專(zhuān)利名稱(chēng)：：酶促制備香茅醛的方法酴&制備香茅醛的方法本發(fā)明涉及從a，/-不飽和醛類(lèi)制備旋光飽和酪類(lèi)或醇類(lèi)的除淀方法，尤其是制備香茅搭的方法。發(fā)明背景(R)-(+)香茅醛是重要的化學(xué)中間體，其例如可用于制備薄荷醇?；瘜W(xué)法制備(R)-(+)香茅醛，始于檸檬醛，需要非常復(fù)雜的方法(隔絕氧和7JC)，這導(dǎo)致工業(yè)合成的成^f艮高。發(fā)明目的目的是提供通過(guò)對(duì)應(yīng)選擇性還原檸檬醛制備香茅醛的方法，該方法提供了高化學(xué)產(chǎn)率且擁有最大對(duì)映體純度的香茅醛。發(fā)明描述本發(fā)明涉及在烯醇還原酶的存在下通過(guò)還原從式(l)的a，P-不飽和窿類(lèi)制備式(2)的旋光飽和醛類(lèi)或醇類(lèi)的過(guò)程。所述烯醇還原酶(i)具有多肽序列SEQIDNo.l或2,或(ii)具有與SEQIDNo.l或2的序列至少80%同一的多肽序列。(1)(2)其中，Rl和R2分別獨(dú)立地為H、CrCr烷基，R3為H、d-CV烷基或烯基，以支鏈和直鏈形式。本發(fā)明方法可使用式(l)的a，p-不飽和醛類(lèi)實(shí)現(xiàn)，在所述式1中Rl和R2分別獨(dú)立地為H、支鏈和直鏈形式的d-Cr烷基，R3為H、支鏈和直鏈形式的d-CV烷基或烯基。烷基和烯基可以是單或多取代的。本發(fā)明的方法特別適宜的底物是式(l)的那些a，(5-不飽和醛類(lèi)，其中Rl為H，R2為CH3且R3為-<:112-<:112-<:11=(<:113)2(順式或反式檸檬醛)；以及其中Rl為CH3,R2為H且R3為013(2-甲基-戊-2-烯-1-醛)的那些。本發(fā)明所采用的烯醇還原酶，偶爾且在某種程度上，也會(huì)除了將a^官能團(tuán)的a，j5位中的雙鍵還原之外，還原所述羰基官能團(tuán)自身，以在該情況中產(chǎn)生相應(yīng)的醇。適用于本發(fā)明方法的烯醇還原酶，是能夠在NADPH依賴(lài)的反應(yīng)中將2-曱基-戊-2-烯-l-醛還原以提供(S)-2-甲基-戊烷-l-醛的酶。該反應(yīng)在下文中也凈皮稱(chēng)作纟莫式反應(yīng)。此外，本發(fā)明方法中適合的烯醇還原酶具有如SEQIDNo.l或No.2的多肽序列，或與SEQIDNo.l或2的序列為至少80。/n、優(yōu)選至少90%、特別優(yōu)選至少95%、以及尤其是至少97%、98%或99%同一的多肽序列。具有SEQIDNo.l的多肽是來(lái)自貝克酵母菌中的QYE2基因(釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)基因座YHR179W)。具有SEQIDNo.2的多肽是來(lái)自貝克酵母菌中的QYE3基因(釀酒酵母基因座YPL171C)。為了本文描迷的目的，序列同一性由威斯康星大學(xué)(UniversityofWisconsin)遺傳計(jì)算機(jī)組(GeneticsComputerGroup,GCG)的計(jì)算;^^呈序"GAP"確定，采用10.3版本和GCG推薦的標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)。從SEQIDNo.l或2開(kāi)始，此類(lèi)烯醇還原酶可以通過(guò)技術(shù)人員已知的特定或隨機(jī)誘變過(guò)程得到。但是可選的，也可以就烯醇還原酶篩選樣史生物，特別是以下屬的那些J/&/^HWie//<i、交替球菌屬^4/r^w^cc"^、匈wa附owas、Ji7im'co/a、殺雄菌屬(14rsewo!p^wi/s)、々Wv/rg"、丑rewwm'a、布赫納氏菌屬0"cA/iWtf)(蜂蟲(chóng)P-內(nèi)共生體)，布戴約維采菌屬OB"i/v/c/a)、布丘氏菌屬^B"故ViMx:e,/a)、C""編fl似s尸A/o附ofettctef，西地西菌屬(CW"^1)、檸檬酸細(xì)菌屬(OY/Y^""w),D/cA:^^,愛(ài)德華氏菌屬、腸桿菌屬(五"fe/vAacter),歐文氏菌屬(jE"nv/"/ff)，埃希氏菌屬(jE^c/rer/c/f/")，愛(ài)文菌哉￡"卿>^//")，GW附o"/e〃"，哈夫尼菌屬(^(/>|/")，克雷伯氏菌屬(1&^>//")，克呂'沃爾菌屬(iO"3;vwfl)，勒克菌屬(JLec/e,c/a)，勒米《若菌屬(/^>)/^//")、米勒菌屬(Af(CerC/a)，摩根菌屬(Mof^awe/Za)，月巴軒菌屬((76esM/w6flcte"M附)，泛菌屬(尸flwtoea》果股軒菌屬(尸ec似Aflcten'M附),發(fā)光軒菌屬(jP/w似r/raAdMs),鄰單胞菌屬(/YesiV附o"fls),布拉格菌屬(iV"g/fl)、^承并,4(尸w紐附)，普羅威登斯菌屬(/VoviVfew"Vi)，#,感、拉烏爾菌屬(K朋"/feWa)、沙門(mén)菌氏屬(S"/附owe//^、沙門(mén)菌屬(S"wso"/fl)，沙雷氏菌屬(Seira""),志賀氏菌屬(^/^^//")、、塔特姆菌屬(r"似附e,/fl)、7hiAw/wW/flr、ff7gg/esMW^/"、致病桿菌屬(JVTewof^"^/附)，耶爾森氏菌屬(!^,'/|/");^約克菌屬(1^^^//<1)，所述烯醇還原酶催化上述模式反應(yīng)，且其M酸序列已經(jīng)具有所需的與SEQNo.l或2的序列同一性或其通過(guò)誘變過(guò)程得到。所述烯醇還原酶可以以純化或部分純化的形式或者另外以;微生物本身的形式4吏用。從微生物中回收和純化脫氫酶的方法是技術(shù)人員充分了解的。用所述烯醇還原酶的對(duì)映選擇性還原優(yōu)選在合適的輔因子(也叫做協(xié)同底物)的存在下進(jìn)行。還原酮常用的輔因子是NADH和/或NADPH。此外，也可以將烯醇還原酶用作天然包含輔因子的細(xì)胞系統(tǒng)，或添加可選的氧化還原介體(A.Schmidt,F.Hollmann和B.Biihler"OxidationofAlcohols"inK.Drauz和H.Waldmann，EnzymeCatalysisinOrganicSynthesis2002,第III巻，991-1032,Wiley-VCH，Weinheim)。更加優(yōu)選在合適還原劑的存在下用所述烯醇還原酶實(shí)現(xiàn)對(duì)映選擇性還原，所述還原劑再生在所述還原過(guò)程中被氧化的輔因子。合適還原劑的實(shí)例有糖類(lèi)，特別是己糖，例如葡萄糖、甘露糖、果糖，和/或可被氧化的醇類(lèi)，特別是乙醇、丙醇或異丙醇，也可以是甲酸鹽、亞磷酸鹽或氫分子。為了氧化還原劑并與^目關(guān)地再生輔酶，可以添加第二種脫氫酶，例如，若使用的還原劑是葡萄糖，那么添加葡萄糖脫氫酶；或者如果使用的還原劑是甲酸鹽，那么添加甲酸脫氫酶。所述的第二種脫氬酶可以作為游離或固定化的酶，或者以游離或固定化細(xì)胞的形式使用。其制備可以分別進(jìn)行，也可以通過(guò)在(重組)還原酶菌林中共表達(dá)來(lái)進(jìn)行。所述方法的優(yōu)選實(shí)施方案是通過(guò)酶促系統(tǒng)再生輔因子，在所述系統(tǒng)中使用第二種脫氫酶，特別優(yōu)選是葡萄糖脫氫酶。本發(fā)明另外涉及烯醇還原酶用于制M茅醛的用途。在此實(shí)施方案中使用的優(yōu)選的輔因子分別是NAD+和NADP+，其可以通過(guò)合適的協(xié)同底物(氧化劑)再次再生。這里可以使用的優(yōu)選的協(xié)同底物是丙酮，其與已經(jīng)存在的ADH和/或額外使用的脫氫酶一起，再生輔因子并在該過(guò)程中被還原為異丙醇。為了本發(fā)明的目的，"對(duì)映選擇性"意思是根據(jù)下式以已知方式計(jì)算的S對(duì)映體的對(duì)映體過(guò)量(enantiomerexcess,ee)(以o/o):ee(。A)-S-對(duì)映體-R-對(duì)映體/(S-對(duì)映體-R-對(duì)映體)xlOO是至少80%,優(yōu)選至少90%,特別是至少95%以及尤其是至少97%。根據(jù)本發(fā)明使用的烯醇還原酶可以游離形式或固定化形式使用。固定化酶表示固定在惰性支持物上的酶。合適的支持材料和在其上固定的酶公開(kāi)于EP-A-1149849、EP-A-1069183和DE-A100193773，以及這些專(zhuān)利里引用的參考文獻(xiàn)中。在這個(gè)問(wèn)題上，引用的參考文獻(xiàn)是其整體引入這些出版物的公開(kāi)中。合適支持材料的實(shí)例包括粘土、粘土礦物例如諸如高嶺石、硅藻土、珍珠巖、二氧化硅、氧化鋁、碳酸鈉、碳酸鉤、纖維素粉、陰離子交換材料，合成聚合物諸如聚苯乙烯、丙烯酸樹(shù)脂、酚醛樹(shù)脂、聚氨基甲酸酯和聚烯烴諸如聚乙烯和聚丙烯。支持材料常常以細(xì)分的顆粒形式用于制備受支持的酶，優(yōu)選提供多孔形式。支持材料的顆粒大小一般不大于5mm，特別是不大于2mm(篩級(jí)(sievegrade))。類(lèi)似地，當(dāng)使用脫氫酶作為整個(gè)細(xì)胞催化劑時(shí)，可以選用游離或固定化形式。支持材料的實(shí)例是藻酸4丐和角叉藻聚糖。酶和細(xì)胞也可以直接與戊二醛交聯(lián)(交聯(lián)以得到CLEA)。例如，相應(yīng)的和其他固定化方法在J.Lalonde和A.Margolin的"ImmobilizationofEnzymes"inK.Drauz和H.Waldmann，EnzymeCatalysisinOrganicSynthesis2002,第III巻，991-1032，Wiley-VCH,Weinheim中有描述。反應(yīng)可以在水性或非水性反應(yīng)介質(zhì)中，或在2相體系中，或在(微)乳劑中進(jìn)行。水性反應(yīng)介質(zhì)優(yōu)選是緩沖溶液，其通常具有從4到8的pH,優(yōu)選從5到8。除水之外，水性溶劑也可以包含至少一種醇，例如乙醇或異丙醇或二甲基亞砜。非水性反應(yīng)介質(zhì)指基于反應(yīng)介質(zhì)的總質(zhì)量，包含小于1%(重量)，優(yōu)選小于0.5%(重量)的水的反應(yīng)介質(zhì)。該反應(yīng)優(yōu)選在有機(jī)溶劑中進(jìn)行。適宜溶劑的實(shí)例;O旨族烴，其優(yōu)選具有5至8個(gè)碳原子，如戊烷，環(huán)戊烷，己烷，環(huán)己烷，庚烷，辛烷或環(huán)辛烷；卣代脂族烴，其優(yōu)選具有一個(gè)或兩個(gè)碳原子，如二氯曱烷，氯仿，四氯化碳，二氯乙烷或四氯乙烷；芳烴，如苯，甲苯，二曱苯，氯苯或二氯苯；脂族無(wú)環(huán)和環(huán)的醚類(lèi)或醇類(lèi)，其優(yōu)選具有4至8個(gè)碳原子，如乙醚，甲基叔丁基醚，乙基叔丁基醚，二丙醚，二異丙醚，二丁基醚，四氫呋喃；或酯類(lèi)，如乙酸乙酯或乙酸正丁酯；或酮類(lèi)，如甲基異丁基酮或二惡烷或其混合物。特別優(yōu)選是使用上述醚類(lèi)，尤其是四氫呋喃。用烯醇還原酶的還原優(yōu)選在7jc性-有機(jī)，特別是水性，反應(yīng)介質(zhì)中進(jìn)行。S^l還原中使用的底物(l)優(yōu)選濃度是從0.1g/l到500g/l，特別優(yōu)選是從lg/1到50g/l,并且可以隨后連續(xù)或分批添加。Sl^還原通常在反應(yīng)溫度低于所使用的還原酶的滅活溫度并高于-10。C下進(jìn)行。所述溫度特別優(yōu)選是從0到100。C的范圍內(nèi)，特別是從15到6(fC，且尤其是從20到40°C，例如大約30。C。該步驟可以涉及，例如，最初向底物(l)引入烯醇還原酶、溶劑，以及(根據(jù)需要)輔酶；根據(jù)需要引入第二種脫氫酶以便再生所述輔酶；和/或還有還原劑并混合混合物，例如通過(guò)攪拌或搖晃。但是，也可以將該還原酶固定在反應(yīng)器中，例如在柱子中并引導(dǎo)包含底物以及根據(jù)需要輔酶和/或協(xié)同底物的混合物通過(guò)反應(yīng)器。為此目的，混合物可以在反應(yīng)器中循環(huán)，直到達(dá)到所需的轉(zhuǎn)化率。在該過(guò)程中，羰基官能團(tuán)的a,p位雙鍵被還原為單鍵；偶然地，皿官能團(tuán)本身被還原為醇官能團(tuán)?；诨旌衔镏写嬖诘牡孜?，通常進(jìn)行還原達(dá)到轉(zhuǎn)化率至少為70%，特別優(yōu)選至少85%，且尤其是至少為95%.反應(yīng)的過(guò)程，也就是，雙鍵的順序還原，可以通過(guò)常規(guī)手段進(jìn)行監(jiān)控，比如說(shuō)氣相色謙或高壓液相色譜。具>^〉開(kāi)的酶的"功能等價(jià)物"或類(lèi)似物為了本發(fā)明的目的，是指與之不同且還具有所需生物活性比如底物特異性的多肽。因此，例如，"功能等價(jià)物"指這樣的酶，其催化模式反應(yīng)，并具有包含SEQIDNo.l或2所列出的任意^J^酸序列的酶活性的至少20%，優(yōu)選50%,特別優(yōu)選75%，非常特別優(yōu)選90%。此外，功能等價(jià)物優(yōu)選在pH4到IO之間穩(wěn)定，且有利地具有pH最優(yōu)在5到8之間且溫度最優(yōu)在20。C到80°C的范圍內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明，"功能等價(jià)物"特別還指突變體，其在上述JL^,列的至少一個(gè)序列位置中具有并非是特定提到的那一個(gè)的氨基酸，但是其仍然具有上述生物學(xué)活性之一。"功能等價(jià)物"因此包含通過(guò)一個(gè)或多個(gè)氨基酸添加、取代、缺失和/或倒位獲得的突變體，任何序列位置上發(fā)生所述修飾都是可能的，只要它們產(chǎn)生的突變體擁有本發(fā)明的性質(zhì)。如果突變體和未修飾的多肽之間的反應(yīng)性模式定性地相對(duì)應(yīng)(即例如相同底物以不同的速率反應(yīng))，功能等價(jià)性也是特別存在的。合適的M酸取代實(shí)例可在下表中找到<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>上述含義中的"功能等價(jià)物"也是所描述多肽的"前體"且也是"功能衍生物"。在此上下文中，"前體，，是多肽的天然或合成的前體，其具有或不具有所需的生物學(xué)活性。本發(fā)明中多肽的"功能衍生物"同樣可以在已知技術(shù)的幫助下，在功能性M酸側(cè)基或其N(xiāo)端或其C端上制備。此類(lèi)衍生物包含，例如羧g團(tuán)的脂族酯，羧脧基團(tuán)的酰胺，該酰胺通過(guò)與氨或與伯胺或仲胺反應(yīng)得到；游離氨基的N-?；苌?，該衍生物通過(guò)與?；磻?yīng)制備；或游離羥基的O-酰基t汴生物，該衍生物通過(guò)與酰基反應(yīng)制備。在可能的蛋白質(zhì)糖基化情形中，本發(fā)明的"功能等價(jià)物"包含上述類(lèi)型的去糖基化或糖基化形式的蛋白質(zhì)，也包含通過(guò)改變糖基化模式得到的修飾的形式。"功能等價(jià)物，，天然還包含從其他生物獲得的多肽以及還有天然存在的變體。例如，同源序列區(qū)的區(qū)域可以通過(guò)序列比較確立，而等價(jià)酶可以基于本發(fā)明特定的指導(dǎo)確定。"功能等價(jià)物"同樣包含本發(fā)明多肽的片斷，優(yōu)選單個(gè)域或序列基序，例如該片段具有所需的生物學(xué)功能。"功能等價(jià)物"此外還是融合蛋白質(zhì)，其包含任何所述多肽序列或由此衍生的功能等價(jià)物，以及至少一個(gè)另外的異源序列，所述異源序列與之功能不同且是N-末端或C-末端功能性連接的(即，無(wú)任何實(shí)質(zhì)的融合蛋白質(zhì)部分的互相功能損害)。例如，此類(lèi)異源序列的非限制性實(shí)例是信號(hào)肽或酶。本發(fā)明中蛋白質(zhì)的同源物可以通過(guò)篩選諸如截短突變體的突變體組合文庫(kù)鑒別。例如，多種蛋白質(zhì)變體文庫(kù)可以通過(guò)核酸水平的組合誘變生成，例如通過(guò)S^1連接合成的寡核苷酸混合物。有大量的方法可用于從簡(jiǎn)并的寡核苷酸序列制備潛在同源物文庫(kù)。簡(jiǎn)并的基因序列可以在DNA合成儀中化學(xué)合成，然后將合成的基因連接到合適的表達(dá)載體中。使用簡(jiǎn)并的基因集合4吏得在混合物中提供所有的序列成為可能，所迷序列編碼所需的潛在蛋白質(zhì)序列集合。合成簡(jiǎn)并的寡核苷酸的方法已為技術(shù)人員所知(例如Narang，S.A.(1983)Tetrahedron39:3;Itakura等人，(1984)Annu.Rev.Biochem.53:323;Itakura等人，(1984)Science198:1056;Ike等人(1983)NucleicAcidsRes.11:477).篩選通過(guò)點(diǎn)突變或截短制備的組合文庫(kù)的基因產(chǎn)物以及篩選具有所選擇性質(zhì)的基因產(chǎn)物的cDNA文庫(kù)的多種技術(shù)在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的?？蓪⑦@些技術(shù)修改以用于快速篩選基因文庫(kù)，所述基因文庫(kù)是通過(guò)本發(fā)明同源物的組合誘變生成的。篩選進(jìn)行高通量分析的大基因文庫(kù)的最常用技術(shù)包括將基因文庫(kù)克隆進(jìn)可復(fù)制的表達(dá)載體，將合適的細(xì)胞用得到的載體文庫(kù)轉(zhuǎn)化并在一定條件下表達(dá)組合基因，在所述條件下所需活性的檢測(cè)促進(jìn)了10編碼其產(chǎn)物被檢測(cè)的基因的載體的分離。循環(huán)集團(tuán)誘變(Recursiveensemblemutagenesis,REM)是增加文庫(kù)中功能性突變體的頻率的技術(shù)，可以同篩選測(cè)試組合以便鑒定同源物(Arkin和Yourvan(1992)PNAS89:7811-7815;Delgrave等人(1993)ProteinEngineering6(3):327國(guó)331)。本發(fā)明還涉及核酸序列(單鏈和雙鏈DNA和RNA序列，例如cDNA和mRNA)，其編碼具有本發(fā)明還原酶活性的酶。優(yōu)選提供這樣的核酸序列，其編碼例如根據(jù)SEQIDNo.l或2的M酸序列或其特征部分序列。本文提及的所有核酸序列可以本身已知的方式通過(guò)化學(xué)合成從核苷酸構(gòu)件制備，例如通過(guò)個(gè)體重疊、雙螺旋的互補(bǔ)核酸構(gòu)件的片段濃縮。寡核酸可以，例如，4吏用phosphoamidite方法以已知方式化學(xué)合成(Voet，Voet，第2版，WileyPressNewYork,第896-897頁(yè))。借助于DNA聚合酶克列諾片段和連接反應(yīng)的合成寡核苷酸的裝配和缺口填充以及還有一般的克隆方法在Sambrook等人(1989)的MolecularCloning:Alaboratorymanual,ColdSpringHarborLaboratoryPress有描述。實(shí)施本發(fā)明的S^還原方法的另外的實(shí)施方案烯醇還原酶在本發(fā)明的方法中可以用作游離或固定化酶。本發(fā)明的方法有利地在0。C到95。C間，優(yōu)選是在10。C到85。C之間，特別優(yōu)選是在15。C到75。C之間的溫度下進(jìn)行。在本發(fā)明方法中，有利保持pH在4到12之間，優(yōu)選是在pH4.5到9之間，特別優(yōu)選在pH5到8之間。在本發(fā)明方法中，對(duì)映純的或手性產(chǎn)物(2)指的是表現(xiàn)出對(duì)映體富集的對(duì)映體。在本方法中優(yōu)選實(shí)現(xiàn)至少為70。/。ee,優(yōu)選至少為80。/。ee，特別優(yōu)選至少90。/。ee,非常特別優(yōu)選至少98。/。ee的對(duì)映體純度。本發(fā)明的方法可以使用生長(zhǎng)細(xì)胞，該生長(zhǎng)細(xì)胞包含本發(fā)明中的核酸，核酸構(gòu)建物或載體。也可以使用靜息細(xì)胞或破裂的細(xì)胞。破裂的細(xì)胞指，例如，通過(guò)用溶劑處理變得可透過(guò)的細(xì)胞，或者例如通過(guò)用酶處理、通過(guò)機(jī)械處理(例如弗細(xì)胞壓碎器或超聲波處理)或通過(guò)其他方法被破裂的細(xì)胞。用這種方式獲得的粗提取物有利地適于本發(fā)明的方法。對(duì)于該方法還可以使用純化的或部分純化的酶。已經(jīng)有利地應(yīng)用于反應(yīng)的固定化的微生物或酶同樣也是合適的。本發(fā)明的方法可以分批、半分批或連續(xù)操作。該方法可以有利地在生物反應(yīng)器中進(jìn)行，例如，在Rehm等人編著(1993)的Biotechnology第二版第三巻中，特別是第二章中所描述的。下述實(shí)施例通過(guò)舉例的方法描述但不限定本發(fā)明。在此背景中，參考附圖，其中實(shí)驗(yàn)部分用釀酒酵母的2-曱基-戊-2-烯-l-醛的生物轉(zhuǎn)化生物轉(zhuǎn)化是在有擋板的500ml的錐形瓶中進(jìn)行的。所述燒g每種情形中裝有126ml的轉(zhuǎn)化溶液。為此，每種情形中加入21g的D-葡萄糖。調(diào)節(jié)所需的pH(6和8.5之間)。每個(gè)燒瓶的底物量是200mg的2-甲基戊-2-烯-l-醛。通過(guò)添加21g的貝克酵母起始實(shí)驗(yàn)，并且將反應(yīng)混合物置于培養(yǎng)箱(處于所需溫度下(28和3"C之間)(以240rpra搖動(dòng)))中。于6、U、l8、24、36和48小時(shí)后取出樣品并通過(guò)氣相色鐠分析。在pH7.5和pH8.5之間達(dá)到最高轉(zhuǎn)化率(40-70%)。在pH=8.5且T=37。C時(shí)，光學(xué)純度為ee=92.1，轉(zhuǎn)化率為66.6%。用釀酒酵母的檸檬醛的生物轉(zhuǎn)化生物轉(zhuǎn)化是在有擋板的500ml的錐形瓶中進(jìn)行的。所述燒瓶在每種情形中裝有126ml的轉(zhuǎn)化溶液。為此，在每種情形中添加21g的D-葡萄糖。調(diào)節(jié)所需的pH(6和8.5之間)。每個(gè)燒瓶的底物量是210mg的檸檬醛(檸檬醛為70:30順式/反式混合物)。通過(guò)添加21g的貝克酵母起始實(shí)驗(yàn)，并且將反應(yīng)混合物置于培養(yǎng)箱(處于所需溫度下(28和37。C之間)(以240rpm搖動(dòng)))中。于6、12、18、24、36和48小時(shí)后取出樣品并通過(guò)氣相色謙分析。除(R)-(+)香茅醛之外，還得到了(RM+)-B-香茅醛以及橙花醇和香葉醇。53.4g的Na2HP04和21g的D-葡萄糖，以及126ml的蒸餾7JC(pH調(diào)整到6和8.5之間)。權(quán)利要求1.在烯醇還原酶的存在中通過(guò)還原從式(1)的α，β-不飽和醛類(lèi)制備式(2)的旋光飽和醛類(lèi)或醇類(lèi)的方法，所述烯醇還原酶(i)具有多肽序列SEQIDNo.1或2，或(ii)具有與SEQIDNo.1或2的序列有至少80％同一的多肽序列，其中，R1和R2分別獨(dú)立地為H、C1-C4-烷基，R3為H、C1-C6-烷基或烯基，以支鏈和直鏈形式。2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中還原使用NADPH作為輔因子進(jìn)行。3.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中S^1再生所使用的輔因子。4.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中通過(guò)葡萄糖脫氫酶再生輔因子。5.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中還原在水性系統(tǒng)中進(jìn)行。6.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中烯醇還原酶以固定化形式存在。7.烯醇還原酶在用于從檸檬醛制備(R)-(+)香茅醛的方法中的用途，所述烯醇還原酶(i)具有多肽序列SEQIDNo.l或2,或(ii)具有與SEQIDNo.l或2的序列至少80。/。同一的多肽序列。全文摘要在烯醇還原酶的存在下，通過(guò)還原從式(1)的α，β-不飽和醛類(lèi)制備式(2)的旋光飽和醛類(lèi)或醇類(lèi)的方法，所述烯醇還原酶(i)具有多肽序列SEQIDNo.1或2，或(ii)具有與SEQIDNo.1或No.2所示有至少80％序列同一性的多肽序列。文檔編號(hào)C12P7/24GK101331233SQ200680046937公開(kāi)日2008年12月24日申請(qǐng)日期2006年12月19日優(yōu)先權(quán)日2005年12月30日發(fā)明者A·沙德勒,R·施蒂默爾,S·林克-楊科,T·弗里德里希申請(qǐng)人:巴斯夫歐洲公司