專(zhuān)利名稱(chēng)：用于藥物不良反應(yīng)的危險(xiǎn)率評(píng)估的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于預(yù)測(cè)個(gè)體藥物不良反應(yīng)(adverse drug reactions)的危險(xiǎn)的方法。
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背景技術(shù)：
藥物不良反應(yīng)(ADR，adverse drug reactions)是重要臨床問(wèn)題。根據(jù)廣泛被引用的meta-分析，ADR介于第四種和第六種最通常的死亡原因之間(Lazarou et al.，1998)。特別地，潛在的嚴(yán)重皮膚性ADR大約占所有醫(yī)院案例的2-3％(Bigby et al.，1986)。雖然藥疹(drug eruption)可能是溫和至中等程度的如斑丘疹、紅斑多形物(EM)、蕁麻疹和混合藥疹，當(dāng)較嚴(yán)重的皮膚性ADR會(huì)危急生命并經(jīng)常導(dǎo)致死亡，如斯-約二氏綜合癥(SJS，Stevens-Johnsonsydrome)、中毒性表皮壞死溶解(TEN，toxic epidermal necrolysis；Lyell′s綜合癥)和過(guò)敏綜合癥(HSS，hypersensitivity sydrome)。
SJS的特征在于高燒、不適以及迅速發(fā)展的水泡疹斑點(diǎn)和伴隨粘膜牽連(mucosal involvement)的靶樣損害。TEN具有相似的表現(xiàn)，其具有更廣泛的皮膚分離和更高的死亡率(30～40％)。過(guò)敏綜合癥(HSS)的特征在于皮疹、發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大和內(nèi)臟器官牽連，其還被稱(chēng)為DRESS(具有嗜曙紅細(xì)胞增多和全身癥狀的藥物反應(yīng))或DIHS(藥物-誘發(fā)的過(guò)敏綜合癥)(Tas and Simonart、2003)。具有廣泛分布皮疹的HSS患者通常發(fā)展為剝脫性皮炎、一種或多種內(nèi)臟器官牽連(例如，肝炎、肺炎、腎炎、心肌炎、心包炎、肌炎、胰炎、甲狀腺炎)和血液異常(嗜曙紅細(xì)胞增多、非典型淋巴細(xì)胞增多、中性粒細(xì)胞增多、中性粒細(xì)胞減少、血小板減少、貧血)。其它現(xiàn)象可以是淋巴結(jié)病、眶周或顏面浮腫。盡管SJS/TEN的發(fā)生率很低，每年估計(jì)發(fā)生率為每百萬(wàn)人3-5例，但這些病情可使得原來(lái)健康的人死亡或嚴(yán)重殘疾(Roujeau and Stern，1994)。該病情的嚴(yán)重性促使了藥物公司撤回了一些新推出的藥物。
幾乎所有SJS/TEN/HSS病例均是由藥物引起的，最常見(jiàn)為磺胺、抗驚厥藥、別嘌醇、非甾類(lèi)抗炎藥(NSAID)和抗瘧藥(Roujeau et al.，1995)。在臺(tái)灣，抗驚厥藥(卡馬西平、苯妥因和苯巴比妥)和別嘌醇是導(dǎo)致SJS/TEN的最常見(jiàn)藥物。還表明其它藥物如NSAID和抗生素引起嚴(yán)重ADR。
藥物基因組學(xué)的最近進(jìn)展暗示了ADR可能與遺傳變體相關(guān)。應(yīng)用基因組學(xué)研究預(yù)防藥物-誘發(fā)副作用的成功例子是在開(kāi)藥方為氮雜硫代嘌呤之前基因分型硫代嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶(TPMT)，其中氮雜硫代嘌呤是用于風(fēng)濕病或癌癥的藥物(Yates et al.，1997)。TPMT的個(gè)體基因組多態(tài)性可引起酶缺陷并延緩了代謝率，導(dǎo)致白血球減少。由CLIA(臨床試驗(yàn)改善修訂會(huì))鑒定的此類(lèi)分子診斷現(xiàn)由美國(guó)(Prometheus Laboratory Inc.；Genaissance Pharmaceutical)和歐洲的相關(guān)實(shí)驗(yàn)室提供。盡管使用某些藥物時(shí)易患SJS/TEN/HSS被認(rèn)為是由遺傳決定的(GennisMA、1991；Edwards SG、1999)，但仍未鑒定出可靠的遺傳因子，目前沒(méi)有臨床可用的用于預(yù)測(cè)哪些人或?qū)τ谀男┧幬飼?huì)發(fā)生SJS/TEN/HSS的方法。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了一種預(yù)測(cè)患者發(fā)生藥物不良反應(yīng)特別是SJS、TEN或過(guò)敏綜合癥(HSS)的方法。已發(fā)現(xiàn)HLA-B等位基因，HLA-B*1502，與多種藥物誘發(fā)的SJS/TEN相關(guān)?？R西平-誘發(fā)的SJS/TEN與HLA-B*1502的相關(guān)最為顯著，其中所有受試患者均具有HLA-B*1502等位基因。此外，另一種HLA-B等位基因，HLA-B*5801，與別嘌醇誘發(fā)的SJS/TEN特別相關(guān)。HLA-B*5801還與別嘌醇-誘發(fā)的過(guò)敏綜合癥(HSS)相關(guān)。卡馬西平誘發(fā)的較溫和皮膚反應(yīng)如斑丘疹、紅斑多形物(EM)、蕁麻疹和混合藥疹，與第三種等位基因-HLA-B*4601特別相關(guān)。
因此，本發(fā)明提供了一種評(píng)價(jià)患者發(fā)生應(yīng)答于藥物的藥物不良反應(yīng)的危險(xiǎn)的方法，包括使用來(lái)自人的生物樣本進(jìn)行HLA分型。與ADR相關(guān)的靈敏度至少約為40％的任一HLA等位基因可用作本發(fā)明的危險(xiǎn)因子。優(yōu)選地，危險(xiǎn)因子的靈敏度至少約為50％、60％、70％、80％、85％或90％。更優(yōu)選地，靈敏度至少為95％。藥物優(yōu)選卡馬西平、別嘌醇、苯妥因、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、阿莫西林、布洛芬和酮洛芬?？晒┻x擇地，該藥物優(yōu)選不是非甾類(lèi)抗炎藥。優(yōu)選地，HLA-B等位基因是危險(xiǎn)因子。
具體地，本發(fā)明一方面提供了評(píng)價(jià)患者發(fā)生應(yīng)答于藥物的藥物不良反應(yīng)的危險(xiǎn)的方法，包括確定選自HLA-B*1502、HLA-B*5801和HLA-B*4601的HLA-B等位基因的存在，其中HLA-B等位基因的存在指示了藥物不良反應(yīng)的危險(xiǎn)。藥物優(yōu)選卡馬西平、別嘌醇、苯妥因、柳氮磺吡啶、阿莫西林、布洛芬和酮洛芬。更優(yōu)選地，該藥物是卡馬西平、別嘌醇或苯妥因。
藥物不良反應(yīng)優(yōu)選是皮膚性藥物不良反應(yīng)如斯-約二氏綜合癥、中毒性表皮壞死溶解或HSS。在優(yōu)選實(shí)施方案中，藥物是卡馬西平，等位基因是HLA-B*1502。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，等位基因HLA-B*5801用于預(yù)測(cè)應(yīng)答于別嘌醇的皮膚性ADR如斯-約二氏綜合癥或中毒性表皮壞死溶解的危險(xiǎn)。HLA-B*5801還是別嘌醇-誘發(fā)的嗜曙紅細(xì)胞增多和全身癥狀的藥物反應(yīng)(如別嘌醇-誘發(fā)的過(guò)敏綜合癥)的標(biāo)記物。除了HLA-B*1502、HLA-B*5801或HLA-B*4601之外，HLA-B15、B58或B46的其它亞型如HLA-B*1503或*1558也可用于預(yù)測(cè)ADR危險(xiǎn)。
使用本領(lǐng)域已知的任一方法可檢測(cè)等位基因。例如，通過(guò)使用與編碼等位基因的核酸特異性雜交的寡核苷酸可測(cè)定等位基因的存在。優(yōu)選地，由患者外周血制備的DNA應(yīng)用于該測(cè)定中。等位基因還可通過(guò)例如血清學(xué)或微細(xì)胞毒方法檢測(cè)。
等位基因的存在還可通過(guò)檢測(cè)該等位基因的等價(jià)遺傳標(biāo)記物而測(cè)定，該標(biāo)記物是連接于等位基因的遺傳標(biāo)記物。等價(jià)遺傳標(biāo)記物可以是例如SNP(單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism))、微衛(wèi)星標(biāo)記物或任一種遺傳多態(tài)性(genetic polymorphism)。例如，HLA-B*1502單倍型的HLA標(biāo)記物包括但不限于DRB1*1202、Cw*0801、Cw*0806、A*1101和MICA*019。HLA-B*5801單倍型的HLA標(biāo)記物包括例如HLA-A*3303、Cw*0302、DRB1*0301和MICA*00201。換言之，存在的HLA-B*1502、5801或4601單倍型而非等位基因本身指示了藥物不良反應(yīng)危險(xiǎn)。
本發(fā)明另一方面提供了藥物基因組序型分析(pharmacogenomicsprofiling)的方法，包括測(cè)定至少一種選自HLA-B*1502、HLA-B*5801和HLA-B*4601的HLA-B等位基因的存在。優(yōu)選地，測(cè)定至少兩種選自上述的等位基因如HLA-B*1502和HLA-B*5801的存在。更優(yōu)選地，測(cè)定所有三種等位基因的存在。該方法可任選包括測(cè)定其它遺傳因子。那些其它遺傳因子可能與易患包括藥物不良反應(yīng)的任一疾病或醫(yī)學(xué)情形相關(guān)。例如，這些其它遺傳因子可選自硫代嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶和長(zhǎng)-QT綜合癥(long-QT syndrome)基因。
進(jìn)一步提供了在藥物開(kāi)發(fā)中使用HLA-B*1502、5801或4601作為靶點(diǎn)篩選和/或鑒別可用于治療藥物-誘發(fā)的SJS/TEN或HSS的藥物的方法。例如表達(dá)任一等位基因的細(xì)胞可與候選藥物接觸，結(jié)合于等位基因的候選物易于抑制等位基因的表達(dá)和/或功能。然后可進(jìn)一步測(cè)試候選物治療藥物誘發(fā)不良反應(yīng)的效力。
此外，與SJS/TEN/HSS相關(guān)的HLA等位基因還可用于篩選誘發(fā)SJS/TEN/HSS的藥物。例如，候選藥物可與HLA等位基因接觸，結(jié)合于等位基因的候選物可誘發(fā)SJS/TEN/HSS并可進(jìn)一步測(cè)試。含有HLA等位基因的細(xì)胞或動(dòng)物也可用于篩選誘發(fā)SJS/TEN/HSS的藥物。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了預(yù)測(cè)患者發(fā)生藥物不良反應(yīng)特別是SJS、TEN或HSS危險(xiǎn)的方法。已發(fā)現(xiàn)HLA-B等位基因，HLA-B*1502，與多種藥物誘發(fā)的SJS/TEN相關(guān)?？R西平-誘發(fā)的SJS/TEN與HLA-B*1502的相關(guān)最為顯著，其中所有受試患者具有HLA-B*1502等位基因。此外，另一HLA-B等位基因-HLA-B*5801，與別嘌醇誘發(fā)的SJS/TEN或HSS特別相關(guān)。與卡馬西平相關(guān)的較溫和皮膚反應(yīng)比如斑丘疹、紅斑多形物(EM)、蕁麻疹和混合藥疹，與第三種等位基因-HLA-B*4601特別相關(guān)。
在詳細(xì)描述本發(fā)明之前，除非另有說(shuō)明如下定義本申請(qǐng)所用術(shù)語(yǔ)。
定義“藥物不良反應(yīng)”是不希望的且非故意的藥物作用。特別地，在用于預(yù)防、診斷或治療的劑量下發(fā)生藥物不良反應(yīng)。
“藥物”是為了預(yù)防、診斷或治療目的給予患者的任何化合物或物質(zhì)。
如果一名患者發(fā)生藥物不良反應(yīng)的幾率高于普通人群發(fā)生藥物不良反應(yīng)的幾率，那么該患者具有藥物不良反應(yīng)的“危險(xiǎn)”。該患者發(fā)生藥物不良反應(yīng)的幾率優(yōu)選至少約為普通人群發(fā)生藥物不良反應(yīng)幾率的1.5倍，更優(yōu)選至少約2倍，更加優(yōu)選至少約3、4、5、6、7、8或9倍，且最優(yōu)選至少約10倍。可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法確定該幾率，如通過(guò)使用危險(xiǎn)因子發(fā)生率。例如，假定的危險(xiǎn)因子存在于在5％的普通人群中。如果該因子存在于具有藥物不良反應(yīng)的10％患者中，那么具有該危險(xiǎn)因子的患者發(fā)生藥物不良反應(yīng)的幾率是普通人群發(fā)生藥物不良反應(yīng)幾率的2倍。
ADR的“危險(xiǎn)因子”是與ADR相關(guān)的因子。危險(xiǎn)因子的靈敏度優(yōu)選至少約為40％，更優(yōu)選至少約50％、60％、70％、80％、85％或90％。最優(yōu)選地，該靈敏度至少為95％。
預(yù)測(cè)ADR的危險(xiǎn)因子的“靈敏度”是具有危險(xiǎn)因子的ADR患者的百分比。換言之，如果每一個(gè)SJS患者都具有等位基因A，那么等位基因A預(yù)測(cè)SJS的靈敏度為100％，如果40名SJS患者中有20人具有等位基因B，那么等位基因B預(yù)測(cè)SJS的靈敏度為50％。
感興趣的等位基因的“等價(jià)遺傳標(biāo)記物”是指與有感興趣的等位基因相連的遺傳標(biāo)記物。本發(fā)明有用的等價(jià)遺傳標(biāo)記物顯示了與感興趣的等位基因的連鎖不均衡(linkage disequilibrium)。
“藥物基因組序型分析”是指測(cè)定與疾病或醫(yī)學(xué)情形特別是藥物不良反應(yīng)相關(guān)的存在于受試者體內(nèi)的遺傳因子。典型地，在藥物基因組序型分析中確定遺傳因子組(a panel of genetic factors)，這些因子可能與相同疾病、醫(yī)學(xué)情形或藥物反應(yīng)相關(guān)或不相關(guān)。
藥物“代謝物”是指由于藥物在生物體優(yōu)選哺乳動(dòng)物更優(yōu)選人體內(nèi)代謝而衍生的化合物。
如本文所用，藥物“衍生物”是指除了藥物中至少一個(gè)氫被下列取代基取代之外與藥物相同化合物，其中取代基包括鹵素、羥基、酰胺基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、芳基、芳氧基芳基、羧基、羧基烷基、羧基-取代的烷基、羧基-環(huán)烷基、羧基取代的環(huán)烷基、羧基芳基、羧基-取代的芳基、羧基雜芳基、羧基取代的雜芳基、羧基雜環(huán)基、羧基-取代的雜環(huán)基、環(huán)烷基、取代的烷基、取代的烷氧基、取代的芳基、取代的芳氧基、取代的芳氧基芳基、取代的環(huán)烷基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)的或者取代的雜環(huán)基。這些化學(xué)基團(tuán)如下定義或如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,583,139中定義。這些取代基優(yōu)選包含0-10、更優(yōu)選0-6、更優(yōu)選0-4且最優(yōu)選0-2個(gè)碳原子。
如本文所用，“烷基”是指優(yōu)選具有1-10個(gè)碳原子且更優(yōu)選1-6個(gè)碳原子的烷基。該術(shù)語(yǔ)的例示性基團(tuán)比如為甲基、叔丁基、正庚基、辛基等。
“取代的烷基”是指具有具有1-10個(gè)碳原子、具有1-5個(gè)選自下列取代基的烷基烷氧基、取代的烷氧基、?；?、?；被⒘虼驶被?、?；趸?、氨基、脒基、烷基脒基、硫代脒基、氨基?；被驶被?、氨基硫代羰基氨基、氨基羰基氧基、芳基、取代的芳基、芳基氧基、取代的芳基氧基、芳基氧基芳基、取代的芳基氧基芳基、氰基、鹵原子、羥基、硝基、羧基、羧烷基、羧基-取代的烷基、羧基-環(huán)烷基、羧基-取代的環(huán)烷基、羧基芳基、羧基-取代的芳基、羧基雜芳基、羧基-取代的雜芳基、羧基雜環(huán)基、羧基取代的雜環(huán)基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、胍基、胍基砜、硫醇、硫代烷基、取代的硫代烷基、硫代芳基、取代的硫代芳基、硫代環(huán)烷基、取代的硫代環(huán)烷基、硫代雜芳基、取代的硫代雜芳基、硫代雜環(huán)基、取代的硫代雜環(huán)基、雜芳基、取代的芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、環(huán)烷氧基、取代的環(huán)烷氧基、雜芳基氧基、取代的雜芳基氧基、雜環(huán)基氧基、取代的雜環(huán)基氧基、氧基羰基氨基、氧基硫代羰基氨基、-OS(O)2-烷基、-OS(O)2-取代的烷基、-OS(O)2-芳基、-OS(O)2-取代的芳基、-OS(O)2-雜芳基、-OS(O)2-取代的雜芳基、-OS(O)2-雜環(huán)基、-OS(O)2-取代的雜環(huán)基、-OSO2-NRR、-NRS(O)2-烷基、-NRS(O)2-取代的烷基、-NRS(O)2-芳基、-NRS(O)2-取代的芳基、-NRS(O)2-雜芳基、-NRS(O)2-取代的雜芳基、-NRS(O)2-雜環(huán)基、-NRS(O)2-取代的雜環(huán)基、-NRS(O)2-NR-烷基、-NRS(O)2-NR-取代的烷基、NRS(O)2-NR-芳基、-NRS(O)2-NR-取代的芳基、NRS(O)2-NR-雜芳基、-NRS(O)2-NR-取代的雜芳基、NRS(O)2-NR-雜環(huán)基、-NRS(O)2-NR-取代的雜環(huán)基、單-和二-烷基氨基、單-和二-(取代的烷基)氨基、單-和二-芳基氨基、單-和二-(取代的芳基)氨基、單-和二-雜芳基氨基、單-和二-(取代的雜芳基)氨基、單-和二雜環(huán)基氨基、單-和二-(取代的雜環(huán)基)氨基、不對(duì)稱(chēng)二取代的胺，該胺具有的不同取代基，該取代基選自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基；取代的烷基，其具有被常規(guī)保護(hù)基團(tuán)(如Boc、Cbz、甲?；?保護(hù)的氨基，和烷基/被下列基團(tuán)取代的烷基-S(O)2-烷基、-S(O)2-取代的烷基、-S(O)2-烯基、-S(O)2-取代的烯基、-S(O)2-環(huán)烷基、-S(O)2-取代的環(huán)烷基、-S(O)2-芳基、-S(O)2-取代的芳基、-S(O)2-雜芳基、-S(O)2-取代的雜芳基、-S(O)2-雜環(huán)基、-S(O)2-取代的雜環(huán)基或-SO2-NRR，其中R是氫或烷基。
“烷氧基”是指“烷基-O-”基團(tuán)，其包括，例如，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基、1，2-二甲基丁氧基等。
“取代的烷氧基”是指基團(tuán)“取代的烷基-O-”。
“?；笔侵富鶊F(tuán)H-C(O)-、烷基-C(O)-、取代的烷基-C(O)-、烯基-C(O)-、取代的烯基-C(O)-、炔基-C(O)-、取代的炔基-C(O)環(huán)烷基-C(O)-、取代的環(huán)烷基-C(O)-、芳基-C(O)-、取代的芳基-C(O)-、雜芳基-C(O)-、取代的雜芳基-C(O)、雜環(huán)基-C(O)-和取代的雜環(huán)基-C(O)-，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基如本文定義。
“?；被笔侵富鶊F(tuán)-C(O)NRR，其中各R獨(dú)立選自氫、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基；其中各R可與氮原子一起連接形成雜環(huán)基或取代的雜環(huán)基，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基如本文定義。
“酰基氧基”是指基團(tuán)烷基-C(O)O-、取代的烷基-C(O)O-、烯基-C(O)O-、取代的烯基-C(O)O-、炔基-C(O)O-、取代的炔基C(O)O-、芳基-C(O)O-、取代的芳基-C(O)O-、環(huán)烷基-C(O)O-、取代的環(huán)烷基-C(O)O-、雜芳基-C(O)O-、取代的雜芳基-C(O)O-、雜環(huán)基-C(O)O-和取代的雜環(huán)基-C(O)O-，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基如本文定義。
“烯基”是指優(yōu)選具有2-10個(gè)碳原子且更優(yōu)選2-6個(gè)碳原子以及具有至少1個(gè)且優(yōu)選1-2不飽和烯基位點(diǎn)的烯基。
“取代的烯基”是指具有1-5個(gè)下列取代基的烯基烷氧基、取代的烷氧基、?；?、?；被⒘虼驶被?、?；趸?、氨基、脒基、烷基脒基、硫代脒基、氨基?；被驶被?、氨基硫代羰基氨基、氨基羰基氧基、芳基、取代的芳基、芳基氧基、取代的芳基氧基、芳基氧基芳基、取代的芳基氧基芳基、鹵原子、羥基、氰基、硝基、羧基、羧基烷基、羧基-取代的烷基、羧基環(huán)烷基、羧基-取代的環(huán)烷基、羧基芳基、羧基-取代的芳基、羧基雜芳基、羧基-取代的雜芳基、羧基雜環(huán)基、羧基取代的雜環(huán)基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、胍基、胍基砜、硫醇、硫代烷基、取代的硫代烷基、硫代芳基、取代的硫代芳基、硫代環(huán)烷基、取代的硫代環(huán)烷基、硫代雜芳基、取代的硫代雜芳基、硫代雜環(huán)基、取代的硫代雜環(huán)基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、環(huán)烷氧基、取代的環(huán)烷氧基、雜芳基氧基、取代的雜芳基氧基、雜環(huán)基氧基、取代的雜環(huán)基氧基、氧基羰基氨基、氧基硫代羰基氨基、-OS(O)2-烷基、-OS(O)2-取代的烷基、-OS(O)2-芳基、-OS(O)2-取代的芳基、-OS(O)2-雜芳基、-OS(O)2-取代的雜芳基、-OS(O)2-雜環(huán)基、-OS(O)2-取代的雜環(huán)基、-OSO2-NRR、-NRS(O)2-烷基、-NRS(O)2-取代的烷基、-NRS(O)2-芳基、-NRS(O)2-取代的芳基、-NRS(O)2-雜芳基、-NRS(O)2-取代的雜芳基、-NRS(O)2-雜環(huán)基、-NRS(O)2-取代的雜環(huán)基、-NRS(O)2-NR-烷基、-NRS(O)2-NR-取代的烷基、NRS(O)2-NR-芳基、-NRS(O)2-NR-取代的芳基、NRS(O)2-NR-雜芳基、-NRS(O)2-NR-取代的雜芳基、NRS(O)2-NR-雜環(huán)基、-NRS(O)2-NR-取代的雜環(huán)基、單-和二-烷基氨基、單-和二-(取代的烷基)氨基、單-和二-芳基氨基、單-和二-(取代的芳基)氨基、單-和二-雜芳基氨基、單-和二-(取代的雜芳基)氨基、單-和二雜環(huán)基氨基、單-和二-(取代的雜環(huán)基)氨基、不對(duì)稱(chēng)二取代的胺，該胺具有不同取代基，該取代基選自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基；以及取代的烯基，其具有被常規(guī)保護(hù)基團(tuán)(如Boc、Cbz、甲?；?保護(hù)的氨基，以及烯基/被下列基團(tuán)取代的烯基-S(O)2-烷基、-S(O)2-取代的烷基、-S(O)2-烯基、-S(O)2-取代的烯基、-S(O)2-環(huán)烷基、-S(O)2-取代的環(huán)烷基、-S(O)2-芳基、-S(O)2-取代的芳基、-S(O)2-雜芳基、-S(O)2-取代的雜芳基、-S(O)2-雜環(huán)基、-S(O)2-取代的雜環(huán)基或-SO2-NRR，其中R是氫或烷基。
“炔基”是指優(yōu)選具有2-10個(gè)碳原子且更優(yōu)選3-6個(gè)碳原子以及具有至少1個(gè)且優(yōu)選1-2個(gè)不飽和炔基位點(diǎn)的炔基。
“取代的炔基”是指具有1-5個(gè)下列取代基的炔基烷氧基、取代的烷氧基、?；?、酰基氨基、硫代羰基氨基、?；趸被?、脒基、烷基脒基、硫代脒基、氨基?；?、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰基氧基、芳基、取代的芳基、芳基氧基、取代的芳基氧基、芳基氧基芳基、取代的芳基氧基芳基、鹵原子、羥基、氰基、硝基、羧基、羧基烷基、羧基-取代的烷基、羧基環(huán)烷基、羧基-取代的環(huán)烷基、羧基芳基、羧基-取代的芳基、羧基雜芳基、羧基-取代的雜芳基、羧基雜環(huán)基、羧基取代的雜環(huán)基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、胍基、胍基砜、硫醇、硫代烷基、取代的硫代烷基、硫代芳基、取代的硫代芳基、硫代環(huán)烷基、取代的硫代環(huán)烷基、硫代雜芳基、取代的硫代雜芳基、硫代雜環(huán)基、取代的硫代雜環(huán)基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、環(huán)烷氧基、取代的環(huán)烷氧基、雜芳基氧基、取代的雜芳基氧基、雜環(huán)基氧基、取代的雜環(huán)基氧基、氧基羰基氨基、氧基硫代羰基氨基、-OS(O)2-烷基、-OS(O)2-取代的烷基、-OS(O)2-芳基、-OS(O)2-取代的芳基、-OS(O)2-雜芳基、-OS(O)2-取代的雜芳基、-OS(O)2-雜環(huán)基、-OS(O)2-取代的雜環(huán)基、-OSO2-NRR、-NRS(O)2-烷基、-NRS(O)2-取代的烷基、-NRS(O)2-芳基、-NRS(O)2-取代的芳基、-NRS(O)2-雜芳基、-NRS(O)2-取代的雜芳基、-NRS(O)2-雜環(huán)基、-NRS(O)2-取代的雜環(huán)基、-NRS(O)2-NR-烷基、-NRS(O)2-NR-取代的烷基、NRS(O)2-NR-芳基、-NRS(O)2-NR-取代的芳基、NRS(O)2-NR-雜芳基、-NRS(O)2-NR-取代的雜芳基、NRS(O)2-NR-雜環(huán)基、-NRS(O)2-NR-取代的雜環(huán)基、單-和二-烷基氨基、單-和二-(取代的烷基)氨基、單-和二-芳基氨基、單-和二-(取代的芳基)氨基、單-和二-雜芳基氨基、單-和二-(取代的雜芳基)氨基、單-和二雜環(huán)基氨基、單-和二-(取代的雜環(huán)基)氨基、不對(duì)稱(chēng)二取代的胺，該胺具有不同取代基，該取代基選自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基；取代的炔基，其具有被常規(guī)保護(hù)基團(tuán)(如Boc、Cbz、甲?；?保護(hù)的氨基，以及炔基/被下列基團(tuán)取代的炔基-S(O)2-烷基、-S(O)2-取代的烷基、-S(O)2-烯基、-S(O)2-取代的烯基、-S(O)2-環(huán)烷基、-S(O)2-取代的環(huán)烷基、-S(O)2-芳基、-S(O)2-取代的芳基、-S(O)2-雜芳基、-S(O)2-取代的雜芳基、-S(O)2-雜環(huán)基、-S(O)2-取代的雜環(huán)基或-SO2-NRR，其中R是氫或烷基。
“氨基?；笔侵?NRC(O)烷基、-NRC(O)取代的烷基、-NRC(O)環(huán)烷基、-NRC(O)取代的環(huán)烷基、-NRC(O)烯基、-NRC(O)取代的烯基、-NRC(O)炔基、-NRC(O)取代的炔基、-NRC(O)芳基、-NRC(O)取代的芳基、-NRC(O)雜芳基、-NRC(O)取代的雜芳基、-NRC(O)雜環(huán)基和-NRC(O)取代的雜環(huán)基，其中R是氫或烷基，且其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基如本文定義。
“氨基羰基氧基”是指-NRC(O)O-烷基、-NRC(O)O-取代的烷基、-NRC(O)O-烯基、-NRC(O)O-取代的烯基、-NRC(O)O炔基、-NRC(O)O-取代的炔基、-NRC(O)O-環(huán)烷基、-NRC(O)O取代的環(huán)烷基、-NRC(O)O-芳基、-NRC(D)O-取代的芳基、-NRC(O)O雜芳基、-NRC(O)O-取代的雜芳基、-NRC(O)O-雜環(huán)基和-NRC(O)O-取代的雜環(huán)基，其中R是氫或烷基，且其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基如本文定義。
“氧基羰基氨基”是指-OC(O)NRR、-OC(O)NR-烷基、-OC(O)NR-取代的烷基、-OC(O)NR-烯基、-OC(O)NR-取代基烯基、-OC(O)NR-炔基、-OC(O)NR-取代的炔基、-OC(O)NR-環(huán)烷基、-OC(O)NR-取代的環(huán)烷基、-OC(O)NR-芳基、-OC(O)NR-取代的芳基、-OC(O)NR-雜芳基、-OC(O)NR-取代的雜芳基、-OC(O)NR-雜環(huán)基和-OC(O)NR-取代的雜環(huán)基，其中R是氫或烷基，且其中R可與氮原子一起連接形成雜環(huán)基或取代的雜環(huán)基，且其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基如本文定義。
“芳基”或“Ar”是指6-14個(gè)碳原子具有單環(huán)(如苯基)或多稠合環(huán)(如萘基或蒽基)的不飽和芳香碳環(huán)基，其稠合環(huán)可以是芳香族的或不是芳香族的(如2-苯并噁唑啉酮、2H-1，4-苯并噁嗪-3(4H)-酮-7-基等)。優(yōu)選的芳基包括苯基和萘基。
取代的芳基是指被1-3個(gè)選自下列的取代基取代的芳基羥基、?；Ⅴ；被?、硫代羰基氨基、?；趸?、烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、脒基、烷基脒基、硫代脒基、氨基、氨基酰基、氨基羰基氧基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、芳基、取代的芳基、芳基氧基、取代的芳基氧基、環(huán)烷氧基、取代的環(huán)烷氧基、雜芳基氧基、取代的雜芳基氧基、雜環(huán)基氧基、取代的雜環(huán)基氧基、羧基、羧基烷基、羧基取代的烷基、羧基-環(huán)烷基、羧基-取代的環(huán)烷基、羧基芳基、羧基-取代的芳基、羧基雜芳基、羧基-取代的雜芳基、羧基雜環(huán)基、羧基-取代的雜環(huán)基、羧酰胺基、氰基、硫醇、硫代烷基、取代的硫代烷基、硫代芳基、取代的硫代芳基、硫代雜芳基、取代的硫代雜芳基、硫代環(huán)烷基、取代的硫代環(huán)烷基、硫代雜環(huán)基、取代的硫代雜環(huán)基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、胍基、胍基砜、鹵素、硝基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、環(huán)烷氧基、取代的環(huán)烷氧基、雜芳基氧基、取代的雜芳基氧基、雜環(huán)基氧基、取代的雜環(huán)基氧基、氧基羰基氨基、氧基硫代羰基氨基、-SO(O)2-烷基、-SO(O)2-取代的烷基、-S(O)2-環(huán)烷基、-S(O)2-取代的環(huán)烷基、-S(O)2-烯基、-S(O)2-取代的烯基、-S(O)2-芳基、-S(O)2-取代的芳基、-S(O)2-雜芳基、-S(O)2-取代的雜芳基、-S(O)2-雜環(huán)基、-S(O)2-取代的雜環(huán)基、-OS(O)2-烷基、-OS(O)2-取代的烷基、-OS(O)2-芳基、-OS(O)2-取代的芳基、-OS(O)2-雜芳基、-OS(O)2-取代的雜芳基、-OS(O)2-雜環(huán)基、-OS(O)2-取代的雜環(huán)基、-OSO2-NRR、-NRS(O)2-烷基、-NRS(O)2-取代的烷基、-NRS(O)2-芳基、-NRS(O)2-取代的芳基、-NRS(O)2-雜芳基、-NRS(O)2-取代的雜芳基、-NRS(O)2-雜環(huán)基、-NRS(O)2-取代的雜環(huán)基、-NRS(O)2-NR-烷基、-NRS(O)2-NR-取代的烷基、NRS(O)2-NR-芳基、-NRS(O)2-NR-取代的芳基、NRS(O)2-NR-雜芳基、-NRS(O)2-NR-取代的雜芳基、NRS(O)2-NR-雜環(huán)基、-NRS(O)2-NR-取代的雜環(huán)基、單-和二-烷基氨基、單-和二-(取代的烷基)氨基、單-和二-芳基氨基、單-和二-(取代的芳基)氨基、單-和二-雜芳基氨基、單-和二-(取代的雜芳基)氨基、單-和二雜環(huán)基氨基、單-和二-(取代的雜環(huán)基)氨基、不對(duì)稱(chēng)二取代的胺，該胺具有不同的取代基，該取代基選自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、在取代的芳基上被常規(guī)保護(hù)基團(tuán)(如Boc、Cbz、甲?；?保護(hù)的氨基，以及-SO2NRR，其中R是氫或烷基。
“芳基氧基”是指基團(tuán)芳基-O-，其例如包括苯氧基、萘氧基等。
“取代的芳基氧基”是指取代的芳基-O-基團(tuán)。
“芳基氧基芳基”是指基團(tuán)-芳基-O-芳基。
“取代的芳基氧基芳基”是指在任一或兩個(gè)芳環(huán)上被選自下列的1-3個(gè)取代基取代的芳基氧基芳基羥基、?；?、酰基氨基、硫代羰基氨基、酰基氧基、烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、脒基、烷基脒基、硫代脒基、氨基、氨基?；被驶趸?、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、芳基、取代的芳基、芳基氧基、取代的芳基氧基、環(huán)烷氧基、取代的環(huán)烷氧基、雜芳基氧基、取代的雜芳基氧基、雜環(huán)基氧基、取代的雜環(huán)基氧基、羧基、羧基烷基、羧基-取代的烷基、羧基-環(huán)烷基、羧基-取代的環(huán)烷基、羧基芳基、羧基-取代的芳基、羧基雜芳基、羧基-取代的雜芳基、羧基雜環(huán)基、羧基-取代的雜環(huán)基、羧酰胺基、氰基、硫醇、硫代烷基、取代的硫代烷基、硫代芳基、取代的硫代芳基、硫代雜芳基、取代的硫代雜芳基、硫代環(huán)烷基、取代的硫代環(huán)烷基、硫代雜環(huán)基、取代的硫代雜環(huán)基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、胍基、胍基砜、鹵素、硝基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、環(huán)烷氧基、取代的環(huán)烷氧基、雜芳基氧基、取代的雜芳基氧基、雜環(huán)基氧基、取代的雜環(huán)基氧基、氧基羰基氨基、氧基硫代羰基氨基、-S(O)2-烷基、-S(O)2-取代的烷基、-S(O)2-環(huán)烷基、-S(O)2-取代的環(huán)烷基、-S(O)2-烯基、-S(O)2-取代的烯基、-S(O)2-芳基、-S(O)2-取代的芳基、-S(O)2-雜芳基、-S(O)2-取代的雜芳基、-S(O)2-雜環(huán)基、-S(O)2-取代的雜環(huán)基、-OS(O)2-烷基、-OS(O)2-取代的烷基、-OS(O)2-芳基、-OS(O)2-取代的芳基、-OS(O)2-雜芳基、-OS(O)2-取代的雜芳基、-OS(O)2-雜環(huán)基、-OS(O)2-取代的雜環(huán)基、-OSO2-NRR、-NRS(O)2-烷基、-NRS(O)2-取代的烷基、-NRS(O)2-芳基、-NRS(O)2-取代的芳基、-NRS(O)2-雜芳基、-NRS(O)2-取代的雜芳基、-NRS(O)2-雜環(huán)基、-NRS(O)2-取代的雜環(huán)基、-NRS(O)2-NR-烷基、-NRS(O)2-NR-取代的烷基、-NRS(O)2-NR-芳基、-NRS(O)2-NR-取代的芳基、-NRS(O)2-NR-雜芳基、-NRS(O)2-NR-取代的雜芳基、-NRS(O)2-NR-雜環(huán)基、-NRS(O)2-NR-取代的雜環(huán)基、單-和二-烷基氨基、單-和二-(取代的烷基)氨基、單-和二-芳基氨基、單-和二-(取代的芳基)氨基、單-和二-雜芳基氨基、單-和二-(取代的雜芳基)氨基、單-和二雜環(huán)基氨基、單-和二-(取代的雜環(huán)基)氨基、不對(duì)稱(chēng)二取代的胺，該胺具有不同的取代基，該取代基選自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、在取代的芳基上被常規(guī)保護(hù)基團(tuán)(如Boc、Cbz、甲酰基等)保護(hù)的氨基，以及-SO2NRR，其中R是氫或烷基。
“環(huán)烷基”是指具有單環(huán)的3-8個(gè)碳原子的環(huán)烷基，例如包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)辛基等。該定義排除了多環(huán)烷基比如金剛烷基等。
“環(huán)烯基”是指具有單個(gè)或多個(gè)不飽和環(huán)但非芳環(huán)的3-8個(gè)碳原子的環(huán)烯基。
“取代的環(huán)烷基”和“取代的環(huán)烯基”是指優(yōu)選3-8個(gè)碳原子具有1-5個(gè)選自下列取代基的環(huán)烷基和環(huán)烯基氧代(＝O)、硫代(＝S)、烷氧基、取代的烷氧基、?；Ⅴ；被⒘虼驶被?、?；趸被?、脒基、烷基脒基、硫代脒基、氨基?；?、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰基氧基、芳基、取代的芳基、芳基氧基、取代的芳基氧基、芳基氧基芳基、取代的芳基氧基芳基、鹵原子、羥基、氰基、硝基、羧基、羧基烷基、羧基-取代的烷基、羧基-環(huán)烷基、羧基-取代的環(huán)烷基、羧基芳基、羧基-取代的芳基、羧基雜芳基、羧基-取代的雜芳基、羧基雜環(huán)基、羧基取代的雜環(huán)基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、胍基、胍基砜、硫醇、硫代烷基、取代的硫代烷基、硫代芳基、取代的硫代芳基、硫代環(huán)烷基、取代的硫代環(huán)烷基、硫代雜芳基、取代的硫代雜芳基、硫代雜環(huán)基、取代的硫代雜環(huán)基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、環(huán)烷氧基取代的環(huán)烷氧基、雜芳氧基、取代的雜芳氧基、雜環(huán)氧基、取代的雜環(huán)氧基、氧基羰基氨基、氧基硫代羰基氨基、-OS(O)2-烷基、-OS(O)2-取代的烷基、-OS(O)2-芳基、-OS(O)2-取代的芳基、-OS(O)2-雜芳基、-OS(O)2-取代的雜芳基、-OS(O)2-雜環(huán)基、-OS(O)2-取代的雜環(huán)基、-OSO2-NRR、-NRS(O)2-烷基、-NRS(O)2-取代的烷基、-NRS(O)2-芳基、-NRS(O)2-取代的芳基、-NRS(O)2-雜芳基、-NRS(O)2-取代的雜芳基、-NRS(O)2-雜環(huán)基、-NRS(O)2-取代的雜環(huán)基、-NRS(O)2-NR-烷基、-NRS(O)2-NR-取代的烷基、NRS(O)2-NR-芳基、-NRS(O)2-NR-取代的芳基、NRS(O)2-NR-雜芳基、-NRS(O)2-NR-取代的雜芳基、NRS(O)2-NR-雜環(huán)基、-NRS(O)2-NR-取代的雜環(huán)基、單-和二-烷基氨基、單-和二-(取代的烷基)氨基、單-和二-芳基氨基、單-和二-(取代的芳基)氨基、單-和二-雜芳基氨基、單-和二-(取代的雜芳基)氨基、單-和二雜環(huán)基氨基、單-和二-(取代的雜環(huán)基)氨基、不對(duì)稱(chēng)二取代的胺，該胺具有不同的取代基，該取代基選自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基；取代炔基，其具有被常規(guī)保護(hù)基團(tuán)(如Boc、Cbz、甲酰基等)保護(hù)的氨基；以及炔基/被下列基團(tuán)取代的炔基-S(O)2-烷基、-S(O)2-取代的烷基、-S(O)2-烯基、-S(O)2-取代的烯基、-S(O)2-環(huán)烷基、-S(O)2-取代的環(huán)烷基、-S(O)2-芳基、-S(O)2-取代的芳基、-S(O)2-雜芳基、-S(O)2-取代的雜芳基、-S(O)2-雜環(huán)基、-S(O)2-取代的雜環(huán)基或-SO2-NRR，其中R是氫或烷基。
“環(huán)烷氧基”是指-O-環(huán)烷基。
“取代的環(huán)烷氧基”是指-O-取代的環(huán)烷基。
“鹵素”是指氟、氯、溴和碘且優(yōu)選氯或溴。
“雜芳基”是指在環(huán)內(nèi)有2-10個(gè)碳原子和1-4個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子的芳香碳環(huán)。該雜芳基可具有單環(huán)(如吡啶基或呋喃基)或多稠合環(huán)(如中吲嗪基或苯并噻吩基)。優(yōu)選的雜芳基包括吡啶基、吡咯基、吲哚基和呋喃基。
“取代的雜芳基”是指被1-3個(gè)選自下列的取代基取代的雜芳基羥基、?；Ⅴ；被⒘虼驶被?、?；趸?、烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、脒基、烷基脒基、硫代脒基、氨基、氨基酰基、氨基羰基氧基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、芳基、取代的芳基、芳基氧基、取代的芳基氧基、環(huán)烷氧基、取代的環(huán)烷氧基、雜芳基氧基、取代的雜芳基氧基、雜環(huán)基氧基、取代的雜環(huán)基氧基、羧基、羧基烷基、羧基-取代的烷基、羧基-環(huán)烷基、羧基-取代的環(huán)烷基、羧基芳基、羧基-取代的芳基、羧基雜芳基、羧基-取代的雜芳基、羧基雜環(huán)基、羧基-取代的雜環(huán)基、羧酰胺、氰基、硫醇、硫代烷基、取代的硫代烷基、硫代芳基、取代的硫代芳基、硫代雜芳基、取代的硫代雜芳基、硫代環(huán)烷基、取代的硫代環(huán)烷基、硫代雜環(huán)基、取代的硫代雜環(huán)基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、胍基、胍基砜、鹵素、硝基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、環(huán)烷氧基、取代的環(huán)烷氧基、雜芳基氧基、取代的雜芳基氧基、雜環(huán)基氧基、取代的雜環(huán)基氧基、氧基羰基氨基、氧基硫代羰基氨基、-S(O)2-烷基、-S(O)2-取代的烷基、-S(O)2-環(huán)烷基、-S(O)2-取代的環(huán)烷基、-S(O)2-烯基、-S(O)2-取代的烯基、-S(O)2-芳基、-S(O)2-取代的芳基、-S(O)2-雜芳基、-S(O)2-取代的雜芳基、-S(O)2-雜環(huán)基、-S(O)2-取代的雜環(huán)基、-OS(O)2-烷基、-OS(O)2-取代的烷基、-OS(O)2-芳基、-OS(O)2-取代的芳基、-OS(O)2-雜芳基、-OS(O)2-取代的雜芳基、-OS(O)2-雜環(huán)基、-OS(O)2-取代的雜環(huán)基、-OSO2-NRR、-NRS(O)2-烷基、-NRS(O)2-取代的烷基、-NRS(O)2-芳基、-NRS(O)2-取代的芳基、-NRS(O)2-雜芳基、-NRS(O)2-取代的雜芳基、-NRS(O)2-雜環(huán)基、-NRS(O)2-取代的雜環(huán)基、-NRS(O)2-NR-烷基、-NRS(O)2-NR-取代的烷基、-NRS(O)2-NR-芳基、-NRS(O)2-NR-取代的芳基、-NRS(O)2-NR-雜芳基、-NRS(O)2-NR-取代的雜芳基、-NRS(O)2-NR-雜環(huán)基、-NRS(O)2-NR-取代的雜環(huán)基、單-和二-烷基氨基、單-和二-(取代的烷基)氨基、單-和二-芳基氨基、單-和二-(取代的芳基)氨基、單-和二-雜芳基氨基、單-和二-(取代的雜芳基)氨基、單-和二雜環(huán)基氨基、單-和二-(取代的雜環(huán)基)氨基、不對(duì)稱(chēng)二取代的胺，該胺具有不同的取代基，該取代基選自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、在取代的芳基上被常規(guī)保護(hù)基團(tuán)(如Boc、Cbz、甲?；?保護(hù)的氨基，以及-SO2NRR，其中R是氫或烷基。
“雜芳基氧基”是指-O-雜芳基以及“取代的雜芳基氧基”是指-O-取代的雜芳基。
“雜環(huán)”或”雜環(huán)的”是指具有單環(huán)或多稠合環(huán)、在環(huán)內(nèi)包含1-10個(gè)碳原子和1-4個(gè)選自氮、硫或氧的雜原子的飽和或不飽和基團(tuán)。在稠合環(huán)系中，一個(gè)或多個(gè)環(huán)可以是苯基或雜芳基。
“取代的雜環(huán)基”是指被1-3個(gè)選自下列的取代基取代的雜環(huán)基氧代(＝O)、硫代(＝S)、烷氧基、取代的烷氧基、?；?、?；被?、硫代羰基氨基、?；趸?、氨基、脒基、烷基脒基、硫代脒基、氨基?；被驶被?、氨基硫代羰基氨基、氨基羰基氧基、芳基、取代的芳基、芳基氧基、取代的芳基氧基、芳基氧基芳基、取代的芳基氧基芳基、鹵原子、羥基、氰基、硝基、羧基、羧基烷基、羧基-取代的烷基、羧基-環(huán)烷基、羧基-取代的環(huán)烷基、羧基芳基、羧基-取代的芳基、羧基雜芳基、羧基-取代的雜芳基、羧基雜環(huán)基、羧基取代的雜環(huán)基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、胍基、胍基砜、硫醇、硫代烷基、取代的硫代烷基、硫代芳基、取代的硫代芳基、硫代環(huán)烷基、取代的硫代環(huán)烷基、硫代雜芳基、取代的硫代雜芳基、硫代雜環(huán)基、取代的硫代雜環(huán)基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、環(huán)烷氧基取代的環(huán)烷氧基、雜芳氧基、取代的雜芳氧基、雜環(huán)氧基、取代的雜環(huán)氧基、氧基羰基氨基、氧基硫代羰基氨基、-OS(O)2-烷基、-OS(O)2-取代的烷基、-OS(O)2-芳基、-OS(O)2-取代的芳基、-OS(O)2-雜芳基、-OS(O)2-取代的雜芳基、-OS(O)2-雜環(huán)基、-OS(O)2-取代的雜環(huán)基、-OSO2-NRR、-NRS(O)2-烷基、-NRS(O)2-取代的烷基、-NRS(O)2-芳基、-NRS(O)2-取代的芳基、-NRS(O)2-雜芳基、-NRS(O)2-取代的雜芳基、-NRS(O)2-雜環(huán)基、-NRS(O)2-取代的雜環(huán)基、-NRS(O)2-NR-烷基、-NRS(O)2-NR-取代的烷基、NRS(O)2-NR-芳基、-NRS(O)2-NR-取代的芳基、NRS(O)2-NR-雜芳基、-NRS(O)2-NR-取代的雜芳基、NRS(O)2-NR-雜環(huán)基、-NRS(O)2-NR-取代的雜環(huán)基、單-和二-烷基氨基、單-和二-(取代的烷基)氨基、單-和二-芳基氨基、單-和二-(取代的芳基)氨基、單-和二-雜芳基氨基、單-和二-(取代的雜芳基)氨基、單-和二雜環(huán)基氨基、單-和二-(取代的雜環(huán)基)氨基、不對(duì)稱(chēng)二取代的胺，該胺具有不同的取代基，該取代基選自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基；炔基，其具有被常規(guī)保護(hù)基團(tuán)(如Boc、Cbz、甲?；?保護(hù)的氨基；以及炔基/被下列基團(tuán)取代的炔基-S(O)2-烷基、-S(O)2-取代的烷基、-S(O)2-烯基、-S(O)2-取代的烯基、-S(O)2-環(huán)烷基、-S(O)2-取代的環(huán)烷基、-S(O)2-芳基、-S(O)2-取代的芳基、-S(O)2-雜芳基、-S(O)2-取代的雜芳基、-S(O)2-雜環(huán)基、-S(O)2-取代的雜環(huán)基或-SO2-NRR，其中R是氫或烷基。
雜環(huán)和雜芳基例如包括但不限于，氮雜環(huán)丁烷、吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、噠嗪、吲嗪、異吲哚、吲哚、吲哚滿、吲唑、嘌呤、喹嗪、異喹啉、喹啉、酞嗪、萘基吡啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、菲咯啉、異噻唑、吩嗪、異噁唑、吩噁嗪、吩噻嗪、四氫咪唑、咪唑啉、哌啶、哌嗪、二氫吲哚、鄰苯二甲酰亞胺、1，2，3，4-四氫異喹啉、4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩、噻唑、噻唑烷、噻吩、苯并[b]噻吩、嗎啉代、硫代嗎啉代、哌啶基、吡咯烷、四氫呋喃基等。
“雜環(huán)基氧基”是指-O-雜環(huán)基，“取代的雜環(huán)基氧基”是指-O-取代的雜環(huán)基。
方法有證據(jù)證明若干類(lèi)似的多系統(tǒng)藥物過(guò)敏性反應(yīng)的發(fā)病機(jī)理涉及藥物或藥物代謝產(chǎn)物的MHC-限制性呈遞，在T細(xì)胞活化之前直接將這些非肽抗原結(jié)合至MHC分子或半抗原(haptenation)至內(nèi)源性蛋白(Svensson et al.，2000)。在大皰反應(yīng)(bullous reaction)如SJS/TEN中發(fā)現(xiàn)皮膚-滲透CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞占據(jù)主導(dǎo)(Hari et al.，2001)，而CD4+輔助性T細(xì)胞的特征在于較溫和皮膚性藥物不良反應(yīng)如斑丘疹(Pichler et al.，1997)。因?yàn)橐阎饕M織相容性復(fù)合物(MHC)在測(cè)定對(duì)于抗原如藥物代謝物的T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答中具有重要作用，我們?cè)u(píng)價(jià)了主要組織相容性復(fù)合物的等位基因是否與藥物誘發(fā)的SJS/TEN/HSS相關(guān)。
我們對(duì)于具有藥物不良反應(yīng)的患者進(jìn)行了HLA分型。結(jié)果表明HLA-B*1502存在于接受卡馬西平的全部42名SJS/TEN患者中(100％)(實(shí)施例1)。在接受其它藥物的53名SJS/TEN患者中有17人(32％)也發(fā)現(xiàn)了該等位基因(8名苯妥因，2名別嘌醇、2名阿莫西林，1名柳氮磺胺吡啶，1名酮洛芬，1名布洛芬和2名未知藥物)。特別地，服用苯妥因后發(fā)生SJS/TEN的17名患者中有8人也攜有HLA-B*1502等位基因。另一方面，該等位基因還發(fā)現(xiàn)于4.1％(3/73)卡馬西平-耐受組、0％(0/32)苯妥因-耐受組、6.3％(9/142)具有除了SJS外較溫和藥物不良反應(yīng)的患者以及5.3％(5/94)普通人群中。通過(guò)使用耐受組作為對(duì)照，與卡馬西平-誘發(fā)SJS/TEN相關(guān)的B*1502的優(yōu)勢(shì)比、靈敏度、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別是1712、100％、95.89％、96.0％和100％。對(duì)于苯妥因-誘發(fā)SJS/TEN相關(guān)的B*1502，其優(yōu)勢(shì)比、靈敏度、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別是58、47％、100％、100％和65.35％。因此，該HLA-B的存在可用于鑒定對(duì)于藥物-誘發(fā)的SJS/TEN特別是卡馬西平-和苯妥因-誘發(fā)的SJS/TEN具有高危險(xiǎn)性的患者。
卡馬西平誘發(fā)的溫和不良反應(yīng)似乎與另一等位基因-HLA-B*4601相關(guān)。由此，對(duì)于卡馬西平具有這些較溫和反應(yīng)的16名患者中有10人(62.5％)具有HLA-B*4601。相反，該等位基因僅發(fā)現(xiàn)于26％(19/73)卡馬西平-耐受組中。與卡馬西平-誘發(fā)的較溫和皮膚性ADR相關(guān)的B*4601的優(yōu)勢(shì)比為4.73。因此，HLA-B*4601可用于卡馬西平誘發(fā)的溫和皮膚性ADR危險(xiǎn)率評(píng)估。
第三種HLA-B等位基因-HLA-B*5801發(fā)現(xiàn)于接受別嘌醇的全部17名(100％)具有SJS/TEN或過(guò)敏的患者中，但在普通人群中僅有18％。與別嘌醇-誘發(fā)SJS/TEN或過(guò)敏相關(guān)的B*5801的優(yōu)勢(shì)比、靈敏度、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別是155、100％、82％，84.7％和100％(實(shí)施例2)。HLA-B*5801由此可用于預(yù)測(cè)應(yīng)答別嘌醇的藥物不良反應(yīng)的危險(xiǎn)。
因此，本發(fā)明提供了評(píng)價(jià)患者服藥后發(fā)生藥物不良反應(yīng)危險(xiǎn)的方法，包括測(cè)定選自HLA-B*1502、HLA-B*5801和HLA-B*4601的HLA-B等位基因的存在，其中該HLA-B等位基因的存在指示了藥物不良反應(yīng)的危險(xiǎn)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，HLA-B*1502用于預(yù)測(cè)SJS/TEN特別是卡馬西平-誘發(fā)的SJS/TEN的危險(xiǎn)。
卡馬西平，還被稱(chēng)為T(mén)egretol、Tegol、G-32883、Biston、Calepsin、Carbatrol、Epitol、Finlepsin、Sirtal、Stazepine、Telesmin或Timonil是芳香族抗驚厥劑。其它芳香族抗驚厥劑包括苯妥因(Dilantin)和苯巴比妥，引起類(lèi)似于卡馬西平的藥物不良反應(yīng)。因此，HLA-B*1502還可用于評(píng)價(jià)對(duì)于這些其它芳香族抗驚厥劑藥物不良反應(yīng)的危險(xiǎn)。可將HLA-B*1502用作其危險(xiǎn)因子的芳香族抗驚厥劑還包括卡馬西平、苯妥因或苯巴比妥的代謝物和衍生物。本領(lǐng)域已知這些藥物的代謝物(例如參見(jiàn)，Gennis et al.，1991；Leeder，1998；Naisbitt et al.，2003)，比如卡馬西平-10，11環(huán)氧化物、卡馬西平-10，11-二醇、卡馬西平-2，3-二醇、二氫卡馬西平、卡馬西平兒茶酚和卡馬西平o-醌、p-羥基苯妥因、苯妥因二氫二醇、苯妥因兒茶酚、苯妥因甲基兒茶酚和苯妥因o-醌。
在另一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，HLA-B*5801用于預(yù)測(cè)別嘌醇-誘發(fā)SJS/TEN或HSS的危險(xiǎn)。別嘌醇是用于高尿酸血癥和慢性痛風(fēng)的藥物。與其它藥物一樣，HLA-B*5801也可用于評(píng)價(jià)別嘌醇代謝物和衍生物的危險(xiǎn)。
HLA-B15、B58或B46位的其它亞型也可導(dǎo)致易患皮膚性藥物不良反應(yīng)，特別是當(dāng)該患者是不同種族時(shí)。本領(lǐng)域已觀察到這樣的亞型變異。例如，強(qiáng)直性脊椎炎與HLA-B27非常相關(guān)。已報(bào)道了HLA-B27的許多等位基因或亞型，比如B*2701-B*2723。這些亞型分布于世界的不同地方，許多與強(qiáng)直性脊椎炎相關(guān)(Khan，2000；Feltkamp et al.，2001)。我們認(rèn)為HLA-B15、B58或B46與本文所述皮膚性ADR相關(guān)，其它HLA-B15、B58或B46亞型還可替代HLA-B*1502、5801或4601用于危險(xiǎn)率評(píng)估，例如HLA-B*1503或*1558。
此外，應(yīng)注意除了特異的HLA等位基因本身，連接于各特異等位基因的遺傳標(biāo)記物也可用于預(yù)測(cè)相應(yīng)的ADR。這是因?yàn)楦信d趣的HLA等位基因附近的遺傳標(biāo)記物傾向于與感興趣的等位基因共分離或顯示連鎖不均衡。因此，這些標(biāo)記物(等價(jià)遺傳標(biāo)記物)的存在指示了感興趣的等位基因的存在，其又指示了ADR危險(xiǎn)。如實(shí)施例3所示，HLA-B*1502單倍型包括HLA標(biāo)記物如DRB1*1202、Cw*0801、Cw*0806、A*1101和MICA*019。HLA-B*5801單倍型的HLA標(biāo)記物包括例如A*3303、Cw*0302、DRB1*0301和MICA*00201。
等價(jià)遺傳標(biāo)記物可以是任一標(biāo)記物，包括HLA標(biāo)記物、微衛(wèi)星和單核苷酸多態(tài)性(SNP)標(biāo)記物。優(yōu)選地，有用的遺傳標(biāo)記物距HLA-B位約200kb或更短。更優(yōu)選地，這些標(biāo)記物距HLA-B位約100kb、80kb、60kb、40kb或20kb或更短。特別感興趣的標(biāo)記物位于特異HLA-B單倍型的DRB1和HLA-A區(qū)域之間。
通過(guò)使用本領(lǐng)域已知的任何方法可檢測(cè)HLA等位基因。優(yōu)選地，基因組DNA與特異于感興趣等位基因的探針雜交。探針可被標(biāo)記以直接檢測(cè)，或通過(guò)特異性結(jié)合于探針的第二種可檢測(cè)分子進(jìn)行接觸?？晒┻x擇地，可檢測(cè)cDNA、RNA或等位基因的蛋白產(chǎn)物。例如，血清分型或微細(xì)胞毒方法可用于測(cè)定等位基因的蛋白產(chǎn)物。相似地，通過(guò)領(lǐng)域已知的任何方法可檢測(cè)等價(jià)遺傳標(biāo)記物。
為了進(jìn)一步提高危險(xiǎn)預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性，感興趣的等位基因和/或其等價(jià)基因標(biāo)記物可與輔助分子和共刺激分子的遺傳標(biāo)記物一起進(jìn)行測(cè)定，其中該輔助分子和共刺激分子在抗原-存在細(xì)胞和T-細(xì)胞相互作用中被涉及。這些遺傳標(biāo)記物包括微衛(wèi)星和單核苷酸多態(tài)性(SNP)標(biāo)記物。輔助和共刺激分子包括細(xì)胞表面分子(例如CD80、CD86、CD28、CD4、CD8、T細(xì)胞受體(TCR)、ICAM-1、CD11a、CD58、CD2等)和炎性或前炎性細(xì)胞激酶、趨化因子(例如、TNF-a)和介質(zhì)(例如，補(bǔ)體、凋亡蛋白、酶、細(xì)胞外基質(zhì)成分等)。其它感興趣的是涉及藥物生物活性和解毒的藥物代謝酶的遺傳標(biāo)記物。藥物代謝酶包括I期酶(例如，細(xì)胞色素P450超家族等)和II期酶(例如，線粒體環(huán)氧化水解酶、芳基胺N-?；D(zhuǎn)移酶、UDP-glucuronosyl-轉(zhuǎn)移酶等)。
本發(fā)明進(jìn)一步提供藥物基因組序型分析的方法。由此，測(cè)定給定個(gè)體的一組遺傳因子，各遺傳因子與疾病或醫(yī)學(xué)情形包括藥物不良反應(yīng)相關(guān)。在本方法中，該組的遺傳因子包括至少一種選自HLA-B*1502、5801和4601的等位基因。該組優(yōu)選包括至少兩種等位基因，且最優(yōu)選所有三種。除了HLA-B*1502、5801和/或4601外，該組可包括任何其它已知的遺傳因子如硫代嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶和長(zhǎng)-QT綜合癥的基因。還可包括上述的輔助分子、共刺激分子和/或藥物代謝酶的遺傳標(biāo)記物。
進(jìn)一步提供了在藥物開(kāi)發(fā)中使用HLA-B*1502、5801或4601作為靶點(diǎn)篩選和/或鑒別可用于治療藥物-誘發(fā)的SJS/TEN或HSS的藥物的方法。例如表達(dá)任一等位基因的細(xì)胞可與候選藥物接觸，結(jié)合于等位基因的候選物易于抑制等位基因的表達(dá)和/或功能。然后可進(jìn)一步測(cè)試候選物治療藥物誘發(fā)的不良反應(yīng)的效力。
試劑盒本發(fā)明另一方面提供了含有用于檢測(cè)至少一種選自HLA-B*1502、5801或4601等位基因的裝置的試劑盒。該裝置優(yōu)選是特異性結(jié)合于等位基因的探針，且該試劑盒還優(yōu)選包含探針的檢測(cè)試劑。該探針優(yōu)選是寡核苷酸。該試劑盒可進(jìn)一步包含采集患者生物樣本以及由樣本制備基因組DNA、cDNA、RNA或等位基因蛋白的工具和/或試劑。例如，可包括增強(qiáng)基因組DNA相關(guān)區(qū)域的PCR引物。
該試劑盒優(yōu)選含有用于檢測(cè)至少兩種選自HLA-B*1502、5801或4601等位基因的裝置。任選地，該試劑盒可含有檢測(cè)其它遺傳因子特別是適用于藥物基因組序型分析的裝置。優(yōu)選的實(shí)例是硫代嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶。
由此，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該試劑盒可含有用于檢測(cè)所有三種等位基因HLA-B*1502、5801和4601的探針。更優(yōu)選地，該試劑盒進(jìn)一步含有適用于各等位基因的PCR引物。
提供了下面的實(shí)施例以舉例說(shuō)明本發(fā)明，不得解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。雖然參考其優(yōu)選實(shí)施方案具體表明并描述了本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解到，可進(jìn)行形式和細(xì)節(jié)的多種改變而不偏離如權(quán)利要求所定義的本發(fā)明的精神和范圍。
實(shí)施例在下面的實(shí)施例中，下面的縮寫(xiě)具有下述含義。未定義的縮寫(xiě)具有它們通常被接受的含義。
℃＝攝氏度hr＝小時(shí)min＝分鐘sec＝秒μM＝微摩爾mm＝毫摩爾M＝摩爾ml＝毫升μl＝微升mg＝毫克μg＝微克ADR＝藥物不良反應(yīng)SJS＝斯-約二氏綜合癥(Stevens-Johnson symdrome)TEN＝中毒性表皮壞死溶解(toxic epidermal necrolysis)HSS＝過(guò)敏癥狀(hypersensitivity syndrome)DRESS＝伴有嗜酸性細(xì)胞增多和全身癥狀的藥物反應(yīng)(drug reactionwith eosinophilia and systemic symptoms)
SSO＝順序特異的寡核苷酸(sequence-specific oligonucleotide)PCR＝聚合酶鏈反應(yīng)HLA＝人白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen)STRP＝短串聯(lián)重復(fù)多態(tài)性(short tandem repeat polymorphism)材料和方法患者和對(duì)照受試者為了實(shí)施例1和2所述的研究，從Chang Gung Memorial Hospital或從全臺(tái)灣的若干其它醫(yī)學(xué)中心總共招募到112名SJS/TEN患者。在這些患者中，42人患有卡馬西平(tegretol)-誘發(fā)的SJS/TEN，17人患有別嘌醇-誘發(fā)的嚴(yán)重ADR。此外，還招收了126名患者，其發(fā)生了對(duì)于不同藥物的中等程度過(guò)敏反應(yīng)。記錄的服藥史包括劑量和療程以及藥物不良反應(yīng)的表型。臨床形態(tài)學(xué)的診斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)Roujeau(Roujeau JC、1994)定義。我們將SJS定義為皮膚脫離(skin detachment)低于體表面積的10％，交錯(cuò)SJS-TEN定義為皮膚脫離為10-30％，以及TEN為高于30％。SJS、交錯(cuò)SJS-TEN和TEN總稱(chēng)為SJS/TEN。
對(duì)于各患者，停用被懷疑的藥物并觀察患者的癥狀。排除發(fā)生皮膚性藥物不良反應(yīng)且在停用藥物后沒(méi)有平息的患者。包括73名tegretol-耐受的患者作為對(duì)照。還招募了普通臺(tái)灣人志愿者(n＝94；年齡范圍20-80歲)。該研究經(jīng)學(xué)會(huì)委員會(huì)批準(zhǔn)并獲得了知情同意。
HLA的基因分型逆lineblot順序特異的寡核苷酸(SSO)的試劑購(gòu)自DYNAL BiotechLtd.(Bromborough、UK)并用于HLA基因分型。簡(jiǎn)言之，使用將HLA I組或II組位的第二和第三外顯子生物素化的引物對(duì)產(chǎn)生PCR產(chǎn)物，然后雜交至固定于尼龍膜上的探針的SSO的lineblot。使用抗生蛋白鏈菌素-辣根過(guò)氧化物酶(HRP)和發(fā)色的可溶性底物檢測(cè)結(jié)合于特異探針的生物素化PCR產(chǎn)物的存在從而在陽(yáng)性探針位置產(chǎn)生藍(lán)“線”。該探針?lè)磻?yīng)模式通過(guò)基因分型軟件DynalRELITMSSO(DYNAL Biotech Ltd.；Bromborough、UK)解釋。潛在的模糊之處通過(guò)根據(jù)IHWG Technical Manual(International Histocompatibility WorkingGroup)進(jìn)行的基于序列的分型和DNA測(cè)序進(jìn)一步解析。
SNP基因分型通過(guò)使用PUREGENE DNA純化體系(Gentra systems、Minnesota、USA)分離基因組DNA。SNP基因分型通過(guò)高通量MALDI-TOF質(zhì)譜儀進(jìn)行。簡(jiǎn)言之，使用Spectro DESIGNER軟件(Sequenom、San Diego、CA、USA)設(shè)計(jì)引物和探針。進(jìn)行多重聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，未并入的dNTP經(jīng)弱堿性磷酸酶(Hoffman-LaRoche、Basel、Switzerland)脫磷酸化，隨后進(jìn)行引物延伸。將該純化的引物延伸反應(yīng)涂點(diǎn)至384-元素的硅芯片(SpectroCHIP、Sequenom)上，使用Bruker Biflex III MALDI-TOF SpectroREADER質(zhì)譜儀(Sequenom)和具有SpectroTYPER(Sequenom)的波譜儀進(jìn)行分析。
短串聯(lián)重復(fù)多態(tài)性(STRP)基因分型從NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中選擇位于MHC區(qū)域的20個(gè)高度多態(tài)性的微衛(wèi)星標(biāo)記物(即，D6S258、D6S2972、D6S510、D6S265、D6S388、D6S2814、HLAC_CA1、HLABC_CA2、MIB、MICA、TNFd、BAT2_CA、D6S273、D6S1615、DQCAR、G51152、D6S2414、D6S1867、D6S1560、和D6S1583)。標(biāo)記物的平均雜合性為0.72，估計(jì)具有230kb的間距。
基于數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)報(bào)道的寡核苷酸序列而設(shè)計(jì)引物。使用GeneAmp 9700熱循環(huán)子(thermocyclers)(Applied Biosystems、Foster City、CA、USA)在包含10ng基因組DNA和0.33μM各引物的5μl體積中進(jìn)行基因分型PCR。在毛細(xì)管凝膠電泳之前，將總共6個(gè)合適大小的產(chǎn)物和熒光標(biāo)記置于池中。多態(tài)性擴(kuò)增子的尺寸通過(guò)ABI 3730 DNA定序器(Applied Biosystems)電泳而確定，使用LIZ500尺寸標(biāo)準(zhǔn)物作為尺寸內(nèi)標(biāo)(Applied Biosystems)。使用GENMAPPER程序3.0版(Applied Biosystems)計(jì)算等位基因尺寸。使用SAS程序進(jìn)行allelecalling和binning。為了定性對(duì)照的目的，在所有基因分型試驗(yàn)中均包括三種CEPH對(duì)照個(gè)體(1331-01、1331-02、1347-2)和H20。
統(tǒng)計(jì)分析通過(guò)構(gòu)建2x2表經(jīng)具有Y值校正(Yates correction)的卡方方法比較不同組中的等位基因頻率。通過(guò)該區(qū)域內(nèi)存在的觀察到的HLA等位基因的數(shù)目乘以原始P值而比較多個(gè)HLA等位基因從而校正P值(Pc)。使用Haldane′smodification計(jì)算優(yōu)勢(shì)率，其向所有細(xì)胞增加了0.5以調(diào)節(jié)可能的零計(jì)數(shù)。
實(shí)施例1HLA-B*1502等位基因在具有ADR的238人的組中，經(jīng)診斷112例患有SJS/TEN，126人對(duì)于多種藥物出現(xiàn)較緩和的皮膚性藥物不良反應(yīng)(紅斑多形物、斑丘疹、蕁麻疹、血管性水腫和固定性藥疹)。在112名SJS/TEN患者中，42人接觸卡馬西平(tegretol)，17人服用別嘌醇、53人服用除卡馬西平和別嘌醇外的其它藥物。
對(duì)患者進(jìn)行材料和方法中所述的HLA分型。如表1所示，HLA-B位置中DNA變化的等位基因(HLA-B*1502)與具有藥物-誘發(fā)的SJS/TEN的患者特別是接受卡馬西平(tegretol)的患者是相關(guān)的。
表1卡馬西平(tegretol)-誘發(fā)斯-約二氏綜合癥/中毒性表皮壞死溶解的42名臺(tái)灣患者體內(nèi)的HLA-B*1502機(jī)率
a，具有較SJS更溫和的藥物不良反應(yīng)的患者b，普通臺(tái)灣人群c，卡馬西平耐受患者X2，具有Y值校正的卡方Pc，觀察到的HLA-B等位基因的數(shù)目(35)乘以原始P值而算得。
由此，在接受卡馬西平的42名SJS/TEN患者中檢測(cè)到42次(100％)HLA-B*1502。該等位基因還在接受其它藥物(8人苯妥英、2人別嘌醇、2人阿莫西林、1人柳氮磺吡啶、1人酮洛芬、1人布洛芬和2人未知藥物)的53名(32％)SJS/TEN患者中發(fā)現(xiàn)17次。特別地，服用苯妥英后發(fā)生SJS/TEN的17名患者中有8人(47.05％)也帶有HLA-B*1502等位基因。另一方面，該等位基因僅在卡馬西平-耐受組的4.1％(3/73)中發(fā)現(xiàn)，苯妥英-耐受組的0％(0/32)中發(fā)現(xiàn)，具有除SJS外更溫和藥物不良反應(yīng)的患者的6.3％(9/142)中發(fā)現(xiàn)，以及普通人群的5.3％(5/94)中發(fā)現(xiàn)。通過(guò)使用耐受組作為對(duì)照，與卡馬西平-誘發(fā)的SJS/TEN相關(guān)的B*1502的優(yōu)勢(shì)比、靈敏度、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別是1712、100％、95.89％、96.0％和100％。具有如此高的預(yù)測(cè)值和靈敏度，該HLA-B等位基因的分型可用于鑒定對(duì)于藥物誘發(fā)的SJS/TEN特別是tegretol-誘發(fā)的SJS/TEN高危險(xiǎn)的患者。
B*1502等位基因沒(méi)有表現(xiàn)出與tegretol誘發(fā)的所有表型相關(guān)。如表2所示，在患對(duì)于tegretol較溫和的皮膚反應(yīng)(如斑丘疹)的16名患者中沒(méi)有檢測(cè)到表位基因(表2)。但是，另一種等位基因，HLA-B*4601，與這些較較溫和的皮膚反應(yīng)明顯相關(guān)(16名患者者中有10名，或62.5％)。由此，HLA-B*4601可用作溫和皮膚ADR的危險(xiǎn)因素，特別是對(duì)于由tegretol誘發(fā)的ADR。
表2tegretol-誘發(fā)的皮膚ADR患者的表型/基因型數(shù)據(jù)
實(shí)施例2HLA-B*5801等位基因和SJS/TEN我們已確定了HLA-B*5801等位基因?yàn)榘l(fā)生別嘌醇-誘發(fā)的SJS/TEN的危險(xiǎn)因素。在服用別嘌醇的所有17名(100％)SJS/嚴(yán)重ADR患者體內(nèi)均發(fā)現(xiàn)了HLA-B*5801等位基因(表3和4)，但僅在18％普通臺(tái)灣人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)(優(yōu)勢(shì)比155、靈敏度100％、特異性82％、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值84.7％、陰性預(yù)測(cè)值100％、Pc＝3.7×10-9)。因此，HLA-B*5801等位基因可單獨(dú)或與其它遺傳標(biāo)記物一起用于服用別嘌醇個(gè)體發(fā)生SJS的危險(xiǎn)率評(píng)估。
表3別嘌醇-誘發(fā)嚴(yán)重皮膚性藥物不良反應(yīng)的17名臺(tái)灣患者體內(nèi)的HLA-B*5801機(jī)率
a，具有較SJS更溫和的藥物不良反應(yīng)的患者b，普通臺(tái)灣人群
X2，具有Y值校正的卡方Pc，觀察到的HLA-B等位基因的數(shù)目(35)乘以原始P值而算得。
表4別嘌醇-誘發(fā)的皮膚ADR患者的表型/基因型數(shù)據(jù)
實(shí)施例3HLA-B*5801等位基因誘發(fā)的過(guò)敏綜合癥在另一種廣泛地研究中，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)HLA-B*5801還與別嘌醇-誘發(fā)的過(guò)敏綜合癥(HSS)相關(guān)聯(lián)。研究了31名患者，包括12名SJS、3名SJS/TEN、1名TEN和15名HSS患者。HSS的標(biāo)準(zhǔn)為皮疹(如彌散性斑丘疹、剝脫性皮炎)，以及兩種如下癥狀發(fā)熱、嗜曙紅細(xì)胞增多、非典型循環(huán)胸腺依賴性細(xì)胞、白細(xì)胞增多、急性肝細(xì)胞損傷或腎功能惡化(Arellano et al.，1993)。在所有征集的病例中，如果ADR癥狀發(fā)作出現(xiàn)在首次接觸別嘌醇的2個(gè)月內(nèi)且停藥后消除ADR癥狀，那么別嘌醇被認(rèn)為是激怒藥物(offending drug)。排除具有下列任一病情的患者在此接觸別嘌醇后未出現(xiàn)癥狀的患者、以及較溫和皮疹尚未達(dá)到HSS、SJS或TEN標(biāo)準(zhǔn)的患者。
所有患者癥狀的發(fā)作在首次接觸別嘌醇2個(gè)月內(nèi)，且2名患者再次接觸的2天內(nèi)第二次發(fā)作。12名患者接受除別嘌醇外的多種藥物，但它們的醫(yī)療記錄表明當(dāng)服用這些共用藥物而不服用別嘌醇時(shí)沒(méi)有藥物不良反應(yīng)。所有患者具有高尿酸血癥和/或痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，以及其它慢性疾病，包括高血壓(14/31)、慢性腎病(16/31)和糖尿病(9/31)。
引入服用別嘌醇至少6個(gè)月(平均＝38個(gè)月，范圍＝6-107個(gè)月)而無(wú)ADR的98名痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者作為別嘌醇-耐受的對(duì)照。耐受組的性別分布與中國(guó)人中普通痛風(fēng)發(fā)病率相當(dāng)。此外，作為另一對(duì)照組的93名正常受試者，為正常的臺(tái)灣人群。這3組人口統(tǒng)計(jì)學(xué)的變化示于表5中。
表5在嚴(yán)重ADR患者、耐受患者以及正常受試者中接觸別嘌醇的人口統(tǒng)計(jì)學(xué)的變化、劑量和療程
HLA-B*5801等位基因在所有31名別嘌醇-誘發(fā)嚴(yán)重ADR患者中存在31次(100％)，98名耐受患者中有16次(16.3％)(優(yōu)勢(shì)比315、Pc＜10-15)，93名正常受試者中有19次(20％)(優(yōu)勢(shì)比241、Pc＜10-13)。相對(duì)于別嘌醇-耐受組，存在的該等位基因?qū)τ趧e嘌醇-ADR具有100％的陰性預(yù)測(cè)值，存在的B*5801具有66％的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值。因此，HLA-B*5801是別嘌醇-誘發(fā)嚴(yán)重ADR(包括皮膚ADR)和別嘌醇-誘發(fā)DRESS(嗜曙紅細(xì)胞增多和全身癥狀的藥物反應(yīng))的高特異性(84％)和靈敏度(100％)標(biāo)記物。
實(shí)施例4連接于HLA-B*1502或B*5801等位基因的等價(jià)遺傳標(biāo)記物存在的HLA-B*1502、5801或4601可通過(guò)其它遺傳標(biāo)記物指示。特別地，接近感興趣的HLA等位基因的遺傳標(biāo)記物趨向于與感興趣的等位基因共分離或顯示了連鎖不均衡。因此，存在這些標(biāo)記物(等價(jià)遺傳標(biāo)記物)預(yù)示了存在感興趣的等位基因。
為了測(cè)試藥物不良反應(yīng)患者體內(nèi)潛在的等價(jià)遺傳標(biāo)記物發(fā)生率，測(cè)量了HLA-B*1502單倍型中的若干標(biāo)記物與藥物不良反應(yīng)的關(guān)聯(lián)性。實(shí)際上，HLA-B*1502單倍型的HLA標(biāo)記物，如DRB1*1202、Cw*0801、Cw*0806、A*1101和MICA*019在已接觸卡馬西平的SJS/TEN患者中具有明顯較高的發(fā)生率(表6)。
表6B*1502-祖單倍型(ancestral haplotyoes)的標(biāo)記物對(duì)于易患藥物不良反應(yīng)的貢獻(xiàn)
還測(cè)定了與HLA-B*5801相關(guān)的標(biāo)記物。受HLA-B*5801等位基因純合的4名患者指引，我們分析了混合的HLA位的等位基因分布并定義了祖單倍型為HLA-A*3303、Cw*0302、B*5801和DRB1*0301。該祖單倍型存在于31名別嘌醇-ADR患者的12人(38.7％)中(表7)，但在耐受患者中僅存在7.1％，在正常受試者中僅存在9.7％。
表7在別嘌醇誘發(fā)嚴(yán)重藥物不良反應(yīng)、別嘌醇耐受患者以及正常受試者中單一或聯(lián)合位的HLA-B*5801祖單倍型的頻率
+優(yōu)勢(shì)比(別嘌醇-ADR/耐受)315(95％Cl，18.3-5409.5)，Pc＝7.5×10-16。
++優(yōu)勢(shì)比(別嘌醇-ADR/耐受)241(95％Cl，14.1-4111)，Pc＝6.×10-14。
我們還通過(guò)分型MHC區(qū)域中的STRP(短串聯(lián)重復(fù)多態(tài)性)標(biāo)記物獨(dú)立分析了單倍型。連鎖不均衡曲線表明在別嘌醇-ADR患者組中的HLA-C和TNFd之間存在阻滯，但不在于耐受組中。在該阻滯中，確定了HLA-B基因附近的單倍型(MIB*358-MICA*206-TNFd-140)，其與發(fā)現(xiàn)的B*5801與疾病的關(guān)聯(lián)(p＝0.0018)相一致。通過(guò)使用STPR標(biāo)記物和測(cè)序MICA等位基因，我們發(fā)現(xiàn)所分析的別嘌醇-ADR患者攜有相同的B等位基因(B*5801)、MICA等位基因(MICA*00201)和TNF STRP標(biāo)記物(TNFd*140)。但是，一名患者沒(méi)有與其它患者相同的MIB標(biāo)記物(MIB*358)。這些數(shù)據(jù)表明除了MIB之外的易患基因存在于HLA-B和TNF位之間的230kb區(qū)域。
權(quán)利要求
1.一種評(píng)價(jià)患者發(fā)生應(yīng)答于藥物的藥物不良反應(yīng)危險(xiǎn)的方法，其包括測(cè)定選自HLA-B*1502、HLA-B*5801和HLA-B*4601的HLA-B等位基因的存在，其中HLA-B等位基因的存在指示了藥物不良反應(yīng)的危險(xiǎn)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述藥物選自卡馬西平、別嘌醇、苯妥因、柳氮磺吡啶、阿莫西林、布洛芬和酮洛芬。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中所述藥物是卡馬西平。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中所述藥物是別嘌醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的方法，其中所述藥物不良反應(yīng)是斯-約二氏綜合癥(SJS)、中毒性表皮壞死溶解(TEN)或藥物過(guò)敏綜合癥(HSS)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3或5的方法，其中所述藥物不良反應(yīng)是SJS或TEN，所述藥物是卡馬西平，以及所述等位基因是HLA-B*1502。
7.根據(jù)權(quán)利要求1、2、4或5的方法，其中所述藥物不良反應(yīng)是SJS、TEN或HSS，所述藥物是別嘌醇，以及所述等位基因是HLA-B*5801。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、2或5的方法，其中所述藥物不良反應(yīng)是SJS、TEN或HSS，所述藥物是苯妥因，以及所述等位基因是HLA-B*1502。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的方法，其中通過(guò)使用與編碼等位基因的核酸特異性雜交的寡核苷酸測(cè)定等位基因的存在。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)的方法，其中通過(guò)使用由患者外周血制備的DNA測(cè)定等位基因的存在。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)的方法，其中通過(guò)使用由患者外周血制備的RNA、蛋白、細(xì)胞或血清測(cè)定等位基因的存在。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)的方法，其中通過(guò)測(cè)定等位基因的等價(jià)遺傳標(biāo)記物測(cè)定等位基因的存在，其中所述等價(jià)遺傳標(biāo)記物的存在指示了等位基因的存在。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述等價(jià)遺傳標(biāo)記物選自HLA-DRB 1*1202、Cw*0801、Cw*0806、A*1101、MICA*019、A*3303、Cw*0302、DRB1*0301和MICA*00201。
14.一種開(kāi)發(fā)用于藥物誘發(fā)的不良反應(yīng)的治療的方法，其包括使用其中至少一種HLA-B等位基因作為靶點(diǎn)的測(cè)定法來(lái)篩選候選藥物，其中所述HLA-B等位基因選自HLA-B*1502、HLA-B*5801和HLA-B*4601。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中所述不良反應(yīng)是斯-約二氏綜合癥(SJS)、中毒性表皮壞死溶解(TEN)或藥物過(guò)敏綜合癥(HSS)。
16.根據(jù)權(quán)利要求14或15的方法，其中所述藥物選自卡馬西平、別嘌醇、苯妥因、柳氮磺吡啶、阿莫西林、布洛芬和酮洛芬。
17.根據(jù)權(quán)利要求14、15或16的方法，其中所述藥物是卡馬西平或別嘌醇。
18.根據(jù)權(quán)利要求14-17任一項(xiàng)的方法，其中所述不良反應(yīng)是SJS或TEN，所述藥物是卡馬西平，以及所述等位基因是HLA-B*1502。
19.根據(jù)權(quán)利要求14-17任一項(xiàng)的方法，其中所述不良反應(yīng)是SJS、TEN或HSS，所述藥物是別嘌醇，以及所述等位基因是HLA-B*5801。
20.根據(jù)權(quán)利要求14-19任一項(xiàng)的方法，其中所述測(cè)定法包括提供表達(dá)HLA-B等位基因的細(xì)胞。
21.一種藥物基因組序型分析的方法，其包括測(cè)定至少一種選自HLA-B*1502、HLA-B*5801和HLA-B*4601的HLA-B等位基因的存在。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的方法，其中測(cè)定了HLA-B*1502和HLA-B*5801二者的存在。
23.根據(jù)權(quán)利要求21或22的方法，其進(jìn)一步包括測(cè)定至少一種選自硫代嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶和長(zhǎng)-QT綜合癥基因的遺傳因子的存在。
24.根據(jù)權(quán)利要求21-23任一項(xiàng)的方法，其中通過(guò)使用與編碼等位基因的核酸特異性雜交的寡核苷酸測(cè)定等位基因的存在。
25.根據(jù)權(quán)利要求21-24任一項(xiàng)的方法，其中通過(guò)使用由患者外周血制備的DNA測(cè)定等位基因的存在。
26.根據(jù)權(quán)利要求21-24任一項(xiàng)的方法，其中通過(guò)使用由患者外周血制備的RNA、蛋白、細(xì)胞或血清測(cè)定等位基因的存在。
27.一種評(píng)價(jià)患者發(fā)生應(yīng)答于藥物的SJS、TEN或HSS的危險(xiǎn)的方法，包括測(cè)定患者體內(nèi)HLA亞型的存在，其中所述HLA亞型是SJSTEN或HSS的危險(xiǎn)因子。
28.根據(jù)權(quán)利要求27的方法，其中所述藥物選自卡馬西平、別嘌醇、苯妥因、柳氮磺吡啶、阿莫西林、布洛芬和酮洛芬。
29.一種鑒定誘發(fā)SJS、TEN或HSS的藥物的方法，其包括使含有HLA亞型的細(xì)胞與候選藥物進(jìn)行接觸。
30.根據(jù)權(quán)利要求27、28或29的方法，其中所述HLA亞型是HLA-B亞型。
31.根據(jù)權(quán)利要求27-30任一項(xiàng)的方法，其中所述HLA亞型是HLA-B15、B58或B46亞型。
32.根據(jù)權(quán)利要求27-31任一項(xiàng)的方法，其中所述HLA亞型是HLA-B*1502、HLA-B*5801和HLA-B*4601。
33.根據(jù)權(quán)利要求29-32任一項(xiàng)的方法，其中所述細(xì)胞位于非人動(dòng)物中。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種預(yù)測(cè)患者發(fā)生藥物不良反應(yīng)特別是SJS、TEN或過(guò)敏綜合癥(HSS)的方法。已發(fā)現(xiàn)HLA－B等位基因，HLA－B
文檔編號(hào)C12Q1/68GK1902328SQ200480040177
公開(kāi)日2007年1月24日 申請(qǐng)日期2004年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月10日
發(fā)明者陳垣崇, 洪舜郁, 鐘文宏, 鄔哲源 申請(qǐng)人:中央研究院