專利名稱：：昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明是有關(guān)快速穩(wěn)定生產(chǎn)作為保健食品、醫(yī)藥品、化妝品等加以利用的冬蟲夏草菌類等的昆蟲寄生菌子實(shí)體(蘑菇)的方法。
背景技術(shù)：
：昆蟲寄生菌的子實(shí)體，例如冬蟲夏草菌類等，可以用作中藥藥材和高級(jí)食品材料。冬蟲夏草菌類等的子實(shí)體，通常都是采摘天然生長的，所以往往數(shù)量很少，大小不等，質(zhì)量也不穩(wěn)定。另外，昆蟲寄生菌即使是如同蛹蟲草那樣的同一屬種，在生育速度、菌子生育和昆蟲病原性等方面，也往往都有差別。因此，人們一直都在探索優(yōu)良的昆蟲寄生菌，研究其人工培養(yǎng)的方法。具體來說，有人提出過給寄主昆蟲人工接種冬蟲夏草菌類，在不到發(fā)育程度的低溫下控制溫度的同時(shí)進(jìn)行飼養(yǎng)來生產(chǎn)子實(shí)體的方法(例如，參照日本專利特開平8-75號(hào)公報(bào))。該方法是一種將蛹浸泡在冬蟲夏草菌類的子囊孢子懸浮液中，進(jìn)行接種的方法。還有人提出過先制備以蠶蛹組分(水萃取物)為主成分的培養(yǎng)基，再用該培養(yǎng)基生成子實(shí)體，利用子囊孢子的方法(例如，參照日本專利特開平10-42691號(hào)公報(bào))。據(jù)此方法，利用蠶蛹作培養(yǎng)基，可進(jìn)行冬蟲夏草的連續(xù)培養(yǎng)。除了這些方法之外，大家知道還有一種方法是，先制備包含冬蟲夏草菌類等的昆蟲病原菌類菌絲段(蟲菌體，hyphalbody)的接種劑，用其給昆蟲接種，以該昆蟲作為昆蟲菌床，生成子實(shí)體的方法(例如，參照國際公開第WO01/022801號(hào)小冊(cè)子)。按照該方法接種以后，可以縮短生成子實(shí)體的時(shí)間，能簡便地、在短期間內(nèi)高效率大量生產(chǎn)昆蟲病原菌類的子實(shí)體。然而，在特開平8-75號(hào)公報(bào)所記載的方法中，在常溫下大部分寄主昆蟲都羽化了，或者顯著產(chǎn)生細(xì)菌。按照基于懸浮液的接種感染法，在感染個(gè)體上會(huì)出現(xiàn)色斑，感染所需時(shí)間非常長。另一方面，如果控制在低溫之下，要生成來自子囊孢子的子實(shí)體，必需1至3個(gè)月這樣相當(dāng)長的時(shí)間。另外，在特開平10-42691號(hào)公報(bào)以及國際公開第WO01/022801號(hào)小冊(cè)子所記載的方法中，也很難生成子囊孢子，作為接種源，也很難確保穩(wěn)定。也就是說，這些方法存在著如下問題冬蟲夏草菌類等的昆蟲寄生菌產(chǎn)生子實(shí)體較少，在天氣干燥的年份，即便在野外都幾乎看不到，很難確保能穩(wěn)定生產(chǎn)。同時(shí)，即便在野外采摘到子實(shí)體，也很難得到有同樣穩(wěn)定的質(zhì)量且未被細(xì)菌污染的子囊孢子。例如，即便用這種自然發(fā)生的子囊孢子做成的懸浮液，注射到昆蟲例如幼蟲或蛹的體內(nèi)使之感染，也依然存在有特別多的被細(xì)菌腐敗的個(gè)體、成品率變低、不能穩(wěn)定生產(chǎn)子實(shí)體這樣的問題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明就是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)所存在問題而做出的。其目的在于提供一種能快速穩(wěn)定生產(chǎn)昆蟲寄生菌子實(shí)體的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法。為了達(dá)到上述目的，權(quán)利要求l所記載發(fā)明的昆蟲寄生菌子實(shí)體生產(chǎn)方法的特征在于通過弄傷昆蟲表皮，在負(fù)傷部接種昆蟲寄生菌，使昆蟲寄生菌在昆蟲體內(nèi)繁殖，來生成昆蟲寄生菌的子實(shí)體。權(quán)利要求2所記載發(fā)明的昆蟲寄生菌子實(shí)體生產(chǎn)方法的特征在于在權(quán)利要求l涉及的發(fā)明中，上述昆蟲寄生菌是冬蟲夏草菌類。權(quán)利要求3所記載發(fā)明的昆蟲寄生菌子實(shí)體生產(chǎn)方法的特征在于在權(quán)利要求1或2涉及的發(fā)明中，把上述昆蟲寄生菌置于瓊脂培養(yǎng)基或谷物培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在讓昆蟲寄生菌的菌絲在該培養(yǎng)基上生成的狀態(tài)下，在其上放置表皮負(fù)了傷的昆蟲，接種昆蟲寄生菌。權(quán)利要求4所記載發(fā)明的昆蟲寄生菌子實(shí)體生產(chǎn)方法的特征在于在權(quán)利要求3涉及的發(fā)明中，上述昆蟲寄生菌的菌絲，是遍及整個(gè)培養(yǎng)基上生成的。權(quán)利要求5所記載發(fā)明的昆蟲寄生菌子實(shí)體生產(chǎn)方法的特征在于在涉及權(quán)利要求1或2的發(fā)明中，上述昆蟲表皮的負(fù)傷，是控制在昆蟲體液不溢出的程度下進(jìn)行的。權(quán)利要求6所記載發(fā)明的昆蟲寄生菌子實(shí)體生產(chǎn)方法的特征在于在權(quán)利要求1或2涉及的發(fā)明中，上述昆蟲的形態(tài)是蛹。權(quán)利要求7所記載發(fā)明的昆蟲寄生菌子實(shí)體生產(chǎn)方法的特征在于在涉及權(quán)利要求l的發(fā)明中，上述昆蟲寄生菌在昆蟲體內(nèi)繁殖，使得昆蟲硬化，把其表皮上生成了子實(shí)體原基的部分作為種菌，來生成子實(shí)體。權(quán)利要求8所記載發(fā)明的昆蟲寄生菌子實(shí)體生產(chǎn)方法的特征在于在涉及權(quán)利要求7的發(fā)明中，將上述種菌配置于苔上，生成子實(shí)體。權(quán)利要求9所記載發(fā)明的昆蟲寄生菌子實(shí)體生產(chǎn)方法的特征在于將上述種菌配置在pH24的酸性培養(yǎng)基上，生成子實(shí)體。權(quán)利要求10所記載發(fā)明的昆蟲寄生菌子實(shí)體生產(chǎn)方法的特征在于將按照權(quán)利要求79中任何一項(xiàng)記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法所得到的子實(shí)體，粘貼在存放培養(yǎng)基的容器內(nèi)上部，把從子實(shí)體掉落的子囊孢子作為種菌，來生成子實(shí)體。按照本發(fā)明，可能獲得如下效果。按照權(quán)利要求l所記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，通過弄傷昆蟲表皮，可以排除昆蟲原本持有細(xì)菌等的影響，顯著提高昆蟲寄生菌的感染速度，在昆蟲體內(nèi)盡快而且容易進(jìn)行昆蟲寄生菌的繁殖，生成子實(shí)體。因此，可快速而且穩(wěn)定地生產(chǎn)出昆蟲寄生菌的子實(shí)體。按照權(quán)利要求2所記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，可有效發(fā)揮權(quán)利要求l涉及的有關(guān)冬蟲夏草菌類發(fā)明的效果，提高其利用價(jià)值。按照權(quán)利要求3所記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，在權(quán)利要求1或2涉及的發(fā)明效果基礎(chǔ)上，既可抑制昆蟲體內(nèi)生存的細(xì)菌類泄漏到體外而增加，又能抑制昆蟲寄生菌的活性下降。按照權(quán)利要求4所記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，在涉及權(quán)利要求3的發(fā)明效果基礎(chǔ)上，還能提高昆蟲寄生菌的感染率。按照權(quán)利要求5所記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，在權(quán)利要求1或2涉及的發(fā)明效果基礎(chǔ)上，還能促進(jìn)昆蟲體內(nèi)昆蟲寄生菌的感染。按照權(quán)利要求6所記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，既能最容易、最可靠地弄傷昆蟲，又能提高權(quán)利要求1或2涉及的發(fā)明效果。按照權(quán)利要求7所記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，在權(quán)利要求l涉及的發(fā)明效果基礎(chǔ)上，還能在昆蟲體內(nèi)繁殖昆蟲寄生菌，使昆蟲變成菌絲體，在昆蟲的表皮生成子實(shí)體原基，再以其為種菌，生成子實(shí)體。按照權(quán)利要求8所記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，在權(quán)利要求7涉及的發(fā)明效果基礎(chǔ)上，還能在適合于苔的濕度和溫度下，使子實(shí)體的生成更容易進(jìn)行。按照權(quán)利要求9所記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，在權(quán)利要求7涉及的發(fā)明效果基礎(chǔ)上，既能抑制雜細(xì)菌的繁殖，還能抑制子實(shí)體的污染、蛹的腐敗和容器內(nèi)的污染，與此同時(shí)，還能避免使用抗生素、抗菌劑等。按照權(quán)利要求10所記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，在權(quán)利要求79的任何一項(xiàng)所涉及的發(fā)明效果基礎(chǔ)上，還能利用子囊孢子的種菌作為下一世代生產(chǎn)的種菌，與此同時(shí)，可抑制昆蟲寄生菌的昆蟲病原性下降和繁殖力下降，進(jìn)行子實(shí)體的連續(xù)性生產(chǎn)。具體實(shí)施方式以下詳細(xì)說明本發(fā)明的最佳實(shí)施例。本實(shí)施例的昆蟲寄生菌(昆蟲病原菌)子實(shí)體(蘑菇)的生產(chǎn)方法，是將昆蟲表皮弄傷(負(fù)傷)，在負(fù)傷部接種昆蟲寄生菌，讓昆蟲寄生菌在昆蟲體內(nèi)繁殖，生成昆蟲寄生菌的子實(shí)體。子實(shí)體主要呈棒狀，在其頭部和頂端附近有一個(gè)結(jié)果部，該結(jié)果部為抱著子囊孢子的袋狀器官，即子囊果集結(jié)部。子實(shí)體的形態(tài)，有棍棒型、橢圓體(熱水袋)型、掏耳勺型等類型。子實(shí)體的長度，以從幾毫米到幾厘米者居多，但也有十幾厘米的。子實(shí)體的顏色，有橘黃色、白色、黃色、茶色等。作為客體的昆蟲寄生菌，是在被接種到宿主(寄主、主體)昆蟲時(shí)，能生成其子實(shí)體的寄生菌。能作為這種昆蟲寄生菌的，可以列舉屬于剌束梗孢(Akanthomyces)屬、球束梗孢(Gibellula)屬、蟲草(Cordyc印s)屬、束梗孢(Stilbellaceae)屬，多頭束霉(Tilachlidium)屬、彎頸霉(Tolypocladium)屬、錐殼(Torrubiella)屬、野村菌(Nomuraea)屬、羽束梗孢(Paraisaria)屬、層束梗孢(Hymenostilbe)屬、被毛孢(Hirsutella)屬、擬青霉(Paecilomyces)屬、白僵菌(Beauveria)屬、綠僵菌(Metarhizium)屬等的菌類。因此，冬蟲夏草菌類是相當(dāng)于子囊菌門、麥角菌目、麥角菌科的一屬(冬蟲夏草屬)的菌類，更具體地說，是屬于麥角菌科的蟲草(Cordyc印s)屬，球束梗孢(Gibellula)屬、錐殼(Torrubiella)屬以及被毛孢(Hirsutella)屬的菌類。作為冬蟲夏草菌類，更具體來說，例如可以列舉蟲草(Cordyc印s)屬的蛹蟲草(Cordycepsmilitaris)、高雄山蟲草(Cordycepstakaomontaiia)等。對(duì)于上述昆蟲沒有特別限制，但一般采用鱗翅目的昆蟲和甲蟲目的昆蟲等。作為鱗翅目的昆蟲，可以列舉斜紋夜蛾(spodopteralitura)、煙草蛾、蠶蛾、小菜蛾、黃地老虎、蝙蝠蛾等。作為甲蟲目的昆蟲，可以列舉亮綠麗金龜、天牛、叩頭蟲等。在此，所謂昆蟲也包括幼蟲、蛹、成蟲等成長過程的任一形態(tài)(生態(tài))的概念。作為弄傷昆蟲表皮的方法，可以利用針，或者金屬、玻璃、陶瓷等堅(jiān)硬而銳利的刃具或者激光來進(jìn)行。通過在昆蟲負(fù)傷的部分(以下稱負(fù)傷部)接種昆蟲寄生菌，可以促進(jìn)昆蟲寄生菌的感染，使寄生菌在昆蟲體內(nèi)的繁殖更容易進(jìn)行，而生成子實(shí)體。在此情況下，負(fù)傷應(yīng)該只是弄傷昆蟲的表皮，而別傷到昆蟲體內(nèi)。也就是說，不要弄傷到昆蟲表皮破裂的程度，最好是以體液不溢出為度，不用說，更別讓昆蟲死去。在弄傷昆蟲的情況下，具體來說，一般采取用針開孔的方法(開孔負(fù)傷法)、刃具切割法或激光照射法等。但是，即使用熱烙鐵灼傷也不能促進(jìn)從該部分感染。例如，使用昆蟲寄生菌的蛹蟲草，在22t:的條件下，在PDA培養(yǎng)基上，單純培養(yǎng)蛹蟲草，使之蔓延，對(duì)非休眠態(tài)的斜紋夜蛾蛹，用尖銳小鑷子弄傷過的100只個(gè)體，予以靜置。其結(jié)果，7天之后所有蛹的動(dòng)作都停止，12天之后，有90只個(gè)體硬化。通常，昆蟲的皮膚上有一種防御寄生菌的機(jī)構(gòu)，所以寄生菌很難感染，但是，如果在昆蟲表皮生成了輕度負(fù)傷部，并在此接種了昆蟲寄生菌，那么感染速度就會(huì)明顯加快，昆蟲體內(nèi)寄生菌的繁殖就可能快速而且容易進(jìn)行。昆蟲在從前蛹蛻皮為蛹的時(shí)期，表皮變薄，在土繭中，有一個(gè)昆蟲寄生菌明顯容易感染的時(shí)期。另外，剛蛻皮后的白蛹的皮膚與通常的蛹相比，還更容易感染昆蟲寄生菌。但是，僅僅大量采集剛蛻皮后的白蛹是很難的，況且這種蛹很軟，不好處理。在本實(shí)施例中，通過對(duì)通常的蛹進(jìn)行劃傷來接種昆蟲寄生菌，可以較好地進(jìn)行寄生菌繁殖。另外，一般認(rèn)為，在使昆蟲感染昆蟲寄生菌的情況下，最好使用休眠蛹，不過，在本實(shí)施例中，因?yàn)槭菍⑼ㄟ^昆蟲弄傷來接種昆蟲寄生菌，使之感染的，所以感染能很快發(fā)生，適用于非休眠蛹，可以大量生產(chǎn)子實(shí)體。用瓊脂(agar)培養(yǎng)基或谷物培養(yǎng)基培養(yǎng)昆蟲寄生菌，在該培養(yǎng)基上生成昆蟲寄生菌的菌絲狀態(tài)下，可以在其上放置把表皮弄傷了的昆蟲來接種昆蟲寄生菌。在此情況下，預(yù)先在培養(yǎng)器中培養(yǎng)好足夠的昆蟲寄生菌，將蛹靜置擺放在其中。將該培養(yǎng)基放入恒溫器內(nèi)保存數(shù)天，使之感染。作為瓊脂培養(yǎng)基，可以列舉PDA培養(yǎng)基(PotatoDextroseAgar,馬鈴薯糖瓊脂培養(yǎng)基)等。作為谷物培養(yǎng)基，可以列舉使用稻谷、小麥、大麥等制成的培養(yǎng)基。因此，通過在上述培養(yǎng)基上生成昆蟲寄生菌的菌絲(菌叢)的狀態(tài)下，特別是在菌絲蔓延的狀態(tài)下，放置昆蟲來進(jìn)行接種，可以排除昆蟲原本持有細(xì)菌等的影響，使昆蟲寄生菌快速感染。其結(jié)果，可以提高昆蟲寄生菌的感染幾率，增加成品率。使用能讓昆蟲寄生菌蔓延到整個(gè)培養(yǎng)基的瓊脂培養(yǎng)基或谷物培養(yǎng)基，其目的是為了抑制生存在昆蟲體內(nèi)的細(xì)菌類泄漏到體外而增加，同時(shí)防止昆蟲寄生菌活性的下降。但是，在培養(yǎng)基上配置昆蟲的情況下，昆蟲的體表面最好用殺菌劑洗凈。另外，昆蟲寄生菌在昆蟲體內(nèi)繁殖，使得昆蟲硬化，以其表皮上形成的子實(shí)體原基作為種菌，可以生成子實(shí)體。所謂子實(shí)體原基，是指成為子實(shí)體之根源的粒狀部分(芽)。如果在負(fù)傷昆蟲的負(fù)傷部接種寄生菌，寄生菌會(huì)在昆蟲體內(nèi)繁殖，昆蟲變成菌絲體，在昆蟲表皮生成子實(shí)體原基。按照此法，例如10天后有50%的個(gè)體硬化，12天后有90%的個(gè)體硬化，14天后有92%的個(gè)體硬化。此后，在5天內(nèi)，在蛹的表面生成橘黃色的有性世代原基。這個(gè)子實(shí)體原基，從1個(gè)蛹中生成15根，可將在其表皮生成的物質(zhì)作為種菌利用。另外，這個(gè)時(shí)候生成的子實(shí)體，是生成子囊孢子的有性世代，不是生成白色分生孢子的無性世代。通過進(jìn)一步將其移植到保濕培養(yǎng)基上，可以使昆蟲寄生菌的大量培養(yǎng)變得穩(wěn)定。如果進(jìn)行隔離保管，則使得從蛞蝓(俗稱鼻涕蟲)和粉蜱等食菌性動(dòng)物來保護(hù)種菌成為可能。另外，把硬化了的昆蟲，特別是把硬化了的蛹作為種菌，將該種菌配置在苔上，可以生成子實(shí)體。也就是說，在負(fù)傷昆蟲的負(fù)傷部接種昆蟲寄生菌，當(dāng)菌類在昆蟲體內(nèi)蔓延之后，將硬化了的種菌配置在苔(苔體)上，最好是配置在活著的苔上，或者灰蘚上，控制在2025'C，進(jìn)行昆蟲寄生菌的子實(shí)體生產(chǎn)?；姨\的形狀特別適合于埋設(shè)保持種菌。如果保持適當(dāng)?shù)臐穸群蜏囟?，也可以利用除灰蘚以外的物質(zhì)作培養(yǎng)基。在灰蘚上，例如，在子實(shí)體原基生成之后，在22X:、20天內(nèi)生長了24cm的子實(shí)體，有90%以上的個(gè)體生成。從此結(jié)果可知，子實(shí)體的生成和繁殖，亦即生產(chǎn)是可能的。在此情況下，作為由種菌產(chǎn)生子實(shí)體的環(huán)境，良好的條件是濕度在90%以上，溫度在1625T:之間。溫度若是25t:，雖然子實(shí)體的生成期間會(huì)縮短，但因變得稍微有些軟弱，所以如果重視質(zhì)量的話，希望控制在162(TC之間。如果控制在26。C以上，則腐畋率會(huì)升高。另外，把硬化了的昆蟲，特別是把硬化了的蛹作為種菌，將該種菌配置在pH24的酸性培養(yǎng)基上，也可以生成子實(shí)體。作為此時(shí)利用的培養(yǎng)基，最好是諸如蛭石(vermiculite)、泥煤苔(peatmos)、7jC苔(sphagna)等。為了將該培養(yǎng)基的pH調(diào)到24的酸性，常利用檸檬酸等。通過使培養(yǎng)基酸性化，可抑制細(xì)菌在栽培環(huán)境內(nèi)的繁殖，抑制子實(shí)體的污染，繼而可抑制促進(jìn)蛹、種菌腐敗的雜細(xì)菌的繁殖，與此同時(shí)，還可避免抗生素、合成抗菌劑等殺菌劑等的使用。進(jìn)而言之，將所得到的子實(shí)體，粘貼在存放培養(yǎng)基容器的內(nèi)側(cè)上部，把從子實(shí)體落下的子囊孢子作為種菌，可以生成子實(shí)體。例如，將種菌或者子實(shí)體粘貼在存放培養(yǎng)基容器的上蓋內(nèi)面，取出落下的子囊孢子，可以做成下一世代的種菌(接種源)。按照該方法，可在子實(shí)體上生成整個(gè)世代的子囊孢子。另外，把從子實(shí)體生成的子囊孢子落到培養(yǎng)基上，切取之后再分離，將其培養(yǎng)使其大量繁殖，就可做成進(jìn)行下一世代子實(shí)體生產(chǎn)的種菌。另外，利用該方法，還能抑制現(xiàn)有技術(shù)中成為問題的昆蟲寄生菌的昆蟲病原性下降和繁殖力的下降，連續(xù)生產(chǎn)子實(shí)體。上述所得昆蟲寄生菌(種菌)，可以在把由上述子實(shí)體得到的子囊孢子，落到添加了磨碎的寄主蛹的半合成培養(yǎng)基上繁殖之后，進(jìn)行冷凍、凍結(jié)或冷藏，長時(shí)間保存。在此情況下，經(jīng)過長時(shí)間存放，既能防止昆蟲病原性的降低，又能無菌性確保昆蟲寄生菌。另外，既能更容易與最新菌株比較，又能作為用于選拔的方法加以利用。例如，制取上述半合成培養(yǎng)基后，在放有該培養(yǎng)基的培養(yǎng)器的蓋內(nèi)面粘貼子實(shí)體，靜置數(shù)日，就能在培養(yǎng)基上生成多個(gè)來源于子囊孢子的群體(colony)。選擇其中繁殖良好、未被細(xì)菌污染的純?nèi)后w，進(jìn)行再分離，然后在相同培養(yǎng)基上繁殖，凍結(jié)或冷藏，進(jìn)行長期保存。將該方法用于種菌，繼代培養(yǎng)優(yōu)良形質(zhì)的昆蟲寄生菌，進(jìn)行保管。也可以對(duì)培養(yǎng)基整體在低溫下管理。還可以將菌絲或子實(shí)體置于殺過菌的溶劑中進(jìn)行低溫管理。另外，把在昆蟲表皮生成了子實(shí)體原基的種菌，直接進(jìn)行干燥，可以在室內(nèi)等的常溫、最好是2025。C下的、而且在其中放入硅膠等干燥劑使其相對(duì)濕度為1020%的干燥室中，進(jìn)行長時(shí)間保存。例如，把在昆蟲表皮生成了子實(shí)體原基的蛹作為種菌，將其保管在溫度為2025。C、相對(duì)濕度為1020%的容器內(nèi)，管理保管60天，再通過將這些種菌轉(zhuǎn)移到濕度90%、溫度22。C的容器內(nèi)，可以生成子實(shí)體。如上所述，從在自然界采摘的冬蟲夏草菌類等昆蟲寄生菌的子實(shí)體，分離培養(yǎng)子囊孢子，可以不喪失昆蟲病原性和繁殖能力，進(jìn)行繼代培養(yǎng)。另一方面，使昆蟲負(fù)傷，在其負(fù)傷部接種昆蟲寄生菌，使昆蟲感染昆蟲寄生菌，生成子實(shí)體原基，將其移植，從而可連續(xù)生產(chǎn)子實(shí)體。其次，再說明一下本實(shí)施例的作用。在昆蟲的表皮上，特別是在蛹的表皮上，用小刀等劃傷，在其負(fù)傷部接種昆蟲寄生菌。通過弄傷昆蟲表皮，可避免昆蟲原本持有的細(xì)菌等的影響，還能提高昆蟲寄生菌對(duì)昆蟲的感染速度。因此，昆蟲寄生菌在昆蟲體內(nèi)反復(fù)繁殖，在昆蟲表皮生成昆蟲寄生菌的子實(shí)體原基，再由該子實(shí)體原基生成子實(shí)體。按照以上詳述的本實(shí)施例，可以獲得如下的效果。按照本實(shí)施例中所述昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，是將昆蟲表皮弄傷，在其負(fù)傷部接種昆蟲寄生菌，使昆蟲寄生菌在昆蟲體內(nèi)繁殖，生成昆蟲寄生菌子實(shí)體的。因此，通過將昆蟲表皮弄傷，在其負(fù)傷部接種昆蟲寄生菌這樣簡單的操作，就可以較早且容易地在昆蟲體內(nèi)繁殖昆蟲寄生菌，生成子實(shí)體。因此，可以快速穩(wěn)定地生產(chǎn)昆蟲寄生菌的子實(shí)體，大大提高生產(chǎn)率。昆蟲寄生菌選擇冬蟲夏草菌類，可在冬蟲夏草菌類上有效發(fā)揮上述效果，提高其利用價(jià)值。另外，通過在瓊脂培養(yǎng)基或在谷物培養(yǎng)基上培養(yǎng)昆蟲寄生菌，在該培養(yǎng)基上生成昆蟲寄生菌菌絲的狀態(tài)下，在其上放置表皮負(fù)傷的昆蟲，從而接種昆蟲寄生菌，因此，可抑制在昆蟲體內(nèi)生存的細(xì)菌類泄漏到體外而增加，同時(shí)，還能抑制昆蟲寄生菌活性的下降。.通過昆蟲寄生菌在昆蟲體內(nèi)繁殖，使得昆蟲硬化，以'其表皮上形成的子實(shí)體原基作為種菌，生成子實(shí)體。因此，昆蟲寄生菌在昆蟲體內(nèi)繁殖，昆蟲變成菌絲體，在昆蟲的表皮生成子實(shí)體原基，用它做種菌，可以生成子實(shí)體。通過昆蟲硬化，用昆蟲做種菌，將該種菌配置在苔上，生成子實(shí)體。因此，可在取決于苔的適當(dāng)濕度和溫度下，容易生成子實(shí)體。通過昆蟲硬化，用昆蟲做種菌，將該種菌配置在pH24的酸性培養(yǎng)基上，生成子實(shí)體。因此，可抑制雜細(xì)菌的繁殖，還可抑制子實(shí)體的污染、蛹的腐敗和容器內(nèi)的污染，與此同時(shí)，還可避免使用抗生素和抗菌劑等。另外，通過將所得子實(shí)體粘貼在存放培養(yǎng)基容器內(nèi)的上部，用從子實(shí)體落下的子囊孢子做種菌，生成子實(shí)體。因此，可以用子囊孢子的種菌作為下一世代生產(chǎn)的種菌，同時(shí)，可抑制昆蟲寄生菌的昆蟲病原性的降低和繁殖力的下降，進(jìn)行子實(shí)體的連續(xù)生產(chǎn)。生產(chǎn)出來的昆蟲寄生菌子實(shí)體，具有免疫作用、鎮(zhèn)靜作用、滋養(yǎng)強(qiáng)壯等作用，所以能較好地用于醫(yī)藥品，保健食品，化妝品等領(lǐng)域。以下，列舉參考例和試驗(yàn)例，進(jìn)一步具體說明上述實(shí)施例。參考例l，昆蟲世代的比較將昆蟲寄生菌置于PDA培養(yǎng)基內(nèi)，在25"C下繁殖10天，使其蔓延，將斜紋夜蛾幼蟲的3齡(年齡)、4齡、5齡，前蛹及蛹各10只，在那里靜置2天，接種蛹蟲草。接種后飼養(yǎng)管理35天，考察蛹蟲草有無感染，死亡蟲的只數(shù)以及有無生成子實(shí)體等。對(duì)于沒有進(jìn)行上述處理的情況，也進(jìn)行了試驗(yàn)(無處理)。其結(jié)果列于表l。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>從表l所示結(jié)果可知，前蛹中有9只感染，3齡幼蟲有2只、4齡幼蟲有1只感染。這樣雖然可認(rèn)定在前蛹和部分幼蟲中有被感染的，但在其他世代中，即便是蛹的感染也在10%以下。另外，這些個(gè)體即使感染，也只是菌絲的發(fā)育，而沒有子實(shí)體的生成。從這些結(jié)果可知，對(duì)于前蛹來說，接種的方法最合理?？墒?，要想大量獲得僅僅這一個(gè)時(shí)期的蛹是很難的。可見，為了防止羽化，進(jìn)行穩(wěn)定的生產(chǎn)，應(yīng)該在還是蛹的時(shí)代就進(jìn)行負(fù)傷接種。試驗(yàn)例l，接種方法比較用PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)蛹蟲草，由此配制了菌絲濃度為l(f個(gè)/ml的菌絲懸浮液(培養(yǎng)菌絲液)。然后，用該培養(yǎng)菌絲液給斜紋夜蛾蛹進(jìn)行噴霧接種(寄生菌噴霧接種)。另外，用注射器，在斜紋夜蛾蛹體內(nèi)，從背面注射培養(yǎng)菌絲液O.2ml(寄生菌菌絲液注射)，進(jìn)行接種。同時(shí)，在用PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)的蛹蟲草上，將斜紋夜蛾蛹靜置2天并接種(無傷靜置)。同時(shí)，對(duì)斜紋夜蛾蛹的一部分，用尖刀劃上小傷后，放在培養(yǎng)菌絲內(nèi)靜置2天，在負(fù)傷部接種(負(fù)傷靜置l)。同時(shí)，改變對(duì)蛹負(fù)傷的程度，弄傷至體液溢出的程度為止，再同樣靜置，在負(fù)傷部接種(負(fù)傷靜置2)。如此接種之后，取這些蛹于22t:下，管理了50天。另外，供試蛹數(shù)分別取樣150只。同時(shí)，對(duì)未做上述處理的斜紋夜蛾蛹，也進(jìn)行了同樣試驗(yàn)(無處理)。然后，對(duì)蛹蟲草有無感染、到子實(shí)體生成為止的天數(shù)、子實(shí)體的個(gè)數(shù)、操作性、多個(gè)接種(蛹蟲草對(duì)整個(gè)斜紋夜蛾蛹做的接種)進(jìn)行測定或評(píng)價(jià)，其結(jié)果示于表2。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>從表2所示結(jié)果可知，噴霧接種了蛹蟲草菌絲液的蛹全部都羽化，變態(tài)為成蟲，感染沒有成立。注射了蛹蟲草的蛹，3閂后停止了動(dòng)作，IO閂后硬化，30閂后整個(gè)都生成無性世代的白色菌絲束。但是，這種注射法，在注射需要時(shí)間、勞動(dòng)力，感染時(shí)間短，昆蟲病原性強(qiáng)的菌株的情況下，蛹的死亡變得過快，要想得到繁殖整齊等的實(shí)用性，必須進(jìn)行濃度調(diào)整。同時(shí)，在PDA培養(yǎng)基內(nèi)靜置了2天的斜紋夜蛾蛹，全都變?yōu)槌上x了。另外，在無處理的情況下(斜紋夜蛾蛹保持不變)，當(dāng)然看不到昆蟲寄生菌的感染。另一方面，將蛹的一部分弄傷，在菌子中靜置2天，就看到在47天期間，蛹的動(dòng)作就停止，而且未羽化就死亡，感染成立。將該蛹靜置于25。C的恒溫室內(nèi)，17曰后就發(fā)現(xiàn)在昆蟲的表皮生成了子實(shí)體，35日后全都生成橘黃色的子實(shí)體。改變對(duì)蛹弄傷的程度，在使體液溢出程度的情況下，雖然所有個(gè)體都很容易被寄生菌感染了，但早期死亡，由菌絲蔓延的個(gè)體，或者腐敗的個(gè)體非常突出。同時(shí)，在泄漏到培養(yǎng)基內(nèi)的體液中，也有了細(xì)菌繁殖、對(duì)寄生菌的繁殖產(chǎn)生影響的培養(yǎng)基。從這些結(jié)果可知，在培養(yǎng)器內(nèi)培養(yǎng)昆蟲寄生菌，在其中靜置削傷體表皮的蛹，使之感染的方法，對(duì)于要感染大量的蛹并加以管理的情況來說，是最恰當(dāng)?shù)姆椒āＳ么朔椒ㄉ傻淖訉?shí)體，都是有性世代。試驗(yàn)例2，培養(yǎng)天數(shù)的比較在PDA培養(yǎng)基內(nèi)，讓蛹蟲草在25"C下繁殖2天，4天，6天，8天和10天，然后，分別將10只斜紋夜蛾蛹在22i:下靜置4天，使其接種。接種后飼養(yǎng)管理35天，對(duì)蛹蟲草有無感染、子實(shí)體生成的天數(shù)以及有無雜菌繁殖等進(jìn)行了考察。另外，全部的蛹都弄傷了體表皮。對(duì)沒有進(jìn)行上述處理的情況，也做了試驗(yàn)(無處理)。其結(jié)果示于表3。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>從表3結(jié)果可知，在培養(yǎng)了10天蛹蟲草的培養(yǎng)基里，感染率最高，子實(shí)體的生成也多。而在培養(yǎng)了2天和4天的培養(yǎng)基中，感染率低，還出現(xiàn)了羽化個(gè)體。并且，子實(shí)體的生成天數(shù)也增多了。從這些結(jié)果可知，如果讓菌絲在培養(yǎng)基內(nèi)充分蔓延，進(jìn)行接種，則不僅雜菌的繁殖沒有了，而且感染也加快，子實(shí)體的生成也加快。試驗(yàn)例3，培養(yǎng)基的比較在試驗(yàn)例3中，將生成有子實(shí)體原基的蛹，在保濕狀態(tài)下靜置，使子實(shí)體生成。由于在通常的室內(nèi)不生成子實(shí)體，所以為了促進(jìn)生成，選用灰蘚、山間地的沼澤泥土中、保濕器、蛭石(vermiculite)、泥煤苔(peatmoss)、水苔作為培養(yǎng)基。在后3種培養(yǎng)基中，為了抑制細(xì)菌的發(fā)生，添加了檸檬酸，使pH降低到3.0。在容量為l升的容器(T叩perware(株)制的聚乙烯食品容器(T叩perware))內(nèi)，倒入上述材料O.7升，再添加蒸餾水0.1升，使其保濕，將生成有子實(shí)體原基的蛹，各埋設(shè)了20只。20天后，考察了子實(shí)體的生成率(％)及腐敗個(gè)數(shù)。其結(jié)果列于表4。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>由表4結(jié)果可見，不管哪種培養(yǎng)基，都有子實(shí)體生成。尤其是在灰蘚中生成率高。就連埋設(shè)在山間土壤中的情況下也同樣生成了。雖然在保濕容器中也生成了子實(shí)體，但是為了提高子實(shí)體的生成率還是需要做遮光處理。子實(shí)體的顏色是橘黃色。另外，在使用蛭石、泥煤苔和水苔的情況下，當(dāng)直接使用時(shí)，細(xì)菌就繁殖，從而產(chǎn)生腐敗個(gè)體。但是，當(dāng)把pH調(diào)整到3的時(shí)候，細(xì)菌的污染和腐敗都消失了。而且子實(shí)體的生成率也提高到90%左右。試驗(yàn)例4，繼體培養(yǎng)當(dāng)將子實(shí)體粘貼在裝有PDA培養(yǎng)基的醫(yī)療用玻璃器皿(schale)的蓋內(nèi)面使其靜置時(shí)，昆蟲寄生菌的子囊孢子掉落在培養(yǎng)基上，對(duì)新鮮子囊孢子進(jìn)行再分離就變得有可能。應(yīng)用這個(gè)方法，進(jìn)行了以下的試驗(yàn)。試驗(yàn)的培養(yǎng)基，使用了PDA培養(yǎng)基以及添加了斜紋夜蛾蛹磨碎液的PDA培養(yǎng)基。將生成了子實(shí)體的蛹，用膠帶粘貼在培養(yǎng)器的蓋內(nèi)面，在25t:的恒溫室內(nèi)放置3天。把在培養(yǎng)基表面生成的菌絲群體，移植到其他培養(yǎng)基里，通過再分離后培養(yǎng)10天，弄傷蛹之后接種，考察了子實(shí)體的生成天數(shù)、昆蟲病原性有無降低、凍結(jié)或冷藏的保存性能。昆蟲病原性的有無降低，用子實(shí)體的生成天數(shù)判斷。子實(shí)體的有無生成，用顯微鏡觀察確定。關(guān)于保存性能，分別考察了l個(gè)月、4個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月以及24個(gè)月后菌的繁殖速度。其結(jié)果列于表5。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>從表5的結(jié)果可知，如果用PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)蛹蟲草，對(duì)蛹接種的話，在19天內(nèi)就生成子實(shí)體，即使凍結(jié)保存12個(gè)月、冷藏保存4個(gè)月，在培養(yǎng)基上都有顯著的子實(shí)體繁殖。雖然經(jīng)四次繼代培養(yǎng)，保存性也沒有變化，但發(fā)現(xiàn)子實(shí)體的生成天數(shù)為26曰，且昆蟲病原性也有下降。在添加了蛹磨碎液的PDA培養(yǎng)基的情況下，子實(shí)體生成天數(shù)為17天，且尚未見昆蟲病原性的下降。如果取菌絲在添加了蛹磨碎液的TOA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，給負(fù)傷的蛹接種的話，則可以確認(rèn)，所生成的子實(shí)體變?yōu)橛行允来訉?shí)體，成功生成了初次子囊孢子，并生成了來自子囊孢子繼體培養(yǎng)的子實(shí)體。在擔(dān)心昆蟲病原性下降的情況下，將從子實(shí)體分離出來的昆蟲寄生菌置于添加了蛹磨碎液的半合成培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)和保存的方法是穩(wěn)定可靠的。試驗(yàn)例5，干燥保存法將生成子實(shí)體原基之前已硬化的蛹干燥數(shù)天，再于2025。C下，保存在能密閉的500ml玻璃容器內(nèi)。在玻璃容器內(nèi)，放入200g硅膠作為干燥劑，使內(nèi)部保持干燥狀態(tài)(干燥處理區(qū))。另一方面，作為比較，在同樣的玻璃容器內(nèi)，放入濕的棉球以提高濕度，保存與上述相同的蛹(保濕處理區(qū))。另外，作為對(duì)照，在干燥或不加濕的玻璃容器內(nèi)也保存同樣的蛹(無處理區(qū))。然后考察子實(shí)體的生成，并按以下基準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)，其結(jié)果列于表6?！?子實(shí)體以較高生成率生成。O:子實(shí)體以較低生成率生成。X:未見生成子實(shí)體。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>從表6所示結(jié)果可知，在干燥玻璃瓶內(nèi)保存的硬化蛹，即使保存2個(gè)月后，一旦使之為加濕狀態(tài)也生成子實(shí)體，但是在保濕處理區(qū)和無處理區(qū)，蛹上菌絲的繁殖加快，成為過繁盛狀態(tài)，未見子實(shí)體的生成。在干燥處理區(qū)處理3個(gè)月之后，子實(shí)體的生成率稍微下降，5個(gè)月后則見不到子實(shí)體的生成了。由此可知，在讓寄生菌感染一次之后，不生成子實(shí)體就保存的情況下，以在干燥條件下放置的方法為佳。這一事實(shí)表明，子實(shí)體生成蛹的生產(chǎn)是可能調(diào)節(jié)的。顯然，如果控制在低溫，就可以保存更長時(shí)間。試驗(yàn)例68，基于昆蟲種類和昆蟲寄生菌種類的差異作為昆蟲，選用煙草蛾蛹(試驗(yàn)例6)和蠶蛾蛹(試驗(yàn)例7)進(jìn)行了實(shí)施。作為昆蟲寄生菌，選用蛹蟲草，采用PDA培養(yǎng)基和谷物(稻谷)培養(yǎng)基，對(duì)該蛹蟲草在25'C下培養(yǎng)10天，在菌子蔓延的培養(yǎng)容器內(nèi)，將20只煙草蛾蛹弄傷后靜置，接種蛹蟲草，與此同時(shí)，爾后取出，保持在恒溫于22'C的蛭石培養(yǎng)基中。接下來，采用PDA培養(yǎng)基和谷物(米)培養(yǎng)基，在25。C下，培養(yǎng)蛹蟲草10天，在菌子蔓延的培養(yǎng)容器內(nèi)，將20只蠶蛾蛹弄傷后靜置，接種蛹蟲草，與此同時(shí)，爾后取出，保持在恒溫于22'C的蛭石培養(yǎng)基中。考察了在這種狀態(tài)下子實(shí)體原基生成時(shí)期、子實(shí)體生成時(shí)期以及腐敗蛹個(gè)數(shù)。其結(jié)果列于表7和表8之中。另外，還將生成了用同樣方法生成的子實(shí)體原基的種菌(硬化后生成了子實(shí)體原基的蛹)30個(gè)體，放于濕度在1020%、裝有干燥硅膠的容器內(nèi)靜置5天，然后放入調(diào)節(jié)成酸性的泥煤苔培養(yǎng)基中，考察子實(shí)體生成的有無(試驗(yàn)例8)。其結(jié)果列于表9。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表8<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表9<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>從表7所示結(jié)果可知，在煙草蛾的情況下，用PDA培養(yǎng)基，從13天后生成子實(shí)體原基；用谷物培養(yǎng)基，是從10日后生成子實(shí)體原基。同時(shí)可見，子實(shí)體分別從20天和19天之后生成。而且，谷物培養(yǎng)基的腐敗蛹個(gè)數(shù)，比PDA培養(yǎng)基的少。再從表8結(jié)果看，蠶蛾也有同樣的趨勢。從這些結(jié)果可知，與PDA培養(yǎng)基比較起來，因?yàn)椴捎霉任锱囵B(yǎng)基的菌絲繁殖好，所以蛹蟲草菌的繁殖良好，感染得快，子實(shí)體的生成加快，效率更高。此外，從表9所示結(jié)果可知，在干燥處理的情況下，既未產(chǎn)生腐敗，子實(shí)體生成效率也高。從這些結(jié)果可知，本發(fā)明中的昆蟲寄生菌的子實(shí)體的生產(chǎn)方法，煙草蛾蛹和蠶蛾蛹都可以利用。另外，上述實(shí)施例也可以做如下變更?？梢栽黾釉诶ハx表皮形成負(fù)傷部的數(shù)量，而對(duì)這些負(fù)傷部分別接種昆蟲寄生菌。在進(jìn)行昆蟲寄生菌子實(shí)體生產(chǎn)的時(shí)候，在1020'C的溫度范圍內(nèi)，進(jìn)行溫度調(diào)節(jié)，可調(diào)整昆蟲寄生菌的繁殖。在培養(yǎng)基中還可添加礦物質(zhì)類、維生素類、氨基酸類等營養(yǎng)成分。權(quán)利要求1.一種昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，其特征在于通過弄傷昆蟲表皮，在負(fù)傷部接種昆蟲寄生菌，使昆蟲寄生菌在昆蟲體內(nèi)繁殖，來生成昆蟲寄生菌的子實(shí)體。2、根據(jù)權(quán)利要求l記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，其特征在于上述昆蟲寄生菌是冬蟲夏草菌類。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，其特征在于把上述昆蟲寄生菌置于瓊脂培養(yǎng)基或谷物培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在讓昆蟲寄生菌的菌絲在該培養(yǎng)基上生成的狀態(tài)下，在其上放置表皮負(fù)了傷的昆蟲，接種昆蟲寄生菌。4、根據(jù)權(quán)利要求3記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，其特征在于上述昆蟲寄生菌的菌絲，是遍及整個(gè)培養(yǎng)基上生成的。5、根據(jù)權(quán)利要求1或2記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，其特征在于上述昆蟲表皮的負(fù)傷，是控制在昆蟲體液不溢出的程度下進(jìn)行的。6、根據(jù)權(quán)利要求1或2記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，其特征在于上述昆蟲的形態(tài)是蛹。7、根據(jù)權(quán)利要求l記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，其特征在于上述昆蟲寄生菌在昆蟲體內(nèi)繁殖，使得昆蟲硬化，把其表皮上生成了子實(shí)體原基的部分作為種菌，來生成子實(shí)體。8、根據(jù)權(quán)利要求7記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，其特征在于將上述種菌配置于苔上，生成子實(shí)體。9、根據(jù)權(quán)利要求7記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，其特征在于將上述種菌配置在pH24的酸性培養(yǎng)基上，生成子實(shí)體。10、一種昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，其特征在于將按照權(quán)利要求79中任何一項(xiàng)記載的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法所得到的子實(shí)體，粘貼在存放培養(yǎng)基的容器內(nèi)上部，把從子實(shí)體掉落的子囊孢子作為種菌，來生成子實(shí)體。全文摘要本發(fā)明提供一種能快速穩(wěn)定生產(chǎn)昆蟲寄生菌子實(shí)體的昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法。按照該昆蟲寄生菌子實(shí)體的生產(chǎn)方法，通過弄傷昆蟲表皮，在負(fù)傷部接種昆蟲寄生菌，使昆蟲寄生菌在昆蟲體內(nèi)繁殖，從而生成昆蟲寄生菌的子實(shí)體。作為昆蟲寄生菌，例如可采用冬蟲夏草菌類；作為昆蟲，采用斜紋夜蛾等鱗翅目的昆蟲。最好是把上述昆蟲寄生菌置于瓊脂培養(yǎng)基或谷物培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在讓昆蟲寄生菌的菌絲在該培養(yǎng)基上生成的狀態(tài)下，在其上放置表皮負(fù)了傷的昆蟲，接種昆蟲寄生菌。此外，也可以讓昆蟲寄生菌在昆蟲體內(nèi)繁殖，使得昆蟲硬化，把其表皮上生成了子實(shí)體原基的部分作為種菌，來生成子實(shí)體。文檔編號(hào)C12N1/14GK101210223SQ200610063639公開日2008年7月2日申請(qǐng)日期2006年12月27日優(yōu)先權(quán)日2006年12月27日發(fā)明者田口義廣,近藤幸盛申請(qǐng)人:近藤幸盛