 3uucuccgaac gugucacgut t 21<210> 4<211〉 21<212> DNA<213> 人工序列<220><223〉 陰性對(duì)照siRNA反義序列，<400〉 4acgugacacg uucggagaat t<210> 5<211〉 21<212〉 DNA<213> 智人(Homo sapiens)<400> 5tccatgtcag tgctgagagg a<210> 6<211〉 20<212〉 DNA<213> 智人(Homo sapiehs)<400〉 6gaaggtccat gagacaaggc<210〉 7<211> 20<212> DNA<213> 智人(Homo sapiens)<400〉 7與人、小鼠、大鼠基因均無任何同源性2121acctgacctg ccgtctagaa 20 <210> 8 <211〉 20 <212> DNA<213> 智人(Homos叩iens) <400> 8tccaccaccc tgttgctgta 20
權(quán)利要求
1、碳納米管作為siRNA的載體，其特征在于，所述的碳納米管為原始的單壁碳納米管或多壁碳納米管；在原始的單壁碳納米管或多壁碳納米管基礎(chǔ)上共價(jià)或非共價(jià)修飾的碳納米管，經(jīng)3∶1(v/v)的98％濃硫酸和70％濃硝的酸混酸超聲處理得到的羧基化的單壁碳納米管或多壁碳納米管；在羧基化的單壁碳納米管或多壁碳納米管的基礎(chǔ)上非共價(jià)修飾的碳納米管；在羧基化的多壁碳納米管的基礎(chǔ)上共價(jià)修飾的碳納米管或在羧基化的單壁碳納米管基礎(chǔ)上非己二胺共價(jià)修飾的碳納米管。
2、 碳納米管作為siRNA的載體的方法，其特征在于，步驟和條件如下(1) 、常規(guī)方法制備SlRNA;(2) 將碳納米管與siRNA混勻，siRNA與碳納米管按照1: 40 — 1: 200 (w/w) 的比例混勻，在室溫15—3(TC下放置三十分鐘至一小時(shí)；(3) 利用步驟(2)處理后的碳納米管和siRNA混合物作用培養(yǎng)細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及利用碳納米管作為siRNA載體及其轉(zhuǎn)染的方法。本發(fā)明利用碳納米管作為siRNA的轉(zhuǎn)染載體，該載體具有很低的細(xì)胞毒性，能有效將siRNA轉(zhuǎn)入細(xì)胞，使其發(fā)揮生物學(xué)功能。其轉(zhuǎn)染方案為(1)常規(guī)方法制備siRNA；(2)將碳納米管與siRNA混勻，室溫放置一段時(shí)間；(3)利用以上處理后的碳納米管和siRNA混合物作用培養(yǎng)細(xì)胞。本發(fā)明的碳納米管作為siRNA載體及其轉(zhuǎn)染的方法有低細(xì)胞毒性、轉(zhuǎn)染效率高等優(yōu)點(diǎn)。所述的siRNA以己二胺功能化的碳納米管為載體，經(jīng)轉(zhuǎn)染使K562細(xì)胞的人類細(xì)胞周期蛋白A₂的mRNA表達(dá)水平下降60-95％。
文檔編號(hào)C12N15/63GK101220369SQ200710056310
公開日2008年7月16日 申請(qǐng)日期2007年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月13日
發(fā)明者曲曉剛, 王曉輝 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所